同所性マウス脳腫瘍モデルのコンビネーション放射線治療

この記事の目的は、放射線研究のための同所性神経膠芽腫モデルの使用を記述することです。この資料では、注入、セル処理かかわらず移動して、頭蓋モデルを用いてマウスの放射線治療になります。

この手順の全体的な目標は、マウスの脳に頭蓋内に移植された神経膠芽腫細胞を説明、表示、および治療することです。これは、最初に細胞を準備し、次に細胞をマウスの脳に移植することによって達成されます。外科的処置の後、腫瘍は脳内で成長し、さまざまな治療で実験することができます。

最終的に、生存曲線は治療が効果的であったかどうかを示すことができます。この技術の意味は、薬物や放射線などの新しい治療法をテストするより効果的な方法である可能性があるため、神経膠芽腫の治療にまで及びます。10%FBSのDMEMでは、1、225立方センチメートルのフラスコは、5匹のマウスを移植するのに十分な細胞を提供し、細胞から培地を吸引し、カルシウムやマグネシウムを含まないPBSの細胞と10ミリリットルのPBSを手動ロッキングで簡単に洗浄します。

洗浄液を吸引した後、トリプシンは10〜15分後に細胞を目視し、15ミリリットルの培地でトリプシンを中和します。次に、すべての細胞と培地を50ミリリットルの円錐管に移します。細胞の2つのフラスコが1つのチューブに収まります。

細胞を1600 RPMで7分間スピンダウンし、吸引によって上清を完全に除去します。ペレットを10ミリリットルの冷たいPBSに再懸濁し、溶液中で細胞を穏やかにピペッティングして、均一な濁った懸濁液を作るまで細胞をすすぎます。培養カウンターを使用して細胞濃度を測定した後、最適な腫瘍増殖のためにPBS洗浄を繰り返します。

U 87細胞の最終濃度をマイクロリットルあたり200, 000細胞に調整します。他の細胞株では、最適な腫瘍増殖のために異なる濃度が必要になる場合があります。注射用の細胞を準備したら、それらを氷上に保ち、動物の準備を進めます。

宿主マウスに麻酔薬を送達して、マウスの準備を開始します。約15分後、つま先をつまんでマウスが痛みに鈍感であることを確認します。麻酔をかけたら、目が乾燥するのを防ぐために軟膏を塗ります。

次に、マウスを定位固定装置フレームのベッドに置きます。マウスバーの切り欠きに歯を引っ掛けます。次に、ベッドをフレームに配置します。

次に、頭を安定させるために、マウスにノーズガードを取り付けてから、イヤーバーを耳にそっと挿入します。運河は、頭蓋骨を骨折したり、マウスが窒息したりする可能性があるため、これらのバーのいずれかをきつくしすぎません。この時点で、ヘッドが水平になっていることを確認します。

最終的な準備は、アルコールとヨウ素で頭を交互に3回スワブし、4回目のアルコール塗布で終了することです。移植手術は、右目の後ろから始まり、頭蓋骨の左後部に斜めに戻る切開から開始します。切開部の長さは約10〜15ミリメートルである必要があります。

綿のアプリケーターを使用して切開部をゆっくりと分離し、頭蓋骨を露出させ、頭蓋骨と皮膚の間にある膜を拭き取り、血液や過度の出血を拭き取ります。次に、bgmaを視覚化し、フェルトチップマーカーを使用して10マイクロリットルのガラス製ハミルトンシリンジをその上に配置します。bgma の右 2 mm と前方 1 mm のマークを前縫合線の近くに作ります。

次に、シリンジを取り外し、マークされた位置の頭蓋骨に小さな穴を開けます。ドリルビットは22ゲージの針のサイズです。ビットが頭蓋骨に退屈するのをやらせてください。

追加の圧力は必要ありません。30〜33ゲージのニードルシリンジを使用して、シリンジに5マイクロリットルのよく混合された細胞をロードし、フレームに再取り付けします。針を頭蓋骨の穴に合わせ、頭蓋骨表面から頭蓋骨表面まで下げます。

針を3ミリメートル下げて、2分間待ちます。この一時停止により、トラウマの可能性が減少します。プランジャーをゆっくりと押し下げて、1分あたり約1マイクロリットルの速度で細胞を移植します。

最後の細胞が移植された後の逆流は慎重に避けてください。針をさらに2分間そのままにして、すべての細胞が落ち着くようにします。重りの後、針を脳からそっと引き抜き、綿のアプリケーターで穴を丁寧に拭きます。

今度は5つのoh PBS縫合糸を使用して、約3針で切開部を閉じます。マウスをヒートパッドに置き、必要に応じて再度適用します。目の軟膏。

マウスが頭を持ち上げたり、肩を動かしたりしたら、ホームケージに戻します。麻酔注射の時点から、この手順は30〜60分かかります。マウスが90分後に攪拌されない場合、マウスは回復しない可能性があり、安楽死が効果的な代替手段となる可能性があります。

また、過度の出血がある場合、または処置中のいずれかの時点で頭蓋骨にひびが入った場合は、安楽死をお勧めします。細胞株にもよりますが、マウスの放射線治療は移植後5〜7日で行うことができます。例えば、オルソ電圧放射線治療ユニットを放射線治療に用いることができる。

B-L-I-M-R-IやCTなどのイメージング技術を使用して腫瘍を視覚化してから、マウスを実験グループに無作為に割り付けます。細胞移植後、腫瘍は通常、細胞株にもよりますが、2〜4週間以内に形成されます。死亡時には、腫瘍を検査するために脳組織に染色が行われました。

治療効果の重要な評価は、Kaplan-Meier生存曲線をプロットすることです。これは、薬物治療、放射線治療、または併用療法を受けた動物の注射後の平均寿命を比較したものです。この開発後、この技術は、脳腫瘍やマウスの治療法を探求するための腫瘍学分野の研究への道を開きました。