Name: マイクロCTイメージングのための準備として、逆行性灌流およびマウスの冠動脈血管系の充填 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: 学ぶマウス冠動脈血管の逆行性灌流と放射線不透過性染料充填法。マイクロCTイメージングの準備として心血管疾患研究に有用な血管構造の可視化手法です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

我々は、一般的な議論のための博士マイケルシモンズ、博士キープハウク、そのラボの両方のメンバーが、プロトコルの初期の試験のためにケリー博士スティーブンに感謝します。 この作品は、NIHの助成金HL087513とP01 HL094374によってサポートされています。

1。出発前の準備<ol><li>それぞれ、血管拡張バッファー（PBS中4mgの/ Lのパパベリン+ 1グラム/ Lアデノシン）、またはPBS中4％パラホルムアルデヒド（PFA）で圧力灌流装置の各側面を埋める。 </li><li> 1:100ヘパリン（5000U/mlストック）の0.1ミリリットルでそれを充填し、上ベベルと〜120度の角度に針を曲げて1/2ccインスリンシリンジ（恒久的に接続されている29Gと½ &quot;針）を準備が増加します。 0.3ミリリットル飽和KCl溶液で満たされた1 mlのシリンジ（26G½ &quot;針付き）と同じです。 </li></ol> 2。心臓を露出し、大動脈をcannulating <ol><li>選択した麻酔薬を使用して、マウスを麻酔。 （私たちは、ケタミン/キシラジン混合物の過剰使用：130 mg / kgのケタミンと生理食塩水の8.8 mg / kgのキシラジンのIP注射）を</li><li>アップ解剖トレイ、腹側に麻酔マウスをピン。正中切開で腹腔を開き、皮膚を撤回臓器を公開します。後部下大静脈（PVC）の領域を露出させる一方の側に腸に移動します。 </li><li> PVCにヘパリン溶液を注入します。あなたが針を抽出するように、漏れを防止し、PVC壁の血栓やアザラシまで数秒のためにそれを保持するために綿棒で針の穴をカバーしています。マウスの循環を通して分散させるためにヘパリン2-3分待ちます。 </li><li>あなたは心臓の鼓動を観察することができるように横隔膜と胸郭を解剖。徐々に心臓の逮捕まで、PVCのKCl溶液を注入します。 </li><li>ダイアフラムの領域前方をそのまま残し、ダイヤフラムと消費税マウスの後部の下にあるすべての臓器を削除します。心臓への近位部は、後続のステップで見つけることは容易であるので、絞りの近くにPVCを切断するように注意して、ダイヤフラムを取り外します。 </li><li>大動脈の切り口を探します。大動脈の下に6から0編組絹縫合糸の1つの長い長さ数ミリメートルあちこち前方に置きメートル縫合糸は、バック自体に倍増されるようにカット終了。大動脈下縫合の2個があるので、半分にこの長い縫合糸をカットします。大動脈（図1A、B）の切断端に血管カテーテルを挿入し、代わりに血管カテーテルを保持し、漏れから大動脈内の任意の背圧を防止するために、ダブルノットで各縫合糸を結ぶ。 </li></ol> 3。血流とMicrofil注入<ol><li>圧力灌流装置（図2）に血管カテーテルを接続し、100から110 mmHgの運転圧力に灌流装置をポンプで血管拡張バッファ（図1C）で血管を灌流を開始します。バッファは、液体を確実にすることによって、coronariesを通して灌流されていることを確認しダブルは、PVCから終了します。少なくとも3分間、またはPVCを出る流体がクリアされるまで灌流し続けています。 （灌流しながら次のステップに進みます。） </li><li>リブとピンバック（または削除）心臓を露出させる胸郭を解剖。一度公開され、CAである心はガーゼのバッファーに浸漬した部分から心臓にバッファの滴を絞って乾燥させないreful。大動脈弓を公開するために胸腺を離れてオフにします。流体がcoronariesを通してではなく、これらの大きい、低抵抗血管（図1Dの）を介して流用されていることを確認するために6から0まで編んだシルク糸を使用して、3つの主要な大動脈の枝を連結。 </li><li> 15分間固定して心臓を灌流し、少なくとも2分間血管拡張バッファーですすぎます。一方、注射後の心臓（図1E）の外に漏れるのMicrofilを防ぐために両方の前部静脈Cavaeを連結。場所は、PVCと大動脈周囲の縫合糸が充填後まで締めないでください。 </li><li> Microfilを準備します（試薬の表で指定された）と1 mlの注射器にロードします。カテーテル（Microfilシリンジに潅流チューブから切り替えたときに気泡の導入を防ぐために）をカバーするのに十分な水で解剖トレイを記入してください。血apを切断カテーテルからparatusと準備Microfilシリンジを接続します。 </li><li>冠状動脈の良好な充填が（図1F、3A）明らかになるまで、大動脈にMicrofilを注入：動脈は、最初に記入し、その後MicrofilはMicrofilの色を持つ組織のフラッシュのように毛細血管に &quot;流出&quot;します。それは小型船から出てくるように一回静脈側では、Microfilの疎水性の性質は、それが最初に独立した球体として表示されます。連続した列が静脈を一杯になるまでMicrofilを注入し続けています。 Microfilは、血管内の連続であるときに完全な充填が明らかとなり、それがPVCを介して終了します。 </li><li>充填が完了した後、すぐに以前の船舶のうちMicrofilを絞ってから、心臓組織の弾性の性質を防止するためにPVCと大動脈の周囲に配置された縫合糸を締めます。 </li><li> （解剖トレイから水に浸した濡れたガーゼで心臓をカバーMicrofilが重合されるまで）は、乾燥し、それが室温で約1時間放置を防ぐことができます。そのような心の奥に満ち船舶の早期ビューを取得しようとして心を持ち上げたり、回転などの重合プロセスの間、心臓の任意の外部からの圧力を避ける。これはMicrofilで改行を引き起こし、心のより弾性領域にいくつかの血管からMicrofilを絞ることができます。 </li><li>心臓を取り出して、4℃で一晩4％PFAでそれをポスト修正℃にその後、4℃、70％エタノールに保存心臓血管系は現在、μCTイメージングのための準備ができています。 </li></ol> 4。代表的な結果効果的にMicrofilで灌流されている船舶は、船舶全体の連続的な、切れ目のないMicrofil（図3A）を持ちます。冠状血管の充填の程度は、目で判断することができる。静脈epicardially 18に配置され、簡単に（図3A、矢印）が観察できます。動脈、これは、18以上の心筋が、心臓の表面（図3A、矢印）からも見ることができます。心臓組織は、毛細血管の非常に高い密度を有し、したがって、ときに毛細血管塗りとしてキャピラリーフィリングにも明らかである、心臓の組織がMicrofilの色（図3A、スター）でフラッシュします。このように、埋めるために失敗した血管網が原因Microfilの欠如（図3B、C）に顕著になります。 Microfilの疎水性の性質は、それ自体に収縮充填容器内の &quot;改行&quot;を引き起こすことになりますので、Microfilの不連続性（図3Bのアスタリスク）が頻繁に表示されます。血管内の圧力は、心臓から血管の出口点の適切な提携オフを通して維持されている場合、これらの &quot;改行&quot;は削減することができます。他の不連続性がmicrofil内の気泡によって発生することができます。灌流APからの切り替え時の空気の導入を防ぐために、血管カテーテルが完全に水に沈めていることを確認してください<html> Microfilシリンジにparatus。気泡が導入されている場合は、それはしばしばバブルが冠状血管の通って押し出されたまでMicrofil灌流を続けることによって、単に削除することができます。 血管床の一部が（図3B、矢印）がブロックされている場合、血管のネットワークは完全に埋めることはできません。ヘパリンは血栓の形成を阻害しながら、時折閉塞はまだ手順を開始する、またはその他の未知の要因に起因する前に起因する不完全なヘパリン血流に発生する可能性があります。閉塞が発生した場合は、血管の塗りつぶしを完了するには、閉塞を外れないための方法は、我々の知る限り、ありません。少なすぎる圧力はMicrofilは、すべての血管床と毛細血管網（図3C）に強制されないので、充填時に使用されている場合、不完全な充填にも発生する可能性があります。逆に、あまりにも多くの圧力が毛細血管周囲の組織（図3D）にMicrofilバーストと浸出する可能性があります。 files/ftp_upload/3740/3740fig1.jpgの &quot;alt =&quot;図1 &quot;/&gt; 図1。 Microfil灌流スキームの概要 。 （A）大動脈とPVCは、ダイアフラムの約レベルでカットされます。 （B）上行大動脈は、血管カテーテルでカニューレ挿入されています。 （D）大動脈弓からの3つの主要な枝が連結されている間（C）血管拡張バッファは、（図示せず）の圧力灌流装置によって駆動され、血管を通って灌流されています。両方の前部静脈のカヴァが連結されている間（E）4％PFAはcoronariesを通して灌流されています。それは塩化ビニル（PVC）から出るが観察されるまで、（F）注射器を使用して、Microfilはcoronariesを通して灌流されています。 <img src="/files/ftp_upload/3740/3740fig2.jpg" alt="図2"/> 図2。灌流装置2つの三角フラスコ、血管拡張バッファまたは4％PFAのどちらかで満たされた各々が、参加し、彼らのsidearmsに接続されたチューブを介して加圧されています。システムは、ポンプマニュアルを加圧されているバルブ、圧力計、圧力のモニタリングとメンテナンスを可能にするためにフラスコのいずれかに接続されています。小さなチューブはゴム栓を介して上下に各フラスコ内の流体に拡張します。圧力はこれらの小さなチューブより各フラスコからsidearmsポンプ流体から入力します。チューブは、一度に1つのフラスコから流れるように流体ができます活栓にマージします。 <img src="/files/ftp_upload/3740/3740fig3.jpg" alt="図3"/> 図3。 Microfilled心をサンプリングします 。 （A）も満たされる船舶は、（もしあれば）Microfilで改行をいくつか持っているし、心臓組織はいっぱい毛細血管（スター、およびCと比較して）によるMicrofilの帯びた色になります。両方の動脈（矢印 - 左前下行枝）と静脈（矢印 - 左冠状静脈）は心臓の表面を介して表示されます。 （B）microfilで休憩（アスタリスク）と同様に完全にマイクを防止するいくつかの血管の閉塞による心浸透をrofil。ブロックされた血管は血液が灌流プロセス中にフラッシュされていないとして、赤（矢印）のままです。 （C）不完全に満たされた血管と心臓。組織がMicrofilが毛細血管に浸透しなかったことを示す、Microfilの黄色の色で撮影していないことに注意してください。 （D）心のどこMicrofilが周囲の組織（矢​​印）に漏れることを引き起こして、充填中の毛細血管が破裂。

<ol><li>Couffinhal, T., Dufourcq, P., Barandon, L., Leroux, L., Duplaa, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+to+study+angiogenesis+in+the+context+of+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Biosci%22%5BJournal%5D)">Mouse models to study angiogenesis in the context of cardiovascular diseases.</a> Front. Biosci. 14, 3310-3325 (2009).</li>
<li>Zagorchev, L., Mulligan-Kehoe, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+of+vessels+in+mouse+models+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging of vessels in mouse models of disease.</a> Eur. J. Radiol. 70, 305-311 (2009).</li>
<li>Krucker, T., Lang, A., Meyer, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+polyurethane-based+material+for+vascular+corrosion+casting+with+improved+physical+and+imaging+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Res.+Tech%22%5BJournal%5D)">New polyurethane-based material for vascular corrosion casting with improved physical and imaging characteristics.</a> Microsc. Res. Tech. 69, 138-147 (2006).</li>
<li>Murakami, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+flow+patterns+in+the+rat+pancreas%3A+a+simulative+demonstration+by+injection+replication+and+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Res.+Tech%22%5BJournal%5D)">Blood flow patterns in the rat pancreas: a simulative demonstration by injection replication and scanning electron microscopy.</a> Microsc. Res. Tech. 37, 497-508 (1997).</li>
<li>Icardo, J. M., Colvee, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+course+of+the+coronary+arteries+in+normal+mice+and+in+iv%2Fiv+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Origin and course of the coronary arteries in normal mice and in iv/iv mice.</a> J. Anat. 199, 473-482 (2001).</li>
<li>Beighley, P. E., Thomas, P. J., Jorgensen, S. M., Ritman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+architecture+of+myocardial+microcirculation+in+intact+rat+heart%3A+a+study+with+micro-CT%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">3D architecture of myocardial microcirculation in intact rat heart: a study with micro-CT.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 430, 165-175 (1997).</li>
<li>Bentley, M. D., Ortiz, M. C., Ritman, E. L., Romero, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+microcomputed+tomography+to+study+microvasculature+in+small+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The use of microcomputed tomography to study microvasculature in small rodents.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 282, R1267-R1279 (2002).</li>
<li>Jorgensen, S. M., Demirkaya, O., Ritman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+imaging+of+vasculature+and+parenchyma+in+intact+rodent+organs+with+X-ray+micro-CT%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional imaging of vasculature and parenchyma in intact rodent organs with X-ray micro-CT.</a> Am. J. Physiol. 275, H1103-H1114 (1998).</li>
<li>Marxen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroCT+scanner+performance+and+considerations+for+vascular+specimen+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Phys%22%5BJournal%5D)">MicroCT scanner performance and considerations for vascular specimen imaging.</a> Med. Phys. 31, 305-313 (2004).</li>
<li>Zagorchev, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro+computed+tomography+for+vascular+exploration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Angiogenes.+Res%22%5BJournal%5D)">Micro computed tomography for vascular exploration.</a> J. Angiogenes. Res. 2, 7-7 (2010).</li>
<li>Heinzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchical+microimaging+for+multiscale+analysis+of+large+vascular+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">Hierarchical microimaging for multiscale analysis of large vascular networks.</a> Neuroimage. 32, 626-636 (2006).</li>
<li>Dedkov, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synectin%2Fsyndecan-4+regulate+coronary+arteriolar+growth+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Synectin/syndecan-4 regulate coronary arteriolar growth during development.</a> Dev. Dyn. 236, 2004-2010 (2007).</li>
<li>Gossl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+anatomy+and+hemodynamic+characteristics+of+vasa+vasorum+in+the+walls+of+porcine+coronary+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+A.+Discov.+Mol.+Cell.+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional anatomy and hemodynamic characteristics of vasa vasorum in the walls of porcine coronary arteries.</a> Anat. Rec. A. Discov. Mol. Cell. Evol. Biol. 272, 526-537 (2003).</li>
<li>Rodriguez-Porcel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+myocardial+microvascular+3D+architecture+in+experimental+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Altered myocardial microvascular 3D architecture in experimental hypercholesterolemia.</a> Circulation. 102, 2028-2030 (2000).</li>
<li>Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+heart+perfusion%3A+The+Langendorff+technique+of+isolated+heart+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Retrograde heart perfusion: The Langendorff technique of isolated heart perfusion.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 50, 940-950 (2011).</li>
<li>Skrzypiec-Spring, M., Grotthus, B., Szelag, A., Schulz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+heart+perfusion+according+to+Langendorff---still+viable+in+the+new+millennium%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolated heart perfusion according to Langendorff---still viable in the new millennium.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 55, 113-126 (2007).</li>
<li>Toyota, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+is+required+for+coronary+collateral+growth+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor is required for coronary collateral growth in the rat.</a> Circulation. 112, 2108-2113 (2005).</li>
<li>Lavine, K. J., Long, F., Choi, K., Smith, C., Ornitz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+signaling+to+distinct+cell+types+differentially+regulates+coronary+artery+and+vein+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Hedgehog signaling to distinct cell types differentially regulates coronary artery and vein development.</a> Development. 135, 3161-3171 (2008).</li>
<li>Cheema, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adventitial+microvessel+formation+after+coronary+stenting+and+the+effects+of+SU11218%2C+a+tyrosine+kinase+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Adventitial microvessel formation after coronary stenting and the effects of SU11218, a tyrosine kinase inhibitor.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 47, 1067-1075 (2006).</li>
<li>Lametschwandtner, A., Lametschwandtner, U., Weiger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scanning+electron+microscopy+of+vascular+corrosion+casts--technique+and+applications%3A+updated+review%5BTitle%5D)+AND+%22Scanning+Microsc%22%5BJournal%5D)">Scanning electron microscopy of vascular corrosion casts--technique and applications: updated review.</a> Scanning Microsc. 4, 889-941 (1990).</li>
<li>Schneider, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+3D+visualization+and+quantification+of+murine+bone+and+bone+vasculature+using+micro-computed+tomography+and+vascular+replica%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Res.+Tech%22%5BJournal%5D)">Simultaneous 3D visualization and quantification of murine bone and bone vasculature using micro-computed tomography and vascular replica.</a> Microsc. Res. Tech. 72, 690-701 (2009).</li>
<li>Manelli, A., Sangiorgi, S., Binaghi, E., Raspanti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+analysis+of+SEM+images+of+corrosion+casting+using+adaptive+stereo+matching%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+Research+and+Technique%22%5BJournal%5D)">3D analysis of SEM images of corrosion casting using adaptive stereo matching.</a> Microscopy Research and Technique. 70, 350-354 (2007).</li>
<li>Alanentalo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tomographic+molecular+imaging+and+3D+quantification+within+adult+mouse+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Meth%22%5BJournal%5D)">Tomographic molecular imaging and 3D quantification within adult mouse organs.</a> Nat. Meth. 4, 31-33 (2007).</li>
<li>Quintana, L., Sharpe, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aQuintana%2C+L+%22Optical+projection+tomography+of+vertebrate+embryo+development%22">Optical projection tomography of vertebrate embryo development</a>. , Cold Spring Protoc. 586-594 (2011).</li>
<li>Walls, J. R., Coultas, L., Rossant, J., Henkelman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-Dimensional+Analysis+of+Vascular+Development+in+the+Mouse+Embryo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Three-Dimensional Analysis of Vascular Development in the Mouse Embryo.</a> PLoS ONE. 3, e2853-e2853 (2008).</li>
<li>Chalothorn, D., Clayton, J. A., Zhang, H., Pomp, D., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collateral+density%2C+remodeling%2C+and+VEGF-A+expression+differ+widely+between+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Genomics%22%5BJournal%5D)">Collateral density, remodeling, and VEGF-A expression differ widely between mouse strains.</a> Physiol. Genomics. 30, 179-191 (2007).</li>
<li>Behm, C. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Imaging+of+Endothelial+Vascular+Cell+Adhesion+Molecule-1+Expression+and+Inflammatory+Cell+Recruitment+During+Vasculogenesis+and+Ischemia-Mediated+Arteriogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Molecular Imaging of Endothelial Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Expression and Inflammatory Cell Recruitment During Vasculogenesis and Ischemia-Mediated Arteriogenesis.</a> Circulation. 117, 2902-2911 (2008).</li>
<li>Carr, C. L., Lindner, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+perfusion+imaging+with+contrast+echocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Cardiol.+Rep%22%5BJournal%5D)">Myocardial perfusion imaging with contrast echocardiography.</a> Curr. Cardiol. Rep. 10, 233-239 (2008).</li>
<li>Leong-Poi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+Endogenous+and+Therapeutic+Arteriogenesis+by+Contrast+Ultrasound+Molecular+Imaging+of+Integrin+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Assessment of Endogenous and Therapeutic Arteriogenesis by Contrast Ultrasound Molecular Imaging of Integrin Expression.</a> Circulation. 111, 3248-3254 (2005).</li>
<li>Villanueva, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbubbles+Targeted+to+Intercellular+Adhesion+Molecule-1+Bind+to+Activated+Coronary+Artery+Endothelial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Microbubbles Targeted to Intercellular Adhesion Molecule-1 Bind to Activated Coronary Artery Endothelial Cells.</a> Circulation. 98, 1-5 (1998).</li>
<li>Wei, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+Myocardial+Blood+Flow+With+Ultrasound-Induced+Destruction+of+Microbubbles+Administered+as+a+Constant+Venous+Infusion%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Quantification of Myocardial Blood Flow With Ultrasound-Induced Destruction of Microbubbles Administered as a Constant Venous Infusion.</a> Circulation. 97, 473-483 (1998).</li>
<li>Beckmann, N., Stirnimann, R., Bochelen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Resolution+Magnetic+Resonance+Angiography+of+the+Mouse+Brain%3A+Application+to+Murine+Focal+Cerebral+Ischemia+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Magnetic+Resonance%22%5BJournal%5D)">High-Resolution Magnetic Resonance Angiography of the Mouse Brain: Application to Murine Focal Cerebral Ischemia Models.</a> Journal of Magnetic Resonance. 140, 442-450 (1999).</li>
<li>Kobayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+MR+angiography+of+intratumoral+vasculature+using+a+novel+macromolecular+MR+contrast+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Magnetic+Resonance+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">3D MR angiography of intratumoral vasculature using a novel macromolecular MR contrast agent.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 46, 579-585 (2001).</li>
<li>Nezafat, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B1-insensitive+T2+preparation+for+improved+coronary+magnetic+resonance+angiography+at+3+T%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">B1-insensitive T2 preparation for improved coronary magnetic resonance angiography at 3 T.</a> Magn. Reson. Med. 55, 858-864 (2006).</li>
<li>Wagner, S., Helisch, A., Ziegelhoeffer, T., Bachmann, G., Schaper, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+angiography+of+collateral+vessels+in+a+murine+femoral+artery+ligation+model%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+in+Biomedicine%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance angiography of collateral vessels in a murine femoral artery ligation model.</a> NMR in Biomedicine. 17, 21-27 (2004).</li>
<li>Cochet, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+MR+angiography+and+velocity+measurement+in+mice+coronary+arteries+at+9.4+T%3A+assessment+of+coronary+flow+velocity+reserve%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">In vivo MR angiography and velocity measurement in mice coronary arteries at 9.4 T: assessment of coronary flow velocity reserve.</a> Radiology. , 254-441 (2010).</li>
</ol>

マウスは、ワシントン大学の動物実験及び利用委員会と米国国立衛生研究所（NIH出版番号85から23で公開実験動物のケアと使用のためのガイドに従い、承認された方法で処理された）1996を改訂しました。

心臓組織は非常に高い代謝需要を持っているため、冠状血管系によって提供される血液から栄養と酸素の安定供給を必要とします。血管の狭窄や閉塞が原因で冠状動脈の機能を低下させる冠状血管の疾患は、組織低酸素および虚血につながると、心筋梗塞や心臓の筋肉への取り返しのつかない損傷の危険性が影響を受けた患者を置くことができます。これらの血管の病気の状態の理解が必要であり、冠状血管を勉強するために我々の能力に重要では脈管構造を視覚化したものです。ここでは、放射線不透過性材料で血管を充填することによってex vivoでのイメージングのためのマウス冠状血管系を調製するための方法を提示します。このプロトコルは、特に毛細血管を含むすべての冠状血管の完全充填し、その後可視化を確保するために設計されています。 すべての毛細血管の完全な充填、充填アジャンを確保するためにトン、Microfilは、血管のネットワーク内の小型化、高抵抗容器にMicrofilを強制的に部分的に閉じたシステムに注入する必要があります。 生体内充填システムで私たちの内にこの部分クロージャ...

<html><table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> 1 mlのシリンジ</td><td> <a href="http://www.bd.com/" target="_blank">ベクトン·ディッキンソン</a> </td><td> BD-309602 </td><td></td></tr><tr><td>恒久的に接続されている29G½ &#39;針1/2ccインスリンシリンジ</td><td> <a href="http://www.bd.com/" target="_blank">ベクトン·ディッキンソン</a> </td><td> BD-309306 </td><td></td></tr><tr><td> 2 &quot;×2&quot;ガーゼパッド</td><td> Med101store.com </td><td> SKU 2208 </td><td></td></tr><tr><td> 24G¾ &quot;Angiocath IVカテーテル</td><td> <a href="http://www.bd.com/" target="_blank">ベクトン·ディッキンソン</a> </td><td> BD-381112 </td><td></td></tr><tr><td> 26G½ &quot;ゲージの針</td><td>痩せ細った &quot;&gt;ベクトン·ディッキンソン</td><td> BD-305111 </td><td></td></tr><tr><td>アデノシン</td><td> <a href="http://www.sigmaaldrich.com/" target="_blank">シグマ</a> </td><td> A9251 </td><td>血管拡張バッファのPBSで1グラム/ L（パパベリン付） </td></tr><tr><td>斜めグレーフェ鉗子</td><td> <a href="http://www.finescience.com/" target="_blank">ファイン科学ツール</a> </td><td> 11052から10 </td><td></td></tr><tr><td>綿棒のアプリケーター：6 &quot;非滅菌</td><td> <a href="http://www.cardinal.com/" target="_blank">カーディナルヘルス</a> </td><td> C15055-006 </td><td></td></tr><tr><td>湾曲した外科用はさみ</td><td> <a href="http://www.finescience.com/" target="_blank">ファイン科学ツール</a> </td><td> 14085から09 </td><td></td></tr><tr><td>解剖立体と光源</td><td> <a href="http://www.nikon.com/" target="_blank">ニコン</a> </td><td> NA </td><td> NA </td></tr><tr><td>解剖トレイ、29.2 x 7.5インチ</td><td> <a href="http://www.coleparmer.com/" target="_blank">コール·パーマー</a> </td><td> YO-10915から12 </td><td>マウスを下に固定するためのタールで満たされた</td></tr><tr><td>ファイン曲がり鉗子</td><td> <a href="http://www.aesculapusa.com/" target="_blank">Aesculap</a> </td><td> FD281R </td><td>必要がある2つの</td></tr><tr><td>ヘパリン、5000 U / mlストック</td><td> <a href="http://www.apppharma.com/" target="_blank">APPファーマシューティカルLLC</a> </td><td> NDC 63323-047-10 </td><td>水で100倍希釈</td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td> <a href="http://www.fishersci.com/" target="_blank">フィッシャー</a> </td><td> P217 </td><td> H2Oの飽和溶液</td></tr><tr><td>ケタミン（Ketaset）、100 mg / mlストック</td><td>フォートドッジ、オーバーランドパーク、カンザス州、アメリカ合衆国</td><td> NDC 0856-2013-01 </td><td> 0.9パーセントsのキシラジンで、130 mg / kg体重のように混合アリーン</td></tr><tr><td> Microfil </td><td> <a href="http://www.flowtech-inc.com/" target="_blank">フローテック</a> </td><td> MV-122（黄色）。他のカラーオプションも用意されています。 </td><td>硬化剤の体積10％、重量比で1:1に混合します。それが十分に混合であることを確認するためだけに注入し、渦の前準備</td></tr><tr><td>非滅菌縫合糸：6-0、編んだシルク</td><td> <a href="http://www.harvardapparatus.com/" target="_blank">ハーバード装置</a> </td><td> 723287 </td><td></td></tr><tr><td>パパベリン</td><td> <a href="http://www.americanregent.com/" target="_blank">アメリカのリージェント株式会社</a> </td><td> NDC 0517-4010-01 </td><td>血管拡張バッファのPBS中4mgの/ L（アデノシン付） </td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td> <a href="http://www.sigmaaldrich.com/" target="_blank">シグマ</a> </td><td> P6148 </td><td> 4％の溶液として調製し</td></tr><tr><td>灌流装置</td><td></td><td></td><td>図2を参照してください。 </td></tr><tr><td>春のはさみ</td><td> <a href="http://www.finescience.com/" target="_blank">ファイン科学ツール</a> </td><td> 15018から10 </td><td></td></tr><tr><td>キシラジン（Anased）に20 mg / GL株式</td><td> <a href="http://www.lloydlab.com/" target="_blank">ロイドラボ</a> </td><td> NADA＃139から236 </td><td> 0.9％生理食塩水のケタミンで、8.8 mg / kg体重のように混合</td></tr></tbody></table>

マイクロctイメージングのための準備として、逆行性灌流およびマウスの冠動脈血管系の充填

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

血管系の可視化は、さまざまな病気の状態を理解するためにますます重要になっています。いくつかの技術は、撮像血管系に存在するが、いくつかは、小型船1,2が含まれています解像度を拡張しながら全体としての血管網を可視化することができます。さらに、多くの血管の鋳造技術は、サンプル3-5のさらなる解析を防ぐために、周囲の組織を破壊する。これらの問題を回避する一つの方法は、マイクロコンピューター断層撮影​​（μCT）です。 μCTイメージングは、解像度が&lt;10ミクロンでスキャンすることができます血管網の3次元再構成を作り出すことができるであり、その後の分析（例えば、組織学および形態計測）6月11日のために無傷の組織を残します。しかし、ex vivoで μCT法によるイメージング血管は血管が放射線不透過性化合物で満たされている必要があります。このように、μCT画像によって生成された脈管構造の正確な表現は時に​​偶発的です。信頼性の高い容器の充填が完了しました。このプロトコルでは、我々は、μCT画像の準備のためにマウス冠状血管を充填するためのテクニックについて説明します。 二つの支配的なテクニックは、冠状動脈血管を埋めるために存在する：in vivoでの挿管とランゲンドルフ灌流システム15から17を経由して大動脈（または大動脈弓から分岐）12から14、またはex vivoでの逆行性血流を介して。ここでは、特にすべての船舶の充填を確認するように設計されている生体大動脈カニュレーション法で説明しています。我々は、すべての毛細血管だけでなく、血管網の動脈および静脈の両側を埋めるために、最小血管を灌流することができますMicrofilと呼ばれる低粘度の放射線不透過性化合物を使用しています。血管は加圧された灌流システムを用いた緩衝液で灌流し、Microfilで満たされている。そのMicrofilが小さい高抵抗血管を埋めるようにするために、我々は、大規模なブランチemanatinを連結coronariesにMicrofilをそらして大動脈からグラム。一度の充填には、いくつかの船のMicrofilを絞り出しから心臓組織の弾性の性質を防止するために、完了したら、我々はすぐに充填した後にアクセス可能な主要な血管の出口点を連結。動脈、毛細血管、静脈同様に - したがって、我々の手法は、完全な冠状血管網の可視化を可能にする、完全な充填および充填剤の最大保持のために最適化されています。

冠状血管の可視化は、心血管疾患の我々の理解を進めることが重要です。ここでは、マイクロコンピューター断層撮影​​（μCT）イメージングの準備のために、放射線不透過性シリコーンゴム（Microfil）とマウス冠状動脈血管を灌流する方法を説明します。

マイクロCTイメージングのための準備として、逆行性灌流およびマウスの冠動脈血管系の充填

血管系の可視化は、多種多様な疾患状態を理解する上でますます重要になっています。……するためのいくつかの手法が存在しますが、

本手順の目的は、マイクロコンピューター断層撮影（micro CT）イメージングに向けて、冠状動脈系を造影剤で充填することです。まず、マウスの腹腔を開き、腹大動脈にカニューレを挿入します。次に、血管拡張緩衝液で灌流し、続いてAFF固定液で灌流します。次に、PERFUSE 8を誘導し、潜在的な漏出点を遮断するために、血管を結紮します。最後に、冠動脈に造影剤を満たします。冠動脈系の完全な充填状態は、心臓の視覚的分析またはマイクロCTイメージングおよび分析によって評価できます。この手法は、冠状動脈の脈管系や分枝パターン、さらには血管閉塞やその他の冠動脈疾患に関する知見を提供できます。また、脳、腎臓、後肢などの他の器官系における他の血管ネットワークにも適用可能です。血管結紮の手順を習得するのは困難であるため、本手法を視覚的に提示することは極めて重要です。血管の解剖学的構造に不慣れな場合、周囲組織の中から適切な血管を見つけ出し、結紮することは困難な場合があります。手技を開始する前に、圧力灌流装置の一方に血管拡張剤を含むバッファーを、もう一方にPBSで調製した4%パラホルムアルデヒドを満たしてください。次に、29ゲージ・0.5インチの針を装着した0.5 mLインスリン用シリンジに、1/100ヘパリンを0.1 milliliters分充填します。次に、針の切断面（ベベル）を上にして、約120度の角度に曲げます。最後に、26ゲージの0.5インチ針を装着した1mLシリンジに、0.4mLの飽和塩化カリウム溶液を満たし、先ほど示したように針を120度に曲げます。マウスを麻酔し、腹側を上にして解剖トレーにピンで固定した後、被毛が濡れるまでエタノールをスプレーします。次に、正中切開で腹腔を開きます。皮膚を牽引して臓器を露出させ、後大静脈（PVC）にアクセスできるよう、腸を脇に寄せます。必要に応じて脂肪や結合組織を取り除き、調製したヘパリン溶液をPVCに注入します。針を抜く際、漏れを防ぐために綿棒で針穴を覆い、PVC壁が凝固して密閉されるまで数秒間、綿棒をそのまま押さえてください。ヘパリンがマウスの循環系全体に行き渡るまで2〜3分待機した後、拍動している心臓を視認できるように横隔膜と肋骨を解剖します。その後、心停止するまで、調製した塩化カリウム溶液をPVCにゆっくりと注入します。次に、後の工程で心臓に近い部分を特定しやすくするため、横隔膜の高さ付近でPVCを切断します。続いて、横隔膜より下のすべての臓器を取り除き、マウスの後部を切り出します。次に、大動脈の切断端を確認し、6-0編み絹縫合糸の長い1本を、切断端から数ミリ前方に大動脈の下で折り返して配置します。この長い縫合糸を切断し、大動脈の下に2本の糸がある状態にします。最後に、カテーテルを切断端から大動脈内に挿入し、それぞれの縫合糸を二重結びにしてカテーテルを固定し、大動脈内の逆圧による漏れを防ぎます。まず、圧力灌流装置をカテーテルに接続します。次に、灌流装置を100〜110 mmHgの駆動圧までポンプし、血管内を血管拡張剤含有緩衝液で灌流します。液体が透明になるまで待ちながら、PVCから液体が排出されていることを確認し、緩衝液が冠動脈を灌流していることを確かめてください。肋骨を切り開き、肋骨格をピンで固定して心臓を露出させます。露出後、心臓が乾燥するのを防ぐため、バッファーを浸したガーゼから心臓にバッファーを数滴滴下します。その後、胸腺を取り除きます。大動脈弓を露出させ、血管を結紮することは、本手順において最も困難な工程です。大動脈弓に付着している血管の位置を特定することは、初心者にとって非常に困難な場合がありますが、血管の解剖学的構造を理解すれば、脂肪やその他の結締組織に遮られて明確に見えない場合でも、そこに血管が存在することを確信できるようになります。縫合糸の配置には忍耐と安定した手技が必要ですが、これは練習を重ねることで習得できるスキルです。次に、6-0編組シルクサチャーで大動脈の3つの主要分枝を結紮し、液体がこれらの抵抗の低い大きな血管ではなく、冠動脈に流れるようにします。続いて、固定液で15分間心臓を灌流します。その後、血管拡張バッファーで少なくとも2分間洗浄します。その間、注入後にマイクロフィルが心臓から漏れ出すのを防ぐため、まず第1前大静脈を、次に第2前大静脈を結紮します。PVCと大動脈の周囲に縫合糸をかけますが、充填が終わるまで締めないでください。マイクロフィルを調製して1 mLシリンジに充填した後、カテーターが浸るまで解剖トレイに水を満たします。次に、灌流装置をカテーテルから切り離し、マイクロフィル用シリンジを接続します。大動脈にマイクロフィルを注入してください。マイクロフィルはまず動脈を満たし、次いで毛細血管へと浸透するため、組織がマイクロフィルの色に染まります。マイクロフィルの疎水性により、細い血管から現れる際に、最初は独立した球体のように見えることに注目してください。マイクロフィルが血管内で連続し、PVCから流出していれば、完全に充填されたことになります。充填完了後、心臓組織の弾性によってマイクロフィルが血管から押し出されないよう、PVCと大動脈の周囲の縫合糸を素早く締め付けてください。重合プロセス中は、心臓背面の充填された血管を早く確認しようとして心臓を持ち上げたり回転させたりするなど、心臓に外部からの圧力をかけることは避けてください。次に、解剖トレイの水でガーゼを湿らせ、心臓が乾燥しないようにガーゼで覆います。マイクロフィルが重合するまで、心臓を室温で約1時間静置してください。最後に、心臓を取り出し、4% PFAで4°Cにて一晩固定します。その後、心臓を70% ethanolに移し、4°Cで保存します。Microfillによる灌流が適切に行われた血管では、血管全体にわたってMicrofillが途切れることなく連続して充填されています。この最初の図に示されているように、冠血管の充填度は目視で判断できます。静脈は心外膜側に位置しており、矢頭で示されているように容易に観察できます。より心筋内に位置する動脈も心臓の表面を通して視認でき、ここでは矢印で示されています。毛細血管への充填も認められます。この図の中で、星印で示された心臓の毛細血管が密集している領域を観察してください。稀に、閉塞によって血管床の一部に充填が行われないことがあります。したがって、充填されなかった血管ネットワークは、ここで矢印で示したように、microfillが欠如しているため明確に分かります。さらに、microfillに断裂が生じる場合があり、その例をアスタリスクで示しています。また、microfillの投与時に圧力が不十分な場合、microfillがすべての毛細血管ネットワークに押し込まれないため、不完全な充填となる可能性があります。組織がマイクロフィルによって黄色に染まっていないことから、マイクロフィルが毛細血管内に浸透しなかったことがわかります。逆に、圧力が強すぎると毛細血管が破裂し、矢印で示されているようにマイクロフィルが周囲の組織に漏出することがあります。この手順を行う際は、血管が破裂して血管鋳型が損なわれるため、マイクロフィルを速く注入しすぎたり、過剰な圧力をかけたりしないことが重要です。マイクロCTスキャンの手順に従い操作を行います。さらなる疑問の解決や、血管および周囲組織の詳細な特性評価を行うために、免疫組織化学分析などの他の手法を実施することも可能です。

retrograde-perfusion-filling-mouse-coronary-vasculature-as

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

高周波ドップラー超音波は、局所的な心筋機能を評価するための新しい技術です。この作品は、心筋の歪み、DP / dtは、虚血 -...

高周波高分解能心エコー検査：虚血 - 再灌流マウス心臓における心筋ストレイン、収縮性、および僧帽弁閉鎖不全の非侵襲的な反復測定に関する最初の証拠

microCTによる造影小動物の血管イメージングは​​、シリアルのための迅速かつコスト効率と高スループットのテクニックです...

MicroCTを使用して造影血管イメージング

マイクロコンピュータ断層撮影イメージング用Microfilで虚血後肢と血管系の灌流に浸透ドラッグデリバリー

冠状動脈循環予備力(CFR)は、心筋の酸素要求量の評価と心血管リスクの評価に役立ちます。この研究では、マウスの冠状動脈から測定されたCFRの変化を縦断的に監視するための段階的な経胸壁ドップラー心エコー法(TTDE)法を確立します。大動脈バンディングの実験的圧力過負荷下で。...

マウスの圧負荷モデルを用いた冠動脈の流れと冠血流準備の超音波ベースのアセスメント

この方法は、実験的に誘発された心筋虚血のマウスにおいて、心臓の形態、機能、灌流、代謝、および生存率を評価するための量子マイクロコンピュータ断層撮影法(MicroCT)の使用を概説しています。この技術は、ヒト心臓病のさまざまな動物モデルの非破壊ハイスループット縦断的in...

心筋の構造、機能の in vivo定量的評価では 、灌流および生存率は、心臓マイクロコンピュータ断層撮影法を使用しました

放射線不透過性鉛ベースのシリコーンゴムを使用して大動脈径の大動脈瘤マウスモデルで定量化のためマウスの血管を灌流する詳細な方法について説明します。...

Aortopathy β-アミノプロピオニ トリルによる大動脈瘤と解離のマウスモデルでのマイクロ CT 定量分析

冠状流れ予備(CFR)は、休止冠動脈血流に対する最大冠状血流の比率として定義される。我々は、閉塞性冠動脈疾患がない場合の心血管リスク因子を予測する機会を提供する超音波を介してラットのCFRを評価するためのプロトコルを提示する。...

ラットにおける心筋虚血再灌流後の冠動脈流量の評価

ここでは、中隔動脈がカニュール化および加圧されるように、動脈灌流圧および流れを維持する動脈灌流圧および流れのex...

マウス心臓における毛細血管、細動脈、および周囲細胞の動的測定とイメージング

ここでは、マイクロX線コンピュータ断層撮影を用いたマウス後肢血管の可視化と定量方法について述べている。...

コンピューター断層撮影ベースの3次元可視化のサンプル調製

本プロトコルは、左前下行動脈の迅速かつ正確な局在化のための修正された胸骨傍長軸ビューを説明しています。このアプローチは、マウスの心筋虚血再灌流後の冠状動脈血流予備能の動的変化の検査を容易にする一方で、よりシンプルでユーザーフレンドリーになるように設計されています。...

マウスにおける心筋虚血再灌流後の冠動脈血流予備能の動的評価

学ぶマウス冠動脈血管の逆行性灌流と放射線不透過性染料充填法。マイクロCTイメージングの準備として心血管疾患研究に有用な血管構造の可視化手法です。

マイクロCTイメージングのための準備として、逆行性灌流およびマウスの冠動脈血管系の充填

さらに動画を探す