Name: キトサンベース、レーザー活性薄膜外科用接着剤、 SurgiLux：準備とデモ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: 学ぶ キトサンベースのレーザー活性化外科用接着剤SurgiLuxの調製と組織接着法。低出力赤外線レーザーでコラーゲン組織に強固に接着し、手術応用の可能性を示す。

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著者はLJRフォスターに国立保健オーストラリアの医学研究評議会（NHMRC＃1000674）からの助成金を認めている。

1。 SurgiLux溶液の調製<ol><li>きれいなガラスビーカーに脱イオン水を用いて酢酸の2％（v / v）の溶液を調製し、汚染を避けるために、層流フードを使用しています。 </li><li>発色団の0.02％（w / v）を秤量し、滅菌エッペンドルフチュー​​ブに、ICG、インドシアニングリーン、チューブはどんな光の侵入を防ぐために、銀ホイルに包まれていることを確認します。 </li><li>きれいで、使い捨てピペットを用いて、色素を溶解そっと振るとホイルに包まれた保つためにチューブに希酢酸溶液約1mlを転送します。 </li><li>ビーカーの中に可溶化されたICGを移し、無菌のマグネチックスターラーを追加する前に、キトサン粉末を2％（w / v）を追加します。 </li><li>パラフィルムでビーカーをカバーした後、層流フード内で室温で72時間約125 rpmで内容物を混合する前に、銀ホイルで包む。 </li><li> 4℃で15分間、15,000×gでクリーンな遠心チューブと遠心分離機に内容を転送℃の任意particulaを削除するteの問題。 </li><li>慎重にきれいなガラスビーカーに緑SurgiLuxソリューションを譲渡、溶液の粘度を高めるために12時間、冷蔵庫で保管する前に、銀ホイルで包むその後パラフィルムを使用してカバーしています。 </li></ol> 2。 SurgiLuxフィルムの鋳造<ol><li>無菌の注射器を用いて、95ミリメートル径のクリーン、ペトリ皿に冷たいSurgiLuxの溶液8mlを分配、ゆっくりと溶液によって完全なカバレッジを確保するためにプレートを傾けてください。鋳造領域に溶液体積の比を変化させること、膜厚の制御を可能にし、 図1を参照してください。 </li><li>無菌針の先端を使用して溶液中で目に見える気泡を除去する。残留ミクロンサイズの気泡を除去するために冷蔵庫で銀箔と所定の位置に皿をカバーしています。 </li><li> 20分は慎重に冷蔵庫からシャーレを削除した後、層流フード内の場所は、銀ホイルで覆い、3週間蒸発するソリューションを残す。 </li><li> CO後にmplete蒸発、離れる皿表面からフィルム &#39;ピール&#39;優しくスコアシャーレ内の明確な緑SurgiLuxフィルムの外側の縁と。 </li><li> SurgiLux膜が裂けたり壊すことなく、柔軟かつ容易に操作する必要があります。 </li><li>使用直前まで、乾燥条件下で銀ホイルに包まれたペトリ皿に円形SurgiLuxフィルムを保管してください。 </li></ol> 3。 SurgiLux接着フィルムのレーザー活性化<ol><li>レーザー活性化のプロセスを説明するために、我々はこのような幅15mmと20mmの長さのサイズにカットステーキなどウシ組織片を使用します。 10ミリメートルで15の2個を生成するために、数字の10外科用ブレードを使用して、直線で組織を切開する。 </li><li>おおよそそれらの縁が触れなく重なり、そして綿棒やガーゼを使用しているように、組織の2つの部分は、優しく余分な体液を吸収する。 </li><li>次に、SurgiLux膜7×9 mmの部分をカットし、慎重に二分されたP間のフィルム縦に置く組織の電子通信学会論文誌、その後乾いた綿棒で軽く下に押します。 </li><li> SurgiLuxフィルムが120 mWの設定で赤外ダイオードレーザーを使用して活性化される。これはクラスIIIbのレーザーであるため、適切な安全対策を全職員に対して適切な安全メガネの使用を含めて、取られるべきである。 </li><li>隅から、120 mWで設定赤外レーザーと直径1mmのビームスポットサイズとSurgiLuxを照射します。毎秒約1ミリメートルの割合で緑の膜上のビームスポットを渡します。照射工程を2回繰り返します。 </li></ol> 4。修理の強さ<ol><li>慎重に引張試験器のクランプに組織の両端を固定します。我々は、50ニュートンのロードセルでインストロンMini55システムを使用しています。破断時の最大荷重、引張強さ、および拡張がBluehillコンピュータソフトウェア（米国）を用いて計算した。少なくとも10個のサンプルから手段（n = 10）に決定した。 </li><li> &quot;たるみ&quot;を取るその後、完全に独立したSurgiLuxストリップによって一緒に保持された組織の2枚まで、毎秒1ミリメートルの割合で組織片を分離する。 </li></ol>

<ol><li>Kjaergard, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suture+support%3A+is+it+advantageous%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Suture support: is it advantageous.</a> Am. J. Surg. 182, 15S-20S (2001).</li>
<li>Lauto, A., Mawad, D., Foster, L. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adhesive+biomaterials+for+tissue+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Tech.+Biotech%22%5BJournal%5D)">Adhesive biomaterials for tissue reconstruction.</a> J. Chem. Tech. Biotech. 83, 464-472 (2008).</li>
<li>Fung, L. C., Mingin, G. C., Massicotte, M., Felsen, D., Poppas, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+temperature+on+tissue+thermal+injury+and+wound+strength+after+photochemical+wound+closure%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Effects of temperature on tissue thermal injury and wound strength after photochemical wound closure.</a> Lasers Surg. Med. 25, 285-290 (1999).</li>
<li>Piribo, <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPiribo%2C++%22Glues+%26+Sealants%3A+Industry+Background+Report%22">Glues & Sealants: Industry Background Report</a>. , (2005).</li>
<li>Lauto, A., Hook, J., Doran, M., Camacho, F., Poole-Warren, L. A., Avolio, A., Foster, L. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chitosan+adhesive+for+laser+tissue-welding%3A+in+vitro+characterisation%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Chitosan adhesive for laser tissue-welding: in vitro characterisation.</a> Lasers Surg. Med. 36, 193-201 (2005).</li>
<li>Lauto, A., Stoodley, M., Marcel, H., Avolio, A., Sarris, M., McKenzie, G., Sampson, D. D., Foster, L. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+in+vivo+tissue+repair+with+laser-activated+chitosan+adhesive%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">In vitro and in vivo tissue repair with laser-activated chitosan adhesive.</a> Lasers Surg. Med. 39, 19-27 (2007).</li>
<li>Lauto, A., Foster, L. J. R., Avolio, A., Sampson, D., Raston, C., Sarris, M., McKenzie, G., Stoodley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sutureless+Nerve+Repair+with+Laser-Activated+Chitosan+Adhesive%3A+A+Pilot+in+vivo+Study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Photomed.+Laser.+Surg%22%5BJournal%5D)">Sutureless Nerve Repair with Laser-Activated Chitosan Adhesive: A Pilot in vivo Study.</a> J. Photomed. Laser. Surg. 26 (3), 227-234 (2008).</li>
<li>Marçal, H., Badylak, S. F., Sellaro, T. L., Lauto, A., Foster, L. J. R., Mahler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+coalescence+of+decellularized+tissue+scaffolds%2C+laser-activated+chitosan+bioadhesive+and+olfactory+ensheathing+cells+for+tissue+repair+and+regeneration+of+the+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">The coalescence of decellularized tissue scaffolds, laser-activated chitosan bioadhesive and olfactory ensheathing cells for tissue repair and regeneration of the spinal cord.</a> Lasers Med. Sci. 23 (1), 96(2008).</li>
<li>Foster, L. J. R., Thomson, K., Marcal, H., Butt, J., Watson, S., Wakefield, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chitosan-vancomycin+composite+biomaterial+as+a+laser+activated+surgical+adhesive+with+regional+antimicrobial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">A chitosan-vancomycin composite biomaterial as a laser activated surgical adhesive with regional antimicrobial activity.</a> Biomacromolecules. 11 (12), 3563-3570 (2010).</li>
<li>Shahbazi, J., Marcal, H., Watson, S., Wakefield, D., Sarris, M., Foster, L. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sutureless+sealing+of+penetrating+corneal+wounds+using+a+laser-activated+thin+film+adhesive%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Sutureless sealing of penetrating corneal wounds using a laser-activated thin film adhesive.</a> Lasers Surg. Med. , accepted 15/05/2011 Forthcoming.</li>
<li>Meyers, M. A., Chen, P. -Y., Lin, A. Y. -M., Seki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+materials%3A+Structure+and+mechanical+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Mater.+Sci%22%5BJournal%5D)">Biological materials: Structure and mechanical properties.</a> Prog. Mater. Sci. 53 (1), 1-206 (2008).</li>
</ol>

特別な利害関係は宣言されません。

キトサンは分子量の様々なとdeactylation度の異なる（DDA）を使って取得できます。キトサンの純度のばらつきがSurgiLux溶液中の微粒子の存在につながる可能性があり、遠心分離は、これらを排除し、透明な緑色の溶液をもたらすべきである使用されています。しかし、ろ過も追加または代替の製造ステップとして使用することができます。どんな材料加工と同様に、例えばキトサンDDAと分子量などの変化が、組織への結合の強さを含む結果SurgiLux膜の物理化学的、生物学的および材料特性に影響を与える。 SurgiLuxための製造プロセスは、かなりのバリエーションを可能にします。例えば、表面積をキャストに溶液量の比率（ミリリットル：ミリメートル2）への変更は、膜厚を調整するために利用することができ、図5は、ボリュームとして最終SurgiLux膜の厚さの直線的な増加を示しています。のペトリ皿に注ぎ、溶液が増加した。同様に、鋳肌への変更は、フィルムの表面形態を変更するために使用することができます。 図6は ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/機器の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント（オプション） </td></tr><tr><td>キトサン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> 448877 </td><td></td></tr><tr><td>インドシアニングリーン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> I2633 </td><td>またCardiogreenとして知られている</td></tr><tr><td>酢酸</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> 320099 </td><td></td></tr><tr><td>繊維配達の赤外ダイオードレーザー。 （808 nmで、120 mWで、ビームコア200μm）の</td><td> CNIレーザー</td><td> FC-808 </td><td>可変システム最大5 W電源</td></tr><tr><td>レーザー安全メガネ</td><td> CNIレーザー</td><td> LS-G </td><td></td></tr><tr><td>引張試験装置</td><td>インストロンPty Ltdの</td><td> 5542 </td><td> 50Nのロードセル</td></tr></tbody></table>

キトサンベース、レーザー活性薄膜外科用接着剤、 &#39;surgilux&#39;：準備とデモ

A Chitosan Based, Laser Activated Thin Film Surgical Adhesive, 'SurgiLux': Preparation and Demonstration

縫合糸は、その修理強度（〜100 kPa）のおかげで、創傷の閉鎖のための &quot;ゴールド·スタンダード&quot;のまま4000年の古い技術である。しかし、縫合糸が感染の病巣として作用することができると多くの手続きにおいて創傷修復を行うか、または機能的な組織の再生を妨害することはできません。例えば、フィブリン及びシアノアクリレートに基づくものなど1外科接着剤および接着剤は、用縫合糸の代替品として開発されてきたこのような傷の修理。しかし、現在市販されている接着剤はまた、ウイルスやプリオン伝達とフィブリン糊と同様に修理の強度不足から組織毒性及びシアノアクリレート系接着剤のための生体適合性の欠如に至るまで、大きなデメリットがあります。また、現在利用可能な外科用接着剤は、ゲルをベースになる傾向があり、それらのアプリケーションを制限硬化時間を延長したことができます2同様に、 &quot;タンパク質ベースまたはアルブミンゾル架橋メカニズムを容易にするためにUVレーザーを使用することレーザー組 ​​織溶接（LTW）が組織への熱損傷を素因としながら&#39;がDNA損傷につながることができます。3はその欠点や接着剤、LTWもかかわらdersは、取得した創傷閉鎖市場の約30％は、年間50億ドルの過剰であることが報告縫合技術の必要性への重要な証し。4 縫合技術の追求では、柔軟性のある、薄膜、 &#39;SurgiLux &quot;と呼ばれるレーザーで活性化外科用接着剤の開発のための生体材料としてキトサンを利用してきた。この小説の生体接着剤は、FDAが生物医学アプリケーションと様々な製品で承認され、成功裏に使用されている生体材料、フォトニクスのユニークな組み合わせを使用しています。 SurgiLuxは、縫合糸と現在の外科用接着剤（ 表1を参照）に関連付けられているすべての欠点を克服する。 本発表ではSurgiLuxの製作のための比較的単純なプロトコルを報告し、実証そのレーザーの活性化と組織溶接強度。 SurgiLux膜は、架橋と照射により比較的低パワー（120 mW）の赤外線レーザーの代わりに紫外光を使用するなど、このような化学修飾することなく、コラーゲン組織に付着する。キトサンフィルムがコラーゲン（約3 kPa）までの自然が、弱い接着剤の魅力を持っている、キトサンベースSurgiLuxフィルムのレーザー活性化は、過渡熱膨張の結果としてポリマー鎖間の相互作用を介してこの接着の強さを強調している。5は、この&quot;活性化&quot;のプロセスがなければ、SurgiLux膜が容易に除去されます6月9日 SurgiLuxが神経、腸、硬膜や角膜など、様々な組織に、in vitroおよびin vivoの両方でテストされています。すべてのケースでは、優れた生体適合性と照射の結果として無視できる熱損傷を示した。6-10

遠心分離は4-6での貯蔵後の粘度を増加させる透明な緑色の溶液、℃につながる3週間放置した後、ビデオで示したように緑色の溶液は、約20ミクロンの厚さで透明な緑色SurgiLuxフィルムに変換され、容易に柔軟です。 組織へのSurgiLux膜結合レーザー照射により、。これは、組織が ​​レーザービームがフィルム（ 図2）の上を通過するように収縮するように表示されたフィルムの端で観察することができる。組織とフィルムのない炭化またはアブレーションは観察されなければならない。組織へSurgiLuxの接合強度は、組織の等分部分を持ち上げるのに十分であるべきであり、引張強度が測定されたときにここで報告されたテストでは約15 kPaである必要があります。 <img alt="表1" src="/files/ftp_upload/3527/3527table1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000"...

小説の製造、FDAが承認した成分からフレキシブル薄膜外科用接着剤、キトサンおよびインドシアニングリーンが記載されている。低出力の赤外線レーザーで簡単なアクティベーションプロセスによりコラーゲン組織にこの接着剤の接着性を示す。

キトサンベース、レーザー活性薄膜外科用接着剤、 &#39;SurgiLux&#39;：準備とデモ

縫合糸は4,000年の歴史を持つ技術であり、その修復強度（約100 KPa）により、依然として創傷閉鎖の「ゴールドスタンダード」とされています。しかし、縫合糸は...

この手順の全体的な目的は、Suxと呼ばれる新しいレーザー活性化外科用接着剤を実証することです。これは、まずSux接着剤溶液を調製し、次にSux接着剤フィルムを作製することで達成されます。次に、レーザー照射を用いてSux薄膜接着剤を組織に結合させます。最後に、接着強度を試験します。最終的に、レーザー照射後にSul lockの薄膜接着剤が組織に強力に結合することが示される結果が得られます。フィブリンやシアノアクリレートなどの既存の外科用接着剤と比較した本手法の主な利点は、Sux接着剤が薄膜であるため操作性に優れ、硬化時間が不要で、組織に対して均一な接着が可能であることです。本手順の実演は、バイオポリマー研究グループの博士課程学生であるElizabeth Castonが行います。層流クリーンベンチ内でUX溶液を調製するには、まず滅菌済みのエッペンドルフチューブ中で、酢酸と脱イオン水を用いて2%溶液を作成します。シアンに緑色の発色団、すなわちICGを計量し、光の侵入を防ぐためチューブをアルミホイルで包みます。清潔な使い捨てピペットを使用して、希釈酢酸溶液を約1 mLチューブに移し、緩やかに振って色素を溶解させます。溶解したICGをビーカーに移し、2%キトサン粉末を加えます。滅菌済みの攪拌子を加える前に、ビーカーをパラフィルムで密閉し、アルミホイルで包みます。次に、層流クリーンベンチ内で、スターラープレートを用いて室温で約125 RPMで72時間攪拌します。インキュベーション後、内容物を清潔なチューブに移し、4°Cで15,000 Gにて15分間遠心分離します。粒子状物質を除去するため、緑色のUX溶液を清潔なガラスビーカーに慎重に移します。パラフィルムで蓋をし、ビーカーをアルミホイルで包みます。滅菌シリンジを用いて、粘性を高めるために溶液を冷蔵庫で12時間保存します。冷却したsux溶液 8 mLを清潔な直径95 mmのペトリ皿に分注し、プレートをゆっくりと傾けて溶液で全体を完全に覆います。滅菌針の先端を使用して、溶液中の目に見える気泡を除去します。その後、アルミホイルで蓋をし、冷蔵庫に20分間置きます。残留しているミクロンサイズの気泡を除去するため、シャーレを慎重にラミナーフローフードへ移動させ、溶液を3週間かけて蒸発させます。完全に蒸発した後、透明な緑色のSuxフィルムの外縁に切り込みを入れ、シャーレの表面からフィルムをそっと剥がします。円形のUXフィルムは、使用するまでアルミホイルで包み、乾燥条件下でシャーレに入れて保存してください。ここでは、牛組織（ステーキ肉など）を用いてレーザー活性化プロセスを実演します。まず、組織を幅15 mm、長さ20 mmに切り出します。10番の手術用メスを使用して組織を半分に切り、15 × 10 mmの組織片を2つ作成します。2つの組織

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Bioengineering

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縫合糸は通常、外科手術の際に組織を修復するために必要とされている。彼らは侵襲的であり、組織に損傷を与える可能性があるしかし、そのアプリケーションが問題になることがあります。小説組織接着剤の製造、およびアプリケーションの方法はここで報告されます。この接着フィルムは、レーザー活性化され、縫合糸の使用を必要としません。...

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組織工学のためのアルギン酸微粒子と熱ゲルポリ（N-イソプロピルアクリルアミド） - グラフト - コンドロイチン硫酸複合材料の合成

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調製されたDOX-CL足場は、機械的強度、多孔性、吸水性、分解速度、持続放出、抗菌、生体適合性、および抗炎症特性における理想的なDWドレッシングの前提条件を満たし、これは、DWの損傷した組織の回復に不可欠であると考えられる。...

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