Name: 子宮組織の自動移植による外科的に誘発される子宮内膜症のマウスモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: 学ぶ 子宮組織の自動移植による外科的誘導法でマウス子宮内膜症モデルを作成する方法。腸間膜動脈への縫着と組織学的解析により、ヒトと類似した病態を再現し、疾患メカニズムと治療法の研究に活用できます。

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最適化で、その支援のためのこの原稿の批判的検討のためのクリスKassotisとオードリーベイリーへと博士スコットKorte、ジョセフBeeman、アリソンCurfman、ポールキンボール、ブリジットNeibreggue、ヤコブレーデル、エイミーシュローダー、マイヤスタインバーグ、とステイシーWinkelerに感謝我々の研究室では、このモデルの。資金は、臨床Biodetectivesトレーニンググラント（NIH T90）（KEP）、ミズーリ州のライフサイエンスの大学や研究機会プログラム、MU研究評議会、MU研究会助成金およびNIH R21HD056441（SCN）によって提供されていました。

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<li>Fang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intact+progesterone+receptors+are+essential+to+counteract+the+proliferative+effect+of+estradiol+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+endometriosis%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Intact progesterone receptors are essential to counteract the proliferative effect of estradiol in a genetically engineered mouse model of endometriosis.</a> Fertil. Steril. 82, 673-678 (2004).</li>
<li>Fang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+or+enzymatic+disruption+of+aromatase+inhibits+the+growth+of+ectopic+uterine+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Genetic or enzymatic disruption of aromatase inhibits the growth of ectopic uterine tissue.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 87, 3460-3466 (2002).</li>
<li>Cummings, A. M., Metcalf, J. L., Birnbaum, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promotion+of+endometriosis+by+2%2C3%2C7%2C8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin+in+rats+and+mice%3A+time-dose+dependence+and+species+comparison%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Appl.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Promotion of endometriosis by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin in rats and mice: time-dose dependence and species comparison.</a> Toxicol. Appl. Pharmacol. 138, 131-139 (1996).</li>
<li>Foster, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologic+characteristics+of+endometriosis+in+the+mouse+model%3A+application+to+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+Physiol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Morphologic characteristics of endometriosis in the mouse model: application to toxicology.</a> Can. J. Physiol. Pharmacol. 75, 1188-1196 (1997).</li>
<li>Cummings, A. M., Metcalf, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+surgically+induced+endometriosis+on+pregnancy+and+effect+of+pregnancy+and+lactation+on+endometriosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Soc.+Exp.+Biol.+Med%22%5BJournal%5D)">Effect of surgically induced endometriosis on pregnancy and effect of pregnancy and lactation on endometriosis in mice.</a> Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 212, 332-337 (1996).</li>
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<li>Lee, B., Du, H., Taylor, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+murine+endometriosis+induces+DNA+methylation+and+altered+gene+expression+in+eutopic+endometrium%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Experimental murine endometriosis induces DNA methylation and altered gene expression in eutopic endometrium.</a> Biol. Reprod. 80, 79-85 (2009).</li>
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<li>Hirata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+experimental+model+of+endometriosis+using+mice+that+ubiquitously+express+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Development of an experimental model of endometriosis using mice that ubiquitously express green fluorescent protein.</a> Hum. Reprod. 20, 2092-2096 (2005).</li>
<li>Story, L., Kennedy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+studies+in+endometriosis%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Ilar.+J%22%5BJournal%5D)">Animal studies in endometriosis: a review.</a> Ilar. J. 45, 132-138 (2004).</li>
<li>Cummings, A. M., Hedge, J. M., Birnbaum, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+prenatal+exposure+to+TCDD+on+the+promotion+of+endometriotic+lesion+growth+by+TCDD+in+adult+female+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of prenatal exposure to TCDD on the promotion of endometriotic lesion growth by TCDD in adult female rats and mice.</a> Toxicol. Sci. 52, 45-49 (1999).</li>
<li>Cummings, A. M., Metcalf, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+estrogen%2C+progesterone%2C+and+methoxychlor+on+surgically+induced+endometriosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Fundam.+Appl.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Effects of estrogen, progesterone, and methoxychlor on surgically induced endometriosis in rats.</a> Fundam. Appl. Toxicol. 27, 287-290 (1995).</li>
<li>Sharpe-Timms, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometriotic+lesions+synthesize+and+secrete+a+haptoglobin-like+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Endometriotic lesions synthesize and secrete a haptoglobin-like protein.</a> Biol. Reprod. 58, 988-994 (1998).</li>
<li>Yavuz, E., Oktem, M., Esinler, I., Toru, S. A., Zeyneloglu, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genistein+causes+regression+of+endometriotic+implants+in+the+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Genistein causes regression of endometriotic implants in the rat model.</a> Fertil. Steril. 88, 1129-1134 (2007).</li>
<li>Dmitrieva, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocannabinoid+involvement+in+endometriosis%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Endocannabinoid involvement in endometriosis.</a> Pain. 151, 703-710 (2010).</li>
<li>Efstathiou, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonsteroidal+antiinflammatory+drugs+differentially+suppress+endometriosis+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Nonsteroidal antiinflammatory drugs differentially suppress endometriosis in a murine model.</a> Fertil. Steril. 83, 171-181 (2005).</li>
<li>Becker, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endostatin+inhibits+the+growth+of+endometriotic+lesions+but+does+not+affect+fertility%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Endostatin inhibits the growth of endometriotic lesions but does not affect fertility.</a> Fertil. Steril. 84, Suppl 2. 1144-1155 (2005).</li>
<li>Becker, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+synthetic+endostatin+peptides+inhibit+endothelial+migration+in+vitro+and+endometriosis+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Short synthetic endostatin peptides inhibit endothelial migration in vitro and endometriosis in a mouse model.</a> Fertil. Steril. 85, 71-77 (2006).</li>
<li>Sharpe-Timms, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+rats+as+a+research+model+for+the+study+of+endometriosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Using rats as a research model for the study of endometriosis.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 955, 318-327 (2002).</li>
<li>Stilley, J. A., Woods-Marshall, R., Sutovsky, M., Sutovsky, P., Sharpe-Timms, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+Fecundity+in+Female+Rats+with+Surgically+Induced+Endometriosis+and+in+Their+Daughters%3A+A+Potential+Role+for+Tissue+Inhibitors+of+Metalloproteinase+1%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Reduced Fecundity in Female Rats with Surgically Induced Endometriosis and in Their Daughters: A Potential Role for Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 1.</a> Biol. Reprod. 80, (2009).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

マウスの子宮内膜症の外科的誘導を実行中に注意すべきいくつかの重要なパラメータがあります。最初に、子宮内膜症はエストロゲン依存性疾患であり、そのようなこの手術としてインタクトな動物で、あるいはエストロゲン20で補足した卵巣摘出動物で実行する必要があります。第二に、動脈カスケードに子宮内膜​​生検を縫合は、細心の注意を払って行う必要があります。我々は1つで2つだけの比較的緩い結び目を使用すると、腸とそれに続く組織の壊死や動物の死への血液供給のライゲーションを防止しながら、それぞれの場所で生検を保持投げることを発見した。我々は強く縫合が確実に十分な組織が失われていないことに置かれるように実際の実験に先立っていくつかのマウスの練習をお勧めしますが、腸の壊死を引き起こすとして、あまりにもタイトではない。第三に、それはの中に滅菌PBSを含むペニシリンとストレプトマイシンと腸の組織が水分を保つことが非常に重要です。urgery。第四に、努力が子宮内膜症インプラントのサイズに一貫性があることを確認することも必要となります。この効果に我々は、生検パンチが摘出した子宮組織から一貫してサイズの子宮内膜症インプラントを作成するには、2 m...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>色鉛筆</td><td>フィッシャー</td><td> NC9954135 </td></tr><tr><td>ガラススライド</td><td>フィッシャー</td><td> 12-550-433 </td></tr><tr><td>スポイト</td><td>フィッシャー</td><td> S79383 </td></tr><tr><td>膣細胞診塗抹標本を評価するための標準的な光学顕微鏡</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ブプレノルフィンHCL C3（CARJET）10X1ml </td><td>バトラーのアニマルヘルスサプライ</td><td> 022891 </td></tr><tr><td>滅菌リン酸緩衝生理食塩水（PBS） </td><td> GIBCO </td><td> 14040-117 </td></tr><tr><td> 10,000 U / mlのペニシリン、0.85％NaCl中で10,000μg/ mlのストレプトマイシン</td><td> Hyclone </td><td> SV30010 </td></tr><tr><td>イソフルレン</td><td>アボット動物の健康</td><td> 05260〜05 </td></tr><tr><td>イソフルラン非再呼吸麻酔システム</td><td></td><td></td></tr><tr><td>循環温水暖房パッド</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 30mlの注射器のシース</td><td>フィッシャー</td><td> 14から823 - 16G </td></tr><tr><td>パウダーフリー滅菌手袋</td><td> Fisherbrand </td><td> 19020558 </td></tr><tr><td>眼軟膏</td><td>主な医薬品</td><td> 10033691 </td></tr><tr><td>小型の電気バリカン</td><td>ウォール</td><td> 9861-600 </td></tr><tr><td>クロルヘキシジンスクラブ</td><td>フィッシャー</td><td> NC9863042 </td></tr><tr><td> 70％エタノール</td><td></td><td></td></tr><tr><td> Polylined滅菌フィールド</td><td>ブッセの病院の使い捨て</td><td> 696 </td></tr><tr><td>サイズ3メス</td><td>フィッシャー</td><td> 22-079-657 </td></tr><tr><td>番号10メス刃</td><td>フィッシャー</td><td> 22-079-681 </td></tr><tr><td>小外科はさみ</td><td> Roboz </td><td> RS - 5850 </td></tr><tr><td>小鋸歯状の半湾曲鉗子</td><td> Roboz </td><td> RS - 5135 </td></tr><tr><td> 5から0黒編みこみの絹の縫合</td><td>エチコン</td><td> K870H </td></tr><tr><td>滅菌パイレックスガラスシャーレ</td><td>コー​​ニング</td><td> 70160-101 </td></tr><tr><td> 2ミリメートル生検パンチ</td><td> Miltex </td><td> 33から31 </td></tr><tr><td>滅菌ガーゼ</td><td>ケンドール</td><td> 1806 </td></tr><tr><td> 6から0黒モノフィラメントethilonナイロン縫合糸</td><td>エチコン</td><td> 697G </td></tr><tr><td>針のドライバ（オプション） </td><td>世界の精密機器</td><td> 500023 </td></tr><tr><td> 5から0未染色の編組被覆したVicryl縫合</td><td>エチコン</td><td> J490G </td></tr><tr><td> 9ミリメートルAutoclipの創傷クリップ</td><td>ベクトンディッキンソン</td><td> 427631 </td></tr><tr><td> Autoclipアプライヤ＆リムーバー</td><td>ベクトンディッキンソン</td><td> 427630 </td></tr><tr><td> 23Gの針</td><td>ベクトンディッキンソン</td><td> 305193 </td></tr><tr><td> 1ccの注射器</td><td>ベクトンディクソン</td><td> 301025 </td></tr><tr><td> 5X拡大鏡スタンド（オプション） </td><td>フィッシャー</td><td> 14-648-23 </td></tr><tr><td> 10％緩衝ホルマリン</td><td>フィッシャー</td><td> SF100 - 4 </td></tr><tr><td>カリパス</td><td> Roboz </td><td> RS - 6466 </td></tr><tr><td>カセットの処理/埋め込み</td><td>フィッシャー</td><td> 15から197 - 700A </td></tr><tr><td>生検のフォームパッド</td><td>フィッシャー</td><td> 22-038-222 </td></tr><tr><td> RNAqueous RNA分離キット</td><td>アンビオン</td><td> AM1912 </td></tr><tr><td>液体窒素</td><td></td><td></td></tr><tr><td>スナップキャップのマイクロフラットトップチューブ</td><td>フィッシャー</td><td> 02-681-240 </td></tr><tr><td>ケタミン（オプション） </td><td> Simga </td><td> K4138 </td></tr><tr><td> Domitor（メデトミジン塩酸塩）（オプション） </td><td> Tocris </td><td> 2023 </td></tr><tr><td> Antisedan（atipamezole）（オプション） </td><td>シグマ</td><td> A9611 </td></tr></tbody></table>

子宮組織の自動移植による外科的に誘発される子宮内膜症のマウスモデル

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

子宮内膜症は、その病因は不明のまま慢性、痛みを伴う病気です。さらに、子宮内膜症の治療は、腹腔鏡病変の除去、および/または痛みや不妊の症状の慢性的な医薬品管理を必要とすることができます。子宮内膜症に関連するコストは、米国で1年間あたり22億ドルと推定されている。この謎めいた病気の根底にあるメカニズムの理解を促進するために、動物モデルが採用されている。霊長類では、自発的に子宮内膜​​症を開発するため、霊長類モデルに最も近い女性の病気に似ています。齧歯類のモデルは、しかし、よりコスト効果と2すぐに利用できます。我々はここに記述するモデルは、腸の腸間膜（図1）への子宮組織の自家移転を伴いますし、最初のラット3で開発され、後でマウス4に転送されました。外科的に誘発された子宮内膜症の自家齧歯類モデルの目的は、模倣することです。女性の病気。我々と他の人は以前にマウスやラットの疾患5,6と女性で観察されたミラーをから子宮内膜症の病変で観察される遺伝子発現のパターンが示されている。マウスで手術を行うことの利点の一つは、利用可能なトランスジェニックマウス系統の豊富な子宮内膜症の確立と成長に重要な特定のコンポーネントの役割を決定する上で研究者を助けることができるということです。摘出したヒト子宮内膜断片は、免疫不全マウスの腹膜に導入されている別のモデルにも広く使用されていますが、子宮内膜症2,7に重要であると考えられている正常な免疫システムの不足によって制限されます。重要なのは、外科的に誘発される子宮内膜症のマウスモデルでは、免疫系8、ホルモン9,10および環境要因11,12が FERTで子宮内膜症だけでなく、子宮内膜症の影響をどのように影響するか研究するために使用されている汎用性の高いモデルです。ility 13と痛み14。

腸間膜動脈カスケードに子宮組織の自動移植によるマウスおよびラットにおける子宮内膜症の外科的誘導の説明。

子宮内膜症は、病因が依然として不明な慢性的かつ疼痛を伴う疾患である。さらに、子宮内膜症の治療には、腹腔鏡による……の切除が必要となる場合がある。

本手順の全体的な目的は、子宮組織を腸間膜の動脈系に自家移植することにより、マウスに子宮内膜症を外科的に誘発することです。まず、子宮の子宮内膜を結紮、切除、および露出させることでこれを達成します。次に、2 mmのバイオプシーパンチを用いて、露出させた子宮内膜から3つの子宮内膜様インプラントを作成します。本手順の第3ステップは、3つの子宮内膜様インプラントを腸間膜の動脈カスケード内の動脈に縫合することです。本手順の最終ステップは、腹壁と皮膚を閉鎖し、動物に子宮内膜様病変を回復させることです。マウスから切除された病変は、組織学的解析および遺伝子とタンパク質の発現パターンによって決定される通り、子宮内膜症の女性に見られるものと類似しています。一般的に、この手法に不慣れな方は、主に3つの理由で苦労します。第一に、マウスの組織が非常に小さいこと。第二に、腸間膜が損傷しやすいこと。そして第三に、縫合をきつくしすぎると、腸管壊死を引き起こすことです。まず、鎮痛剤および麻酔薬を含む、無菌手術を成功させるために必要なすべての手術器具を準備します。吸入イソフルランを用いて動物を麻酔した後、足指へのピンチ刺激に対する反応がないことを確認して完全な麻酔状態であることを確認し、手術中の乾燥を防ぐために眼に眼軟膏を塗布した後、小型バリカンで手術部位を除毛します。クロルヘキシジン洗浄剤と70%エタノールを交互に3回拭いて手術部位を消毒し、その後、滅菌ドレープで動物を覆います。小さなハサミまたはメスを用いて、膣開口部から吻側へ0.5〜1.0 cmの位置で終わるように、正中線に小さな切開を加えます。術後の閉鎖を容易にするため、鈍的に体壁を腹壁から剥離します。鈍的剥離の後、腹壁の正中線に小さな切開を加えます。次に、小型のピンセットを使用して、左子宮角を慎重に探します。子宮は腸の背側に位置しており、切開部位に最初に進入した際に通常最初に見えるのは腸です。子宮角をそっと上に引き上げ、開いたピンセットをその下に滑り込ませて、レトラクター（牽引器）として使用します。この時点で、卵巣と子宮の外見を確認しておくことも有用です。発情周期の特定を容易にするため。2枚目のスライドのように、5-0の黒色編組シルク縫合糸を6〜8 cmの長さに切り、伸展させた子宮角の下に通します。子宮管接合部で子宮角をしっかりと結紮します。卵管と子宮頸管接合部をそれぞれ結紮します。各部位をスクエアノットで結び、縫合糸の端は切らずに残しておきます。2か所の結紮部の間の子宮角部分を切り出し、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含む PBS 約 100 µL が入ったガラス製ペトリ皿に組織を置きます。最後に、シルク縫合糸の端をカットします。縫合が緩んでいるか、あるいは出血がある場合は、切り口を確認し、小さな鋏を用いてもう一度結紮します。子宮

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学ぶ 子宮組織の自動移植による外科的誘導法でマウス子宮内膜症モデルを作成する方法。腸間膜動脈への縫着と組織学的解析により、ヒトと類似した病態を再現し、疾患メカニズムと治療法の研究に活用できます。

子宮組織の自動移植による外科的に誘発される子宮内膜症のマウスモデル

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