XpertのMTB / RIFのテストで肺結核の診断

本手順の総合的な目的は、排出された痰または濃縮された痰沈渣から、マイコバクテリウム、結核菌、およびリファンピシン耐性を2時間以内に同時に検出することです。まず、シンプルで非常に効果的な検体除染プロトコルから開始します。次に、処理済みの各検体を、PCR試薬が含まれPCRプロセスが進行する使い捨ての専門的なM-T-B-R-I-Fカートリッジに転移させます。

カートリッジをGeneXpert DXシステムにセットし、結核菌（Mycobacterium tuberculosis）およびリファンピシン耐性を同時に検出するための超高感度HEMIネステッドPCRを開始します。最終的に、検査結果を読み取り、医師に報告してください。Expert MTPRアッセイは、肺結核の臨床的疑いがあり、同社のテキストに記載された基準を満たす患者からの検体に使用することを目的としています。

薬剤療法の効果をモニタリングするために使用してはならないことに注意してください。Crystal。それでは、私の研究室の技術者が、結核ケアの国際標準の標準2に従ってプロトコルを実演します。肺結核が疑われる各患者から、細菌学的検査のために2つの検体を採取してください。

検体ごとにGeneXpert DXシステムのモジュールを1台割り当て、カートリッジに検体IDを記入します。次に、各サンプルのアッセイにおいて、別の滅菌転送ピペットを用いて喀痰1 mLを15 mLコニカルスクリューキャップチューブに移します。M-T-B-R-I-Fサンプル試薬2 mLを加えます。

蓋をしっかりと閉めます。チューブを10〜20回振ってください。激しく振った後、チューブを室温で5分間静置します。

再度、室温で10分間平衡化します。すべての検体にEDが施されており、痰の塊が見られないことを確認してください。まず、各痰沈渣検体の検体IDをカートリッジに記入します。各沈渣検体にM-T-B-R-I-F検体試薬を1.5 milliliters加え、そのうち0.5 millilitersを15 milliliterの円錐形スクリューキャップチューブに移します。蓋を閉めて30秒間ボルテックスし、チューブを直立させた状態で5分間静置します。

ボルテックスで混合し、チューブを直立させたまま10分間静置します。液状化したサンプルを点検し、痰の凝塊がないことを確認してください。チューブのラベルと対応するカートリッジを照合します。

検査の準備が整うまでカートリッジを開封しないでください。また、カートリッジの蓋を開けてから30分以内に使用してください。滅菌転送ピペットを使用して、液状検体をメニスカスが最小標線（minimum mark）を超えるまで吸引します。その後、サンプルをゆっくりとカートリッジに注入してください。

カートリッジの蓋を閉めます。サンプルをカートリッジに添加してから30分以内にテストを開始してください。まずコンピュータの電源を入れ、次にデスクトップ上の装置の電源を入れます。

gene expert DXアイコンをダブルクリックします。システムソフトウェアにログインします。[create test]を選択して、スキャンカートリッジバーコードダイアログボックスを開きます。

次に、サンプルIDを入力し、カートリッジのバーコードをスキャンします。「Create Test」ウィンドウが表示されたら、「Start Test」をクリックし、ダイアログボックスにパスワードを入力してください。その後、装置モジュールのドアを開き、カートリッジをロードします。

ドアを閉じてテストを開始します。緑色のライトが消灯すると、テストは完了です。システムがドアロックを解除したら、モジュールのドアを開けてカートリッジを取り出してください。

最後に、使用済みのカートリッジを適切な廃棄容器に廃棄します。各テストカートリッジには、Mycobacterium tuberculosis complexのリファンピシン耐性のQPCR用試薬および適切な実験用コントロールが含まれています。プローブチェックコントロールにより、カートリッジ内での試薬の再水和、PCRチューブへの充填、プローブの完全性、および色素の安定性を検証します。

サンプル処理曲線は、標的細菌が適切に処理されたことを示す陽性コントロールとして機能し、PCR阻害剤の存在も示します。プライマーは、保存された野生型配列と、RIF耐性に関連するRPOB遺伝子のコア領域における変異とを区別するように設計されています。CT値は、テストサンプル中の標的M-T-B-D-N-Aテンプレートの濃度に反比例します。

テスト結果のダイアログボックスにより、この患者検体ではMTB標的DNAが検出され、RIF耐性は検出されなかったと結論付けられます。MTB標的DNAは低レベルで検出されており、リファンピシン耐性の兆候が見られます。SPCおよびPCCの両コントロールは、割り当てられた判定基準を満たしています。

SPCが陰性であり、PCR産物が検出されなかったため、このアッセイ結果は無効とみなされます。サンプルが適切に処理されていなかったか、あるいはPCRが阻害された可能性があります。アッセイを繰り返してください。

ビデオでご覧いただいた通り、この試験法は標準化されており、中程度の研究施設とトレーニングのみで実施可能です。したがって、エキスパートM-T-B-R-Fアッセイは、結核およびリファンピシン耐性の両方に対する標準化された高感度かつ極めて特異的な診断検査を、あらゆるポイント・オブ・ケア（POC）設定で利用可能にする潜在能力を持っていると考えています。