脾臓の生体顕微鏡検査：寄生虫モビリティと血流​​の定量的解析

この手順では、脾臓を通る寄生虫の通過のダイナミクスを評価するための定量的生体内顕微鏡法を示します。げっ歯類のマラリアモデルでは、GFPトランスジェニック寄生虫に感染したマウスは、脾臓静脈カニューレ挿入の生体内顕微鏡検査のために準備され、生体内染料の注射が可能になります。実験中、蛍光細胞は脾臓のさまざまな領域で画像が動いています。

私たちは、赤い歯髄の3次元低速コンパートメントにおける寄生虫の移動性を説明し、血管の血流を計算するための神話を提供します。このパラメータは、2つのPULE株の脾臓ダイナミクスを比較するために使用されました。こんにちは皆さん。

私の名前はナンド・エル・ポルティージョで、私の研究室の主な研究課題の一つは、マラリアにおける脾臓の役割を理解しようとすることです。S脾腫はこの病気のランドマークの1つですが、技術的および倫理的な問題のために、この臓器の研究に取り組むことは非常に困難です。そのために、この寄生虫のダイナミックな通過を観測し、その現象を定量化する技術を可能にしました。

これが、LorenaとMIがこれらのプロトコルで説明することです。この研究は、部分的には、ドイツのハンブルク大学のラー博士とここ病院クリニックのマリアKbo博士のグループと共同で実施されており、エスパニョールでは、10%寄生虫で致死的または非致死的なGFP寄生虫に感染したドナーMから感染が開始され、フィオンCellexと省庁CIAの一般的な資金提供を受けています。寄生虫をチェックするには、マウスの尾静脈から少量の血液を採取し、顕微鏡で伸ばします。

GIMでchole metric染色をスライドさせます。溶液を使用すると、乾燥した感染した赤血球を視覚化し、血液塗抹標本をメタノールで2分間固定し、GIMを溶液に適用して20分間インキュベートします。スライドを現在の水道水で洗浄し、100 x オイルを含む光学顕微鏡を使用して、総赤血球に対する pbcs の割合を乾燥させて列挙します。目的。

PBSで希釈したドナーマウスの尾血から得られた致死性または非致死性の寄生虫をマウスに感染させます。感染後3日目に末梢寄生虫が1%に達するように、マウスあたり50万個の寄生虫を注射するように用量を調整し、腹腔内注射します。.あるいは、FITCで標識されたRBCを制御に使用することもできます。

マウスから1ミリリットルの動脈血を採取し、FITC溶液中のEDTA含有PBSで遠心分離してペレットを洗浄し、暗所で穏やかに攪拌しながら2時間インキュベートします。その後、遠心分離により上清を取り除き、広範囲に洗浄します。末梢循環の平均1%になるようにコントロールマウスに注入し、in vivo実験に進みます。

こんにちは、mijaです。生体内で脾臓を画像化するには、明らかにこの技術で脾臓を露出させるために動物の小さな相乗効果を実行する必要があります。私は労働者ハイスラーの研究室でステファニーGRからそれを学びました、私が感謝したいと思います、そして今、私はあなたに方法をお見せします

感染した筋症のイメージング 感染後 3 日目に実施 parat が両方の株で 1% の場合。処置中は、マウスに麻酔をかけ、温度を調節してください。水分補給から目を保護し、物質の静脈内投与を容易にするために、進行する前にフットパッドにpingを実行してマウスが完全に麻酔されていることを確認してください。

実験の過程で、マウスの尾静脈をカニューレに挿入してカニューレを構築します。チューブの一方の端に小さな針を挿入し、もう一方の端にアプリケーターを挿入します。カニューレに生理食塩水を充填し、気泡を除去し、溶液がカニューレを正しく流れることを確認します。

尾の側静脈はきれいにカニューレで切られます。尾の付け根でソフトなくびれをすることで視認性を高めます。カニューレの先端を静脈の内側に導入します。

血液の出現は、針が適切に配置されていることを示します。そうでない場合は、静脈の上流でカニューレ挿入を繰り返してから、接着剤とテープを使用してカニューレを尾に固定します。動物の左背側の皮膚と筋肉組織の小さな切開を通して脾臓の下部分を露出させます。

呼吸の動きが少ない場所に脾臓を置き、露出した表面にPBSを塗布して、マウスの毛を清潔に保ち、水分を補給します。脾臓をカバーでシールし、視覚化できるように眠ります。こんにちは、私の名前はロレーナです。

示されたプロトコルにより、脾臓を通るPULI寄生虫の動きを視覚化することができます。これは、GFPトランスジェニック寄生虫のおかげで可能になりました。ドレクセル大学のジェームズ・バーンズ氏からご寄付

蛍光寄生虫のイメージング運動により、致死性株と非致死性株の挙動に違いがあるかどうかを知ることができます。Vidal顕微鏡実験は、温度制御を備えたインキュベーションシステムと63 xグリセロール対物レンズを備えたライカ多光子顕微鏡で実施されました。動物を顕微鏡のステージに置き、蓋付きの睡眠脾臓を対物レンズに向けて置きます。最初。

低倍率で脾臓を視覚化すると、臓器の微小循環構造の全体像が得られます。自家蛍光組織GFP寄生虫を使用して脾臓に焦点を合わせ、脾臓のさまざまな領域を通過することが観察されます。こんにちは、私の名前はバルセロナ大学の科学技術センターのマリア・アルボで、脾臓の生体内イメージングを行います。

感染した赤血球の血流や可動性を調べるために、臓器の動きを避けるのに非常に有効な高速イメージングを可能にする共振スキャンを搭載した共焦点顕微鏡を使用します。視野範囲を選択できるスペクトル顕微鏡です。非常に高速にイメージングするために、2つのフルオレセイン、標識、反射の同時取得を行います。

RBC、リフレクション、コントラスト、およびVidal染料を使用して、脾臓微小血管系を証拠として、さまざまなゾーンを画像化します。次に、Vidal顕微鏡と画像Jソフトウェアを使用して血管血流中の寄生虫の移動性を測定し、赤い歯髄の3次元メッシュワークで寄生虫の動きを追跡する方法について説明します。高速スキャンモードを使用して、5つのZ深度で画像を取得します。

画像スタックをZコード化されたカラームービーに変換して、単一の蛍光細胞の追跡を容易にします。詳細情報は、X、Y、Z、およびT座標を使用して、各ビデオ上の深さで時間経過に異なる粒子を追跡し、方向性、平均速度、および滞留時間などの移動パラメータを計算し、ひずみ集団間の比較分析を可能にするために、分布マップとして表すことができます。脾臓の血管の流れは、デキストリンのような支持表に記載されているいくつかの蛍光分子を全身注射することで画像化できます。

また、内因性赤血球反射コントラストを用いて、レーザースキャンの方向に血管を水平に設定し、強化されたライン平均を使用して中心線の血流をスキャンします。これらの画像では、細胞の移動から生じる縞は、血流を計算し、異なる直径の血管の画像を撮影し、心臓周期全体で変動を補正するために使用されます。脾臓は長い間、マラリア研究のブラックボックスと考えられてきましたが、ここでは、この臓器における寄生虫感染と血流のダイナミクスに関する洞察を得るための定量的生体内顕微鏡法を開発しました。これにより、感染した赤血球の脾臓への生体内付着などの重要な生物学的問題に取り組むことができました。

そして、よろしくお願いいたします。