ラテラルフロー技術を用いた血液学的悪性腫瘍患者における侵襲性肺アスペルギルス症の検出

侵襲性肺アスペルギルス症に対する迅速かつ正確なポイント·オブ·ケアテストが提示されます。それはに結合する特異的なモノクローナル抗体を使用して、横フロー技術を利用しています

この手順の全体的な目標は、ヒト血清および BAL 液中のアスペルギルス属の診断抗原を迅速に検出するためのラテラルフローデバイスの使用を実証することです。これは、最初に血清またはBALサンプルをラテラルフローデバイスのリリースポートに適用することによって達成されます。2番目のステップは、溶液がメンブレンに沿って移動できるようにすることです。

次のステップは、内部制御ラインを調べて、テストが有効かどうかを判断することです。最後のステップは、テストラインを調べてテスト結果を解釈することです。最終的に、ラテラルフローデバイスは、血清またはBAL液中のアスペルギルス属の診断抗原の存在を検出するために使用されます。

アスペルギルスLFDは、侵襲性肺アスペルギルス症の診断のための補助検査として使用できます。アスペルギルス属、ガラクト、マナン酵素免疫測定法、panf、fundal、βグルカンアッセイ、アスペルギルス属PCR検査などの既存の方法に対するこの技術の主な利点は、最小限の検査施設とトレーニングを必要とする迅速なポイントオブケア診断テストであることです。LFDはアスペルギルス属の種を検出するために開発されましたが、ラテラルフロー技術は、セトスポリウム、フザリウム、ライザー種などの他の感染性病原体の検出にも適用できます。

これらの生物に特異的なモノクローナル抗体を組み込むことにより、この方法の視覚的なデモンストレーションが重要です。LFD結果の解釈にはアッセイ形式への精通が必要であるため、未処理の血液サンプルから血清を採取するには、血液を摂氏4度で凝固させ、気管支肺胞洗浄液、またはBAL液を使用前に摂氏マイナス20度でアリコートとして保存する必要がありますアリコートとして、アリコートとして保存しますアリコートとして、繰り返しテスト中にサンプルをフリー保存することにより、ターゲット抗原の分解の可能性を制限し、テスト用の血清およびBALサンプルを準備します。 室温でサンプルを解凍し、その後、ボルテックスによって完全に氷上で混合し、その後、14、000 RPMで1分間遠心分離します ヒトサンプルの日常的なテストのために、血清を組織培養培地で1対1で希釈し、血清免疫複合体から標的抗原を解離します。沸騰水浴中で 4% EDTA 熱を含む PBS で血清を 1 〜 2 個希釈し、14 、 000.RPM を 5 分間遠心分離します。

ヒトBAL液は前処理を必要としません。BALサンプルは渦巻きで解凍されており、遠心分離機はラテラルフローデバイスに直接適用できるすっきりとしたサンプルです。試験のために、ラテラルフローデバイスまたはLFDは室温または摂氏23度で保存され、12か月間安定しています。

アッセイを開始するには、デバイスをポーチから取り出し、平らな面に置きます。滅菌ピペットチップを使用して、100マイクロリットルの前処理された血清を数秒以内にデバイスのリリースポートに適用します。流体は、観察ウィンドウ内の亜硝酸セルロース膜に沿って毛細管現象によって移動するはずです。

同様に、100マイクロリットルのきれいなBALサンプルをデバイスのリリースポートに適用します。アッセイを室温で15分間実行し、その時点でテストの結果を記録する必要があります。テストは、結果を記録する前に15分以上放置しないでください。

これにより結果の解釈が偏る可能性があるため、インキュベーション期間を延長しても1週間の反応は促進されません。LFDは、プラスチックハウジング上の文字Cで示される内部制御ラインと、文字T.The制御ラインは、血清またはBALサンプル中のアスペルギルス抗原に関係なく常に表示される必要があります。これは、アスペルギルス抗原が血清またはBALサンプルに存在する場合、アッセイが正しく実行されたことを示しています。

テストラインは、サンプルアプリケーションから15分以内にも表示されます。テストの強度、ライム反応は、血清およびVALサンプル中の標的抗原の濃度に比例します。この手順で最も難しいのは、テスト結果の解釈です。

LFDの結果は15分で読み取る必要があり、テスト結果はここに示されている代表的な例と比較されます。この図に示されているのは、BALおよび血清サンプルを使用した弱い、陽性、中程度の陽性、および強い陽性のLFD結果の代表例です。強度に関係なく、血清サンプル中の陽性の検査ラインは、血流中に循環するアスペルギルス抗原が存在するため、侵襲性アスペルギルス症または IPA 疾患を示します。強度に関係なく、陽性のBAL反応は、胞子の発芽と肺の潜在的に病原性の菌類の発達を示します。

アスペルギルス抗原がない場合、検査ラインは現れず、結果は陰性として記録されます。この表は、欧州がん研究治療機構および国立アレルギー・感染症研究会の診断基準に従って診断された急性骨髄性白血病またはML患者のBAL液を用いたLFD検査の結果を示しています。この表には、対応する臨床データや心理データ、および各患者のASPERIA特異的PCR検査の結果が含まれています。

2002年のE-O-R-T-C-M-S-Gガイドラインの下で、患者12、13、および16は、宿主因子と臨床基準またはGM陽性に基づいてIPAの可能性があると診断されました。改訂された2008年のE-O-R-T-C-M-S-Gガイドラインによると、宿主因子とGM陽性のみ、または宿主因子と臨床基準だけでは、それぞれ臨床データと真菌学からの裏付けとなる証拠を伴わない限り、侵襲性真菌感染の可能性は示されません。患者6は、宿主因子、主要および軽度の臨床的特徴、およびGM陽性のため、2002年と2008年の両方のガイドラインでIPAの可能性が高いと診断されました。

最後に、LFDアッセイもPCRアッセイも現在、患者6および12のBALサンプルのE-O-R-T-C-M-S-Gガイドラインに含まれていますが、2つのアッセイと市販のガラマニンテストとの間には強い一致があり、この手順に続いてアスペルギルス抗原と核酸の存在が示されています。Pella Glactomannan酵素アミノアッセイ、panf、真菌ベータグルカンテスト、アスペルギルスPCRテストなどの他の方法を並行して実行して、侵襲性真菌性疾患を確認できます。人間の血清やBAL液を扱う作業は非常に危険である可能性があり、デバイスのオペレーターは常にB型肝炎や結核などの病気に対して予防接種を受ける必要があることを忘れないでください。