全血におけるエノキサパリン抗凝固効果の迅速なポイントオブケアアッセイ

低分子量ヘパリン、エノキサパリンによる血液凝固の阻害の迅速な定量分析のデモンストレーション。エノキサパリンの寄与はヘパリナーゼで消化することを通じてその影響を除去することにより評価される。アッセイのより詳細な説明は、当社発表された論文に詳述されている。

はじめに、ここでは、ヒト被験者における低分子量ヘパリンエノキサパリンの血漿レベルの時間経過に関する発表された研究を参照します。本日、低分子量ヘパリンの迅速なポイントオブケアアッセイにより、結果を実証しています。この場合、エンティティはエノキサパリンです。

このスライドに示されている結果は、1日1回、1日あたり40ミリグラムの薬物を慢性的に投与されている患者の血漿濃度を示しており、その後の最後の投与からさらに消失するまでの時間コストは、投与後約4時間で、MLあたり0.4国際単位のピーク濃度が達成されることがわかります。 そして、そのレベルは薬の治療範囲内にあります。しかし、特に興味深い点は、低分子量ヘパリン(この場合はエノキサパリン)の投与後少なくとも12時間待つべきであるという臨床的に受け入れられているガイドラインがあるため、投与後12時間でどれだけ残っているかということです。その時点でまだ明確に検出可能な量が存在することは私たちにとって興味深いことであり、これから示すように、いくつかの研究でそれに焦点を当てています。

また、この研究では、腎障害のある個人は、時間の経過とともに薬物のレベルがかなり高いという事実が示されており、12時間のガイドラインは、腎障害のある患者の場合、または妊娠中の女性や肥満の患者で知られているように、非常に不十分である可能性があることがわかります。このプロジェクトに携わったニューヨーク医科大学の研究者についてご紹介します。私の名前はマリオ・オサです。

私はここで薬理学の教授です。私は、ニューヨーク医科大学の臨床麻酔学准教授であるスーリヤ・パチュラ博士です。私の名前はケシャール・カルです。

医学生の3年生です。これは、これらのアッセイに使用する装置です。この装置は、オミクロン社によって製造されています。

ラインでも電池式でも使用できるため、その意味ではまさにポイントオブケアです。装置には2つのサーモスタット制御コンパートメントがあり、これらのコンパートメントを使用して、実際のアッセイの準備や凝固アッセイ自体の準備でサンプルを事前にインキュベーションします。このアッセイの主な特徴は、高度に精製された市販のヘパリナーゼ製剤を使用することです。

これはシーメンス社から購入しました。それは非常に安定した形で提供され、生理食塩水または任意の水溶液に容易に溶解します。ヘパリンACEの使用は、患者のベースライン凝固値を取得できるため、私たちのアプローチにおいて特に価値があります。

ヘパリン、ヘパリン、ACEの影響がない場合、ACEは低分子ヘパリンと未分画ヘパリンを完全に分解することができますが、ここでの私たちの特別な関心は、低分子ヘパリンに分解し、不活性に分解し、ヘパリンの影響がない場合に凝固時間の値を生成することです。ここで示しているのは、低分子量ヘパリン、この場合はエノキサパリンのヘパリナーゼによる分解の時間経過です。データはベースラインの切断時間の割合としてプロットされているため、ここで確認できるのは、エノキサパリンが1つのアンチ10で追加されたことです。

MLあたりの国際単位は、血液の凝固時間に約50%の延長を引き起こします。次に、摂氏37度のヘパリナーゼとのさまざまな期間のインキュベーションの後、ベースラインの凝固時間の回復にかかる時間コストがわかります。言い換えれば、エノキサパリンの完全な分解が不活性になることです。

抗凝固効果に関しては、すでに1分半でそれを見ることができます。基本的に、ベースラインの凝固時間の100%の回復があります。このタイムコースを検査した後、凝固時間を測定する前に、血液の標準的なインキュベーション前として5分間のインキュベーションを使用することを選択しました。

このポイントオブケアアッセイのアッセイチューブは、メーカーから受け取る方法からわずかに変更されています。これらのチューブはもともと活性化剤カオリンに含まれており、活性化凝固時間の測定のために存在します。アクティベーターなしでチューブを使用すると、感度が大幅に向上することがわかりました。

これを最小活性化アッセイと名付けたのは、活性化の唯一の可能な源がチューブのガラス表面とおそらく磁石であると感じているためです。磁石は、自動アッセイの重要な部分です。これらのチューブはチューブウェル内で回転し、磁石が密度の塊に閉じ込められて動きが失われると、それが検出され、凝固の完了を通知します。

また、オミクロン活性化パーシャルトロンボプラチンタイムカートリッジを使用したアッセイについても検討しました。アッセイは同じ方法で行われます。このシステムでは、わずかに多くの活性化が存在します。

私たちの最初のステップは、バイアルで受け取るときにユリヘパリナーゼを再構成することです。バイアルに0.25mlの生理食塩水を加え、完全に溶解するまで約20秒待ちます。次に、バイアルの内容物全体をツベルクリン注射器に吸引し、通常、この次のステップで約0.2mlを回収します。

インキュベーション前の添加物を、3 mLのバキュテナーチューブにエノキサパリンを含む新たに採取した血液サンプルに加えます。初版はヘパリナーゼを表しており、現時点では混合されています。次に、これは、エノキサパリンを含むチューブに生理食塩水0.2 mlを添加しますが、ヘパリナーゼは含んでいません。これは、同等のVO総量です。

楽器の内蔵タイマーを使用して、300秒をカウントダウンします。これは、5分間のプレインキュベーションです。プレインキュベーションが完了すると、バキューチューブを取り外します。

最後のステップは、インキュベート済みのサンプル2 mlを、活性化度の低いアッセイチューブに移すことです。これらのチューブには、凝固を開始するために0.25モルの塩化カルシウムが100マイクロリットルにあらかじめ充填されています。この最初のチューブは、ヘパリナーゼと事前にインキュベートされたチューブです。

2番目のサンプルは、エノキサパリンを含むがヘパリナーゼを含まないサンプルです。タイマーは塩化カルシウムを添加してからの経過時間を表しており、最初のサンプルが完了したことがわかります。それは凝固の完了に必要な200秒で上部バイアルです。

ヘパリナーゼを含んでいなかったサンプルはより長く進行しており、現在は終了しています。これは、1mlあたり0.4国際単位のエノキサパリンを血液にスパイクした典型的な結果のシミュレーションです。これは、この濃度のエノキサパリンでの凝固時間が約45秒短縮され、凝固時間が18%減少します。

ご覧の通り、凝固検出は自動化されており、検査が完了するまで時間が記録されています。このアッセイは、1mlあたり0.1国際単位という低濃度で実際にテストしたことに言及する必要があります。冒頭で述べたように、これはエノキサパリンの典型的な治療用量の12時間後に存在する可能性のある濃度です。

この濃度でも確実に検出することができました。