Name: 哺乳動物の組織のレーザーキャプチャーマイクロダイセクション (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 34 s
Description: 学ぶレーザーキャプチャーマイクロダイセクション法による哺乳動物組織の精密分離技術。Leica A-S-L-M-Dを用いて標的細胞を正確に採取し、RNA抽出や分子解析に応用する方法を解説します。

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哺乳動物の組織のレーザーキャプチャーマイクロダイセクション

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

また、レーザーマイクロダイセクション（LMD）と呼ばれるレーザーキャプチャー顕微鏡は、、ユーザーは冷凍またはホルマリン固定、パラフィン包埋組織切片から細胞または組織の小さな数字を分離することができます。 LMDの技法は、熱に不安定なの上にどちらかに置か膜、または下に、組織切片に依存しています。一つの方法では、集光レーザーエネルギーは、組織切片から持ち上げことができる基盤となる細胞、上に膜を溶かすために使用されます。その他では、レーザーのエネルギーは、選択したセルが収集装置に分類できるように、組織に&quot;描かれた&quot;パスに沿って箔を気化。各テクニックは、数ミクロンの最小分解能で細胞を選択することができます。 DNA、RNA、タンパク質、および脂質試料を単離し、微小解剖試料から分析することができる。このビデオでは、我々は試料を装着し、キャプチャチューブのセットアップ用器具、試料調製の一般的な考慮事項を、初期化、LMDの原則への導入を含む7つのセグメントでライカAS - LMDレーザーマイクロダイセクション装​​置の使用を、示す、キャプチャコントロールを調整し、組織標本をキャプチャする、顕微鏡を揃える。レーザーキャプチャーマイクロダイセクションは、少数の細胞に相当するものと小さいとして、純粋な細胞集団のサンプルを分離するために調査官が可能になります。これは実験結果を混乱させることが近隣の汚染物質、無料ですが、目的の細胞の分析を行うことができます。

レーザーキャプチャー顕微鏡法（レーザーマイクロダイセクション（LMD）としても知られる）により、凍結または...から少数の細胞や組織を単離することが可能になります。

こんにちは、ロブ・エドワーズです。私はカリフォルニア大学アーバイン校のレーザーキャプチャー顕微鏡施設のディレクターを務めています。ここでは、当施設に導入しているレーザーキャプチャー顕微鏡の使用方法について説明します。当施設では、約3年前に購入したLeica A-S-L-M-Dを使用しています。レーザーキャプチャーシステムには2つの異なるタイプがあります。一つはスポット溶接のような方式で、プラスチック膜の下にガラススライド上の組織片を配置し、その組織を膜で覆う形式です。次に、レーザー光源を用いてメンブレンを融解させ、実質的に組織をメンブレン上にスポット溶接し、その後、捕捉した組織とともにメンブレンを取り除きます。それでは、LCMシステムを起動するために、ここにあるいくつかの装置を順番に電源ONにします。まず、こちらのASLMDコントロールボックスの電源を入れます。次に、コンピューターを起動します。捕捉する細胞を特定するために蛍光光学系が必要な試料を使用する場合は、蛍光照明用の水銀ランプを点灯させます。今回のデモンストレーションでは、水銀ランプは使用しません。処置前後の検体の高品質な画像を撮影したい場合は、ロジックボックスとコンピュータの電源を入れた後、ここでスポットカメラを個別にオンにします。次に、レーザー電源制御ユニットの電源を入れます。このユニットは、装置底面背面にあるキーでオンにします。最後に、コンピュータモニターの電源を入れます。画面上には、習熟しておく必要のある操作コントロールがいくつかあります。これらを頻繁に使用することになります。これは典型的なMicrosoft Windowsベースのプログラムであるため、いくつかのメニューについて説明します。ですが、まずはここのデスクトップについてお話ししましょう。顕微鏡が実際に捉えている映像を表示するライブウィンドウがあります。メニューバーの上部にあるライブイメージボタンで表示でき、フリーズボタンを切り替えてからファイルメニューを使用することで、例えば抽出前と抽出後のように、分離した組織の一部の静止画をキャプチャして記録することが可能です。顕微鏡は、ヘマトキシリン対比染色組織をキャプチャするか、あるいは蛍光染色組織をキャプチャするかによって、明視野モードまたは蛍光モードのいずれかで動作させることができます。次の2つのボタンには、顕微鏡ステージの平面に焦点を合わせる検体モード（specimen mode）と、ガラススライドを退避させて回収チューブ上部の回収された組織を可視化できるコレクターモード（collector mode）があります。これは品質管理のための設定です。メニューバーの次には、回収したい組織や細胞の部分を特定するために使用する一連の描画ツールがあります。そして、画面の右側には、図形描画オプションや

laser-capture-microdissection-of-mammalian-tissue

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオでは、3Dオルガノタイプ共培養モデルのレーザー解剖をミクロン単位の精度で説明しています。3D器官型モデルでは、線維芽細胞などの間質成分をがん上皮細胞と3次元共培養します。3Dモデルは、浸潤とがん-間質の相互作用を生理学的に近い条件で研究できるようにする実験ツールとして機能します。...

レーザーマイクロダイセクション:3D器官型培養モデルから浸潤する結腸直腸癌細胞を分離する技術

顕微解剖は、広範囲の組織内のDNA、RNA、およびタンパク質の試験のために使用されている。レーザーキャプチャー顕微鏡（LCM）は、最も一般的に使用される方法ですが、新しい製粉技術、mesodissectionは、最近になって提供されています。私たちは、 結核菌肉芽腫の組織スライドを組み込みmesodissectedホルマリン固定パラフィンからのRNA抽出を示しています。...

回復への新規マイクロダイセクションアプローチ<em&gt;結核菌</em肺肉芽腫、ホルマリン固定パラフィン包埋から&gt;特異的転写

個々のドーパミンニューロンの単離または直接または間接的な免疫組織化学との腹側被蓋領域は、レーザーキャプチャーマイクロダイセクションを用いて実証されている。赤外線レーザーを用いてガラススライドから組織を単離するため、赤外および紫外レーザーの組み合わせを使用して膜のスライドからパラメータが議論されている。...

レーザーキャプチャーマイクロダイセクション - 個々のドーパミンニューロンの単離と全体の腹側被蓋領域の実証

このプロトコルの目標は、下流のRNA分析のために不均一な前立腺組織から純粋な細胞型の集団を分離する効果的な方法として、レーザーキャプチャーマイクロダイセクションを使用することです。...

RNA分析のためのヒト前立腺上皮のレーザーキャプチャーマイクロダイセクション

ここでは、下流の RNA 解析のための小柱網 (TM) を隔離するため再現性のあるレーザー キャプチャ レーザーマイクロダイ セクション (LCM) のためのプロトコルについて述べる.TM での遺伝子発現の変化を分析する能力は、TM...

遺伝子発現解析のためのマウスの目から非常に純粋な小柱網のキャプチャ マイクロダイゼクション

骨細胞の遺伝子発現解析に十分な量の高品質RNAを得るために、レーザー捕捉微細解剖(LCM)プロトコルが開発されました。現在の研究は、マウス大腿骨のセクションに焦点を当てています。しかしながら、ここで報告されるLCMプロトコルは、任意の硬質組織の細胞における遺伝子発現を研究するために使用することができる。...

新鮮な凍結マウスの骨から高品質のRNAを得るレーザー捕捉微解剖プロトコル

このプロトコルは、マウス胚の新鮮な凍結切片から軟骨および骨を分離するためのレーザー捕捉マイクロセクションを記述する。軟骨および骨はクレシルバイオレット染色によって急速に視覚化され、正確に集めることができるので、トランスクリプト工学的分析のための高品質のRNAを得ることができます。...

遺伝子発現解析のためのマウス胚軟骨と骨のレーザー捕捉微小分片

レーザーマイクロディション(LMD)は、グリオーマの不均一性と侵入を媒介する経路を明らかにするために使用できる、敏感で再現性の高い技術です。ここでは、レーザーLMDを用いて、トランスクリプトーム解析を用いて、グリオーマ組織から離散領域を分離するための最適化されたプロトコルについて述べている。...

腫瘍性異種性、オンコストリーム、および浸潤の空間・分子特性解析のための神経膠腫部分領域のレーザー捕捉微小切除

レーザーマイクロダイセクションを使用してRNAシーケンシングのために個々の線虫組織を単離するプロトコルが記載されている。このプロトコルは、種固有の遺伝子ツールキットを必要とせず、単一組織サンプルのレベルで異なる種間で遺伝子発現プロファイルを比較することを可能にする。...

種にとらわれない単一組織アプリケーションのためのレーザーマイクロダイセクション

このプロトコルは、レーザーマイクロダイセクションを使用して組織学分解細胞集団を濃縮するための、染色された薄い組織切片画像から病理学的に確認された関心領域を人工知能駆動でセグメンテーションするためのハイスループットワークフローを記述します。この戦略には、関心のある細胞集団を示す境界をレーザー顕微鏡に直接転送することを可能にする新しいアルゴリズムが含まれる。...

腫瘍微小環境のマイクロスケールプロテオミクス分析のための工業化された人工知能誘導レーザーマイクロダイセクション

本プロトコルは、パラホルムアルデヒド固定および最適切断温度化合物埋め込みマウス肝組織の定義された組織領域からRNAをレーザーキャプチャマイクロ解剖を用いて単離し、ターゲットを絞った下流遺伝子発現解析を可能にする方法を説明しています。...

パラホルマルデヒド固定マウス肝組織のレーザーキャプチャ顕微解剖によるRNA解析

学ぶレーザーキャプチャーマイクロダイセクション法による哺乳動物組織の精密分離技術。Leica A-S-L-M-Dを用いて標的細胞を正確に採取し、RNA抽出や分子解析に応用する方法を解説します。

哺乳動物の組織のレーザーキャプチャーマイクロダイセクション

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