Name: マウスにおける頭蓋内異種移植研究のための簡単なガイドスクリュー方式 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: 学ぶマウスにおけるガイドスクリュー方式による頭蓋内異種移植モデルの構築法。U87MGグリオーマ細胞を用いて新規治療薬の有効性を評価し、生存期間と神経症状を指標に治療応答を解析する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者らはこのモデルの開発に支援をVerleneヘンリーとリンジーホームズに感謝します。この研究の一部はジェームズS.マクダネル財団（＃220020173）によって賄われていた。

1。細胞株<ol><li> U87MG神経膠腫の細胞は、5％ウシ胎児血清（FBS）を添加したDMEM - F12を持つ大規模な組織培養フラスコで培養されています。 </li><li>細胞は温かいリン酸で二回フラスコを洗浄することによって収穫されている生理食塩水（PBS）は、バッファ、37でそれらをインキュベート° 0.25％トリプシンおよび0.05％EDTAを含むPBS 10mlで5分間。一度細胞が解除され、それらは培養培地、遠心分離（4分間300 × g）を10 mlを入れた50 mlチューブに配置されます。 </li><li>洗浄後、細胞を10 × 10 6 / 50,000細胞/5μlの接種のために許容される培地のmlの濃度で再懸濁する。 </li><li>細胞は、頭蓋内注射するまで氷上で保存されています。 </li></ol> 2。ボルト頭蓋内ガイドのネジ この手順は、細胞の注入の前に数日間行うことができます。ここで説明するすべての手順は、厳格な無菌条件下で行われている。 <ol><li>マウス（BALB / c NU / NU（メス）、5-6週間、約18グラム）は、ケタミン（100 mg / kg体重）及びキシラジン（5 mgの混合物の腹腔内（IP）の注入で秤量し、anesthetised、識別の目的で番号が付けられています/ kg）を。 </li><li>皮膚は、ヨウ素液でダウン拭いていると、小さな切開（2-3 mm）が正中線と両耳ラインの前方の右側に沿って行われます。これは、頭蓋骨の冠状および矢状縫合糸を公開します。ブレグマは、これら2つの縫合糸の接合部に位置している。 </li><li>ガイド用ネジのエントリポイントは、ポイント横2.5ミリメートルとブレグマの前方を1 mmにマークされています。この点は、直接に尾状核1の上方に位置しています。 </li><li> 1 × 1ミリメートルの深穴は、硬膜に頭蓋骨を介してツイストドリルを保持し、滅菌手で掘られている。 </li><li> 硬膜への頭蓋骨の表面の下に1.6ミリメートルを延長する滅菌ガイド用ネジは、ネジをドライバーで穴にボルトで固定されて頭蓋骨（図1A）と同じ高さになるまで。 </li><li>滅菌スタイレットまたはスクリューのダミーは、開口部（図1B）をクローズするためのガイド用ネジの中心孔に配置されます。 </li><li>鎮痛のために傷がVetbond組織接着剤で閉じられます（n -ブチルシアノアクリレート）およびマウスreversineの腹腔内注射（小動物）（0.1 ml / kgをを）与えられ、カルプロフェン（5 mg/kg/100μL）。マウスはその後、20分かかることが温暖化防止マット（36℃）で回復させる。彼らは完全に意識されるまでマウスを頻繁にモニターし、この回復時間の間に観察されています。 </li></ol> 3。頭蓋内細胞の生着<ol><li>滅菌カフハミルトンシリンジは、ガイド用ネジコンセント（図1B）の下に拡張するために、針のわずか2 mmを可能に針の先端に小さなプラスチック製のリングを適用することによって調製される。最終的な接種のポイントは、したがって、頭蓋骨の表面の下に3.5ミリメートルです。 </li><li>ガイド用ネジの手術後4日間、マウスは再び（2.1）上記のように麻酔し、小さな切開は、スタイレットを除去するためのガイド用ネジを介して行われます。 </li><li>カフハミルトンシリンジは、どのような気泡を作成したり、策定しないように予防策を取ってよく混合した細胞を5μlで満たされている。 </li><li>シリンジは、注入ポンプに固定され、針をガイドねじ（図1C）に挿入されます。次に、細胞を1時間あたり30μlの割合で注入されています。 </li><li>自動化装置（図1D）は、私たちは一定の流速で一度に10匹まで注入することができました。細胞はまた、カフ付きハミルトンシリンジを使用して手動で注入することができるか、あるいは注射器を針の先端が2mmからガイド用ネジを超えて拡張できるように3 mmでトリミングされている200μlのピペットの先端で手錠することができます。注入は、一定の安定したペースで実行する必要があります。 </li><li>注入が完了すると、注射器を注意深く除去され、スタイレットは、ガイドのネジに置き換えられます。傷口が閉じて接着され、マウスが（2.7）以前のように回復薬を与えられ、温暖化のマットの上に回復するために許可されています。 </li></ol> 4。治療の課題<ol><li> U87MG細胞接種4日後、マウスを秤量し、無作為にコントロールし、治療群に分けられます。 </li><li>治療群がAMG102（PBS100μl中100μgの）のIP注射を与えている間に、対照群は、PBS（100μL）の腹腔内（IP）注射が与えられます。 </li><li>注射は、14日間は毎秒6日目注射（図2）の合計を繰り返している。 </li><li>最後の注射後、マウスを毎日モニターし、一日おきに秤量する。 </li><li>マウスでは有意な神経学的機能障害（平衡感覚障害、麻痺）、脱水、または10％以上の体重減少または瀕死を表示するために始めたとき、彼らは人道的に安楽死された。これらの人道的エンドポイントの日数は、Kaplan - Meier生存曲線を記録した。 </li></ol> 5。治療効果の評価<li> Kaplan - Meier生存曲線は、Windows用グラフパッドプリズム4.03を使用して生成され、グラフパッドソフトウェア、サンディエゴカリフォルニア、アメリカ、 <a href="http://www.graphpad.com">www.graphpad.com</a> 3。死亡またはeuthanizationsは、エンドポイントのイベントとしてマークされ、1としてスコア化した。実験終了時に生きて残った動物は、非イベントとして記録され、0としてスコア化した。 </li> 6。代表的な結果： 対照動物は23日、細胞の初期接種後の神経障害や体重減少の兆しを示し始めた。これは、大幅に35日にAMG102投与群では遅れていた。確かに35日で、対照群の77％（N = 7 / 9）が安楽死されていた。 Kaplan - Meier生存曲線は明らかにAMG102の治療（図3）に対応して生存率の有意な増加を示しています。 70日では、対照マウスの88％は、AMG102投与群の37％（N = 3 / 8）と比較して（N = 8 / 9）安楽死されていた。脳の組織学的分析は、対照群では全9動物発達した腫瘍は唯一の3 8 AMG102投与したマウス（図4）のと比較していることを確認した。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 図1：画像は（）を直接尾状核の上にあるエリアに位置して頭蓋内のガイド用ネジを示しています。針の2mmのガイド超えると細胞は尾状核の内部に3.5ミリメートルを注入されるように、カフ付きハミルトンシリンジ（細胞との事前ロ​​ードされたが）その後、ガイド用ネジの内側に配置されます。注射器は、後にスタイレット（B）によって除去し、置き換えられます。自動注入装置（C）は、一度に10匹まで注入することができます。ここに示した5つの同時注射は、（D）です。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2"> 図2：治験実施計画書の回路図。細胞は、治療は4日目に開始0日目に注入した。治療群ではAMG102（100μg/100μL）IPの注入を受けた一方、コントロール動物では、PBS（100μL）IPの注射を受けた。これらの注射は10日間一日おきに与えられた。 6注射の合計が指定されました。動物は、神経学的および物理的な障害の兆候がない70日間モニターした。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図3"> 図3：コントロールとAMG102処置マウスを比較したKaplan - Meier生存曲線。有意な生存率はAMG102（P = 0.005）で処理した後得られた。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図4"> 図4：腫瘍対照動物の開発（）とAMG102処理された動物（B）のない脳腫瘍の開発を実証する冠状脳切片の顕微鏡写真。スケールバーは1mmである。

<ol><li>Lal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+implantable+guide-screw+system+for+brain+tumor+studies+in+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">An implantable guide-screw system for brain tumor studies in small animals.</a> J Neurosurg. 92, 326-333 (2000).</li>
<li>Jun, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMG+102%2C+a+fully+human+anti-hepatocyte+growth+factor%2Fscatter+factor+neutralizing+antibody%2C+enhances+the+efficacy+of+temozolomide+or+docetaxel+in+U-87+MG+cells+and+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">AMG 102, a fully human anti-hepatocyte growth factor/scatter factor neutralizing antibody, enhances the efficacy of temozolomide or docetaxel in U-87 MG cells and xenografts.</a> Clin Cancer Res. 13, 6735-6742 (2007).</li>
<li>Pillay, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plasticity+of+oncogene+addiction%3A+implications+for+targeted+therapies+directed+to+receptor+tyrosine+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">The plasticity of oncogene addiction: implications for targeted therapies directed to receptor tyrosine kinases.</a> Neoplasia. 11, 448-458 (2009).</li>
<li>Buchanan, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiosensitization+of+glioma+cells+by+modulation+of+Met+signaling+with+the+hepatocyte+growth+factor+neutralizing+antibody.+AMG102%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Radiosensitization of glioma cells by modulation of Met signaling with the hepatocyte growth factor neutralizing antibody. AMG102.</a> J Cell Mol Med. 15, 1999-2006 (2011).</li>
<li>Wen, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+II+study+evaluating+the+efficacy+and+safety+of+AMG+102+%28rilotumumab%29+in+patients+with+recurrent+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">A phase II study evaluating the efficacy and safety of AMG 102 (rilotumumab) in patients with recurrent glioblastoma.</a> Neuro Oncol. 13, 437-446 (2011).</li>
<li>Caretti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+Tumor+Growth+and+Post-Irradiation+Recurrence+in+a+Diffuse+Intrinsic+Pontine+Glioma+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Monitoring of Tumor Growth and Post-Irradiation Recurrence in a Diffuse Intrinsic Pontine Glioma Mouse Model.</a> Brain Pathol. 4, 441-451 (2011).</li>
<li>Jallo, G. I., Volkov, A., Wong, C., Carson, B. S., Penno, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+brainstem+tumor+model%3A+functional+and+histopathological+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Childs+Nerv.+Syst%22%5BJournal%5D)">A novel brainstem tumor model: functional and histopathological characterization.</a> Childs Nerv. Syst. 22, 1519-1525 (2006).</li>
<li>Johns, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficacy+of+epidermal+growth+factor+receptor-specific+antibodies+against+gliomaxenografts+is+influenced+by+receptor+levels%2C+activation+status%2C+and+heterodimerization%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The efficacy of epidermal growth factor receptor-specific antibodies against gliomaxenografts is influenced by receptor levels, activation status, and heterodimerization.</a> Clin Cancer Res. 13, 1911-1925 (2007).</li>
<li>Scott, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+I+clinical+trial+with+monoclonal+antibody+ch806+targeting+transitional+state+and+mutant+epidermal+growth+factor+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">A phase I clinical trial with monoclonal antibody ch806 targeting transitional state and mutant epidermal growth factor receptors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104, 4071-4076 (2007).</li>
<li>Niyazi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+options+for+recurrent+malignant+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Radiother.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic options for recurrent malignant glioma.</a> Radiother. Oncol. 98, 1-14 (2011).</li>
</ol>

この作品は、Amgen社から研究助成金によって支えられて

ここで紹介する頭蓋内のガイド用ネジの方法は、頭蓋内異種移植片を迅速かつ再現性の確立を可能にし、訓練された動物の技術者の手に、この手順は非常に簡単に定位装置を必要とせずに実行されます。我々の手法は正確にin vivoでの腫瘍の開発に最適な脳の領域、および一度に最大10匹までの同時接種が可能な自動注入ポンプを見つけるために、ガイド用ネジを組み合わせて使用​​します。ガイド用ネジの増大術は、実行するために5分以内かかります。 30μlの/時間における細胞の自動注入は、5μlのボリュームのためにわずか10分かかります。これは一定の速度で正確な投与を保証し、頭蓋内圧亢進に起因する余分-脳神経領域に細胞の追放のリスクを低減します。我々はまた、10μlの容量でこの手順を実行していると携帯逆流に起因する余分-頭蓋腫瘍の成長を確認されていません。自動注入ポンプはまた、いくつかの動物は我々は時間当たり約15の動物に限定されている定位の手順に比べて時間当たり60匹まで注入することができると同時に接種することができますように。 その位置は、腫瘍の大きさの究極の位置を決定するとして、この手順の中で最も重要なステップは、頭蓋骨のガイド用ネジの位置です。ガイド用ネジがあまりにも中心的である場合、細胞はガイドがはるか前方にに配置されている場合では2つの脳半球の間の領域に注入され、細胞は、すべてで脳内に注入されることはありません。したがって、ガイド横2.5ミリメートルとブレグマ1〜前方1 mmの位置で可能な限り正確であることが不可欠である。プラスチック製のガイド用ネジは、このようなMRIやPET 6などの脳イメージングを必要とする研究にも利用できるが、本研究では、鋼のガイド用ネジを使用していました。自動注入ポンプは、いくつかのグループのためのコストがかかりすぎるされている場合でも、細胞はまだ手動でより迅速に定位のアプローチよりも注入することができる。全体的に、この迅速、正確かつ再現性のある方法は神経膠腫、髄芽腫や脳幹の腫瘍7を研究するために使用することができます。この手順は、予想外の麻酔反応（&lt;1％）による死亡者と我々の2つの研究室間、500人以上のマウスで行われている。ガイド用ネジとボルトで固定し、その後、細胞を注入したマウスは、手続きの結果として、神経学的合併症を死亡するか、受けていない。動物はどんな合併症がなく、100日を超えて生存している。我々はヘアレスマウスを使用するのが好ましいが、適切に提供するのと同様に、SCIDのような髪の免疫不全マウスは、頭蓋骨の髪は、サイトを清潔に保つために、ガイド用ネジに干渉する毛を防ぐために手術前に削除されましたれる。 現在、神経膠腫80から10の治療用に開発されているいくつかの新規治療薬があります。最近では、皮下U87MG神経膠腫異種移植片がAMG102 3で処理することにより抑制できることを示した;ヒト化抗体は、現在、神経膠腫5に臨床評価を受けてHGFに指示。我々は、ヌードマウスの脳で頭蓋内U87MG腫瘍を確立する方法がここに記述するために使用。我々の研究は明らかに法の有用性を示し、AMG102が大幅に同所U87MG異種移植片の増殖を阻害することを示しています。我々は、他の治療法が腫瘍の成長をより効果的にinhibitionを取得するにはAMG102と組み合わせて使用​​することができるかを決定するためにこのモデルを使用し続けます。

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント（省略可能） </th></tr><tr><td> DMEM/F12 </td><td>インビトロジェン</td><td> 12634010 </td><td></td></tr><tr><td> FCS </td><td> Bovogen </td><td> SFBを</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン</td><td>インビトロジェン</td><td> 15050065 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td>シグマ</td><td> E6758 </td><td></td></tr><tr><td> BALB / C nu / nuマウス</td><td> ARCパース</td><td></td><td></td></tr><tr><td>スクリューホルダー</td><td>プラスチック一</td><td> SD - 1 </td><td></td></tr><tr><td>ドリルホルダー</td><td>プラスチック一</td><td> DH - 1 </td><td></td></tr><tr><td>ドリルのビット</td><td>プラスチック一</td><td> D＃60 </td><td></td></tr><tr><td>ネジガイド（金属） </td><td>プラスチック一</td><td> C212SG </td><td></td></tr><tr><td>ネジのダミー（スタイラス） </td><td>プラスチック一</td><td> C212SD </td><td></td></tr><tr><td>ハミルトンシリンジ（10μlを26グラム超硬針） </td><td>グレース課発見科学</td><td> 80075 </td><td></td></tr><tr><td> PHD 2000分の22の注入ポンプ</td><td>ハーバード装置</td><td> 70から2003 </td><td>オプション</td></tr><tr><td> Vetbond </td><td> 3M </td><td> 1469SB </td><td></td></tr><tr><td>サーモパッド</td><td>ハーバード装置</td><td> 340390 </td><td></td></tr></tbody></table>

マウスにおける頭蓋内異種移植研究のための簡単​​なガイドスクリュー方式

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

免疫抑制マウスの脳にヒト腫瘍細胞の移植は、神経膠芽腫（グリオーマ）と髄芽腫を含む脳腫瘍の研究のための確立された方法です。広く使用されている定位アプローチは一度に一つの動物の注入を可能にする、労働集約的であり、非常に特殊な装置を必要とします。最初はラルら 、1で開発したガイド用ネジの方法は、面倒な定位の手順を排除するために開発されました。我々は現在、迅速かつ非常に安全であると修正されたガイド用ネジのアプローチを説明し、重要な倫理的配慮が、どちらも。特に、私たちの手続きは今同時に腫瘍細胞を注入することが10匹まで可能に注入ポンプを内蔵しています。 HGF /現在臨床評価2-5を受けて散乱係数に向け完全ヒト抗体を、この手順の有用性を実証するために、我々は、AMG102を投与したマウスの頭蓋内異種移植片、のように人間のU87MG神経膠腫細胞を確立した。 AMG102の全身注射は大幅に頭蓋内U87MGの異種移植片ですべてのマウスの生存を延長し、完全な治療の数となりました。 この研究では、ガイド用ネジのメソッドは頭蓋内異種移植片を確立するための安価な、再現性の高いアプローチであることを示しています。さらに、それは脳腫瘍の治療のための新たな治療戦略を検証するための関連する生理学的モデルを提供します。

神経膠腫の治療のための新たな治療パラダイムを評価するために、生理学的な関連モデルが不可欠です。我々は、定位のアプローチよりもより迅速かつ安全である頭蓋内移植モデルの確立のための埋め込み型ガイド用ネジの手順を利用する。

免疫不全マウスの脳にヒト腫瘍細胞を移植する方法は、膠芽腫を含む脳腫瘍の研究において確立された手法である...

本手順の目的は、新規治療薬の有効性を評価するために、脳内に脳がんの移植片を作成することです。まず、頭蓋骨にガイドスクリューを固定し、次にそのガイドスクリューを通じて脳内に細胞を注入することでこれを達成します。次のステップとして、脳内に定着した腫瘍細胞を標的とした治療的チャレンジを開始します。その後、生存率を評価することで、動物の治療反応をモニタリングします。最終的に、治療剤は対照群と比較して、治療群の腫瘍成長および生存率に影響を与えます。この手順は、細胞注入の数日前に実施することができます。まずマウスの体重を測定し、ケタミンとキシラジンの混合液を腹腔内投与して麻酔をかけます。足指へのピンチ刺激に反応しなくなったことを確認後、ヨードで頭皮を処置し、正中線の右側かつ耳間線より前から2〜3 mmの切開を加えます。この切開により、頭蓋骨の冠状縫合と矢状縫合が露出します。bgmaはこれら2つの縫合線の接合点に位置しています。ガイドスクリューの刺入点を、bgmaから外側に0.2～0.5 mm、前方に1 mmの地点にマークします。この点はCAU 8核の直上に位置します。印を付けた箇所にハンドツイストドリルを使用し、デュラボルトに深さ1 mmの穴を開けます。滅菌済みのガイドネジを、頭蓋骨の表面と面一になるまで穴にねじ込みます。ネジが頭蓋骨の表面に触れたら、すぐに進めるのを止めてください。ネジが頭蓋骨に食い込むと、頭蓋骨が骨折する可能性があります。ガイドネジは、長さ1.6 millimeterの26 gaugeの針を支持します。ガイドネジの開口部を閉じるには、ダミーまたはネジダミーをガイドに挿入してください。ネジを固定します。ピンセットで切開した皮膚を寄せ合わせ、Vet Bondを1滴滴下して皮膚の切端に沿って広げ、接着するまで数秒間皮膚を保持して創傷を閉じます。最後に、腹腔内注射により麻酔回復剤および鎮痛剤のカルプロフェンを投与し、保温マットの上でマウスを回復させます。回復には最大20分かかる場合があります。例として、U 87 mg グリオマ細胞を、5% 胎児ウシ血清を添加した D-M-E-M-F 12 を用いて大型の組織培養フラスコで培養しました。本セクションでは、投与当日にこれらの細胞を注入するための準備方法について説明します。まず、フラスコを温めたPBSで2回洗浄して細胞を回収します。次に、0.25% trypsinおよび0.05% EDTAを含むPBSを10 milliliters加え、37 °Cで5分間、または細胞が剥離するまでインキュベートします。その後、細胞を10 millilitersの培地で回収します。細胞をヘモサイトメーターに載せ、顕微鏡下で細胞数を計測します。10 mLの培養液と細胞を含む50 mLコニカルチューブを300 ×gで4分間遠心分離します。遠心後、細胞を培養液で10 million cells/mLの濃度で再懸濁します。この濃度では、細胞懸濁液5 µLあたり50,000個の細胞が含まれることになり、これを1回あたりの脳内注入に使用します。注入用の細胞懸濁液を氷上で保存します。5 µLのような少量の液量は蒸発しやすく、細胞を死滅させる可能性があるため、ここでは十分な容量の細胞懸濁液を用意する必要があります。まず、カフ付きのハミルトンシリンジを準備してください。ガイドネジの出口から針が2 mmだけ突き出るように、針先に小さなプラスチックリングを取り付けます。これにより、接種部位の深さが3.5 mmになります。あらかじめ増強したマウスを麻酔し、ガイドネジの上に小さな切開を加えます。その後、スタイレットを抜き取ります。次に、氷上で保存し十分に混合した細胞を5 µL、シリンジに充填します。シリンジ内に気泡が入ると、塞栓症や注射部位からの細胞の逆流を引き起こす可能性があるため、注意してください。シリンジを灌流ポンプに固定し、ニードルをガイドに挿入します。細胞注入を30 µL/hourの速度で開始します。自動装置を使用することで、一定の流速で最大10匹の動物に同時に注入することが可能です。一定の安定したペースで行うのであれば、手動での注入も可能です。注入が完了したら、慎重にシリンジを取り外し、前と同様にガイドネジにスタイレットを戻します。Vet Bondで傷口を閉じ、鎮痛剤を投与し、マウスを回復させます。回復には最大20分かかります。U 87 mg細胞の接種から4日後、マウスの体重を測定し、対照群と治療群にランダムに分けました。対照群にはPBS 100 µLを、治療群にはMG 1 0 2 100 µg/100 µLを、それぞれ腹腔内投与しました。この投与を14日間にわたり隔日で繰り返し、計6回の投与を行いました。最終注入後、マウスを毎日観察し、1日おきに体重を測定した。動物のエンドポイントは、平衡感覚の喪失や麻痺などの重大な神経機能障害の発現、脱水、10%以上の体重減少、または死亡と定義した。エンドポイントまでの日数をカプラン・マイヤー生存曲線として記録した。死亡、または呼び出し（calls）がエンドポイントとしてマークされた場合は、イベントとして記録し、1点としてスコア付けしました。実験終了時に生存していた個体は、非イベントとして記録し、対照として0点としました。細胞の初回接種から23日後、動物に神経学的障害の兆候と体重減少が現れ始めました。これはA MG 1 0 2投与群において著しく遅延しました。35日目までに、対照群の9匹中7匹が安楽死となりました。78日目までには、対照群の9匹すべてが安楽死したのに対し、A MG 1 0 2投与群では8匹中わずか3匹でした。脳の組織学的解析により、対照群の9匹すべての動物に腫瘍が発生したのに対し、8:00 AM g 1 0 2 投与マウスでは3匹のみに腫瘍が発生したことが確認されました。

a-simple-guide-screw-method-for-intracranial-xenograft-studies-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

ルシフェラーゼで修飾された人間の脳の腫瘍異種移植片は、腫瘍の成長および生物発光イメージング法を用いて治療に対する反応のその後のモニタリングで、胸腺欠損マウスでは頭蓋内に確立することができます。生存時間解析と組み合わせることで、生物発光のモニタリングは、脳腫瘍の治療を検討している治療法の前臨床試験に不可欠な研究ツールです。...

生物発光イメージングを使用して腫瘍の成長や治療に対する反応のその後の分析では頭蓋内脳の腫瘍異種移植片の確立

私たちは、ヌードマウスとその後シリアルの脳に人間の多形性膠芽腫細胞の正確な、定位注入のための統合方法を説​​明...

定位頭蓋内注入と<emインビボ&gt;</em多形性膠芽腫のマウスモデル系における腫瘍異種移植片の&gt;生物発光イメージング

このビデオでは、免疫治療薬の投与を容易にするために、脳腫瘍マウスモデルに頭蓋内カニューレを埋め込む手順を紹介しています。腫瘍微小環境におけるグリピカン-2特異的キメラ抗原受容体T細胞の送達は、T細胞の活性化を引き起こし、腫瘍溶解および腫瘍退縮をもたらす。...

脳腫瘍に治療薬を送達するためのマウスへの頭蓋内カニューレ移植

出典: Liou, C. et al.自由に動くマウスにおける腸由来微生物代謝産物の脳室内送達J. Vis. 経験。(2022)。このビデオでは、自由に動くマウスに短鎖脂肪酸(SCFA)を頭蓋内注射して、脳を介した行動に対する短鎖脂肪酸(SCFA)の影響を研究する方法を紹介します。マウスの脳に埋め込まれたガイドカニューレにインジェクターカニューレを挿入します。回復後、マウスは新しいケージに慣れます。次に、SCFA...

マウスモデルにおける腸由来微生物代謝産物の頭蓋内注射

悪性神経膠腫は、臨床的および分子的特徴が異なる非常に浸透性の高いグリア新生物の不均一なグループを構成する。原発性異形移植片は、前臨床動物モデルにおける悪性神経膠腫サブタイプの組織病理学的および分子的特徴を再現する。...

原発性異形性神経膠腫は浸潤性の増殖とイソクエンテインゲナーゼI突然変異

脳はよくインビトロまたは異所性の分析によって示されていない資質を持つユニークなサイトです。再現性のある場所および成長特性を有する同所性マウスモデルを確実に定位固定装置及び低圧シリンジポンプを用いて頭蓋内の注射を使用して作成することができる。...

解剖学的に正確な作成と人間の脳の腫瘍の再現性頭蓋内異種移植片

幹細胞は、その固有の腫瘍指向性のために脳腫瘍を治療するための有望な治療キャリアである。非侵襲性の鼻腔内幹細胞送達は、血液脳関門を迂回し、臨床翻訳の可能性を示す。この記事では、神経膠腫のマウスモデルにおける鼻腔内幹細胞送達の基本原理を要約する。...

マウスモデルにおける膠芽細胞腫に対する治療用幹細胞の鼻腔内送達

腸由来の微生物代謝物は、動物の複雑な行動につながる多面的な影響を及ぼします。私たちは、ガイドカニューレを介した脳室内送達を介して脳内の腸由来微生物代謝物の影響を描写するための段階的な方法を提供することを目指しています。...

自由に動くマウスにおける腸由来微生物代謝物の脳室内送達

中枢神経系(CNS)腫瘍は、小児のがん関連死の主な原因であり、局所免疫ベースの治療法は、臨床試験で患者に対してますますテストされています。このプロトコルは、CNS腫瘍を標的とする免疫療法注入の前臨床評価のためのマウスへの局所カニューレ移植の方法を記載しています。...

マウスにおける連続局所キメラ抗原受容体(CAR)T細胞注入のための頭蓋内カニューレ移植

同所性小児脳腫瘍モデルの開発には、がん細胞を正確に移植するための定位固定装置を使用するという、細心の注意を払った精度が必要です。ここで紹介する方法論は、脳腫瘍細胞の調製、頭蓋内注射の実施、および脳腫瘍の生着を評価するための術後モニタリングシステムの実装に関連するステップを概説しています。...

脳腫瘍に対する同所性患者由来異種移植モデルの確立

このプロトコルの目的は、研究者に頭蓋内移植のための再現性の高い技術を提供することです。...

マウスにおける膠芽腫患者由来異種移植細胞株の立体定位頭蓋内移植

学ぶマウスにおけるガイドスクリュー方式による頭蓋内異種移植モデルの構築法。U87MGグリオーマ細胞を用いて新規治療薬の有効性を評価し、生存期間と神経症状を指標に治療応答を解析する。

マウスにおける頭蓋内異種移植研究のための簡単​​なガイドスクリュー方式

さらに動画を探す

マウスにおける頭蓋内異種移植研究のための簡単なガイドスクリュー方式