Name: 発達研究のためのウィンドウ鶏卵 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 1 s
Description: 学ぶウィンドウ鶏卵の準備法。胚の生存時間を延ばし、ビーズ配置や染料注入、in ovo探索などの神経生物学実験を可能にする最適化されたプロトコルを紹介します。

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1。インキュベーターから卵を取り除く<ol><li> 37維持° C 60％以上に設定された相対湿度と。 </li><li>卵を取り外し、卵を90 °回転、大きな基盤が水平に横たわるように。 </li></ol> 2。綿棒は、卵消毒に<ol><li> 70％エタノールで非滅菌ガーゼのスタックを飽和させる。 </li><li> 5卵にまで綿棒に2〜3個を使用してください。ガーゼが汚れた場合は破棄する。 </li></ol> 3。卵白除去サイトの準備<ol><li>ちょうどアルブミンを引き抜くされる領域を保護するためにベースの左側3Mプラスチックテープの1&quot;× 1&quot;の部分をカットして置きます。 </li></ol> 4。卵白の除去<ol><li>テープの真ん中に小さな穴を作るためにハサミのポイントを使用してください。 </li><li> 18ゲージ、1インチの針を10 ccシリンジを使用して、ゆっくりとハサミで作った穴から針をドリル。 </li><li>卵の底に向かって45 ° Cの角度で針を駆動します。 </li><li>中心に向かって針を傾け、卵白の3〜4 mLを策定する。 </li></ol> 5。ウィンドウイング<ol><li>ビニールテープの3&quot;x 3&quot;の部分をカットし、卵の上に収まるようにそれを伸ばす。あまりにも強く引っ張らないように注意しながら、卵の水平表面の丸い端を角のコーナーを拡張。それはない折り目と卵の表面にしっかりとなるようにテープを引っ張る。 </li><li>シャープストレート4&quot;解剖ハサミを使って、テープが配置された領域の下部中央に穴をねじる。ゆっくりの内側に対してヒントを保つようにしている卵にはさみの下刃をガイドシェルは。ベースに向かってブレードを直接ゆっくりとシェルをカットし始めます。ちょうど上部中央に達する前に停止し、反時計回りに進む。はさみを削除するとのほんの少しになるまで反対の方向に進んで繰り返す卵は、接続されたままになります。卵子が受精されることを確かめてください。ウィンドウをシャットダウンします。 </li></ol> 6。卵を再度開き、シール、閉会。 <ol><li>広いビニールテープ&quot;1 / 2に長い&quot;約2〜3カットし、カットした穴に戻って収まるようにウィンドウをシャットダウンします。テープの別の1 × 1&quot;の部分を取ると卵子が排出された穴を塞ぐ。どんな操作を行うために卵を再開する鉗子のペアを使用してください。あなたがインキュベーターに卵を返すように準備ができたら、一部をカットウィンドウを密封し、卵の全体の水平方向の表面をカバーするために十分な大きさのテープの。 </li></ol>

<ol><li>Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).</li>
<li>Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).</li>
<li>Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).</li>
<li>Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).</li>
<li>Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).</li>
<li>Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).</li>
</ol>

このメソッドは、実験操作後の長期生存時間が可能になります。例えば、色素標識研究は、後に運命のマッピングの研究（1）E10またはに生存を許さ。さらに、それは後の発達段階（2-6）に進むために遺伝子の発現レベルと必要な開発の変化を提供するOVOエレクトロポレーション研究のために使用されています。このウィンドウテクニックは、胚への操作後の生存を必要とするすべての手順と組み合わせて使用​​することができます。

<table><tbody><tr><td>回転インキュベーター</td><td> </td><td>Profi</td><td></td><td>温度37&amp;deg;、相対湿度60%以上に維持</td></tr><tr><td>70 % EtOH</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>ガーゼ</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>3Mプラスチックテープ</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>10ccシリンジ</td><td> </td><td></td><td></td><td>卵1個につき1本</td></tr><tr><td>18G針</td><td> </td><td></td><td></td><td>1&amp;#189; インチ針、シリンジ1本につき1本</td></tr><tr><td>解剖用はさみ</td><td> </td><td></td><td></td><td>4&quot; 直刃、鋭利なもの</td></tr><tr><td>受精卵</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr></tbody></table>

発達研究のためのウィンドウ鶏卵

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

開発の研究が大幅に実験モデルとしてニワトリ胚の使用によって促進されています。胚のアクセシビリティの容易さは、ニワトリウズラのキメラとフォーカル色素のラベリングを含めて、いくつかのアプローチを、使用して細胞の運命をマッピングするための実験を​​可能にした。さらに、それはタンパク質でコーティングされたビーズとOVOエレクトロで使用してプラスミドDNAの導入の配置などのいくつかの種類の分子摂動、することができます。これらの実験は、中枢および末梢神経系の発達に重要なデータが得られている。これらの研究の多くの場合、それは卵の殻を開いて、胚の成長を乱すことなく、それをrecloseする必要があります。胚は、卵殻を再度開くことにより、連続した発達段階で調べることができます。鶏の卵を開くためのいくつかの優れた方法がありますが、この記事では、長い生存期間のために最適化されている一つの方法を示しています。この方法では、卵はその側にかかっていると、小さなウィンドウがシェルにカットされます。実験手順の後に、シェルはその開発期間中の卵をカバーするために使用されます。卵殻を覆う透明なプラスチックテープは、胚を保護し、潜伏期間の残りの中に水和を保持するのに役立ちます。このメソッドは、インキュベーションの2日間の始まりを使用されており、成熟した胚古くから生存を可能にした。

胚のアクセシビリティの容易さは、ニワトリウズラのキメラとフォーカル色素のラベリングを含めて、いくつかのアプローチを、使用して細胞の運命をマッピングするための実験を​​可能にした。この記事では、長い生存時間に対して最適化されている1個の卵の調製方法を示しています。

発生学の研究は、実験モデルとしてのニワトリ胚の利用によって大いに促進されてきました。胚へのアプローチが容易であることから...

Kramer Labへようこそ。私はカリフォルニア大学アーバイン校神経生物学・行動科学科のMatt Kornです。本日は、ビーズの配置、色素の注入、またはin ovo探索など、さまざまな操作に向けた鶏卵の調製方法をご紹介します。それでは、早速始めていきましょう。まず、卵を洗浄します。理由は、インキュベーター内に付着している可能性のある不純物が多いためです。これをテープで密封します。卵を採取するウィンドウ部分に小さな破片が入り込み、取り出したい時までに胚が死亡する確率が高まるのを防ぐためです。インキュベーター内では、卵の太い側を上に向けた状態で置かれていることがわかると思います。次に、卵を横に傾けます。これにより、2つのことが可能になります。1つは、観察窓がこちら側に来ること、そして2つ目は、胚が上部に浮上するため、あらゆる操作が行えるようになることです。ここで、インキュベーターに入れていたラックから、いくつかの卵を段ボール製の卵ホルダーに移します。これは実際には卵が配送されてきたときに入っている容器です。今日は、単に卵を保持するためにこれを使用します。配置の方法はあなた次第です。私は、いつでもすべての卵にアクセスでき、かつ卵同士が触れ合わないようにこの方法で配置することを好みます。万が一、緩んでいてひびが入っている卵を見つけ、それを落としてしまったとしても、それぞれに適度な間隔が空いているため安心です。それでは、ガーゼを用意し、このように適度な厚みの束を取り出して2つに分けます。ここに70% alcoholを注ぎ、底まで十分に湿るまで浸します。このガーゼの束全体を使って、すべての卵を拭き取ります。そこで、まず上部を数か所処理し、上部を重点的に行いますが、実質的に卵全体を囲むようにします。これが終わると、アルコールはかなり早く乾くため、テープを貼ることができます。テープはしっかりと密着し、通常、一連の処理を終える頃には最初の一つの乾燥が完了しているため、卵の準備の次のステップに進むことができます。それでは、それをゴミ箱に戻します。これで次のステップに進む準備ができました。さて、すべての卵をアルコールで拭き取ったので、卵の大きい側、つまり卵の底に排水穴を開けます。これにより、アルブミンを抽出することが可能になります。アルブミンを抽出しないと、胚が適切に配置されないためです。操作を行うことはできません。したがって、ここではブレードを使用して、このプラスチックテープを取り除くだけとなります。これはわずかに弾性があり、非常に都合が良いです。穴が想定より少し大きくてもカバーできるだけでなく、実際に卵全体を覆う際には、これを伸ばす必要があるからです。そのため、ウィンドウとなる領域を完全に覆います。では、このように切り取り、約1mmの幅のストリップを作成します。そして、ここ

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

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発達研究のためのウィンドウ鶏卵

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