ウサギ胚融解:胚移植のための凍結保存されたウサギ胚を回収するための加温手順

胚の解凍は、凍結保存された凍結胚を温めて再水化し、生物学的活性を回復するプロセスです。

凍結保存されたウサギの胚を密封された極低温ストローで解凍するには、液体窒素からストローを取り除きます。最小限の量の凍結保護剤を含む培地を持つ胚は、ストロー内の空気と培地セグメントによって物理的に隔離されます。ストローを空気中に短時間配置すると、閉じ込められた液体窒素蒸気の放出が促進され、高温にさらされると胚に損傷が生じます。

極低温液体窒素温度から氷点下温度への急速な上昇により、極低温ストロー内で氷の結晶が形成され、胚が損傷する危険があります。氷の結晶が形成され始めたら、すぐにストローを温度管理されたウォーターバスに浸し、穏やかにかき混ぜて均一に解凍します。このステップにより氷の結晶が除去され、胚が氷の結晶による損傷から保護されます。

ストロープラグを取り外します。ストローの密閉された端を切ります。マイクロディスペンサーを取り付けて、スクロース含有培地の入った培養プレートに内容物を放出します。培地は胚から凍結保護剤を除去するのに役立ちます。スクロースは胚の過度の腫れを防ぎ、水分補給中に胚の生理学的環境を回復します。

胚を新鮮な培地を含むプレートに移して凍結保護剤を完全に除去し、完全な再水和を確保します。解凍された胚は、胚移植手順の準備が整います。

移植のために胚を解凍するには、ミニストローを液体窒素蒸気から10センチメートルの高さに20〜30秒間置きます。ミニストロー内で結晶化プロセスが始まったら、ストローを摂氏25度の水浴に10〜15秒間浸します。ストローと綿のプラグをすぐに取り外し、結合されたマイクロディスペンサーを使用して、胚が5分間残らなければならない0.33モルのショ糖溶液を添加した摂氏25度のベース培地を含むプレートにミニストローの内容物を排出します。次に、胚を新鮮なベース培地のプレートに移し、さらに5分間インキュベートします。