Name: ザ ex vivoで隔離された骨格微小血管の準備 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: 学ぶ ex vivoでの血管反応性評価法。グラシリス筋から微小抵抗血管を外科的に分離し、両端をカニューレ挿入して薬理的・生理的刺激に対する反応を測定する。心血管研究に有用です。

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この作品は、米国心臓協会（EIA 0740129N）とNIH T32 HL90610によってサポートされていました。

<ol><li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li>
<li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li>
<li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+rat+intracerebral+arterioles%3A+methods%2C+morphology%2C+and+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li>
<li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li>
<li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-%281-7%29+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li>
<li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Environ.+Health+A%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li>
<li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li>
<li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li>
<li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li>
<li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li>
<li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li>
<li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+MJ+%22Isolated%2C+perfused+microvessels.+In%3A+Clinically+Applied+Microcirculation+Research%22">Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research</a>. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).</li>
<li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li>
</ol>

利害の衝突が宣言されません。

この一般的な手法は容易にほとんどの組織に適用することができますが、提示さプロトコルは、骨格筋の微小血管の分離、除去し、ダブルカニュレーションについて説明します。現在の原稿のために、用語 &quot;細動​​脈&quot;はアクティブなトーンを休んで、直径70から120ミクロンの範囲の抵抗血管を記述するために著者によって使用されており、臓器にも血流抵抗の調節に主要な貢献者であるか組織。 いくつかの修正と共に、このシステムは、特定の研究者のために複数のアプリケーションに装着することができ、容易に（例えば、膜電位17の決定のための貫通電極の使用）の深さの実験の多くを提供するために追加の技術の取り込みが可能になります。基本的な準備の重要なステップは、常に明確なままで、できるように、容器をカニューレを挿入するために使用される流入量と流出量ピペットがよく一致していることを保証されてい安易な方法で維持される流量と圧力。ピペットは、破片の分の部分で目詰まりすると、その流れを復元するためのヒントを非常に小さな部分を絶つ必要があるかもしれません。捜査官が慎重であれば、彼らはどちら...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬および器具 </td><td> 会社 </td><td> コメント/カタログ＃ </td></tr><tr><td>血管商工会議所</td><td>カスタム</td><td>デイブEick（MCW） </td></tr><tr><td>温水循環水浴</td><td> PolyScienceとハーケ</td><td>ハーケDC 10 </td></tr><tr><td>ピペット</td><td>フレデリックHaer·アンド·カンパニー</td><td>キャピラリーチューブ2.0ミリメートル外径×内径1.0 mm（27-33-1） </td></tr><tr><td>圧力監視装置</td><td>世界の精密機器</td><td></td></tr><tr><td>水ジャケットリザーバー</td><td>カスタム</td><td></td></tr><tr><td>外部光源</td><td>世界の精密機器</td><td> Novaflex </td></tr><tr><td>ピペットプラー</td><td>ミクロ·インスツルメンツ</td><td> PMP102マイクロピペットプラー</td></tr><tr><td>完全相補手術器具のメンター</td><td>ファイン科学ツール</td><td>デュモン</td></tr><tr><td>ウルトラファイン鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td>イノックス＃5 </td></tr><tr><td>シルク縫合糸</td><td> Ethilon </td><td> ＃10から0または9から0 </td></tr><tr><td>ステレオ顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td>オリンパスSZ-11 </td></tr><tr><td>アナログビデオキャリパー</td><td> Boeckeler </td><td>を介してコントローラ（VIA-100） </td></tr><tr><td>高解像度アナログカメラ</td><td>パナソニック</td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td>酸素タンク</td><td>地域の</td><td> 21％のバランスの窒素および5％CO 2のバランス窒素</td></tr><tr><td>チューブ</td><td>タイゴン</td><td></td></tr><tr><td>排出ポンプ</td><td>コー​​ルパーマーインストゥルメント（株） </td><td></td></tr><tr><td>変更されたラットのPSS </td><td>以下のレシピを参照してください。 </td><td></TD&gt; </tr><tr><td>バン·ブレーメンの弛緩PSS </td><td>以下のレシピを参照してください。 </td><td></td></tr></tbody></table> 表1。図に示され孤立した微小血管ステーションのセットアップの主要なコンポーネントのリストが表示されます。 <table border="1"><tbody><tr><td> 変更されたラットPSSレシピ </td><td> PSSの2リットルを作成するには </td><td> 20X塩ストック（2L） </td><td> 20Xバッファーストック（2L） </td></tr><tr><td> NaClを</td><td></td><td> 278.0グラム</td><td></td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td></td><td> 14.0グラム</td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4を -7H 2 O </td><td></td><td> 11.5グラム</td><td></td></tr><tr><td>のCaCl 2-H 2 O </td><td></td><td> 9.4グラム</td><td></td></tr><tr> &lt;TD&gt; NaHCO 3を </td><td></td><td></td><td> 80.8グラム</td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0.4グラム</td></tr><tr><td>のNaH 2 PO 4 </td><td> 0.28グラム</td><td></td><td></td></tr><tr><td>グルコース</td><td> 1.98グラム</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20倍の塩ストック</td><td> 100 mLの</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20Xバッファーストック</td><td> 100 mLの</td><td></td><td></td></tr><tr><td>蒸留水</td><td> 1800 mLの</td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 表2。孤立した微小血管のプロトコルで使用される標準の生理食塩水（PSS）のレシピ。 レシピへのコメント：塩ストックとバッファストックの2 L 2 Lを作成します。これらのC使用されていないときに冷蔵なりますが、PSSを準備する前によく、多くの場合、それらを横に振る。追加成分は、最終的なPSSの準備の時に追加されます。 <table border="1"><tbody><tr><td> バン·ブレーメンの弛緩PSS </td><td> PSSの2リットルを作成するには </td><td> 20X塩ストック（1L） </td><td> 20X緩衝在庫（1L） </td></tr><tr><td> NaClを</td><td></td><td> 107.4グラム</td><td></td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td></td><td> 7.0グラム</td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4を -7H 2 O </td><td></td><td> 5.76グラム</td><td></td></tr><tr><td>のMgCl 2·6H 2 O </td><td></td><td> 81.32グラム</td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3を </td><td></td><td></td><td> 40.4グラム</td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0.2グラム</td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15.22 </td></tr><tr><td>のNaH 2 PO 4 </td><td> 0.28グラム</td><td></td><td></td></tr><tr><td>グルコース</td><td> 1.98グラム</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20倍の塩ストック</td><td> 100 mLの</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20Xバッファーストック</td><td> 100 mLの</td><td></td><td></td></tr><tr><td>蒸留水</td><td> 1800 mLの</td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 表3。ゼロアクティブなトーンの条件下で分離された微小血管のプロトコルで使用されるバン·ブレーメンの弛緩生理食塩水（PSS）のレシピ。 レシピへのコメント：塩株式の1 Lを作成する緩衝在庫のND 1 L。これらは使用されていないときに冷蔵なりますが、よく、多くの場合、PSSを準備する前にそれらを振ることができます。追加成分は、最終的な弛緩PSSの準備の時に追加されます。

ザ ex vivoで</em血管反応性の調査のために>隔離された骨格微小血管の準備

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

孤立した微小血管の準備は、このように血流抵抗が1から5まで様々な要因の寄与を制御する血管径の検査を可能にするex vivoでの製剤である、と。これは、大規模な測定では、最初に内田らによって記述されていた15数十年前に古典的な実験の準備です。この最初の記述は主にバージニア6-8の大学で博士ブライアンDulingの研究室で、広範囲に変更され、強化された技術の基礎を提供し、我々は以下のページで現在のアプローチを提示します。この準備は、特に任意の微小血管としてラットの薄筋の動脈を参照してくださいますが、基本的な準備が容易に種を9月13日を越え、ほぼすべての他の組織または器官から分離された船舶に適用することができます。孤立した微小血管の機械的（すなわち、次元）の変更が容易に評価することができます生理の広範な配列（例えば、低酸素症、血管内の圧力、せん断）または薬理学的な課題への応答、および無傷たが、ex vivoで 、組織に統合された応答を構成する機構要素への洞察を提供することができます。また、血管内の圧力（筋）など、他のソースからの貢献の多くの制御を許可しながら、この方法の重要性は、血行動態、自律神経支配、それは微小血管径の統合された規制上の影響の容易な操作のためにできることです（例えば、せん断応力）、内皮依存性または独立した刺激、ホルモン、および実質の影響は、部分的なリストを提供します。適切な実験条件下で、適切な目標と、これは、 インビボまたは容易に広範な全身の変数の容易な制御のために許可されていない現場組織/臓器の準備、 の上の利点として機能することができます。 マこの準備のJOR制限は本質的に強みの結果である。定義により、これらの血管の動作は血管抵抗の調節に最も重要な貢献者の多くはこのように、神経体液性、代謝などを含む、削除されている、研究者が避けるために注意を促している条件の下で検討されている過この調製物を利用して収集されるデータの解釈と外挿。この準備に関して懸念の他の重要なエリアは、そのような内皮細胞ライニングや血管平滑筋などの細胞成分を損傷し、エラーの変数ソースを導入することができるような非常に簡単であるということです。それが強く、個々の治験責任医師はプロトコルのコースを通じて準備の品質を確保するための適切な測定、実験開始時と定期的に両方を利用することをお勧めします。

不定冠詞<em&gt; ex vivoで</em&gt;準備は血管の血管作動性刺激に対する反応と受動的な壁の力学を介して基本的な構造特性の評価の両方を尋問のために最大の薄筋の抵抗動脈の分離に記載されています。

単離微小血管標本は、血管を制御するさまざまな因子の寄与を検討することを可能にするex vivo標本である。

この手順の全体的な目的は、個々の抵抗動脈を外科的に分離・摘出し、二重カニューレ挿入を行うことです。ex vivoでの検討を行うため、まず麻酔をかけた動物において微小血管を特定し、外科的に分離します。その後、微小血管を血管チャンバーに移し、微小血管の近位端と遠位端の両方にカニューレを挿入します。最後に、微小血管を薬理学的または生理学的な負荷および実験的介入にさらし、血管自体に固有の機能または機能不全の根底にあるメカニズムを評価します。最終的に、適切に標的化された刺激および介入を通じて、単離した条件下での血管反応性のパターンと寄与するメカニズムが明らかになります。一般的に、この手法に不慣れな人は苦労します。というのも、この作製には、顕微鏡下で実施するための優れた手術スキルだけでなく、多くの場合100 µm未満の直径を持つ単離微小血管に二重カニュレーションを行うために必要な忍耐力と精緻な運動制御が求められるためです。血管へのダメージを極限まで最小限に抑えて行う必要があります。さもなければ、血管が反応しなくなり、手技全体が失敗に終わります。本手順を実演するのは、私の研究室の大学院生であるJoshua Butcherです。単離微小血管の操作を行う前の準備について説明します。まず、ブタン火で加熱して、あらかじめ用意したガラスマイクロピペットを適切な形状に曲げます。次に、精密ピンセットを用いて、先端を適切な直径に折ります。2本のマイクロピペットを、マイクロ血管チャンバー用のピペットホルダーに互いに向き合うように設置し、ピペットの先端がチャンバー内で同一の垂直面および水平面上にくるように調整します。次に、生理食塩水（PSS）を調製し、特定の実験条件に適したpHに設定されていることを確認します。ヘモサイトメーターまたは顕微鏡ステージ用マイクロメーターを用いて、血管径の測定に使用するデジタルビデオキャリパーの校正を行います。8-0またはそれより細い眼科用縫合糸を使用して、微小血管をピペットに固定するためのシングルチップループを作成します。実験当日は、顕微鏡スライドに巻き付けた小さなテープの上にループを置き、シャーレに入れて保管してください。血管チャンバーおよびPERFUSE 8とSUSE 8のリザーバー内の平衡化ガスをオンにします。すべてのリザーバー、チューブ、およびチャンバーにPSS溶液を満たします。必要に応じて、シリンジを使用してPSSをピペットの末端までゆっくりと押し出し、詰まりがなく完全に満たされていることを確認してください。圧力トランスデューサの損傷を防ぐため、流入圧力は適度な範囲内に維持してください。動物を麻酔し、微小血管を露出させた後、微小血管の外側を細いピンセットで把持し、血管に沿って切断して取り出します。この際、血管を引っ張ったり、牽引したりしないよう細心の注意を払ってください。次に、血管を満たしたウォーターバスに入れ、細いピンセットを用いて、低速の灌流条件下で近位血管内腔壁の両側を保持し、近位端を流入ピペットにカニュレーションします。次に、血管をカニューレの先端に滑り込ませ、Tループで血管を固定できる位置まで先端に沿って進めます。血管の末端側にTループを配置し、流出ピペットにカニューレを挿入して、Tループで固定します。血管の歪みが最小限になり、血管がin vivoでの長さに近づくまでカニューレを調整します。適切な混合ガスを供給する小型のバブリングストーンをバス内に配置し、顕微鏡レンズへの飛沫を防ぐため、チャンバーをプラスチックラップまたはガラスカバーで覆います。定期的に流出チューブをクランプし、容器内に圧力がかかっているかを確認してください。血管内の圧力を上げ、流出ラインに続いて流入ラインをクランプし、血管に漏れがないかを確認します。管腔内圧が安定していれば、顕著な漏れはありません。血管に小さな側枝があり、そこから漏出している場合は、10-0の眼科用縫合糸で1回結紮して塞ぎます。微小血管のカニュレーション、平衡化、およびバリデーションの後、初期のコントロール応答を決定するための実験を開始します。例えば、筋原性活性化や圧力誘発性収縮などの生理学的刺激の場合、管腔内圧を目的の範囲内でランダムに変化させ、その後、フェニレフリンをさまざまな濃度でランダムな順序で投与し、血管がその刺激に反応する時間を設けます。適切な介入時間の後、さらなる介入を行うか、あるいは最初の溶液を洗浄し、生理学的刺激を取り除いて血管が平衡状態に戻ったことを確認してから、2回目のデータ収集を開始します。血管が活動性緊張を失ったら、実験を終了するか、必要に応じて血管壁の力学的特性に関するデータを収集してください。実験終了後、すべてのラインとチャンバーをPSSおよび大量の蒸留水または脱イオン水で洗浄し、完全に乾燥させます。ここでは、流入および流出ピペットを備えたカニューレ挿入マイクロ血管と、高倍率でのループを示しています。デジタル calipersを用いて測定された、12 µmの内径がここで確認できます。平衡化後のカニューレ挿入済み微小血管を示します。こちらは、アセチルコリンによる刺激に反応して拡張した同一の血管です。そして最後に、フェニレフリンによる刺激後に収縮した血管です。これらのグラフは、コントロール条件下での低酸素状態、アセチルコリン濃度の増加、または血管内圧の変化に対する、単離微小血管の反応をまとめたものです。次に、カルシウムフリーPSS存在下での反応を示しています。この手法を習得すれば、適切に実施することで約1時間で完了でき、適切な温度、ガス、および灌流条件を維持することで、血管はチャンバー内で数時間にわたって容易に生存させることができます。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

微小循環の観察のための新たな汎用性の高い方法が提示される。それは長期的な観察のため、およびpharmacophysiologicalまたは分子生物学的介入との組み合わせに適して考えられている。...

イントラ不可欠な顕微鏡による骨格筋のin vivo微小循環測定における

我々は、ネイティブ、そのまま微小血管内皮にカルシウムシグナル伝達を可視化して操作するための準備を提示する。内皮チューブは新鮮に、骨格筋、隣接セル内との間で、生体内の形態および動的なシグナリングに保持供給マウス抵抗動脈から単離した。内皮チューブは、他の組織および器官の微小血管から調製することができる。...

マウス抵抗動脈から毛細血管内皮の管の隔離

小腸は、しばしば、血流に影響を与える負栄養吸収に影響を与える可能性が毒素に暴露される。 multimyographおよび腸間膜動脈および静脈の分離株を使用して、目的の化合物または毒素は、血管作用についてスクリーニングすることができる。...

バイオアッセイとしてウシ腸間膜動脈と静脈の切片を分離して使用すると、小腸で血管作用をテストするために

私たちは、マトリックスゲルプラグ血管新生アッセイの変動を用いて、マウスにおけるヒト内皮 - 周皮細胞の相互作用を研究するためのプロトコルを提示します。...

マウスにおけるマトリックスゲルプラグアッセイを用いたヒト内皮-周皮細胞の相互作用のin vivo研究で

マウス頸動脈および大動脈の顔面の準備を行う手順が記載されている。そのような調製物は、特異的抗体で免疫蛍光染色されたとき、共焦点顕微鏡法によってタンパク質の局在化および血管壁全体の細胞型の同定を研究することができる。...

マウスの血管の顔面準備

ビデオ顕微鏡システムは、生理学的および薬理学的刺激への反応で分離脂肪細動脈の機能特性を調べるに使用されます。この手法は、肥満人間で異なる脂肪組織ドメインにおける微小血管表現型を確認する使用できます。...

顕微鏡を用いたひと脂肪組織血管機能評価

本稿では、ラット脳の抵抗血管での血管の機能を評価するためのビデオ顕微鏡検査のプロトコル体外について説明します。原稿もレーザー...

分離抵抗性ラットの動脈のビデオ顕微鏡を用いた血管制御機構の評価

本稿では、電気生理学的、カルシウム...

Ex Vivo細胞生理学研究のため網膜細動脈の隔離

ここでは、マウス大様の内皮細胞を直接観察する免疫蛍光染色のためのプロトコルを提示する。この技術は、異なる流れパターンでの内皮細胞の細胞および分子表現型を研究し、アテローム性動脈硬化症の発症に有用である。...

血管内皮細胞を直接観察するためにエンフェイス免疫蛍光染色を用いて

このプロトコルの目的は、リッセンセファリックおよびギレンセファリック脊椎動物の中枢神経系の複数の領域から微小血管を分離することです。...

5つの脊椎動物群にわたる中枢神経系微小血管の信頼性の高い絶縁

脳実質細動脈からの無傷のマウス脳内皮「チューブ」の集中的な調製は、脳血流調節を研究するために例示される。さらに、我々は、細胞内[Ca2+]および膜電位の変化を含む重要な細胞シグナル伝達経路の蛍光イメージングおよび電気生理学的測定のためのこの内皮研究モデルの実験的強みを実証する。...

マウス脳実質の動脈内皮の単離と機能解析

学ぶ ex vivoでの血管反応性評価法。グラシリス筋から微小抵抗血管を外科的に分離し、両端をカニューレ挿入して薬理的・生理的刺激に対する反応を測定する。心血管研究に有用です。

ザ ex vivoで隔離された骨格微小血管の準備

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