プライマリーヒト線維芽細胞の導出のために皮膚パンチ生検植文化

こんにちは.皮膚生検処理ビデオチュートリアルへようこそ。まず、必要な材料を組織培養フードに入れます。フードに入るすべての物体は、70%エタノールを噴霧し、拭き取り、PI番号、日付、イニシャル、およびメディアの種類をプレートにラベル付けし、各壁に0.1%ゼラチンの1ミリリットルでプレートを回転させ、底がゼラチンでコーティングされていることを確認します。

プレートを1時間置いてから使用してください。最初のステップは、生検をチューブからカッティングディッシュに移すことです。カッティングディッシュは、生検が解剖される10センチメートルのペトリプレートの蓋です。

カッティングディッシュの中央に1.5ミリリットルのDMEM 20%FBSを追加します。メディアを中央から広げます。ここでは、皮膚生検を見ることができます。

次のステップは、生検をチューブからカッティングディッシュの中央に移すことです。滅菌鉗子を使用して、皮膚生検ピースを中央に置きます。これを行う際には注意してください、それは無菌性を維持することが不可欠です。

カッティングディッシュを覆い、層流フード内の解剖顕微鏡に移します。次のステップは、生検を12〜18の均等なサイズのピースに解剖することです。メスの取り扱いには注意してください。

準備ができたら、生検を明らかにします。1つのメスを使用して生検を固定します。2つ目のメスを上下に動かして一方向にスライスします。

生検を半分に切ります。12〜18個になるまで、各ピースを半分にカットし続けます。各生検片の理想的なサイズは、倒立顕微鏡の左眼対物レンズのマイクロメーターの約70〜80%を占めます。

マイクロメートルカウントの50%未満のピースは避けてください。12個から18個あることを確認します。次のステップは、組織培養フード内で行われます。

カッティングディッシュを覆い、ティッシュに戻します。培養フードは、6つのウェルプレートからゼラチンを吸引し、それぞれに700マイクロリットルのDMEM 20%FBSを追加します。さて、コンテナの側壁に対してメディアを追加するのは良い方法です。

ウェルがメディアの薄膜で覆われていることを確認してください。鉗子を使用して、6つの壁の各壁に2〜3個の生検ピースを再生します。ウェルプレート。

タッピングまたはスライドモーションを使用して、ピースを壁の底に取り付けます。メスを使用して、鉗子から詰まった生検片を取り除くことができます。このプレート上で成長する細胞は、継代ゼロになります。

これがプレートが最後に見えるべき姿です。これは、倒立顕微鏡下でのピースの1つです。これは初日の皮膚生検です。

通常、1〜3日以内に添付ファイルが見つかります。ケラチノサイトは1週間以内に出現し始めます。線維芽細胞は2週間以内に見ることができます。

ケラチノサイトが観察されないことがあります。通常、線維芽細胞が補完され、包装の準備が整うまでには3週間かかります。