子宮組織の自動移植による外科的に誘発される子宮内膜症のマウスモデル

この手順の全体的な目標は、腸間膜の動脈カスケードへの子宮組織の自家移植により、マウスの子宮内膜症を外科的に誘発することです。これは、最初に子宮の子宮内膜を結紮し、除去し、露出させることによって達成されます。手順の 2 番目のステップは、露出した子宮内膜から 2 mm の生検パンチを使用して 3 つの類内膜インプラントを作成することです。

手順の 3 番目のステップは、腸腸間膜の動脈カスケードの動脈に 3 つの子宮内膜インプラントを縫合することです。手順の最後のステップは、腹壁と皮膚を閉じ、動物が類内膜病変を回復できるようにすることです。マウスから切除されたものは、組織学的分析と遺伝子およびタンパク質発現パターンによって決定された子宮内膜症の女性のものと似ています。

一般的に、この方法に不慣れな人は、主に3つの理由で苦労します。まず、マウスの組織は非常に小さいです。第二に、腸腸間膜は簡単に損傷を受け、第三に、縫合糸がきつく配置されすぎると腸壊死を引き起こします。

まず、無菌手術を成功させるために必要なすべての手術機器(鎮痛と麻酔の両方のソリューションを含む)を集めることから始めます。吸入イソフルランを用いて麻酔を行った後、手術中の乾燥を防ぐためにつま先つま先のつまみ刺激に対する否定反応により完全な麻酔を確認し、眼に眼軟膏を塗布した後、小さなバリカンで手術部位を剃ります。クロルヘキシジンスクラブと70%エタノールを交互に3回スワイプして手術部位を消毒し、動物を滅菌フィールドで覆います。

小さなハサミまたはメスの刃を使用して、膣口まで0.5〜1.0センチメートルの吻側で小さな正中線を切開します。手術部位の閉鎖を容易にするために、腹壁から体壁を穏やかに鈍く解剖します。鈍い解剖の後、腹壁に小さな正中線切開を行います。

次に、小さな鉗子を使用して、左の子宮角をそっと見つけます。子宮は腸の背側にあり、これは通常、切開部位に最初に入ったときに見えるものであり、子宮角をそっと引き上げ、開いた鉗子をその下にスライドさせて開創器として機能します。この時点で卵巣と子宮の外観に注意することも役立ちます。

発情周期の年代測定を支援するため。伸ばされた子宮角の下に、5つの黒く編まれたシルク縫合糸の2つ、6〜8センチメートルのピースをスライドさせます。子宮尿細管接合部でホーンをしっかりと結紮します。

卵管と子宮頸部接合部に寄り添うだけです。各位置で四角い結び目を使用して、縫合糸の端を切断せずに残しておきます。2つの結紮の間の子宮角の部分を切り取り、ペニシリンとストレプトマイシンを含む約100マイクロリットルのPBSを含むガラスのペトリ皿に組織を置きます。

絹縫合糸の端を最後に切ります。縫合糸が緩んだり出血したりした場合は、切り株を見つけて別の結び目を作るか、小さなハサミを使わずに結んでください。子宮角から脂肪を取り除きます。

小さなハサミの1枚の刃を内腔に挿入して、子宮角を開きます。鉗子でホーンを保持しながら、ハサミを子宮ホーンにそっと滑り込ませます ガラスのペトリ皿で、2ミリメートルの生検パンチを使用して、同じサイズの3つのインプラントを切り取ります。それらが乾燥しないように注意してください。

切開部位のすぐ上に滅菌ガーゼを置き、ペニシリンとストレプトマイシンを含む滅菌PBSで完全に濡らします。.小さくて滑らかな鉗子を使用して、次のステップ全体で水分補給を維持することが重要です。盲腸をそっと見つけ、小腸に沿ってぐるぐる動きます。

腸の小さな4〜5センチの部分を引き出し、腸腸間膜の動脈カスケードがはっきりと見えるように、事前に濡らしたガーゼに扇状に並べます。滅菌生理食塩水で常に腸を湿らせておくようにしてください。1本のインプラントを針に装着し、6本のオートブラックアロン縫合糸を使用して、腸から約0.5cmの動脈にインプラントを優しく固定します。

1つだけ使用してください。鉗子を投げ、縫合糸をあまり強く締めないでください。そうすると、血流が失われ、その後腸が壊死する可能性があります。.

1つで2つの結び目を完了し、それぞれを投げてインプラントの2ミリメートル以内で縫合糸をトリミングし、腸を水和します。その後、吻側に移動します。次の3〜4センチの腸を引き出し、すでにインプラントが含まれている部分を静かに交換します。

前のインプラント部位から1本または2本の動脈をスキップし、次のインプラントを縫合し、3番目のインプラントを繰り返します。最後に、腹壁を縫合し、創傷クリップで皮膚を閉じます。手術部位を閉鎖し、鎮痛剤を投与した後、動物が回復するまで、動物の腹側を下にしてケージに入れ、部分的に再循環加熱水パッドの上に置きます。

類内膜病変を回復させるには、腸腸間膜の黒い縫合糸を見つけます。ノギスを使用して、各類内膜病変の長さと幅を測定します。類内膜病変を解剖し、槍で刺さないように注意します。

病変部から非類内膜組織をすべて取り除きます。縫合糸を抜く前に、3つの液体で満たされた類内膜病変を振ってください。縫合糸をそっと取り除き、子宮内膜病変の2つを槍で刺します。

組織処理に進む前に、これらを再度秤量してください。次に、女性とここに示すマウスモデルの両方で子宮内膜症の残りの子宮角組織学的分析を切除し、体重を量ると、子宮内膜症病変には子宮内膜腺が含まれ、マウスの間質子宮内膜症病変には、女性の子宮内膜症の一般的な特徴であるヘモシデリンを含んだマクロファージも含まれています。導入後3日でマウスから摘出された類内膜病変は、成長の2〜4週間後に左に示すように炎症を起こし、出血性に見えます。

マウスモデルの子宮内膜症病変は、誘導時の病変重量と比較して、嚢胞様で液体が充填され、腹膜癒着に囲まれています。導入後1ヵ月と2ヵ月で、液体で満たされた病変は306%と862%、ランス病変は51%と172%大きかった。液体で満たされた若者の類内膜病変。

この手順の後、5つの異なる実験で誘導後1か月の重みは一貫しています。このモデルは、子宮内膜症の病態生理学に関する質問に答え、この疾患に関連する痛みや不妊症の治療のための新しい治療法を探求するために使用できます。