Name: 培養交感神経ニューロンの樹状成長を誘導する (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: 学ぶ、BMP-7またはMatrigelを用いてラットの上位頸神経節から交感神経ニューロンを培養し、樹状突起成長を誘導する方法。この技術は神経発生研究に応用可能です。

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<ol><li>Purpura, D. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPurpura%2C+DP+%22The+Neurosciences%3A+A+Study+Program%22">The Neurosciences: A Study Program</a>. Quarton, Q. C., Melnechuk, T., Schmitt, F. O. , Rockefeller University Press. 372-393 (1967).</li>
<li>Purves, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+structural+changes+in+mammalian+sympathetic+neurons+following+interruption+of+their+axons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Functional and structural changes in mammalian sympathetic neurons following interruption of their axons.</a> J. Physiol. 252, 429-463 (1975).</li>
<li>Purves, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPurves%2C+D+%22A+Trophic+Theory+of+Neural+Connections%22">A Trophic Theory of Neural Connections</a>. , Harvard University Press. (1988).</li>
<li>Miller, J. P., Jacobs, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+between+neuronal+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Relationships between neuronal structure and function.</a> J. Exp. Biol. 112, 129-145 (1984).</li>
<li>Schuman, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synapse+specificity+and+long-term+information+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Synapse specificity and long-term information storage.</a> Neuron. 18, 339-342 (1997).</li>
<li>Sejnowski, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+year+of+the+dendrite%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The year of the dendrite.</a> Science. 275, 178-179 (1997).</li>
<li>Berger-Sweeney, J., Hohmann, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+consequences+of+abnormal+cortical+development%3A+insights+into+developmental+disabilities%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral consequences of abnormal cortical development: insights into developmental disabilities.</a> Behav. Brain Res. 86, 121-142 (1997).</li>
<li>Connors, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+mechanisms+in+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Neurology%22%5BJournal%5D)">Fetal mechanisms in neurodevelopmental disorders.</a> Pediatric Neurology. 38, 163-176 (2008).</li>
<li>Pardo, C. A., Eberhart, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobiology+of+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathology+%28Zurich%2C+Switzerland%29%22%5BJournal%5D)">The neurobiology of autism.</a> Brain Pathology (Zurich, Switzerland). 17, 434-447 (2007).</li>
<li>Zoghbi, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+neurodevelopmental+disorders%3A+meeting+at+the+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Postnatal neurodevelopmental disorders: meeting at the synapse.</a> Science. 302, 826-830 (2003).</li>
<li>de Ruiter, J. P., Uylings, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+and+dendritic+analysis+of+fascia+dentata+granule+cells+in+human+aging+and+senile+dementia%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Morphometric and dendritic analysis of fascia dentata granule cells in human aging and senile dementia.</a> Brain Res. 402, 217-229 (1987).</li>
<li>Flood, D. G., Coleman, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+plasticity+in+normal+aging+and+decreased+plasticity+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Hippocampal plasticity in normal aging and decreased plasticity in Alzheimer's disease.</a> Prog. Brain Res. 83, 435-443 (1990).</li>
<li>Jagadha, V., Becker, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+pathology%3A+an+overview+of+Golgi+studies+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+Neurol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Dendritic pathology: an overview of Golgi studies in man.</a> Can. J. Neurol. Sci. 16, 41-50 (1989).</li>
<li>Bruckenstein, D. A., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+differentiation+of+embryonic+rat+sympathetic+neurons+in+tissue+culture.+I.+Conditions+under+which+neurons+form+axons+but+not+dendrites%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Morphological differentiation of embryonic rat sympathetic neurons in tissue culture. I. Conditions under which neurons form axons but not dendrites.</a> Dev. Biol. 128, 324-336 (1988).</li>
<li>Tropea, M., Johnson, M. I., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+cells+promote+dendritic+development+in+rat+sympathetic+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Glial cells promote dendritic development in rat sympathetic neurons in vitro.</a> Glia. 1, 380-392 (1988).</li>
<li>Lein, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+extracellular+matrix+and+osteogenic+protein-1+on+the+morphological+differentiation+of+rat+sympathetic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The effects of extracellular matrix and osteogenic protein-1 on the morphological differentiation of rat sympathetic neurons.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 14, 203-215 (1996).</li>
<li>Lein, P., Johnson, M., Guo, X., Rueger, D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenic+protein-1+induces+dendritic+growth+in+rat+sympathetic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Osteogenic protein-1 induces dendritic growth in rat sympathetic neurons.</a> Neuron. 15, 597-605 (1995).</li>
<li>Lein, P. J., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laminin+and+a+basement+membrane+extract+have+different+effects+on+axonal+and+dendritic+outgrowth+from+embryonic+rat+sympathetic+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Laminin and a basement membrane extract have different effects on axonal and dendritic outgrowth from embryonic rat sympathetic neurons in vitro.</a> 136, 330-345 (1989).</li>
<li>Higgins, D., Lein, P. J., Osterhout, D. J., Johnson, M. I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHiggins%2C+D+%22Culturing+Nerve+Cells%22">Culturing Nerve Cells</a>. Banker, G., Goslin, K. , The MIT Press. 177-295 (1991).</li>
<li>Beck, H. N., Drahushuk, K., Jacoby, D. B., Higgins, D., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+morphogenetic+protein-5+%28BMP-5%29+promotes+dendritic+growth+in+cultured+sympathetic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Bone morphogenetic protein-5 (BMP-5) promotes dendritic growth in cultured sympathetic neurons.</a> BMC Neurosci. 2, 12-12 (2001).</li>
<li>Guo, X., Rueger, D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenic+protein-1+and+related+bone+morphogenetic+proteins+regulate+dendritic+growth+and+the+expression+of+microtubule-associated+protein-2+in+rat+sympathetic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Osteogenic protein-1 and related bone morphogenetic proteins regulate dendritic growth and the expression of microtubule-associated protein-2 in rat sympathetic neurons.</a> Neurosci. Lett. 245, 131-134 (1998).</li>
<li>Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glia+induce+dendritic+growth+in+cultured+sympathetic+neurons+by+modulating+the+balance+between+bone+morphogenetic+proteins+%28BMPs%29+and+BMP+antagonists%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glia induce dendritic growth in cultured sympathetic neurons by modulating the balance between bone morphogenetic proteins (BMPs) and BMP antagonists.</a> J. Neurosci. 22, 10377-10387 (2002).</li>
<li>Higgins, D., Lein, P., Osterhout, D., Johnson, M. I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHiggins%2C+D+%22Culturing+Nerve+Cells%22">Culturing Nerve Cells</a>. Banker, G., Goslin, K. , MIT Press. 177-205 (1991).</li>
<li>Bruckenstein, D. A., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+differentiation+of+embryonic+rat+sympathetic+neurons+in+tissue+culture.+II.+Serum+promotes+dendritic+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Morphological differentiation of embryonic rat sympathetic neurons in tissue culture. II. Serum promotes dendritic growth.</a> Dev. Biol. 128, 337-348 (1988).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

このモデルの利点は、（a）文化が他の細胞型17,23を欠いている交感神経の神経細胞の均一な集団で構成されていること、（b）交感神経ニューロンの成長因子の要件が十分に確立されている、の使用を許可する定義されているメディア、および定義された様々なメディア、および基板23を成長させ、交感神経ニューロンを維持するためにうまく機能し、（c）これらの培養物における神経細胞はマトリゲル、BMP-7とDPPの他のBMPの樹状突起促進活性に均一に対応し、 60A亜17,18,20,21、および（d）マトリゲルまたはBMP誘導樹状突起の形成は、細胞の生存や軸索の成長17,18の変化の有無で発生します。このモデルは、直ちに主dendr時には、樹状突起の形成に先行し、樹枝状成長、例えば、異なる段階でのニューロンの同期集団を得ることを可能にする樹枝状成長がトリガされたときの実験的な制御を可能にitogenesis（一次樹状突起の初期形成）と樹状成熟の後の段階。モデルの最も重要な制限は、RNAおよび生化学的研究を制限することができる単一のごみ、および遺伝子発現を操作するいくつか...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td>カバーガラス</td><td> Bellco </td><td> 1943から10012 </td><td> 12ミリメートルラウンドカバースリップ第1位の厚さ、ドイツのガラス</td></tr><tr><td>曲がった先端ピペット</td><td> Bellco </td><td> 1273から50003 </td><td></td></tr><tr><td>ポリ-D-リジン</td><td>シグマ</td><td> P0899-100MG </td><td>ストック溶液1 mg / mlの</td></tr><tr><td>蒸留水</td><td>ギブコ</td><td> 15230 </td><td></td></tr><tr><td>ファイン鉗子デュモンない。 4と5 </td><td>ファイン科学ツール（FST） </td><td> 11252から30 11241から30 </td><td></td></tr><tr><td> 20ゲージの針</td><td>ベクトン·ディッキンソン</td><td> 305176 </td><td></td></tr><tr><td>リーボビッツのL-15培地</td><td>インビトロジェン</tD&gt; <td> 11415 </td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼ</td><td>ワージントン</td><td> 4176 </td><td> 1 mg / mlの</td></tr><tr><td>ディスパーゼ</td><td>ロシュ社</td><td> 04942078001 </td><td> 5 mg / mlの</td></tr><tr><td>ハンクス平衡塩溶液（-CA-Mg）の</td><td>インビトロジェン</td><td> 14185-052 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM低グルコース</td><td>インビトロジェン</td><td> 11885 </td><td></td></tr><tr><td> L-グルタミン</td><td>インビトロジェン</td><td> 25030 </td><td> 20mMの</td></tr><tr><td>インスリン/トランスフェリン/セレン</td><td>インビトロジェン</td><td> 51500-056 </td><td> 100X </td></tr><tr><td>脂肪酸フリーBSA </td><td>カルビオケム</td><td> 126609 </td><td></td></tr><tr><td> NGF </td><td>ハーランのバイオ製品</td><td> 5017 </td><td></td></tr><tr><td>ハムF-12栄養培地（F-12） </td><td>インビトロジェン</td><td> 11765 </td><tD&gt; </td></tr><tr><td>シトシンアラビノシド</td><td>シグマ</td><td> C1768 </td><td></td></tr><tr><td>マトリゲル</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 356234 </td><td>凍結融解の繰り返しを避ける</td></tr><tr><td> BMP-7 </td><td> R＆DシステムズCuris株式会社</td><td> 345-BP BMP7-07H </td><td> BMPは4、5、6の作業同様に同様にBMP-7、商業的に入手することも容易である</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>シグマ</td><td> P6148 </td><td></td></tr><tr><td>トリトンX-100 </td><td>フィッシャー</td><td> BP151-500 </td><td></td></tr><tr><td>マウス抗ラットMAP2抗体</td><td>スタンバーグモノクローナル抗体（株） </td><td> SMI52 </td><td> 5000分の1 </td></tr><tr><td>のAlexa Fluor®546ヤギ抗マウス</td><td>インビトロジェン</td><td> A11003 </td><td> 10000分の1 </td></tr><tr><td>マウントメディア</td><td>退色防止キット分子プローブを延長</td> &lt;TD&gt; P7481 </td><td></td></tr></tbody></table>

培養交感神経ニューロンの樹状成長を誘導する

Inducing Dendritic Growth in Cultured Sympathetic Neurons

樹アーバの形状は、ニューロン1-3受信し、これらの入力4-6の種類と分布に影響を与えることができ、合計シナプス入力を決定します。樹枝状成長と可塑性の変化のパターンは実験モデル7の障害神経行動機能に関連付けられていると、発達障害8-10と11-13の神経変性疾患の両方で観察された臨床症状に寄与すると考えられる。このような観測が正確に樹枝状形態を調節する機能の重要性を強調し、樹枝状成長を制御するメカニズムを識別する唯一の正常な発達の間に規制されてどのように神経接続の理解を進めるませんが、また、多様な神経疾患の新規治療戦略についての洞察を提供することを示唆している。 樹枝状成長機構の研究が大幅に可用性oによって促進されるであろうニューロンは実験的に、彼らは彼らのin vivoでの対応と同等の樹アーバを策定したものに樹状突起を拡張することはありませんている状態から切り替えることができるようになり、FAモデルのシステム。周産期のげっ歯類の上頚神経節（SCG）から解離交感神経ニューロンの初代培養は、このようなモデルを提供します。血清および神経節グリア細胞の不在下で定義された培地で培養したときに、交感神経ニューロンは軸索である単一のプロセスを拡張し、このユニポーラ状態は、培養14,15で数週間から数カ月持続します。しかし、培地への骨形成タンパク質-7のいずれかの追加（BMP-7）16,17またはマトリゲル18は樹状突起のために、形態学的生化学的および機能的な基準を満たす複数のプロセスを拡張するために、これらのニューロンをトリガーします。周産期のげっ歯類のSCGから解離し、定義された条件下で増殖交感神経ニューロンは、ニューロン19の均一な集団であるマトリゲル、BMP-7とデカペンタプレジック（DPP）と60A亜17,18,20,21の他のBMPの樹状突起促進活性に均一に対応すること。重要なのは、マトリゲルとBMPによって誘導される樹状突起の形成は、細胞の生存や軸索の成長17,18の変化の有無で発生します。 ここで、我々は、彼らがマトリゲルまたはBMPの選択的な樹状突起促進活性に応答するように周産期ラットのSCGから派生した交感神経の神経細胞の解離文化をセットアップする方法について説明します。

我々は選択的に周産期ラットの上頚神経節（SCG）から解離し、主交感神経ニューロンの樹状突起の成長を誘導する骨形成タンパク質-7（BMP-7）またはマトリゲルを使用するためのプロトコルについて説明します。

樹状突起の形態は、ニューロンが受け取りうる総シナプス入力を決定し1-3、またこれらの入力の種類や分布に影響を与えます...

本手順の目的は、交感神経ニューロンを培養し、その樹状突起の成長を操作できるようにすることです。まず、滅菌条件下で周産期のげっ歯類幼獣から上頸神経節を単離します。次に、神経節を解離させて単一細胞懸濁液を作成し、準備した基質上に播種します。Inde定義培地を用います。その後、非神経細胞を除去するために抗有糸分裂剤で培養物を処理し、続いてBMPsまたはmatrigelで処理して樹状突起の成長を誘導します。最終的に、培養した交感神経ニューロンの伸展した樹状突起を示すために、map two免疫反応性が用いられます。海馬ニューロンの初代培養などの既存の手法に対する本手法の主な利点は、DYSニューロンの形態状態を操作できることであり、培養ニューロンのうち樹状突起を持つものが5%未満となるようにしたり、あるいは95%以上のニューロンが強固な神経突起の伸展を示すようにしたりすることが可能です。胎生19～21日のラット胎児からSCGの関連培養物を調製するには、まず安楽死させた妊娠ラットの腹部を剃毛し、皮膚のない部位を70% ethanolで清浄した後、腸やその他の内臓を傷つけないよう注意しながら、無菌条件下で子宮角を取り出します。子宮角を滅菌済みの150 millimeter Petri dishに入れます。次に、そのPetri dishを氷上のパンに移します。胚胎仔を安楽死させるための麻酔として、肩の下の正中線に沿って脊髄を切断します。これにより大静脈も切断され、頸動脈からの出血が抑制されます。SCGの解剖中、胚はペニシリンおよびストレプトマイシンを添加した滅菌済みのLeibovitz L-15培地に入れます。その後、胚をSilgardを半分まで満たした150 mmのペトリ皿に移し、仰向けに配置します。滅菌済みの20ゲージ針を用いて胸部と頭部を固定し、頸部を緩やかに過伸展させ、顕微鏡下でのSCGの解剖を容易にします。鎖骨の高さで頸部の正中切開を行い、顎下腺を露出させます。微細鑷子を用いて顎下腺を除去し、筋肉層を露出させます。次に、鎖骨付近で胸鎖乳突筋を切断し、気管に隣接する肩甲舌骨筋を慎重に持ち上げます。この筋肉は非常に薄いため、深く切りすぎないように注意してください。深く切りすぎると、下層にある頸動脈やSCGを損傷させる恐れがあります。これらの筋層を除去すると、頸動脈と迷走神経が明確に視認できるはずです。SCGは頸動脈分岐部のすぐ下に位置しています。微細ピンセットを用いて頸動脈の両側から組織を剥離し、神経節を露出させます。次に、2本の微細ピンセットを使用して、SCGの吻側および尾側のレンズの直上および直下で頸動脈を把持します。SCGの上方にある頸動脈の区画およびSCG自体を摘出する際、この発達段階でSCGに隣接しているnoose ganglionも同時に除去される可能性が高くなります。摘出した組織を、L 15 mediumと抗生物質を含む滅菌済みの35 millimeter培養皿に入れます。その後、次のステップに進む前に、すべての幼マウスからSCGを摘出してください。次に、SCGを頸動脈およびその他の組織から慎重に分離します。解剖中にこれらを取り除いてください。神経節から被膜を除去します。その後、神経節をL 15培地を含む別の滅菌済み35 mmディッシュに移します。SCGを分散させるため、L 15培地を除去します。それに代わり、カルシウムおよびマグネシウムフリーのハンクス平衡塩溶液で希釈したコラゲナーゼを加えます。その後、37 °Cで40分間インキュベートします。次いで、SCGを滅菌済みの15 mLコニカル遠心チューブに移します。BSAを最終濃度1〜2 mg/mLとなるように添加したL 15を用いて、液量を10 mLまで調整します。室温で200 ×gで5分間遠心分離します。5分後、上清を除去し、BSAを添加したL 15で再度洗浄します。2回目の洗浄後、L 15培地を除去し、2 mLの培養液で神経節を再懸濁します。火炎研磨した曲がり端ピペットを用いて、細胞を3～4回トリチュレーションします。細胞がガラスに付着するのを最小限に抑えるため、トリチュレーション前にピペットにBSAL 15をコーティングしてください。大きな凝集塊が約1分間沈降した後、細胞懸濁液を15 mLコニカルチューブに移します。その後、残りのSCGにさらに培地を加え、トリチュレーションを行います。凝集塊が沈降した後、2回目のトリチュレーション後の細胞懸濁液を、1回目のトリチュレーション後に回収したものに回収します。神経節がほぼ完全に解離するまで、この工程を数回繰り返します。ラット仔仔から解離させた1リットル分の細胞について、4回目のトリプシン処理後に残っている凝集塊はすべて廃棄し、細胞懸濁液の培地総量を8～10 mLに調整します。追加の培養培地を加え、ピペットを用いて細胞を穏やかに再懸濁させてください。その後、細胞密度の測定用に少量の分注液を回収します。培養で希望する細胞密度の2倍になるように、細胞懸濁液の量を調整します。次に、1ウェルあたり250 µLずつ細胞懸濁液を分注します。樹状突起伸展の形態計測研究では、通常、24ウェルプレートに低密度（1ウェルあたり約5×10⁴個の細胞）で播種します。次に、SCG培養物を、滅菌水を入れたガラス製デシケーター内の磁器製デシケータープレートに置きます。密閉する前に、デシケーター内に二酸化炭素を約120 milliliters注入します。その後、デシケーター全体をインキュベーターに入れ、35.5 degrees Celsiusに設定します。本手順では、播種から24時間後に培地の半分を交換して培養細胞に給餌し、これを週3回繰り返すことで、培養物から非神経細胞を除去します。通常、このタイミングで抗有糸分裂剤であるRRCを1～2 µMの濃度で培養培地に添加します。次に、RSCを含む新鮮な培養液を各ウェルに加え、非神経細胞が除去されRSCレベルが大幅に低下した後、樹状突起の伸展を誘導するために48時間培養します。5日目に、マトリゲルまたはBMP7を培養液に添加します。その後、前述の方法に従ってin vitroでの給餌を行います。ここでは、対照条件下で培養されたニューロンを示しており、MAP2免疫陽性の突起が見られないことから、樹状突起が欠如していることが分かります。対照的に、BMP 7に曝露されたこのニューロンには、ここに示すように、いくつかの先細りのMap2免疫陽性樹状突起が見られます。培養された交感神経ニューロンを5〜7日間培養した後、30〜50 ng/mLのBMP 7で2日間処理しました。樹状突起の成長が始まっていることに注目してください。BMP.Sevenを添加せずに7〜14日間培養した培養物は、軸索の伸展のみを示し続けます。一方、30〜50 ng/mLのBMP.Sevenで7〜14日間処理した培養物は異なります。強固な樹状突起の伸展を示します。このビデオを視聴することで、SCGの単離方法について十分に理解できるはずです。神経形態形成の研究および樹状突起伸展の実験的操作のために、交感神経ニューロンの解離培養を調製します。

inducing-dendritic-growth-in-cultured-sympathetic-neurons

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

これは、新生児ラットの仔の上頚神経節（SCG）からプライマリ交感神経ニューロンを分離して培養する方法を説明するプロトコルです。...

ラット上頚神経節（SCG）から培養交感神経のためのプロトコル

数々の最近の研究では、脳の病理学に関連したシナプス蛋白の変異を同定した。初代培養皮質ニューロンは樹状突起スパイン形態と運動性にこれらの疾患関連タンパク質の影響を調べることで最大限の柔軟性を提供します。...

培養中枢神経系ニューロンの樹状突起スパイン形態の解析

培養大人の背根神経節ニューロンの軸索再生の遺伝学的研究

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ヒト多能性幹細胞からの節後交感神経細胞の生成

ビデオは、後根神経節(DRG)ニューロンとシュワン細胞との共培養を示しています。DRGニューロンは、まず、整列した軸索の成長のために、あらかじめ引き伸ばされた膜上で成長します。次に、軸索に付着するシュワン細胞が導入され、軸索を絶縁し、神経細胞の生存と機能を促進します。...

プレストレッチメンブレン上でのシュワン細胞とDRGニューロンの共培養

このビデオは、トランスフェクションされた後根神経節細胞を使用して、神経ペプチド受容体アゴニストで神経伝達物質の放出を研究する方法を示しています。...

神経ペプチド受容体アゴニストを用いた後根神経節感覚ニューロンの刺激

現在のプロトコルは、神経突起伸長を促進する因子の分子を解放する能力が備わっている培養マクロファージを刺激する実験の手順を示します。神経細胞・...

アクティブに大食細胞の神経突起伸展作用と分子因子を分泌する神経細胞・ マクロファージ共培養

我々は、トランスウェルフィルター上に培養された三叉(TG)ニューロンを用いた歯科パルプ(DP)一次細胞の分離、分散およびめっきについて述べた。DP細胞の細胞応答は、免疫蛍光またはRNA/タンパク質分析で分析することができる。共焦点顕微鏡を用いた神経細胞マーカーの免疫蛍光は、神経突起の成長応答の解析を可能にする。...

歯髄パラクリン信号に反応した神経突起の成長を研究する共培養法

本プロトコルでは、ヒト多能性幹細胞からの神経節後交感神経ニューロンの生成に対する安定した、高効率な分化戦略を説明する。このモデルは、複数の自律神経障害の研究の使用のためにニューロンを利用可能にします.

フィーダーフリーおよび化学的に定義された培養条件下でのヒト多能性幹細胞を用いた後神経節系交感神経ニューロンの効率的な分化

本論文では、上方の頸神経節からの胚性ラット交感神経の単離と培養について述べている。また、免疫細胞化学染色や質量分析のためのニューロン抽出物の準備のための詳細なプロトコルも提供します。...

形態学およびプロテオーム解析のための胚性子宮頸部神経節からのラット交感神経の培養

学ぶ、BMP-7またはMatrigelを用いてラットの上位頸神経節から交感神経ニューロンを培養し、樹状突起成長を誘導する方法。この技術は神経発生研究に応用可能です。

培養交感神経ニューロンの樹状成長を誘導する

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