Name: StemCell Technologies社からRosetteSepキットと人間の血液からNK細胞の濃縮 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 52 s
Description: 学ぶ RosetteSepキットを用いた人間血液からのNK細胞負選択分離法。高純度で生存率の高い自然傷害細胞を迅速に濃縮し、免疫学研究や細胞機能解析に応用可能な信頼性の高いプロトコルを解説します。

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詳細なプロトコルは、それぞれのロゼットのSEP分離カクテルに含まれており、StemCell TechnologiesのWebサイト1で利用できるオンラインになっています。

<ol><li>Procedures and instruction manuals. , 
	
 <a target="_blank" href="http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx">http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx</a> Forthcoming.</li>
</ol>

このテクニックを使用して単離した細胞は、さらに他の細胞分離キットを用いて、異なる集団に分けることができます。

PBS、2％FCSとHistopaqueソリューションを補充は、プロシージャの開始前に室温に戻しておく必要があります。

stemcell technologies社からrosettesepキットと人間の血液からnk細胞の濃縮

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

ナチュラルキラー（NK）細胞は自然免疫系に属し、がんや感染症との戦いで大きな役割を果たす大型顆粒細胞傷害性リンパ球であるが、また妊娠中や移植拒絶反応の初期段階に関与している。これらの細胞は、末梢血中に存在し、それらを単離することができる。細胞は、正または負のどちらか選択を用いて単離することができる。我々は表面のすべてのセル上に存在するマーカーが関心の細胞を標的とする抗体のカクテルを使用して負の選択のためのに対し、正の選択のために我々は、関心の高い細胞の表面マーカーの存在に対する抗体を使用してください。この後者の手法は、それによって不要な細胞の活性化やdifferenciationのリスクを低減、抗体の自由な目的の細胞を残すことを示します。このビデオプロトコルでは、StemCellの技術からRosetteSepキットを使用して、負の選択により、ヒト血液からNK細胞を分離する方法を示します。手順は、ヒト末梢血を（人間の被験者を保護するための制度審査委員会に承認されたプロトコルの下で）取得し、NK細胞上に存在しないマーカーに結合する抗体のカクテルと混合伴いますが、周辺に存在する全ての他の単核細胞上に存在する血液（例えば、Tリンパ球、単球...).カクテルに存在する抗体は、赤血球にグリコフォリンに対する抗体にコンジュゲートされる。すべての不要な細胞や赤血球は、したがって、複合体に閉じ込められます。血液と抗体カクテルのミックスは、その後、希釈Histopaque勾配の上で合成し、遠心分離されています。 NK細胞は、（&gt; 80％純粋）Histopaqueと希釈した血漿との界面で収集することができます。同様のカクテルは、ヒトTリンパ球など他の細胞集団の濃縮のために用意されています。

ナチュラルキラー細胞はリンパ球の小集団である。ここでは、StemCell Technologies社からキットを使用して、負の選択によって、ヒトの血液からこれらの細胞を単離する方法を示します。得られた細胞は、そのための手続きの数に使用する準備が現実的で抗体による手つかずのです、と。

StemCell Technologies社からRosetteSepキットと人間の血液からNK細胞の濃縮

ナチュラルキラー（NK）細胞は、自然免疫系に属する大型の顆粒性細胞傷害性リンパ球であり、がんとの闘いにおいて重要な役割を果たしている...

こんにちは、クリスティーン・ビートンです。私はカリフォルニア大学アーバイン校生理学・生物物理学部のジョージ・チェン研究室で助手研究員を務めています。本日は、Stem Cell Technologies社のカクテルキットを用いて、ヒト血液からナチュラルキラー細胞を陰性選択する方法について説明します。Stem Cell Technologies社のこのキットを使用する理由は、非常に純度の高い細胞が得られ、かつ陰性選択によって抗体に結合していない細胞を回収できるためです。これにより、それらの細胞に予期せぬ事象が発生することを防げます。Tsepキットの仕組みは、血液中で目的外のすべての細胞に結合する抗体を用いるというものです。私の例では、T細胞、B細胞、単球があり、さらに赤血球のグリコフォリンAに結合する抗体があります。ここで行ったのは、白血球に対する抗体と赤血球に対する抗体を結合させたことです。これにより、不要な1つの白血球と複数の赤血球からなる複合体が形成されます。赤血球は白血球よりも密度が高いため、血液と抗体を含む混合カクテルを密度勾配に載せて遠心分離すると、赤血球がチューブの底に沈降し、それに伴って不要な白血球がすべて一緒に引き込まれます。その結果、勾配の上部に回収されるのは、抗体に全く結合していない、純粋またはほぼ純粋なナチュラルキラー細胞になります。それでは、ヒト血液のチューブからNK細胞を単離しましょう。これはソジウムヘパリンチューブに採取された新鮮な血液です。勾配剤として、Roset epのヒトNK細胞濃縮カクテルを使用します。実験の後半では、密度が1.077の10 77 histo packを使用します。また、2%胎児牛血清を添加したPBSも準備しています。これらは冷蔵庫で保存しているため、使用前に室温に戻るようにしてください。それでは、採血した血液全量を取り出し、50 mLファルコンチューブに入れます。真空容器であるため、内部が真空になっており、中身が飛び散らないように開封する必要があります。キャップにある小さな切り欠きの位置を確認し、慎重に持ち上げてチューブ内に空気を導入します。チューブの真空状態が解除されたら、キャップを簡単に取り外すことができます。次に10 mLピペットを用いて、チューブ内の血液をすべてピペットで吸い出します。血液量は約10 mLになると想定されます。ここに9.5 mLの血液があります。この9.5 mLすべてを50 mLファルコンチューブに入れます。血液が入っていたピペットは直接バイオハザード袋に廃棄します。チューブには常に漂白剤を少量加え、蓋を閉めてからバイオハザード袋に入れます。これが、抗体カクテルを添加する前の血液の状態です。これから血液に抗体カクテルを添加します。血液量が約9.5 mLあり、血液1 mLあたり50 µ

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