Name: 人間の毛包から神経堤幹細胞の単離および培養 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: 学ぶ 人間の毛包から神経堤幹細胞を単離・培養する方法。トリプシン処理とフローサイトメトリーによるCD271 HNK1二重陽性細胞の選別、神経球形成の観察を含む詳細なプロトコルです。再生医療研究に応用可能です。

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1。組織培養プレートの作製<ol><li>コー​​トはそれぞれに良く、ポリ-D-リジン（PDL）は井戸の底をカバーするのに十分。プレートがボンネットに乾燥することができます。 </li><li>井戸が乾燥した後、滅菌水で洗い流して、吸引します。プレートがボンネットに乾燥することができます。 </li><li>時フィブロネクチンと乾燥、コート（6ミリリットルで1ミリグラムの濃度で37℃で一晩biowhittakerの水に溶解したもの）。 </li><li> NCSC媒体を加える[95ミリリットルDMEM/F12、1ミリリットルペン/ストレプトマイシン（P / S）、1mlのN2は、2ミリリットルB27、100μlのメルカプトエタノール（2ME、50mMのストック）は、bFGF（20 ng / mlの培地）、IGF -1（20 / NG媒体のml）およびEGF（20 ngの/培地1ml）]プレートで乾燥したフィブロネクチンの前に、 </li></ol> 2。人間の頭皮から毛包細胞を抽出<ol><li>隔離NCSCsの手順を開始する前に、1（ 表1参照） は 、それぞれのメディアと試薬を準備する必要があります。 </li><li>フェイスリフトの手順やFEから新鮮なヒト成人頭皮TAL頭皮組織をPBSでペニシリン - ストレプトマイシンを含むで洗浄し、収集されます。 </li><li>皮膚を50 mlチューブに移し、4℃で一晩ディスパーゼ（10 mg / ml）を含むDMEM中で培養される37℃で2〜4時間のインキュベーション℃のも効果的です。皮膚片は、酵素が浸透することを可能にするために1cmの最大幅でなければなりません。 </li><li>滅菌シャーレに皮膚を移し、皮膚表面の近くに毛幹をつかみ、しっかりとスムーズに引っ張ることによって皮膚からそれぞれの髪をやってのける。毛包が成長期（ 図1A）または休止（ 図1B）のいずれかの形態を示している。 </li><li>定期的に振とうしながら室温で15〜20分間0.05％トリプシン-EDTA（Invitrogen）中で孤立した卵胞の断片をインキュベートし、反応を停止し、10％FBSを含むDMEM 4ミリリットルを追加します。濾胞上皮をトリプシン処理し、様々なサイズと形状の細胞を含む単細胞懸濁液を得るために、フィルタは40μmで濾過する。 </li><li>スピン5分間、200×gで、1 mlのPBSで2％血清（FBS）を含むで再懸濁、慎重に上清を捨てる。 </li><li>代わりに、羽をむしられた毛包は、 その場で毛球を成長させるためにトリプシン消化することなく、文化に配置することができます。 </li></ol> 3。フローサイトメトリー細胞選別を使用した毛包NCSCsの分離<ol><li>毛包単細胞懸濁液をトリプシン消化により得られ、暗闇の中で氷上で40分間CD271（APC標識）/ HNK1（FITC-結合）またはCD271 / alpha4インテグリン（PE-結合）に対する抗体を用いて標識した。 </li><li>室温で200×gで5分間遠心し、上清を吸引除去する。 </li><li> 2パーセント血清（FBS）を含むPBSで細胞を再懸濁して、ソート前に、PIは、死んだ細胞アウトゲートに追加されます。 </li><li>フローサイトメトリー（FACS）による細胞選別を行います。 CD271 +、HNK1 +ダブルポジティブ細胞またはCD271 +、alpha4インテグリン+二重陽性細胞（ 図2）を収集します。 </li><li>ソート後り、CD271 +、HNK1 +ダブルポジティブ細胞またはCD271 +、alpha4インテグリン+二重陽性細胞がNCSC培地で超低アタッチメントプレート中で培養される</li></ol> 4。プライマリNCSCsの文化<ol><li> NCSC培地中で超低アタッチメントプレートに細胞をソート文化引き離され濾胞細胞またはFACSは、毎日培地を変更してください。 </li><li>顕微鏡下で毎日細胞培養を確認してください。 NCSCsは、ドナー（ 図3A）の年齢に応じて培養液中で2〜5週間で数日間と整形球後に浮動小凝集体を形成するために開始されます。伸長はバルジ領域と数週間でin situで整形球（ 図3B）全体の毛包がNCSC培地中で培養さで数日内に表示されます。 </li></ol> 5。 NCSCsの拡大<ol><li>一度PBSで細胞を洗浄します。 </li><li>あらかじめ温めておいた追加（〜37℃、クリティカル）で37 accutaseインキュベートし5〜10℃のC単一のセル（アタッチメント培養NCSCのため、37℃でインキュベートaccutase細胞℃で5分間、毛包幹細胞が切り離さかどうかを確認するため）に解離してください神経幹細胞の球体を作るために定期的に振とうしながら分。 </li><li>残っaccutaseソリューションを削除するDMEM/F12培地において室温で200×gで5分間細胞を2回洗浄し、遠心分離する。 </li><li> NCSC培地で細胞を再懸濁する。 </li><li>浮遊培養では、超低アタッチメントプレートに細胞を入れた。添付ファイルのカルチャでは、前処理された組織培養プレートに細胞を入れた。 </li></ol> 6。代表的な結果 NCSC培地はフィーダー細胞を必要とせずに、未分化状態でhNCSCsを維持するのに十分である。ケラチノサイトは増殖し、徐々に培地中に死亡したことはありません。特定の小円形細胞が増殖し、3から5日後に、懸濁液中の小さな凝集体を形成することになる。これらの浮遊凝集体が徐々にiを増加我々は毛球（ 図3A）と呼ばれるn個のサイズ、生成された三次元の球体状の構造、。コー​​ティングされたプレートで培養した場合、NCSCsは、表面に付着し、どんな球を形成しません。添付NCSCsは、懸濁液中よりも速く成長します。球形成または接続された幹細胞はNCSCsマーカーを発現している。全体の毛包が文化である場合、球はバルジ領域（ 図3B）に対応する領域に形成されている。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/3194/3194fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 図1。成長期（）および休止期（B）が毛包を羽をむしられた。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/3194/3194fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2"> 図2。 NCSCsのFACS分析の代表的な画像左のパネル：。細胞は、抗CD271と抗alphe 4インテグリン抗体を用いて、ゲートされています。右のパネル：細胞は、抗CD271と抗HNK1抗体を用いてゲートさ。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/3194/3194fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図3"> 図3。毛球の形態浮遊毛球、左パネルの（A）の形態：低消費電力、右のパネル：ハイパワー（B）はバルジ領域、左側のパネルで、in situで毛球の形態学：休止期の膨らみの毛球、右のパネル：成長期毛包のバルジ領域の毛球。

<ol><li>Cotsarelis, G., Cheng, S. Z., Dong, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Existence+of+slow-cycling+limbal+epithelial+basal+cells+that+can+be+preferentially+stimulated+to+proliferate%3A+implications+on+epithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Existence of slow-cycling limbal epithelial basal cells that can be preferentially stimulated to proliferate: implications on epithelial stem cells.</a> Cell. 57, 201-209 (1989).</li>
<li>Cotsarelis, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-retaining+cells+reside+in+the+bulge+area+of+pilosebaceous+unit%3A+implications+for+follicular+stem+cells%2C+hair+cycle%2C+and+skin+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Label-retaining cells reside in the bulge area of pilosebaceous unit: implications for follicular stem cells, hair cycle, and skin carcinogenesis.</a> Cell. 61, 1329-1337 (1990).</li>
<li>Tanimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hair+follicle+stem+cells+provide+a+functional+niche+for+melanocyte+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Hair follicle stem cells provide a functional niche for melanocyte stem cells.</a> Cell Stem Cell. 8, 177-187 (2011).</li>
<li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+novel+population+of+multipotent+adult+stem+cells+from+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Isolation of a novel population of multipotent adult stem cells from human hair follicles.</a> Am. J. Pathol. 168, 1879-1888 (2006).</li>
<li>Yu, H., Kumar, S. M., Kossenkov, A. V., Showe, L., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+with+neural+crest+characteristics+derived+from+the+bulge+region+of+cultured+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Stem cells with neural crest characteristics derived from the bulge region of cultured human hair follicles.</a> J. Invest. Dermatol. 130, 1227-1236 (2010).</li>
<li>Wong, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest-derived+cells+with+stem+cell+features+can+be+traced+back+to+multiple+lineages+in+the+adult+skin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Neural crest-derived cells with stem cell features can be traced back to multiple lineages in the adult skin.</a> J. Cell Biol. 175, 1005-1015 (2006).</li>
<li>Sieber-Blum, M., Grim, M., Hu, Y. F., Szeder, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+neural+crest+stem+cells+in+the+adult+hair+follicle%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle.</a> Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).</li>
<li>Amoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implanted+hair+follicle+stem+cells+form+Schwann+cells+that+support+repair+of+severed+peripheral+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Implanted hair follicle stem cells form Schwann cells that support repair of severed peripheral nerves.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 17734-17738 (2005).</li>
<li>Koliatsos, V. E., Xu, L., Yan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+stem+cell+grafts+as+therapies+for+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Biol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Human stem cell grafts as therapies for motor neuron disease.</a> Expert Opin. Biol. Ther. 8, 137-141 (2008).</li>
<li>McKenzie, I. A., Biernaskie, J., Toma, J. G., Midha, R., Miller, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin-derived+precursors+generate+myelinating+Schwann+cells+for+the+injured+and+dysmyelinated+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Skin-derived precursors generate myelinating Schwann cells for the injured and dysmyelinated nervous system.</a> J. Neurosci. 26, 6651-6660 (2006).</li>
<li>LeDouarin, N. M., Kalcheim, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLeDouarin%2C+NM+%22The+Neural+Crest%22">The Neural Crest</a>. , Cambridge University Press. Cambridge. (1999).</li>
<li>Tumbar, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+epithelial+stem+cell+niche+in+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Defining the epithelial stem cell niche in skin.</a> Science. 303, 359-363 (2004).</li>
<li>Roh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-potentiality+of+a+new+immortalized+epithelial+stem+cell+line+derived+from+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev.+Biol.+Anim%22%5BJournal%5D)">Multi-potentiality of a new immortalized epithelial stem cell line derived from human hair follicles.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 44, 236-244 (2008).</li>
</ol>

我々は、開示することは何もない。

記載の細胞単離および培養方法は再現性があり、堅牢です。私たちは、幅広い年齢層を横断して、個人の数十からNCSCsを生成している。それが右の組織の収穫後に組織を処理するのが最善の方法ですが、私たちは、頭皮の組織が安全に、細胞生存率への影響を最小限に抑えて一晩輸送のための氷の上でメディアに格納することができることがわかった。 抗生物質で、頭皮の組織を治療し、潜在的な微生物汚染を避けるために、毛包の単離中に無菌テクニックを使用することが重要です。実行可​​能な卵胞のフェイスリフト皮膚や胎児頭皮組織の利回り百人を捨て、通常は数日後に、FACSソーティングまたはさらなる実験のために十分な組織を生成します。頭皮組織のパンチ生検は、通常の細胞の数が限られて生成され、さらなる実験のために十分な細胞を生成するために追加の文化組織を必要とします。 胚NCSCsは、異なる多数を生じさせる本体11内の細胞型が、それは髪が分化能の広いスペクトルを持っている、派生NCSCs卵胞と思われる。髪の膨らみは3,12幹...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Invitrogen</td><td>11330-32</td><td></td></tr><tr><td>熱不活化FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>B27サプリメント</td><td>Invitrogen</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>N2サプリメント</td><td>Invitrogen</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Invitrogen</td><td>PHG0026</td><td></td></tr><tr><td>上皮成長因子</td><td>R&amp;amp;Dシステム</td><td>236-EG-01M</td><td></td></tr><tr><td>IGF-I</td><td>R&amp;amp;Dシステム</td><td>291-G1-050</td><td></td></tr><tr><td>0.05% トリプシン/EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>ディスパーゼ</td><td>Invitrogen</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>Invitrogen</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;p class=&quot;JoVEコンテンツ&quot;&gt;&lt;強力な&gt;表1.&lt;/strong&gt;&lt;/p&gt;</td></tr></tbody></table>

人間の毛包から神経堤幹細胞の単離および培養

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

毛包は、生涯成長を受け、毛周期は、幹細胞の増殖と休止を伴うよく制御されたプロセスである。髪の膨らみは、成体幹細胞1のためのよく特徴付けニッチです。外毛根鞘のこのセグメントは、上皮幹細胞2、色素幹細胞3と4-7幹細胞のような神経堤幹細胞を含む、さまざまな種類の数が含まれています。毛包は、ヒト幹細胞の種類ごとにアクセス可能で、豊富な情報源を表しています。我々や他のは、人間の胎児と成人の毛包からの神経堤幹細胞（NCSCs）4,5単離した。これらのヒト幹細胞は、ラベル保細胞であり、in vitroにおける非対称細胞分裂を介して自己複製することが可能である。彼らは未熟な神経堤細胞のマーカーではなく、分化マーカーを発現している。当社の発現プロファイリングのための研究では、彼らがマウス皮膚未熟な神経CREと同様の遺伝子発現パターンを共有していることを示したstの細胞。彼らは 、in vitroクローン単一細胞培養での後、筋原性メラニン細胞、および神経細胞系譜を生じさせることができるクローンの多能性を示す。分化した細胞は、系統特異的マーカーを取得するだけでなく、ex vivoでの条件で適切な機能を発揮しないだけ。さらに、これらのNCSCsは間葉系統に向かって分化能を示しています。分化した神経細胞は、マウスの脳に固執し、ニューロンの分化マーカーを保持することができます。それは髪がNCSCsが神経再生を助けることができる派生卵胞、そして、彼らはtransecting脊髄損傷8以下、これらの幹細胞を移植したマウスの運動機能を改善することが示されている。さらに、末梢神経は、幹細胞移植片9と、押しつぶさ坐骨神経に隣接する皮膚由来前駆細胞の移植で修復されました再ミエリン10をもたらした。そのため、毛包/皮膚由来NCSCsはすでにRのための有望な結果が示されている前臨床モデルでegenerative療法。 人工多能性幹（iPS）細胞に再プログラミング体細胞は、再生医療のための巨大な可能性を示している。しかし、癌遺伝子/ウイルス統合および多能性幹細胞の潜在的な発癌性の長期的な効果が十分に対処されていない特に、iPS細胞に関する多くの問題は、まだあります。 iPS細胞は再生医療に使用することができます前に、克服すべき多くのハードルが残っています。成体幹細胞は、安全であることが知られており、それらはそのような骨髄移植のように、長年にわたり臨床的に使用されなければならないということです。多くの患者は、すでに治療の恩恵を受けている。自家成体幹細胞はまだ移植に適した細胞である。したがって、ヒトの皮膚/毛包において容易にアクセス可能で、拡張可能な成体幹細胞は、再生医療のための貴重な情報源です。

この記事では、人間の毛包からの神経堤幹細胞の単離および培養のための堅牢なプロトコルを提案する。

毛包は生涯を通じて成長を繰り返し、ヘアサイクルは幹細胞の増殖と静止期を伴う高度に制御されたプロセスである。ヘアバルジは...

この手順の目的は、ヒト頭皮組織から初代神経堤幹細胞（N CSCs）を単離および培養することです。まず、ヒト頭皮の皮膚を1 cm幅のストリップ状に切り出し、DBAを含む培地でインキュベートします。その後、皮膚を新しい培地の中に配置し、毛包を抜去します。手順の第2ステップでは、毛包をトリプシンで処理し、単一細胞懸濁液を得ます。手順の最終ステップでは、フローサイトメトリーを用いてCD 2 71 HNK one二重陽性のncscを分取し、培養プレートに播種します。最終的に、位相差顕微鏡を用いてニューロスフィアの形成と増殖を観察します。皮膚と毛包を顕微鏡下で解剖することは非常に困難であるため、抽出および単離のステップを習得することは難しく、本手法による実演が極めて重要となります。幹細胞の培養準備として、6ウェルプレートの各ウェルの底をポリリシンでコーティングし、フード内でプレートを乾燥させます。ウェルが乾燥したら、滅菌水でリンスして吸引し、再びウェルを乾燥させます。その後、0.17 mg/mLのフィブロネクチン溶液でプレートをコーティングします。その後、NCSC培地中のフィブロネクチンがプレート内で乾燥する前に、以下の培地および試薬を準備し、いつでも使用できるようにしておきます。97%D-M-E-M-F 12、2%B 27 supplement、1%の2種類のサプリメント（B-F-G-F-E-G-F、IGF one）およびdiss.を準備します。フェイスリフト手術から採取した新鮮な成人ヒト頭皮皮膚、または胎児の頭皮組織を回収し、ペニシリン・ストレプトマイシンを含むPBSで洗浄します。皮膚を50 mLチューブに移し、10 mg/mLのDISを含むDMEM中で37 °Cで2〜4時間、または4 °Cで一晩インキュベートします。次に、皮膚を滅菌済みのペトリ皿に移し、皮膚表面に近い毛幹を掴み、しっかりとスムーズに引き抜くことで、皮膚から毛を除去します。毛包に抗原原形態が認められる場合、単離した毛包断片を0.05% Trypsin-EDTA中で、時々振盪しながら室温で15〜20分間インキュベートします。次に、反応を停止させるために、10% FBS含有DMEMを4 mL加えます。続いて、卵胞上皮を40 µmフィルターに通し、大きさや形状の異なる細胞を含む単一細胞懸濁液を得ます。その後、懸濁液を200 ×gで5分間遠心分離します。S上清を慎重に廃棄し、ペレットを2%FBSを含む1 mLのPBSで再懸濁します。まずFACSを用いてN CSCsを分離するために、CD 271 PC共役抗体、hnk-1 FC共役抗体、またはα4インテグリン CD 271 PE共役抗体で細胞を標識します。標識は、氷上で40分間暗所でインキュベートして行います。室温で200 ×gで5分間遠心分離し、上清を吸引し

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Neuroscience

神経科学

ここでは、マウス表皮神経堤幹細胞（EPI - NCSC）を分離する手法を示す。テクニックは、膨らみを分離し、組織培養にそれをplaceing、ミクロ解剖ウィスカの卵胞を伴います。 4日間 - EPI -...

マウス表皮神経堤幹細胞（EPI - NCSC）文化

in vitroで神経堤幹細胞（NCSC）を育成するために、特殊な培地（NCSCM）が必要です。...

マウス神経堤幹細胞の培養のためのニワトリ胚抽出物の製造

人間の皮膚から実行可能な成人上皮幹細胞を単離の迅速、確実な方法が記載されている。方法は、毛包と細胞培養のための単一の細胞懸濁液または組織断片の分離の摘採が続く皮膚のコラーゲンマトリックスの酵素消化を、利用しています。...

ヒト皮膚から大人上皮幹細胞の単離と培養

捨てられた人間の胎児皮質組織から神経幹細胞の単離および培養上シンプルで信頼性の高い方法が記載されている。既知のヒト神経疾患から派生した培養物は、病理学、細胞及び分子過程の特性だけでなく、薬理学的有効性を評価するためのプラットフォームを提供するために使用することができます。...

廃棄されたヒト胎児脳組織から神経幹細胞の生成

神経管から胚の神経堤の分離の使用を容易に...

胎児マウス神経管から神経堤細胞の単離および培養

このビデオは、ヒト真皮組織からシュワン細胞を分離し、培養するためのプロトコルを示しています。ヒトの真皮には、線維芽細胞やシュワン細胞など、さまざまな種類の細胞が含まれています。単離後、細胞を抗有糸分裂剤で処理して増殖する線維芽細胞を排除し、シュワン細胞を純粋に培養します。...

ヒト真皮からの初代シュワン細胞の単離と培養

このビデオは、ニワトリ胚の中脳領域から脳神経襞を分離する技術を示しています。神経襞の詳細な解剖過程、その配置、およびフィブロネクチン被覆ガラスへの付着を示し、続いて神経襞からの神経堤細胞の移動を観察します。...

ニワトリ胚からの頭蓋神経襞の単離による神経堤細胞培養

私たちは、初代ヒト線維芽細胞培養からナイーブ多能皮膚由来の前駆体（SKP）細胞を単離する方法を報告する。我々は、線維芽細胞培養物に由来するこれらのSKPsは、ヒト皮膚生検から直接誘導されるものに類似した幹細胞の特性を共有することを示している。これらの細胞は、そのようなOCT4とNanogのような多能性マーカーに加えて、神経堤マーカー、ネスチンを発現。...

初代ヒト線維芽細胞培養からナイーブ成人幹細胞の分離

神経堤ヒト多能性幹細胞に由来する（NC）細胞（HPSC）は、ヒトの発生および疾患をモデル化し、細胞置換療法のための大きな可能性を有する。ここでは、現在広く使用されているのフィーダーフリー適応...

ヒト多能性幹細胞からの神経堤前駆細胞のフィーダーフリー導出

このプロトコルは、主に細胞移動の研究のために、マウスモデルからの頭蓋神経堤細胞の解剖および培養について説明する。使用されるライブイメージング技術と速度と細胞形状の変化の解析について述べた。...

神経クレスト細胞の形成と移動の研究のためのマウスからの原発性頭蓋神経クレスト細胞の解剖、培養および分析

マウス胚性幹細胞から脳神経堤細胞を作製するための再現性のあるサイズのニューロスフェアを生成するための三次元(3D) in vitro...

多重化の試みのための頭蓋神経堤の細胞の三次元 の試験管 外分化のプロトコル

学ぶ 人間の毛包から神経堤幹細胞を単離・培養する方法。トリプシン処理とフローサイトメトリーによるCD271 HNK1二重陽性細胞の選別、神経球形成の観察を含む詳細なプロトコルです。再生医療研究に応用可能です。

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