Intracellular Refolding Assay

Tamara Vanessa Walther; Danilo Maddalo

doi:10.3791/3540

JoVE Journal
Biology

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JoVE Journal Biology

Intracellular Refolding Assay

細胞内のリフォールディングアッセイ

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07:18 min

January 24, 2012

DOI: 10.3791/3540-v

Tamara Vanessa Walther¹, Danilo Maddalo¹

¹Institute of Toxicology and Genetics,Karlsruhe Institute of Technology

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

このプロトコルでは熱ショック後に細胞内タンパク質のリフォールディングを測定する方法が記載されている。このメソッドは、その活性に影響を与えることができる分子シャペロンとその補因子または化合物のようなfoldasesを研究するために使用することができます。ホタルルシフェラーゼ活性は、シャペロンのリフォールディング活性を測定するためのレポーターとして使用されます。

次の実験の全体的な目標は、シャペロン依存性の細胞内タンパク質、熱ショック後のリフォールディングを測定することです。ルシフェラーゼレポーターを使用して、まず、ルシフェラーゼレポーター遺伝子と目的のシャペロンをコーティングしたプラスミドを細胞にトランスフェクションします。次に、トランスフェクションした細胞を実験計画の回復時点に分割します。

翌日、細胞に熱ショックを与えてタンパク質のアンフォールディングを誘導します。細胞内タンパク質の折り畳みを取り戻すための回復を待ってから、ルシフェラーゼレポーターの活性を測定します。結果は、ルシフェラーゼアッセイに基づいて、時間依存性およびシャペロン依存性のタンパク質リフォールディングを測定します。

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