インフルエンザA型およびB型ウイルスの定量のための分子ベースのアッセイ

プレフィルドサンプルレシーバー、トランスファーカートリッジ、およびテストベースを含む分子検出システムを考えてみましょう。

テストベースには、ニック部位とインフルエンザAおよびB認識領域を備えたT1およびT2プライマー、酵素ミックス、および蛍光色素とクエンチャーを備えたモレキュラービーコンを含む反応チューブがあります。

ウイルスを含む鼻咽頭サンプルを溶解バッファーに入れて、サンプルレシーバーからテストベースに移します。

RNAが放出され、続いてT2プライマーがRNAの標的領域に結合し、逆転写酵素によって伸長します。

もう一方のT2プライマーは同じRNAに結合し、最初に伸びた鎖を置き換えます。

T1プライマーは置換された鎖に結合し、DNAポリメラーゼはそれを伸ばします。ニッキング酵素は、重合と鎖置換によりその部位を切断し、二本鎖DNAを形成します。

プロセスは継続され、一本鎖のオーバーハングを持つ二本鎖を増幅します。

分子ビーコンはオーバーハングと相互作用し、蛍光色素をクエンチャーから分離し、蛍光を生成してインフルエンザAおよびBを定量します。

テストプロセスを開始するには、計測器画面で[テストの実行]をタッチします。次に、スクリーンキーボードまたはバーコードスキャナーを使用して患者IDを入力し、[OK]を押します。その後、蓋を開け、オレンジ色のテストベースチューブをオレンジ色のテストベースホルダーに挿入します。正しいテストが画面に表示されていることを確認し、[OK]を押します。次に、青色のサンプルレシーバーを青色のサンプルレシーバーホルダーに挿入し、サンプルレシーバーがウォームアップするのを待ちます。その後、サンプルレシーバーの端に2本の指を置き、ホイルシールが所定の位置に留まるようにして、ホイルシールを取り外します。

次に、検査する患者綿棒をサンプルレシーバーに入れます。綿棒を液体に10秒間激しく混合し、綿棒ヘッドをサンプルレシーバーの側面に押し付けて、綿棒から検体を取り除きます。検査綿棒がウイルス輸送培地に保管されている場合は、ウイルス輸送培地を10秒間ボルテックスし、200マイクロリットルをサンプルレシーバーに加えます。次に、[OK] を押して続行します。

その後、白い転写カートリッジを青色のサンプルレシーバーに押し込みます。オレンジ色のインジケーターが上がるまで、サンプルレシーバーを押し続けます。次に、転写カートリッジを持ち上げてテストベースに接続します。カートリッジ転送が正しく取り付けられると、オレンジ色のインジケーターが下がります。ふたを閉め、結果画面が表示されるまで開かないでください。

次に、ホーム画面で [QC テストの実行] をタッチします。実行するQCテストを選択します。次に、[OK] をクリックし、画面上の指示に従ってテストを完了して、テスト用の QC サンプルと一致するテストの種類を確認します。テスト実行が完了したら、インフルエンザA、B、または未知のサブタイプの存在を解釈して画面に表示されるテスト結果を観察し、無効な結果についてテストを繰り返します。