Name: IBDのDSS誘発モデルにおける腸炎の調査 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: 学ぶ DSS誘発性大腸炎マウスモデルにおける腸管免疫応答の評価法。ミエロペルオキシダーゼ活性とプロ炎症性サイトカインの定量により、炎症性腸疾患の病態理解と治療戦略開発に貢献する。

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この作品は、カナダ衛生研究所からの補助金（CIHR）およびクローン病とカナダの大腸炎財団（CCFC）によってサポートされています。

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</ol>

利害の衝突は宣言されません。

DSS大腸炎は腸の炎症の広く使用されている化学的に誘発されたモデルです。このモデルでは、マウスは上皮細胞を消化管や粘膜関門の整合性を妨害するために有毒であると考えられているDSS、を添加した飲料水を与えられます。DSSの10の投与は、軟便、糞便出血、によって特徴づけられる急性大腸炎を誘発すると顆粒球と浸潤10 DSS投与中には、大腸炎は通常、便潜血検査で評価することができる便の大幅な体重減少や血液の存在を、関連付けられています。5.10,11結腸組織サンプルを収集した後、大腸炎の重症度にすることができます以前に確立されたスコアリングシステムを使用して、H＆E染色した結腸の断面のコロンと組織学的分析の肉眼検査によって特徴付け9 このプロトコルに従うとき、それは大腸炎の重症度はによって誘導されることに注意することが重要です。DSSは種であり、特定の株12加えて、別の動物施設と住宅のお部屋の間に腸内細菌の違いは、DSS投与の結果を変更することがあります。13,14は<...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前： </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td>エッペンドルフセイフ - ロックのマイクロ遠心チューブ（液2ml） </td><td>エッペンドルフ</td><td> 0030 120.094 </td><td></td></tr><tr><td> BioTekのEL808吸光度プレートリーダー</td><td> BioTekの</td><td> EL808 </td><td></td></tr><tr><td>デキストラン硫酸ナトリウム塩の試薬グレード（分子量36,000-50,000ダ） </td><td> MPのバイオメディカル</td><td> 160110 </td><td></td></tr><tr><td> GEN5（ソフトウェア） </td><td> BioTekの</td><td>バージョン1.10.8 </td><td></td></tr><tr><td>臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム（HTAB） </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> H5882 - 100G </td><td></td></tr><tr><td>過酸化水素、水に30重量％溶液</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> 216763 </td><td> 2〜8℃に保存</td></tr><tr><td>マイクロテストPL96ウェル平底を食べた</td><td>ザルスタット</td><td> 82.1581 </td><td> 1回限りの使用</td></tr><tr><td> o -ジアニシジン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> D - 3252 </td><td>敏感点灯。 2〜8℃に保存</td></tr><tr><td>リン酸カリウム、二塩基性</td><td>カレドン</td><td> 6620から1 </td><td></td></tr><tr><td>リン酸カリウム、一塩基</td><td> EMDケミカルズ</td><td> PX1565 - 1 </td><td></td></tr><tr><td>プロテアーゼ阻害剤カクテル</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> P8340 </td><td> -20℃で保存</td></tr><tr><td>トリトンX - 100 </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> T8787 </td><td></td></tr><tr><td>組織Lyser IIのための炭化タングステンビーズ</td><td> QUIAGEN </td><td> 69997 </td><td></td></tr></tbody></table>

ibdのdss誘発モデルにおける腸炎の調査

Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD

炎症性腸疾患（IBD）は腸の病態の範囲、潰瘍性大腸炎（UC）およびクローン病（CD）であるの最も一般的に網羅しています。 UCとCD、両方が大腸に存在する場合、下痢、直腸出血、腹痛、体重減少を含めることができます同じような症状のプロファイルを生成する。1 IBDの病因は不明であるが、それは両方を含む多因子疾患として記述されています遺伝と環境のコンポーネント2。 IBDのいくつかの機能に似ている結腸炎症の数々と可変の動物モデルがあります。デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）などの大腸炎を誘発する化学物質の特定の濃度のものが必要な行政へのある種の感受性系統、で自発的に生じるものから大腸炎の範囲の動物モデル。腸の炎症の化学物質誘発性モデルは、IBDの最も一般的に使用されると最高に記載のモデルです。投与により飲料水におけるDSSの意気込みは、管理プロトコルに応じて、急性または慢性大腸炎を生じる。時には直腸出血の証拠で、DSS展示体重減少および軟便または下痢の症状を与えられた3匹の動物が。4,5ここで、我々はこれによってメソッドについて説明大腸炎の開発と、その結果炎症反応は、DSSの投与後に特徴づけることができる。これらのメソッドは、炎症の代理マーカーとして使用することができる組織学的ヘマトキシリン/エオシン染色コロンのセクションの解析、炎症性サイトカインの測定、およびミエロペルオキシダーゼの測定（MPO）活性を、6が含まれています病気の状態で炎症反応の程度は、臨床症状の有無によって、または粘膜組織の組織学の変化によって評価することができる。結腸の組織学的損傷は、陰窩構造、炎症性細胞浸潤、筋肉tの損失を考慮したスコアリングシステムを用いて評価されるhickening、杯細胞の枯渇、およびcrypt膿瘍。定量的に7、インターロイキン（IL）-1β、IL - 6、腫瘍壊死因子（TNF）-αなどの急性炎症性、、と炎症性サイトカインのレベルを用いて決定することができる従来のELISA法。さらに、MPO活性は比色アッセイを用いて測定することができ、炎症の指標として使用さ8。 実験的大腸炎では、疾患の重症度は、多くの場合、MPO活性の増加および炎症性サイトカインの高いレベルと相関している。大腸炎の重症度や炎症関連損傷をヘマトキシリン​​/エオシン染色結腸組織切片を用いて腸の病理組織学的状態を評価することに加えて、便の硬さと出血を調べることによって評価することができる。結腸組織の断片は、MPO活性とサイトカイン産生を決定するために使用することができます。一緒に、これらの措置は、腸内炎症反応を評価するために使用することができます。実験的大腸炎の動物モデル。

炎症性腸疾患の実験モデルは、私たちは病因に関連する複雑な自然免疫と獲得免疫応答を検討することを可能にした。組織学的スコアリング、炎症性サイトカインおよびミエロペルオキシダーゼ活性の定量化を使用して、一つは炎症性腸疾患に見られるこれらの応答を評価するために始めることができます。

IBDのDSS誘発モデルにおける腸炎の調査

炎症性腸疾患（IBD）は一連の腸管病理を包含しており、その中で最も一般的なものが潰瘍性大腸炎（UC）およびクローン病である...

本手順の目的は、炎症に応じて産生されるミエロペルオキシダーゼ活性量および前炎症性サイトカイン量を測定することにより、デキストラン硫酸ナトリウムによって誘発される腸管免疫応答を評価することである。まず、飲水にDSS塩溶液を加えることで、マウスにDSSコライトを誘発させる。次に、肉眼的スコアリングによってコライトの疾患重症度を評価し、さらなる解析のために結腸を摘出する。その後、摘出した結腸を組織学、サイトカイン定量、およびMPO活性測定用に3つの断片に切断します。最後に、結腸組織をホモジナイズし、その上清を用いてMPO活性を測定します。最終的に、分光光度計を用いて収集した吸光度データから、MPO活性の変化を決定することができます。この手法により、DSSおよびTNBS誘発性大腸炎など、炎症性腸疾患のさまざまなモデルにおける慢性的な情報を得ることができます。さらに、本手法は肺や肝臓などの他の臓器にも適用可能です。手順を開始する前に、各マウスケージの飲用水をDSS溶液に交換し、炎症を誘発させてください。コントロールマウスには、DSSを含まない滅菌済みの飲用水を与えます。次に、実験当日に、Whitham WilliamsとWilliamsによるJoVEの記事で既に示されている方法で結腸を摘出します。曲がったピンセットを用いて結腸全体から糞便を慎重に押し出し、組織を滅菌PBSで洗浄しながら、計量紙に回収します。鉗子を用いて糞便を押し、その硬さを確認し、便潜血のスコアを決定します。便の色を観察し、ヘモカルト試験を用いて評価をさらに検証します。ヘモカルト試験では、便をヘモカルト紙に塗布し、現像液を加え、青色に変化した場合は潜血陽性と判定します。その後、この表を用いて各条件の値を決定してください。次に、結腸の近位から遠位への方向を維持したまま、結腸を3等分に切断します。その後、結腸の近位および中位のセクションからサンプル断片を採取し、それぞれのサンプルを個別の1.5 milliliter エッペンドルフチューブに入れます。大腸炎の重症度による組織学的損傷を評価するために、結腸の最も遠位の組織セクションを使用し、0.5〜1 cmの長さの小さな断片を切断します。断片を組織カセットに入れ、10%緩衝ホルマリン溶液に浸します。次に、組織断片のパラフィン包埋横断面を作成し、盲検観察者によるスコアリングのため、切片をヘマトキシリン・エオジンで染色します。最後に、近位および中位結腸切片からのサンプルを液体窒素で凍結し、使用時まで-70°Cで保存します。-70°Cで保存していた結腸サンプルを取り出し、氷上に置きます。次に、曲げ鉗子を用いて目に見える糞便や脂肪を除去し、ホモジナイザーで使用可能な個別の2 mLチューブに入れます。その後、各サンプルの重量を測定し、記録します。次に、各サンプルチューブにホモジナイザービーズを加え、先ほど測定した組織の重量に応じて適切な量のH tabバッファーをチューブに添加します。組織ホモジナイザーを用いて、30 Hzで4分間、断片を分散させます。最後に、細胞溶液を13,400 ×g、4 °Cで6分間遠心分離します。上清を新しいチューブに回収し、ホモジナイザービーズを保持したまま、得られたペレットを廃棄します。上清は、使用時まで-70°Cで保存することができます。まず、あらかじめ調製した組織ホモジネート7 µLを、96ウェルプレートに3連（triplicate）で分注します。次に、希釈した過酸化水素50 µLを、調製直後のOD Dionヨウ素に加えます。マルチチャンネルピペットを用いて、過酸化水素混合液を各ウェルに 200 µL ずつ加えます。次に、分光光度計を使用して 550 nm で吸光度を測定し、32 秒間隔で 3 回の読み取りを行います。その後、吸光度データ、組織重量、およびバッファー量を用いて、このサンプル計算で示されている通りにホモジネート中の NPO 活性を算出します。DSS投与期間中、疾患活動性指数を用いて、疾患の臨床的な進行状況を評価および判定することができます。DSS投与を受けた動物では、初期体重と比較して著しい体重減少、下痢、および血便が認められます。肉眼的症状が重いほど、疾患活動性指数は高くなります。5% DSSを添加した飲水を5日間投与したマウスを安楽死させて結腸を検査したところ、結腸長の短縮、結腸出血、便血、便の緩さ、および直腸出血の徴候に基づく肉眼的スコアによる大腸炎の重症度は、この代表的な実験において、水のみを投与した対照群よりも約5倍悪化していることが判明しました。これらのデータが示すように、DSS投与群の結腸組織サンプルの横断切片では、H&E染色において水投与群よりも高い組織学的スコアが得られています。ここで、水のみを投与した対照動物から採取したこのH&E染色横断切片において、アスタリスクで示された領域では、正常な構造が維持され、細胞浸潤が見られないことが確認できます。次に、DSS投与動物から採取したサンプルのH&E染色図を、前の図と比較してください。この動物の結腸では、#で示される細胞浸潤の増加、および杯細胞の減少とより顕著な歪みから、より深刻な組織学的損傷が認められます。*で示されるKクリプト構造の損傷も確認できます。DSS投与マウスにおける疾患重症度の程度をさらに詳細に評価するため、炎症の代替マーカーであるNPO活性を、結腸組織のホモジナイズ試料から測定することが可能です。予想通り、DSS処置を施した結腸は、対照群よりも高いMPO活性を示します。さらに、DSS誘発性結腸炎の重症度は、IL-1β、IL-6、TNF-αなどの炎症性サイトカインレベルの上昇と相関しています。この手順を実施する際は、MPO活性が時間とともに低下する可能性があることに注意することが重要です。したがって、腸管炎症の重症度を判定する際は、まず最初に行うべきアッセイの一つとしてMPOアッセイが挙げられます。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

飲料水で投与デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）は、急性大腸炎の確立されたマウス炎症性損傷モデルです。このプロトコルは、DSSの治療や組織の準備のための方法を概説します。...

デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）を用いたマウス大腸炎モデル

このビデオは、炎症性腸疾患である大腸炎の化学的誘発性マウスモデルを生成する技術を示しています。マウスは、デキストラン硫酸ナトリウム(DSS)溶液を適切な期間摂取することが許可されています。DSSを摂取すると、結腸の粘液と上皮層のバリアが損傷し、腸内微生物が下層組織に侵入し、常在する免疫細胞によって感知されて誇張された免疫応答を媒介し、炎症を引き起こします。...

デキストラン硫酸ナトリウム誘発性大腸炎のマウスモデル作製技術

このビデオは、DSS誘発性大腸炎(炎症性腸疾患)のマウスモデルにおける結腸損傷を評価するためのヘマトキシリンとエオシン(H&amp;E)染色法を示しています。DSS処理マウスから結腸を分離し、組織切片を取得すると、切片のH&amp;E染色は炎症媒介性組織損傷を特定するのに役立ちます。...

DSS誘発性大腸炎における結腸損傷を評価するためのヘマトキシリンおよびエオシン染色

DNBS / TNBS誘発性大腸炎は炎症性腸疾患の病理生物学を研究するための代替手段で安価な方法を提供しています。このホワイトペーパーで説明プロトコルは、マウスとラットで大腸炎を誘発することがDNBSの成功したアプリケーションの概要を説明し、1は完全に宿主媒介腸の応答を研究することができます。...

DNBS / TNBS大腸炎モデル：食事脂肪の炎症性腸疾患への洞察とエフェクトを提供

炎症効果の正確な評価は、炎症性腸疾患の治療のための潜在的な新薬の評価にとって最も重要です。デジタルホログラフィック顕微鏡は、マウスおよびヒトの結腸組織サンプルの炎症の評価を提供するだけでなく、in...

デジタルホログラフィック顕微鏡とマルチモーダル定量位相イメージングは​​、正確に腸の炎症および上皮創傷治癒を評価します

炎症性腸疾患（IBD）の現在の治療は、疾患の症状の緩和を目指すが、重篤な副作用を引き起こす可能性があります。したがって、代替戦略は、動物大腸炎モデルにおいて研究されています。ここでは、臨床的なIBDの兆候にダイエットサプリメントの有益な効果は、このような大腸炎モデルで分析されている方法について説明します。...

実験的大腸炎の間、腸上皮バリア機能に栄養補助食品の有益な効果を分析

ターゲット特定プローブなど各種疾患 (例えば炎症、感染、腫瘍) におけるタンパク質発現の分子機構を解析するための革新的なツールを表します。本研究では F4/80...

検出とマクロファージによるマウス腸管炎症の定量化のための蛍光を介したトモグラフィー

味覚関連遺伝子の無効のデキストラン硫酸ナトリウム (DSS) の免疫反応に及ぼす影響を調査するためのプロトコルの紹介-炎症性腸疾患 (IBD) マウス...

シグナリング蛋白質の廃止、炎症性腸病気のマウスモデルで腸の炎症に味の効果

無料のコンピュータ支援システムを用いた腸内炎症の系統的採点は、潰瘍および炎症性変化の存在を特徴とする大腸炎モデルにおける組織病理学的変化を定量的に比較する強力なツールである。組織学的大腸炎スコア評価は臨床観察を強化し、データ解釈を促進する。...

プリンデキストラン硫酸ナトリウムによる大腸炎モデルにおける腸内炎症の系統的採点解析

ジャレッドベターは、シロアリ腸内の微生物群集は、微生物間の複雑な相互作用を研究するための優れたシステムである理由を説明しています。宿主昆虫とリグノセルロース分解腸内微生物との間に存在する共生関係も同様に劣化させる植物バイオマスおよび生成するバイオ燃料のためのこれらの微生物の工業的な用途として、説明されています。...

インタビュー - シロアリ後腸内微生物群集の調査

学ぶ DSS誘発性大腸炎マウスモデルにおける腸管免疫応答の評価法。ミエロペルオキシダーゼ活性とプロ炎症性サイトカインの定量により、炎症性腸疾患の病態理解と治療戦略開発に貢献する。

IBDのDSS誘発モデルにおける腸炎の調査

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