Name: 根こぶ線虫、高および低スループット画面サツマイモ属。 /em (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 46 s
Description: 学ぶ根こぶ線虫による植物感染の高・低スループットスクリーニング法。砂質土壌や成長ポーチを用いた苗の育成、二次幼虫の接種、卵塊評価の詳細プロトコルを解説。限られた空間で効率的に抵抗性品種育種に貢献する手法を習得できます。

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Kaloshianラボでの研究は、食と農の米国国立研究所（2007-35607-17765）からの助成金によって賄われています。ロバーツラボでの研究は、国際開発（GDG-G-00-02から00012-00とEDH--00-07から00005）とカリフォルニア乾燥豆諮問委員会の米国代理店からの補助金によって賄われています。

1。鍋やトレイのトマト苗の成長<ol><li>ポット試験、そのようなサンシャイン·ミックスとして有機物に富む土壌でシングルポットの植物トマトの種子。 22から28までの温室で維持℃の発芽後は、ミラクル·グロで週に一度受精。 </li><li>約2週間発芽後、2真の葉の段階で、90％砂10％、有機混合物を含む滅菌した砂質土を充填したポット（直径10cm、深さ17センチメートル）に個別に苗を移植。徐放性肥料をOsmocote、2週間22から28℃の温室内に維持するに追加します。ミラクル·グロで週に一度植物を受精し続けています。 </li><li>高スループットの画面では、直接砂質土壌におけるトレイの植物の種子は、発芽するまでラップとトレイをカバーし、上記のように維持します。発芽後は、徐放性肥料をOsmocoteとミラクル·グロで週に一回肥料を追加します。 </li></ol> 2。苗ポーチのササゲの生育<ol><li> Seedsのいずれか、ペトリ皿の中で発芽させたキムワイプ紙のいくつかの層で裏打ちし、袋に単独で転送したり、パウチの紙の溝に直接配置して、発芽しています。 </li><li>フォルダごとのプラスチック製のハンギングファイルフォルダ、二つに袋を置き、垂直位置でラック内のフォルダを配置します。 25から28℃の温度、16時間明/ 8時間暗サイクルで維持制御環境チャンバ内のラックを配置します。ラックは、温室で維持さが、真菌汚染の可能性を減らすために、箔や植物の茎の両側にラックの上に配置硬い紙のカバーを必要とすることができます。 </li><li>逆浸透水で1日に1回または2回ごとに水が袋。播種後14から10日程度、第三のルートヒントを適切な根系（ 図1）を開発した場合には、苗が接種の準備ができている。 </li></ol> 3。線虫卵の抽出電子メールの抽出感染した根からGGSはハッセーとBarker（1973）によって開発されたプロトコルから変更されています。 <ol><li>線虫接種前に3〜4日、感染したトマトの根から根こぶ線虫の卵を抽出します。卵の抽出を開始する前に、汚染を避けるためにお湯で十分に作業領域を洗ってください。また、お湯で洗うブレンダー、2つのバケット、ワイヤメッシュのサポート、ゴム槌、425の3ふるい、90と25μmの開口部、メスシリンダーとはさみ。 </li><li>次の順序で上から下までふるいをスタック：425、90、25μmの開口部。卵は下部に25μmのふるい上で収集されます。シンクでサポートされている金網にモレキュラーシーブを入れてください。実行して、ソリューションを収集するためにワイヤーメッシュの下にバケツを置く。 </li><li>接種源として使用される感染した植物（s）のトップを切って、捨ててください。慎重にポットから植物を削除します。水の完全なプラスチック製のバケツの中に浸漬することにより根を洗います。実行の下にさらに根をすすぎ土壌粒子は根から洗い流されるまで、水を寧。 </li><li>小さな部分にハサミで根をカット。主根を処分してください。 </li><li>蓋付きの大きなプラスチック瓶に単一の植物から根のみじん切りを入れ、根をカバーし、蓋を閉じるには、ちょうど足りるだけの10％漂白剤溶液を追加します。 </li><li> 2分間根を含むjarファイルを横に振る。 </li><li> jarファイルを開き、上部ふるいの上に根を注ぐと霧吹きノズルに取り付けられたホースで洗浄する。すべての漂白剤の臭いがなくなるまでよく洗います。ふるい孔を目詰まりを避けるためにモレキュラーシーブの側面をタップする木槌を使用しています。 </li><li>トップシーブを取り外し、第二ふるい上に残渣を洗い流してください。 </li><li>第二ふるいを削除し、最後のふるいから、卵を含む微細な破片を収集します。水のボトルから穏やかな流れで、モレキュラーシーブの一方の側に破片を移動します。最小量の水ときれいなビーカーに破片や卵を収集します。 </li><li>もう一度ふるいで収集された水エスケープされた可能性のあるすべての卵を収集するために25μmのふるいを通してバケット。水でよくすすぎ、同じビーカーに収集されます。 </li><li>トップふるいから植物の残骸を破棄し、加圧された水で十分にすべての3つのふるいを洗浄する。それは細孔サイズを歪める可能性があるふるいのメッシュ部分には触れないでください。 </li></ol> 4。ハッチング線虫卵<ol><li>キムワイプ紙のいくつかの層に沿ってきれいな金属製のバスケットをガラスペトリ皿に収まる。バスケット、皿の底部との間に1cmの距離を可能にします。 </li><li>ワイヤーバスケットで紙の上に抽出した線虫の卵を注ぎます。ワイヤーバスケットの底が水面に触れるが、水に浸漬されないように十分な液体を追加します。プラスチック製のふたで上部をカバーしています。 </li><li>毎日、水の蒸発をチェックし、バスケットの底が水に触れるように、ペトリ皿に水を追加します。これは乾燥から卵を防ぐことができます。 </li><li>一日おきに、waを収集するビーカーにペトリ皿からJ2Sが含まれていますTER。すぐに使用しない場合は、水槽ポンプによって生成されたラボの空気供給または空気を用いて室温で収集された接種材料を通気する。 2日以内に気泡接種を使用しています。 J2Sは6-8日の期間にわたって設定孵化から収集することができます。 </li></ol> 5。トマトの根鉢またはトレイで感染し、感染性の評価<ol><li>カウントスライドまたは皿にJ2Sの数を数えるために収集された線虫の3アリコートを使用して、平均値を計算し、接種のために必要なボリュームを決定します。通常は3000 J2Sはポットと苗トレイに生育した植物500 J2Sで工場ごとに使用されています。 </li><li>低速で、磁気撹拌プレート上で接種をかき混ぜる。 </li><li>あなたが植物に接種する前に、土壌が湿った、あまりにも濡れていないことを確認してください。ポット接種のために、鉛筆（ 図2を使用して、それぞれのトマトの根系の周囲に砂の中に約半分の鍋の深さの3つの穴を作る</強い&gt;）。ピペットを使用して、3つの穴にJ2Sを提供することで、それぞれの植物に接種する。その後、穴をカバーしています。 </li><li>トレイのハイスループットスクリーニングのために、土壌にJ2Sを提供するピペッターに沿って5 mlのピペットチップ（ 図3）に接着側面の穴に変更された密封された先端の針を使用しています。また、線虫は、ステップ5.3のように配信することができます。 </li><li> 24から27までの温室で植物を維持°C 6〜8週間のために。ミラクル·グロで月に二回受精を続けています。 </li><li>感染症の評価のために、慎重に鉢から植物を除去し、根を（ステップ3.3で説明されるように）洗ってください。 </li><li> 15分間は、1 mg / L erioglaucineに根を浸して青色の卵塊を染色する。 </li><li>水中で根を洗い、個々の根系に染色された卵塊を数えることによって評価する。照らされた机の拡大鏡は、卵塊を視覚化するために使用することができます。 </li><li>スクリーニングされた植物は、さらにgの必要な場合enetic研究では、評価のための根を洗浄する前に、上部をカットしないでください。染色と卵塊数をカウントした後、有機質土壌に苗を移植し、温室効果の蒸散を軽減し、維持するために頻繁にトップをプルーニングします。 </li></ol> 6。ポーチや感染症の評価におけるササゲの根の感染<ol><li>線虫の接種をカウントし、前述のように磁気攪拌プレート上でかき混ぜる。 </li><li>水平な面の上にぶら下がって、フォルダや場所から袋を削除します。 5ミリリットル1500 J2S各ポーチを接種する。ポーチのプラスチックカバーを持ち上げて、根の表面に均等に線虫を配布しています。 </li><li>光を除外するには、暗い紙で覆われた接種24時間後の水平方向の位置で袋を維持し、成長チャンバー内で吊り下げフォルダに戻ります。 </li><li> 表1に 、半強度ホーグランドのソリューション（ホーグランド＆アルノン、1950年の水植物を、必要に応じて、一回または1日2回、 </strong&gt;）を肥料への応答が観察されるまで、一般的に強化された葉の緑化、より積極的なシュートの成長。通常、植物は行の半分強ホーグランド3日で骨抜きにされています。その後、水と袋の潤いを保つ。 </li><li>接種後約30日（範囲28から35日）、75 mg / Lでerioglaucineの約10〜20 mlの各ポーチを吹き込む。一晩水平に染料が殺到袋に保管してください。 </li><li>袋を切り、照明デスクルーペの下に卵塊を数えることによって、根系を評価します。 </li><li>スクリーニングされた植物は、慎重に温室内で、紙から根を引き抜くポットに有機質土壌に移植し、維持、さらに遺伝学的研究または繁殖の仕事のために必要な場合。 </li></ol> 7。代表的な結果説明した2つのシステムのための線虫接種のためにトマトとササゲ植物の適切な段階は、 図に示されている1と2。加えて、トマトとササゲのよく感染根の例は図4と図5に示されています。ほとんどの病害抵抗性の画面のように、それは感染率の平均を計算するために、線虫接種のための遺伝子型ごとに少なくとも6月10日の植物を使用することをお勧めします。植物の間に線虫感染における変化は、同一の遺伝子型から、均一な植物のサイズと正確な量と接種​​の配信を使用することによって削減することができます。 トレイと成長の袋の使用は、小さな成長の空間での植物の数百〜数千のスクリーニングが可能になります。成長ポーチも洗濯根（ 図4）を必要とせず、根こぶ線虫感染症の迅速かつ効率的な非破壊評価を可能にします。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig1.jpg" /> 図1：2週齢のササゲ植物ポーチに成長し、根こぶNEMAの準備戸出接種。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig2.jpg" /> 図根こぶ線虫の接種2。3週齢のトマト植物の準備。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig3.jpg" /> 図3線虫のハイスループット接種のために使用される変更された針とピペットチップ。針の下には、封印されたと正孔の3つのセットは、レーザービームを使用して針で掘削された。その後、変更された針は、5 mlのピ​​ペットの先端に接着された。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig4.jpg" /> 図4。根こぶ線虫に感染したトマトの根系。 <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig5.jpg" /> 図5で成長erioglaucine 30日後接種で染色した卵塊とササゲの根系28℃

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</ol>

我々は、開示することは何もありません。

そこに成功した線虫の画面の2つの重要な手順は次のとおりです。非常に感染性接種の準備と適切な発達段階で植物を使用します。根こぶ線虫卵の孵化率は5〜非常に変数と範囲である - 50％。したがって、ハッチ、非常に感染J2Sの最適なレベルを得るために、細心の注意が卵抽出および孵化手順に支払わなければならない。卵は、最低期間の漂白剤にさらされるべきであり、漂白剤は、ルートの混合物からうまくリンスする必要があります。時孵化卵は、卵を含むスラリーは、水に沈めてはいけません。さらに、孵化した稚魚が収集された基本的なペトリ皿に卵をこぼし避けてください。孵化プロセス中に卵をこぼし回避する一つの方法は、紙が破損するおそれがあるとして、キムワイプに直接水を追加することではありません。代わりに、ペトリ皿に直接水を追加します。 最良の結果を得るために、新たに孵化したJ2Sを使用しています。 HATC場合hの速度が低く、より多くの接種が必要な場合は、J2Sは長い期間を15℃で保存することができます。接種前に虫を復活させるために室温に保存されている接種を温める。しかし、たとえ15歳で長期間J2Sを格納していない°C飢えJ2Sが効率的に感染しませんように。 若い苗は根こぶ線虫接種のための最高の発達段階があります。しかし、これはJ2S用のエントリポイントとして根の十分な数を提供する十分な根系の形成とバランスする必要があります。最適な植物の成長条件を維持しても画面が非常に重要です。特別に袋で栽培それらオーバー散水植物を避けることができます。過剰散水袋を、袋の底に水を立っているで示されるように、真菌の増殖を促進し、根の健康を減少させることができます。 線虫の感染と卵/ルートシステムと卵/周波数のグラム数の計算のアッセイをさらに評価の両方を持つshのルートを行うことができます。トマトアッセイについては、個々のルーツを秤量し、卵が接種の準備（セクション3）で説明したように抽出されます。植物の多数のサンプルを処理するとき、個々のルートシステムは、卵抽出のためにブレンダーを用いて浸軟することができます。卵の数は、少なくとも3つのアリコートと計算された新鮮な根系の卵/グラムでカウントする必要があります。ポーチアッセイのために、根系は、用紙の挿入をオフに引っ張ら秤量し、卵が抽出されます。

根こぶ線虫、高および低スループット画面サツマイモ属。</em

High and Low Throughput Screens with Root-knot Nematodes Meloidogyne spp.

根瘤線虫（属サツマイモ ） は、嫌気植物の寄生虫である。彼らは非常に多食し、最も経済的に重要な植物寄生性線虫の一つと考えられています。卵で一度脱皮微視的な第二段階の少年（J2）は、感染の段階です。 J2Sは、卵から孵化し、水の膜内の土壌中で自由に移動し、適切な植物種の根を探します。彼らは給餌のサイトを確立し、それらのスタイレットを使用して供給開始する場所植物の根を貫通した後、彼らは血管の筒に向かって移行します。多給サイトが分裂せずに核分裂（有糸分裂を繰り返す）を受けた細胞から形成された &quot;巨大細胞&quot;と呼ばれるいくつかの拡大多核細胞で構成されています。近隣の内鞘細胞は分裂し、典型的な胆嚢やルートノット、根こぶ線虫感染症の特徴的な症状を生じさせるのサイズが拡大します。一度給餌が開始されると、J2Sは、定住や国連になる大人になるための3つの追加moltsをdergo。成人女性は、ルートの表面上または下にゼリー状のマトリックスに150から250個の卵を産む。卵から新たな感染J2Sハッチと新しいサイクルを開始します。根こぶ線虫のライフサイクルは26から28で4-6週間で完了℃でここでは、根こぶ線虫およびハイスループットアッセイには、2つの方法とポットで生育した植物を、感染させる伝統的なプロトコルを提示します。第二は、そのようなササゲとインゲンマメなどの大きな種子を持つ植物のためですが初の高スループットメソッドは、トマトのような小さな種子植物のために使用されます。大型種は最小の栄養補助食品で拡張苗の成長をサポートしています。最初のハイスループットアッセイは、第二のアッセイ工場で土壌の非存在下で袋で栽培されていながら、トレイに砂で育った苗を利用しています。苗の成長ポーチは、種子や苗が置かれている2cmの深さの谷を形成するために、上部に折りたたまれ、15.5×12.5センチメートル紙の芯で作られています。ザ紙の芯は、透明プラスチック袋の内側に含まれています。これらの成長の袋は透明な袋の表面の下に、根と卵の大量生産のかじり、線虫感染症の症状の直接観察を可能にします。どちらの方法で生産を横断またはシードのために、表現型解析の後、スクリーンの植物を使用することができます。パウチは、ラックに配置されたプラスチック製のハンギングフォルダに格納されているため、成長の袋の使用の追加の利点は、小さなスペースの要件です。

根こぶ線虫、画面の植物には2つの異なるメソッドが記述されています。説明したアプローチは、繁殖プログラムでこれらの植物の使用を容易に非破壊で線虫による高スループットスクリーニングが含まれています。

ネコブセンチュウ（Meloidogyne属）は、絶対寄生性の植物寄生虫である。これらは極めて広食性であり、経済的に最も重要な……の一つと考えられている。

本手順の全体的な目的は、ネコブセンチュウに寄生した植物をスクリーニングすることである。まず、砂質土壌または育成ポーチで健全な苗を育成する。次に、高度に感染したネコブセンチュウの2期幼虫の接種源を作成する。次に、苗に適切に接種し、感染させます。最後に、宿主の根系における線虫の卵塊の発達を評価します。ここでは、線虫ではなく、根を持つ植物の高スループットおよび低スループットスクリーニングについて実演します。このハイスループットシステムの主な利点は、植物の育成に必要なスペースを限定でき、感染の評価が容易であることです。したがって、これらの手法によって、植物の根への線虫感染を再現可能かつ均一に行うことができ、その結果、植物の宿主状態をより正確に評価することが可能になります。一般的に、根結線虫を用いた植物評価に不慣れな方は、根に線虫を接種させる際の適切な成長段階を選択していないため、困難に直面する傾向があります。また、通常は感染力の低い、数日経過した感染期幼虫を用いることで、学部生や大学院生に向けた手順のデモンストレーションを行います。私の研究室では、ポット試験用の育成ポーチを用いたスクリーニングの手順を実演します。発芽後、22～28 °Cに維持された温室にて、サSunshine Mixなどの有機質に富んだ土を満たした単一のポットにトマトの種子を播種してください。発芽から約2週間後、本葉が2枚になった段階で、1週間に1回Miracle-Groで施肥します。個々の苗を、滅菌した砂質土（砂90％、有機物10％）で満たしたポットに移植してください。OsmoCoat緩効性肥料を加え、温室内で22から28 °Cの温度で2週間維持します。その後も、1週間に1回Miracle-Groによる施肥を継続してください。ハイスループットスクリーニングを行う場合は、砂質土壌を入れたトレイに種子を直接播種します。発芽するまでプラスチックラップで覆い、前述の方法で管理します。発芽後、Osmo coats緩効性肥料を添加し、週に1回Miracle-Groで施肥します。種子を数層のKimwipeでライニングしたペトリ皿に播種し、インキュベーター内で25 to 28 °Cに維持して発芽させた後、苗を個別のポーチに移植します。あるいは、種子をペーパーグルーブ（紙製の溝）に配置し、個別のポーチ内で直接発芽させます。ポーチをプラスチック製の吊り下げファイルフォルダーに入れ、フォルダーをラック上に垂直に配置します。ラックを、温度25～28°C、明期16時間および暗期8時間のサイクルに維持された環境制御チャンバー内に設置します。播種から約10～14日後、逆浸透水を用いて1日1～2回、ポーチに潅水します。三次根の先端を持つ十分な根系が発達した時点で、苗の接種準備が整ったことになります。卵の抽出を開始する前に、汚染を防ぐため、作業エリアとすべての器具を温水で十分に洗浄してください。回収用のバケツをシンクに置き、溶液を流し込み、その上にワイヤーメッシュのサポートを設置します。卵が25µmのふるいに回収されるよう、孔径の大きい順に3つのふるいを上から順に重ねます。感染した植物の上部を切り取り、慎重に廃棄してください。植物をポットから取り出し、水で満たしたプラスチックバケツに浸して根を洗浄します。さらに、土粒子が洗い流されるまで流水で根をすすぎます。その後、感染したトマトの根からネコメセンチュウの卵を抽出します。まず、ハサミを用いて根を細かく切り、主根は廃棄します。1株分の細かく切った根を蓋付きの大きなプラスチック容器に入れ、根が浸かる分だけの10%次亜塩素酸ナトリウム溶液を加えます。蓋を閉め、容器を2分間振ります。ジャーを開け、根を上部のふるいに注ぎ、ミストノズルを取り付けたホースで洗浄します。漂白剤の臭いが完全になくなるまで十分に洗浄してください。また、ふるいの目詰まりを防ぐため、マレットでふるいの側面を叩いてください。一旦停止し、上のふるいを取り出して残渣を洗い流します。次に2番目のふるいを取り出し、水ボトルの緩やかな水流を用いて、前のふるいから落ちた卵を含む微細な残渣を回収します。デブリをふるいの端に寄せます。デブリと卵を、最小限の水とともに清潔なビーカーに回収します。バケットに溜まった水を25 micronのふるいでろ過し、漏れた可能性のある卵をすべて回収します。水で十分にすすぎ、同じビーカーに回収します。清潔な金属バスケットにキムワイプを数枚重ねて敷き、ガラス製シャーレにセットします。この際、バスケットの底とシャーレの底との間に1 cmの隙間を空けてください。抽出した線虫の卵を、ワイヤーバスケット内のペーパー上に注ぎます。ワイヤーバスケットの底が水面に接するが、水に浸からない程度の液体を加えます。毎日、上部をプラスチック製の蓋で覆います。水の蒸発を確認し、バスケットの底が水に触れるように、ペトリ皿に水を補充してください。卵の乾燥を防ぐため、6〜8日間にわたって1日おきに、J2（第2段階幼虫）を含むペトリ皿の中の水をビーカーに回収します。すぐに使用しない場合は、ラボの空気供給装置またはアクアリウムポンプで生成された空気を用いて、回収した接種物を室温で直ちにエアレーションしてください。次のステップでは、マグネチックスターラーを用いて接種物を低速で攪拌し始めてください。回収した線虫を3つの分注量で使用します。会計におけるJ twosの数を数えるため、スライドまたはディッシュを用いて平均値を算出し、接種に必要な液量を決定します。これらは顕微鏡下で観察したJ twosです。通常、ポット栽培の植物には1株あたり3000 J twosを、苗トレーで育てた植物には500 J twosを使用します。植物に接種する前に、土壌が湿っているが濡れすぎていないことを確認してください。ポットへの接種では、各トマトの根系周囲の砂に、ポットの深さの約半分程度の穴を3か所開けます。鉛筆を用いて、ピペットでJ twosを3つの穴に注入し、各植物に接種します。その後、トレイ内のハイスループットスクリーニング用の穴を塞ぎます。5 mLピペットに側面に穴のある改造密封チップニードルを接着して使用してください。ピペッターを傾け、J2を土壌に注入します。植物を温室内の24 to 27 °Cで6から8週間維持します。月2回、Miracle-Groを用いて追肥を継続します。感染の評価を行う。上部を切り取り、慎重にポットから植物を取り出して根を洗浄する。その後、根を1 mg/Lの溶液に浸し、卵塊を青色に染色する。15分間、Aerioでグロッシングを行う。根を水で洗浄し、個々の根系にある染色された卵塊を数えて評価する。卵塊の可視化には照明付き実体顕微鏡を使用でき、線虫の計数、接種源の調製、および前述の磁気攪拌機による攪拌を行う。吊り下げフォルダからポーチを取り出し、水平な面に置きます。各ポーチに、5 mL中の1,500匹のJ2を接種します。ポーチのプラスチックカバーを持ち上げ、線虫を根の表面に均等に分散させます。接種後、遮光のため黒い紙で覆い、ポーチを24時間水平に保持します。その後、ポーチを成長チャンバー内の水の中にある吊り下げフォルダに戻します。肥料に対する反応が見られるまで、約3日間にわたり、1日1〜2回、0.5倍濃度のHoagland溶液で植物に灌水します。通常、葉の緑色が濃くなり、シュートの成長がより旺盛になります。3日後、ポーチを水で湿らせた状態に保ちます。接種から約30日後、各ポーチに 75 milligrams liter の溶液を約 10 to 20 milliliters 注入します。エアログロッシング。ポーチ内を染料で満たした状態で水平に保ち、一晩静置します。翌日、ポーチ内の液を排出し、照明付きデスクの下で卵塊数を数えて根系を評価します。ここに拡大して示されているのは、広範囲にわたって青色に染色された卵塊が見られる、高度に感染したトマトの根です。トレイを使用することで、狭い育成スペースで数百本の植物のスクリーニングが可能になります。また、育成ポーチを用いることで、根を洗浄することなく、根の状態や線虫感染の非破壊的な評価を迅速かつ効率的に行うことができます。本手法により、限られた育成スペースで数千株の植物の高スループットスクリーニングを行うことが可能です。ここでは、ポーチ内で育成したcow P植物の根系に、接種後の青染された卵塊が認められます。線虫を用いた植物アッセイでは、感染のタイミングが極めて重要です。したがって、感染をわずか数日遅らせるだけでも、感染レベルが著しく低下する可能性があります。このビデオを視聴したことで、根結線虫を用いた植物への接種方法および評価方法について十分に理解できたはずです。線虫に感染した根は適切に取り扱う必要があることを忘れないでください。根を廃棄する前にオートクレーブで滅菌することで、線虫の拡散を制限できます。また、エアリアルグリシンは高用量で発がん性があるため、使用には注意してください。したがって、この化学物質を用いて感染させた根の取り扱いおよびこの化学物質の調製には、手袋を着用する必要があります。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

間の共生を研究するために、...

蛍光顕微鏡を用いて線虫の中の細菌の可視化

このビデオでは、線虫に対する低分子殺線虫剤の有効性を特定するためのスクリーニングアッセイを実演します。殺線虫剤は、ばく露後に試料中の移動性線虫の数を減少させる場合に有効であると考えられています。...

低分子殺線虫剤スクリーニングアッセイ:Ditylenchus dipsaciに対する潜在的な殺線虫剤をスクリーニングするための中スループット法

昆虫病原性線虫、昆虫の広い範囲に寄生する土壌に生息する回虫です。それぞれ、土壌サンプル、感染昆虫死体から線虫の回復のために、昆虫苦しませると変更されたホワイトトラップ：我々は2つ​​の技術を使用した土壌からこれらの線虫を分離するために使用されるサンプリング方法を示しています。...

土壌のサンプリングと昆虫病原線虫の分離（Steine​​rnematidae、Heterorhabditidae）

ここでは、レニフォーム線虫耐性に対する綿のゲノムタイプの迅速な非破壊スクリーニングのためのプロトコルが提示される。このプロトコルは、線虫に感染した綿の苗の根を視覚的に調べて感染反応を決定することを含む。各植物からの栄養芽は、種子生産のための植物を回復するために伝播されます。...

レニフォーム線虫抵抗に対する綿のジェノタイプのスクリーニング

このプロトコルは、現場の天然基質から生きた線虫を効率的に抽出する方法を概説する。...

ベアマン・ファネルによる野生の線虫の迅速な分離

本プロトコールは、 Ditylenchus dipsaciを培養、収集、およびスクリーニングするための信頼性が高く簡単な方法を記載しています。...

植物寄生線虫Ditylenchus dipsaciの培養とスクリーニング

ここでは、遺伝子機能の研究を容易にするために、 ブルサフェレンコス・キシロフィルス におけるRNA干渉の詳細な浸漬方法を紹介します。...

パインウッド線虫、ブルサフェレンコス・キシロフィルスにおけるRNA干渉の応用

このプロトコルは、光学顕微鏡による根構造の組織化学的分析のためのin vivo温室条件下での植物寄生性線虫およびジャガイモin vitroトランスジェニック根によるSolanum...

植物寄生性線虫によるジャガイモ根のin vivoおよびin vitro感染による植物寄生性線虫の感染

私たちは、生物殺虫剤として昆虫病原性線虫を大量増殖させるための農家向けの2つの方法を提案します。最初の方法はポリアクリルアミドゲルを線虫培養基質として使用し、2つ目はポリマーコーティングされた綿を培養基質として使用します。いずれの方法も昆虫死体内で線虫の生 体内...

昆虫病原性線虫の栽培者ベース in vivo 増殖

この方法は、高感度で感染マウスの気管支肺胞洗浄（BAL）液中のH1N1を検出するための赤外線染料ベースのイメージングシステムの使用方法について説明します。試験材料の&lt;10μlの体積を必要とし、複数の病原体の同時スクリーニングのための可能性を秘めている、または384ウェルプレート -...

インフルエンザウイルスのためのハイスループット検出方法

学ぶ根こぶ線虫による植物感染の高・低スループットスクリーニング法。砂質土壌や成長ポーチを用いた苗の育成、二次幼虫の接種、卵塊評価の詳細プロトコルを解説。限られた空間で効率的に抵抗性品種育種に貢献する手法を習得できます。

根こぶ線虫、高および低スループット画面サツマイモ属。

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