アーリーステージのニワトリ胚に成長因子コートビーズの配置

Raburn Labへようこそ。カリフォルニア大学アーバイン校神経生物学・行動学部のマット・コーンです。今日は卵を取り、それを開き、成長因子に浸したビーズを置きます。

卵子の素晴らしい準備は、胚発生のこの初期段階で、さまざまな種類の組織の運命を変えるための成長因子を入れることを可能にします。2日目半、またはステージ17。さて、ここからは、こちらの範囲でご紹介します。

卵と道具は全部持っています。さあ、さあ、ここに卵を引っ張るだけで、私たちのテープがどこにあるかがわかります。ウィンドウシール。

私はこの素敵な小さなドーナツを持っています。芸術的な粘土で作られているだけで、美術品店で手に入れることができます。そして、私は本当にひどい5つの鉗子のペアを取るつもりです。

これらは長い間存在しています。先端の先端はかなり鈍いですが、ウィンドウが来るようにテープを十分に持ち上げるのに最適です。私はそれらを置ける。

これを折りたたんで卵を挟み込み、この窓をその後ろに押し込むだけです。だから今、私はそれをスコープの下に置き、あらゆる種類の操作を行うことができます。この場合、ビーズをやるつもりで、私は先に進んで、インドインクなしで今すぐ私のインドインクをつかむつもりです。

ここには胚の円盤のようなものが少しあり、少し横にずれているのがわかります。ですから、卵をひっくり返すだけで、ここで血液の一部が円を形成している場所を見ることができます。そして、私は先に進んで、インドのインクで私の針を手に入れることができます。

そして、ここの横から降りて、椎間板の下に潜ると、胚がいます。胚と黒のコントラストを見るために、あまり入れたくありません。そして、胚の名簿部分が前を向くように、これを回転させます。

そして、ここで見ることができるのは、セファロン領域です。神経管がここに戻ってきて、それを老化させるための体節がいくつかできています。そして、先に進んでズームインすると、心臓の鼓動が非常に遅いながらも一貫していることがわかります。

心臓はそこにありましたが、鼓動していませんでした。これが重要なサンプルであるかどうかについては、少し心配する必要があります。ですから、その上には本当に厚い膜がないので、ここではタングステンプローブに進むことができます。

私は、薄い膜があり、胚にアクセスできるように、ここを脇に移動するつもりです。私たちは、前脳と後脳にビーズを入れます。そして、これは、前脳を狙

さて、それに到達するためには、膜を切らなければなりません。今では、彼らが若くなったら、タングステンプローブを使って神経管から入り、ビーズを入れたい領域にアクセスできるようになりました。そして今、私は私のタングステンプローブに進むつもりです。

そして、手を安定させるために両手を使っています。私は先に進んで胚を操作するつもりです。ですから、ここにビーズを入れたら、直接神経管に入れて前脳まで入れることができます。

さて、胚が開いたので、先に進んで準備をしてビーズを置くことができます。そこで私が行うことは、プローブを少し深く突き刺して神経管を開くことです。先に進んで、もう少しズームインします。

ここで少し焦点を変えます。そして、そこには素敵な小さな開口部があるのがわかりますが、尾のセファロンがある場所には実際には穴を開けていません、それはビーズが行く場所がそこにあるからです。だから、ビーズが浮くような穴は欲しくありません。

戻したいので、ビーズを入れて前に押し出すことができます。だから今、私は先に進んでビーズを手に入れるつもりです。さまざまなサイズがあることがわかります。

これらはヘパリンアクリルで、PBSに入っています。私は先に進んで、55個の鉗子のペアを取るつもりです。私がPBSに入り、好きなものを見つけるだけだことがわかります。

そして、PBSから出ると、通常はそこの鉗子にくっついて、そこで見ることができます。先に進んでビーズを覆います。私の卵を戻してください。

卵にピントを合わせます。そこで、55個の鉗子にビーズを載せてみたいと思います。私が好きな鉗子の方が少し高いですが、そこにあります。

そして、神経管に穴を開けた場所まで、それを導くようなものです。神経管に入れると、発達中の脳の前に向かって操作しやすくなります。だから、私は先に進んで、私のタングステンプローブを持って、ただそれを押してください。

ビーズをセファロンに入れるときは、胚が老化するにつれて、胚が前方に曲がり始め、次に横に曲がり始めるため、注意する必要があります。そして、多くの場合、前脳にビーズを置いてセファロンに伝えると、くちばしは脳が背側にある胚の腹側部分にくちばしが形成されるため、くちばしに向かって落ちます。しかし、これはかなり良さそうです。

私はこれにかなり満足しています。先に進んで、10マイクロリットルの滅菌PBSが入ったピペットを取り、ここに数滴だけ入れます。さて、それでは先に進んで卵を閉じることができます。

そして、私がやろうとしていることは、窓をここに、何度も何度も持ってきて、卵はまだ密封されていないということです。そこで、乾かないようにしたいのは、これまで使っていたプラスチックテープを少しだけ切ってみることです。窓より少し大きいくらいの大きさです。

そして、少しだけ伸ばして、ここの窓の真上に置き、ぴったりとフィットすることを確認します。ですから、アルブミンを排出するときも窓を切るときも、私たちが開けた穴はどれも塞がれています。だから今、卵は密封されています、それはうみんを失うことはできません、それは乾燥しません。

正常に老化できるはずです。というわけで、ビーズの配置は以上です。あなたのひよこの実験で頑張ってください、そしてあなたが望む結果を受け取ったことを願っています。