正常体温心停止と心肺蘇生法：虚血再灌流障害のマウスモデル

この手順の全体的な目的は、Norm Themic の全体的な虚血再灌流をモデル化して、この重要で一般的な疾患状態に対する介入の影響を評価することです。まず、麻酔をかけた器具付きマウスを心停止および蘇生法またはca CPRのために準備します。次に心停止が誘発されます。

その後、マウスを胸骨圧迫とエピネフリンを使用して心停止から蘇生します。最終的には、血中尿素、窒素、血清クレアチニン、アラントランスフェラーゼ、アスパラギン酸からマイナートランスフェラーゼ、組織学などの機能アッセイを実施して、臓器の大幅な損傷を評価することができます。好中球ゼラチン関連リポカリンなどの初期のバイオマーカーの存在も測定できます。

最後に、蘇生の結果がここで評価され、24 時間のトランスカーディオ、灌流、および腎臓収穫として実証されます。このモデルが、心停止や心肺蘇生法の大型動物モデルなどの他の方法と比較した場合の主な利点は、実験用マウスが低コストで、どこにでも存在し、多くのトランスジェニック株で利用できることです。まず、麻酔をかけたマウスの目を滑らかにし、動物を加熱パッドの仰臥位に置きます。

次に、テープを使用して動物の四肢を固定し、後肢の毛穴を中立位置に配置しますが、胸骨圧迫中に胸壁が完全に逸脱できるように、4つの毛穴を胸壁にできるだけ近づけて固定します。次に、直腸温度プローブを注油して配置します。22ゲージのテフロンカテーテルと角度付きイントロデューサーを使用して気管を挿管します。

チューブの気管内位置は、正圧または負圧のいずれかを使用して確認することができます。正圧を使用して、少量の空気がチューブに押し込まれます。チューブが食道ではなく気管に配置されている場合、胸部は負圧を使用して対称的に上昇します。

少量の液体が透明なチューブに入れられ、気管内チューブに取り付けられています。マウスによる自発的な呼吸努力により、チューブ内の液体が移動します。気管内カテーテルをワイヤーのループで切歯に固定し、切歯にわずかな張力を維持して、胸骨圧迫中に頭を固定します。

げっ歯類の換気装置を140マイクロリットル、毎分150呼吸に設定してマウスを機械的に換気します。滅菌技術と手術用顕微鏡を使用して、事前にフラッシュされたPE 10カテーテルを頸静脈に留置します。PE 10カテーテルをシアノアクリレート外科用接着剤で皮膚の閉鎖部に固定します。

3つの皮下心電図電極を、各軸の近くに1つずつ、もう1つは腹部の左下象限に配置します。すべてのワイヤが動作面に固定されていることを確認してください。信号の交差を最小限に抑え、信号経路内の絶縁体を最小限に抑えます。

接続したら、モニターの心電図信号を最適化します。マウスが標準テーマであることを確認してください。40マイクロリットルの室温、0.5モルの塩化カリウムを静脈内投与し、心電図の等電トレースを観察します。

アレスタイマーを開始します。次に、人工呼吸器を外し、麻酔薬の蒸気を中止します。電子ノイズを発生させ、心電図の監視を妨げる可能性のある加熱パッドやその他の機器の電源を切ります。

マウスの上に断熱ブランケットを置きます。心停止時に毎分温度を記録します。必要に応じて、加熱lを使用して、コア温度を通常のテーマ範囲に上げます。

心停止から7分30秒後、人工呼吸器を再接続し、1分間に180回に増やします。自発的な循環を回復するために胸骨圧迫を行うことは、このモデルの最も難しい部分です。マウスは非常に小さいため、ポジショニングと圧力が重要です。

圧力がかかりすぎると、肺や肝臓の損傷を引き起こし、生存率が低下します。圧力が小さすぎると、自発循環が戻る可能性が低くなります。胸部はANA列の3分の1から2分の1に圧縮する必要があります。

後方距離と完全な反動は、圧縮の間に許容されるべきです。このモデルで生存を達成できないのは、ほとんどの場合、8分での最適でないCPRが原因です。毎分300拍で胸骨圧迫を開始します。

胸骨圧迫は人差し指で行う必要があります。剣状突起の5ミリメートル上、正中線のわずかに左側に注入します。0.5ミリリットルのエピネフリンを1ミリリットルあたり15マイクログラムに希釈した。

CPRの最初の30秒間で、自発循環またはROSCの回復のために心電図を注意深く観察し、最初の2分間で頻繁な早期心室収縮と心電図軸の変化が観察されます。ROSCとほとんどの場合、安定した洞性頻脈に解消されます。2分後に、蘇生とエピネフリンの投与量の合計時間を記録します。

10分間、毎分温度を記録します。R-O-S-C-E-K-Gリードを取り外すことができる後 自発呼吸が始まると、通常はROSC後12〜50分以内に、頸静脈カテーテルを取り外し、直接圧力を使用して止血を行い、自発呼吸数が毎分60を超えるときに気管を抜管します。最後に、マウスを37°Cに設定された温度制御面上の回復ケージにマウスを置きます 処置後の最初の2時間または麻酔からの完全な回復に必要な場合はそれ以上、ケージはそれらを標準的な術後ハウジング状態に移動することができます C-A-C-P-Rマウスを麻酔し、最初に生理食塩水で、次にホルマリンでトランスカーディオ灌流を行います 固定に続いて、 開腹術は、腎固定の適切性を確認するために行われます。

適切に灌流され固定された腎臓はよく湯通しされています。心停止は、灌流の即時損失を誘発します。ここでは、圧力は平均動脈圧またはマップとして表されます。

この灌流圧の喪失により、陰影領域の心停止期間中、局所腎皮質血流または RR CBF がほぼ完全に停止します。ここで見られるように、胸骨圧迫とエピネフリン復帰による蘇生は正常に戻り、RR CBFは蘇生後の期間に着実に上昇します。この図では、処置後24時間の血中尿素窒素またはBUN血清クレアチニン、および尿細管細胞死の程度が、偽の手順で治療された動物と比較して、ca CPRを受けた動物ですべて有意に上昇していることがわかります ca CPRはここで汎生物の虚血性侮辱を誘発します、肝機能酵素の大規模な上昇による証拠、 アラントランスフェラーゼまたはLTおよびアスパラギン酸からミノロトランスフェラーゼまたはSTのca、CPRマウスを偽治療動物と比較

ここでは、好中球ゼラチン状関連リポカリンまたは末端ギャルに対するポリクローナル抗体を用いて行ったウェスタンブロット。腎虚血性損傷の感度の高い指標が示されています。尿サンプルは、A、B、C、D.として表される4匹の動物でC-A-C-P-Rの前後と24時間後に採取されました.この図は、C-A-C-P-R後のマウス尿中にN galが大幅にアップレギュレーションされていることを示しています。

この図は、CA CPRの24時間後に腎組織の短軸肺門切片のヘマット、トイン、およびエオイン染色を示していますが、尿細管の詰まりによる髄質および皮質髄質尿細管への明らかな損傷は、同じ動物の同じ領域のフルオロジェイドB染色が見られます。この図では、C-A-C-P-Rの24時間後に見ることができます。 フルオロジェイドBは壊死細胞を明るい緑色に染色し、斑状のコルチコ髄質チューブリン壊死を示します。これらの所見は、急性腎障害またはKIを発症したヒトからの腎生検所見と実質的に類似しており、KIの他の動物モデルによって生成されるものとは異なります、この手順を試みる際には、心電図信号ノイズを最小限に抑え、最適な圧力で胸骨圧迫を提供するために、休息前にマウスを慎重に配置することを覚えておくことが重要です。