植物組織中の非構造炭水化物の定量のための比色アッセイ

消化可能な炭水化物は植物組織の非構造成分であり、植物の成長と代謝のための予備エネルギー源として機能します。

非構造炭水化物を定量化するには、測定量の植物組織をチューブに取ります。希釈した硫酸をチューブに加え、サンプルを加熱します。加熱すると、硫酸は消化可能な炭水化物の多糖類をそれぞれの単糖類サブユニットに加水分解します。

サンプルを冷却します。チューブを遠心分離して未消化の植物材料をペレット化し、単糖類を含む上清を得る。

上清を新鮮なチューブに吸引し、単糖類をフェノール溶液で処理し、続いて硫酸を加えます。チューブをボルテックスして内容物を混合し、インキュベートします。

インキュベーション中、硫酸は単糖類を脱水してフルフラール誘導体を生成します。これらのフルフラール誘導体はフェノールと反応して黄金溶液を生成します。

植物サンプル中の炭水化物含有量に対応する490ナノメートルでの黄金溶液の吸光度を分光的に測定します。

次に、さまざまな濃度のグルコース溶液を取り、フェノール-硫酸処理を繰り返して異なる色の強度を得出し、標準曲線をプロットします。未知の炭水化物サンプルの吸光度値をグルコース標準と比較して、植物組織中の消化可能な炭水化物の含有量を取得します。

まず、各組織サンプルから15ミリリットルのガラス管に複製物を計量します。チューブにラベルを付け、各サンプルの正確な質量を記録します。

次に、各チューブに1ミリリットルの0.1モル硫酸を加え、キャップをしっかりと閉じます。次に、チューブを沸騰したお湯に1時間入れます。

チューブをぬるま湯に移して冷却します。次に、チューブの内容物をラベル付きの1.5ミリリットル微量遠心チューブに注ぎます。この後、チューブを15,000 gで10分間遠心分離します。マイクロピペットを使用して、上清を新しい標識された1.5ミリリットルチューブに移します。

ピペットを使用して、15マイクロリットルの未知のサンプルを独自の試験管に移します。次に、各チューブに 385 マイクロリットルの蒸留水を加えます。

ヒュームフードで、400マイクロリットルの5%フェノールを各標準および未知のサンプル試験管に加えます。その後すぐに、各チューブに2ミリリットルの硫酸を加えます。

の表面に硫酸を必ず添加してください。

チューブを10分間インキュベートした後、チューブをボルテックスします。次に、チューブをさらに30分間インキュベートします。

各サンプルチューブから800マイクロリットルを3つのポリスチレン1.5ミリリットルセミマイクロキュベットに移します。次に、分光光度計を490ナノメートルで読み取るように設定し、ブランクキュベットで校正します。

最後に、各キュベットを分光光度計に通し、吸光度を記録します。