Name: マダニScapularisダニの唾液、唾液腺、および体液コレクション (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: 学ぶIxodes scapularisダニからの体液・唾液腺・唾液採取法。ピロカルピン刺激と毛細管を用いた唾液採取、解剖による唾液腺収集、脚切断による体液採取の手法を解説。病原体研究に活用可能です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

著者らは、マウスやウサギの彼らの手入れや、保守のために特別にベクトルを媒介とする疾病の動物資源支店の部門、アンドレアソン、リサマスウーディー、ヴァーナ·オブライエン、ジョン·リデルに感謝します。また、この原稿に向かって彼らの貢献のためにエイミー·ウルマン、テレサ·ラッセル、バーバラJ.ジョンソンに感謝します。最後に、この原稿の撮影に関連付けられているすべての合法性を導くためのグラフィックイラストやジュディ·ラヴェルを製造するためのCDCのコミュニケーションのためのアソシエートディレクターのオフィスでアリッサ·エッカートを確認したいと思います。

1。スライドの準備のために体液のコレクション （動画1） <ol><li>穏やかに表面殺菌に10分間、5分間、その後70％エタノールで3％、局所過酸化水素の動物や場所からダニを供給積極的に削除します。 </li><li> PAPペンでシランコーティングされた顕微鏡スライド上に円を描くとPAPペンサークル内での目盛りを配置します。 <ol><li>シランコートしたスライドは、顕微鏡スライドに体液の最高の遵守のために使用されます。 </li></ol></li><li>解剖顕微鏡（1X目的、10X接眼レンズ、3.5X倍率）の下の目盛りを表示します。 </li><li>そっとダニの足をスプレーしてダニを固定するためにピンセットでダニの背を下に押します。 </li></ol> 注：これは腸または穿刺のダニを破壊し、体液を汚染する可能性があるため、ダニを固定するときはあまりにもハードキーを押さないでください。 <ol start="5"><li>目でダニの足や足を切断使い捨てメス細かい点を持つe遠位関節。体液を介して感染を決定するために1つだけの脚は切断する必要があります。体液のコレクションのために、スライド上の複数の脚は切断されることがあります。 </li></ol> 注：これは体液の中腸の汚染を引き起こす可能性があるため、体に近すぎて足を切断しないでください。 <ol start="6"><li>脚や足が切断された後、穏やかにスライド上に足を外に分泌する体液のために目盛りの背に圧力をかけ続けています。穏やかに体液を広げるために、スライド上の周りにダニを移動します。 </li></ol> 2。唾液腺の除去 （映画2＆3） <ol><li>リン酸塩のスポットいくつかの25μlのプールは、顕微鏡スライド上に緩衝生理食塩水（PBS）とPBSプールのいずれかに目盛りを配置します。 </li><li>解剖顕微鏡（1X目的、10X接眼レンズ、3.5X倍率）の下の目盛りを表示します。 </li><li>微細な先端forcepとダニを安定させる基礎頭状花（口の部分）やダニの後部を押したままだ。 </li><li>ダニの背面に微細な先端鉗子を挿入し、臓器を公開するダニの背をスライス。必要に応じて中腸は、この時点で削除され、顕微鏡スライド上でPBSの新鮮なプールに、またはPBSを含むマイクロチューブに転送することができます。 </li><li>両側ダニの足と一緒に位置して唾液腺（ブドウのようなクラスタ）のペアを見つける。唾液腺は、ダニの破片は、唾液腺の破壊や損失を低減するためにPBSの新鮮なプールには、まだ唾液腺を含む、主要な目盛りの部分を移動する間表示されていない場合。 </li></ol> 注：彼らは、後に摂食のに比べて開発されていないため、以前の給餌では、唾液腺では見つけることが困難です。 <ol start="6"><li>微細な先端鉗子とPBSの新鮮なプール内の場所でダニから唾液腺を削除します。 </li><li>のWi細かいthは鉗子は、任意の外部の微生物やダニの残骸を削除するには、この洗浄ステップ3-4回以上繰り返し、別のきれいな25μlのPBSプールに唾液腺を転送するチップを渡した。 </li></ol> 注：個々の唾液腺の損失と混乱を減らすために静かに唾液腺クラスタを洗浄します。 <ol start="8"><li>シランコートスライド上またはPBSを含むマイクロチューブにPBSのきれいなプールに腺を配置します。 </li></ol> 3。唾液採取 （動画4） <ol><li>優しくウサギまたはそれらが完全に充血した、約5-7日後に添付ファイルをドロップオフ直前の細かい先端鉗子を使用して、他のホストから大人の女性のダニを削除します。 </li><li>スコッチテープで顕微鏡用スライドの一方の端を上にほぼ充血したダニを付着。テープは約配置する必要があります¾方法のTickの背の頭に向かって、ダニの基礎頭状花（口部分）が露出したまま。</li><li>ここで、テープが5％ピロカルピン溶液のダニ背面のピペットを5μl（メタノール中）の前縁を満たしています。テープはピロカルピンは、ダニの基礎頭状花に接触させることなく、ダニの背の上にピロカルピンを芯することができます。 </li><li>顕微鏡スライド上に非毒性粘土の作品ダニの口器から約1インチをマウントします。 </li><li>微細な先端鉗子を使用して所望の直径にプルキャピラリーチューブ28の先端を折ります。 </li><li>解剖顕微鏡下でダニの基礎頭状花を表示します。 </li><li>優しく上顎palpsは、毛細管の外側に存在することができ引っ張らキャピラリーチューブにダニの口円錐に合わせて。 </li><li>代わりに、毛細管を保持するために粘土にキャピラリーチューブの反対側の端を押してください。 </li><li>高湿度（例えば、濡れたPAPが並んで蓋付き発泡スチロールのボックスを暗室内にマウントされた垂涎の目盛りを配置する<html> ERのタオル）。重力は、唾液採取を支援することができ、口円錐指すように容器の底にスライドを傾けます。 </li><li>室温で容器を置きます。 </li><li>密接に最初の1時間は垂涎ダニを監視し、それはパスツールピペットの電球とキャピラリーチューブの外に排出することによって生成される唾液を収集します。最初の一時間後に、少なくとも4時間は蓄積時間ごとにチェックマークを付けます。それが生成される唾液を収集し続けています。 </li></ol> 注：十分な唾液が実行されて研究のために収集されると、唾液の収集が停止することができます。 <ol start="12"><li>ダニは垂涎されていない場合、または複数の唾液が必要な場合は、流涎が時折口円錐をマッサージしてキャピラリーチューブを用いて誘導することができます。 </li><li>必要になるまで-80℃で唾液や店舗℃にプロテアーゼ阻害剤カクテル0.1ボリュームを追加します。 </li></ol> 4。代表的な結果e_contentは、 &quot;&gt;ムービー1は、部分的に供給I. scapularisニンフを保持し、顕微鏡スライド上に体液を収集するために足を切断する方法を示しています。脚または足が透明な液体が（図1Aおよび1B）分泌され、切断されたら。もし腸体液はそのまま曇りが表示され切断した脚（S）（図1Cおよび1D）から出てくる破裂しています。 ニンフは、48時間または72時間のために供給された後、唾液腺の抽出は、映画の2および3に示されています。ダニ後の破片の多く（気管、マルピーギ管から成る、血液、結合組織など）がPBSの新鮮なプールに目盛りを移動する唾液腺の損失や中断を防ぐために、一般的にはありパンクである。ニンフは、オープンカットされた後に唾液腺が置かれている図2Aおよび2Bは、図2Cは、PBSのプールで唾液腺のクラスタを削除示しています。 I.から設定唾液採取scapularis成人女性I<html>のは、映画4および図3に示す。キャピラリーチューブに垂涎の目盛りは、映画5で観察される。唾液コレクションのこのメソッドは、唾液分泌を刺激すると成人女性の目盛り当たりの唾液20μlを介して得ることができますピロカルピン使用されます。 <img alt="図1。" src="/files/ftp_upload/3894/3894fig1.jpg" /> I. scapularisニンフの図1。ラベル付けされた構造。 ムービー1。 マダニscapularis体液コレクションは<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie1.avi">映画を見るにはここをクリックしてください</a> 。 <img alt="図2。" src="/files/ftp_upload/3894/3894fig2.jpg" /> 図2は汚染されていない（＆B）とニンフの脚から滲出（C＆D）体液を汚染。 映画（2）48時間飼育I.からの唾液腺抽出scapularisニンフ。pload/3894/3894movie2.aviは、 &quot;&gt;映画を見るにはここをクリックしてください。 72時間飼育I.からムービー3。唾液腺抽出scapularisニンフ。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie3.avi">映画を見るにはここをクリックしてください</a> 。 <img alt="図3。" src="/files/ftp_upload/3894/3894fig3.jpg" /> 図3 マダニscapularisニンフ唾液腺。 （＆B）抽出に先立って、72時間給餌ニンフの唾液腺の例は、。 （C）唾液腺のクラスタを削除しました。 大人のI.から設定ムービー4。唾液採取scapularis雌ダニ。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie4.avi">映画を見るにはここをクリックしてください</a> 。 <img alt="図4。" src="/files/ftp_upload/3894/3894fig4.jpg" /> 大人のI.から図4唾液採取scapularis女性トンicks。 （＆B）粘土によって保持されて毛細管のunpulled端とキャピラリーチューブの引き上げ最後に、その口円錐のスライド上にマウントされているチェックを入れます。よだれ大人I.を含んでいる （C＆D）加湿チャンバーscapularis女性チック。 映画5。キャピラリーチューブによだれscapularis雌ダニのマダニ 。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie5.avi">映画を見るにはここをクリックしてください</a> 。

<ol><li>Quach, K. A., Boctor, F. N., Elston, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%27s+eating+you%3F+Hyalomma+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Cutis%22%5BJournal%5D)">What's eating you? Hyalomma ticks.</a> Cutis. 87, 165-167 (2011).</li>
<li>Graham, J., Stockley, K., Goldman, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-borne+illnesses%3A+a+CME+update%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Emerg.+Care%22%5BJournal%5D)">Tick-borne illnesses: a CME update.</a> Pediatr. Emerg. Care. 27, 141-147 (2011).</li>
<li>Nuttall, P. A., Paesen, G. C., Lawrie, C. H., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vector-host+interactions+in+disease+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Microbiol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Vector-host interactions in disease transmission.</a> J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2, 381-386 (2000).</li>
<li>Estrada-Pena, A., Jongejan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ticks+feeding+on+humans%3A+a+review+of+records+on+human-biting+Ixodoidea+with+special+reference+to+pathogen+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Appl.+Acarol%22%5BJournal%5D)">Ticks feeding on humans: a review of records on human-biting Ixodoidea with special reference to pathogen transmission.</a> Exp. Appl. Acarol. 23, 685-715 (1999).</li>
<li>Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen-tick-host+interactions%3A+Borrelia+burgdorferi+and+TBE+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Zentralbl+Bakteriol%22%5BJournal%5D)">Pathogen-tick-host interactions: Borrelia burgdorferi and TBE virus.</a> Zentralbl Bakteriol. 289, 492-505 (1999).</li>
<li>Jones, L. D., Hodgson, E., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+virus+transmission+by+tick+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Enhancement of virus transmission by tick salivary glands.</a> J. Gen. Virol. 70, 1895-1898 (1989).</li>
<li>Labuda, M., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-borne+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick-borne viruses.</a> Parasitol. 129, 221-245 (2004).</li>
<li>Socolovschi, C., Mediannikov, O., Raoult, D., Parola, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+tick-borne+bacterial+diseases+in+Europe%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite%22%5BJournal%5D)">Update on tick-borne bacterial diseases in Europe.</a> Parasite. 16, 259-273 (2009).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Interactions+that+Enable+Movement+of+the+Lyme+Disease+Agent+from+the+Tick+Gut+into+the+Hemolymph%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Molecular Interactions that Enable Movement of the Lyme Disease Agent from the Tick Gut into the Hemolymph.</a> PLoS Pathog. 7, e1002079(2011).</li>
<li>Piesman, J., Schneider, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+changes+in+Lyme+disease+spirochetes+during+transmission+by+nymphal+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Appl.+Acarol%22%5BJournal%5D)">Dynamic changes in Lyme disease spirochetes during transmission by nymphal ticks.</a> Exp. Appl. Acarol. 28, 141-145 (2002).</li>
<li>Brossard, M., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+immunobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick immunobiology.</a> Parasitol. , Suppl 129. S161-S176 (2004).</li>
<li>Machackova, M., Obornik, M., Kopecky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+salivary+gland+extract+from+Ixodes+ricinus+ticks+on+the+proliferation+of+Borrelia+burgdorferi+sensu+stricto+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Effect of salivary gland extract from Ixodes ricinus ticks on the proliferation of Borrelia burgdorferi sensu stricto in vivo.</a> Folia Parasitol. 53, 153-158 (2006).</li>
<li>Nuttall, P. A., Labuda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-host+interactions%3A+saliva-activated+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick-host interactions: saliva-activated transmission.</a> Parasitol. 129, 177-189 (2004).</li>
<li>Anguita, J., Hedrick, M. N., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+Borrelia+burgdorferi+in+the+tick+and+the+mammalian+host%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Adaptation of Borrelia burgdorferi in the tick and the mammalian host.</a> FEMS Microbiol. Rev. 27, 493-504 (2003).</li>
<li>Hovius, J. W., van Dam, A. P., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-host-pathogen+interactions+in+Lyme+borreliosis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick-host-pathogen interactions in Lyme borreliosis.</a> Trends Parasitol. 23, 434-438 (2007).</li>
<li>Dunham-Ems, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+reveals+a+biphasic+mode+of+dissemination+of+Borrelia+burgdorferi+within+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks.</a> Journal Clin. Invest. 119, 3652-3665 (2009).</li>
<li>Ribeiro, J. M., Mather, T. N., Piesman, J., Spielman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+and+salivary+delivery+of+Lyme+disease+spirochetes+in+vector+ticks+%28Acari%3A+Ixodidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Dissemination and salivary delivery of Lyme disease spirochetes in vector ticks (Acari: Ixodidae).</a> J. Med. Entomol. 24, 201-205 (1987).</li>
<li>Piesman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+Lyme+disease+spirochetes+%28Borrelia+burgdorferi%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Appl.+Acarol%22%5BJournal%5D)">Transmission of Lyme disease spirochetes (Borrelia burgdorferi.</a> Exp. Appl. Acarol. 7, 71-80 (1989).</li>
<li>De Silva, A. M., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+migration+of+Borrelia+burgdorferi+in+Ixodes+ticks+during+blood+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Growth and migration of Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks during blood feeding.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 53, 397-404 (1995).</li>
<li>Horka, H., Cerna-Kyckova, K., Skallova, A., Kopecky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+saliva+affects+both+proliferation+and+distribution+of+Borrelia+burgdorferi+spirochetes+in+mouse+organs+and+increases+transmission+of+spirochetes+to+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Med.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Tick saliva affects both proliferation and distribution of Borrelia burgdorferi spirochetes in mouse organs and increases transmission of spirochetes to ticks.</a> Int. J. Med. Microbiol. 299, 373-380 (2009).</li>
<li>Brossard, M., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+of+interactions+between+ticks+and+hosts%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Immunology of interactions between ticks and hosts.</a> Med. Vet. Entomol. 11, 270-276 (1997).</li>
<li>Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+modulation+of+host+immunity%3A+an+important+factor+in+pathogen+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen transmission.</a> Int. J. Parasitol. 29 (99), 851-859 (1999).</li>
<li>Binnington, K. C., Kemp, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+tick+salivary+glands+in+feeding+and+disease+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Role of tick salivary glands in feeding and disease transmission.</a> Adv. Parasitol. 18, 315-339 (1980).</li>
<li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+neutrophil+function+by+two+tick+salivary+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Inhibition of neutrophil function by two tick salivary proteins.</a> Infect. Immun. 77, 2320-2329 (2009).</li>
<li>Montgomery, R. R., Lusitani, D., De Boisfleury Chevance, A., Malawista, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+saliva+reduces+adherence+and+area+of+human+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Tick saliva reduces adherence and area of human neutrophils.</a> Infect. Immun. 72, 2989-2994 (2004).</li>
<li>Lima, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+infectivity+of+the+Lyme+disease+spirochete+Borrelia+burgdorferi+derived+from+Ixodes+scapularis+salivary+glands+and+midgut%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Differential infectivity of the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi derived from Ixodes scapularis salivary glands and midgut.</a> J. Med. Entomol. 42, 506-510 (2005).</li>
<li>Severinova, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-inoculation+of+Borrelia+afzelii+with+tick+salivary+gland+extract+influences+distribution+of+immunocompetent+cells+in+the+skin+and+lymph+nodes+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Co-inoculation of Borrelia afzelii with tick salivary gland extract influences distribution of immunocompetent cells in the skin and lymph nodes of mice.</a> Folia Microbiol. 50, 457-463 (2005).</li>
<li>How to pull capillary tubes [Internet]. , benchflydotcom. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.youtube.com/watch?v=2yKHvKCatmM">http://www.youtube.com/watch?v=2yKHvKCatmM</a> (2009).</li>
<li>Labuda, M., Jones, L. D., Williams, T., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+tick-borne+encephalitis+virus+transmission+by+tick+salivary+gland+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Enhancement of tick-borne encephalitis virus transmission by tick salivary gland extracts.</a> Med. Vet. Entomol. 7, 193-196 (1993).</li>
<li>Kariu, T., Coleman, A. S., Anderson, J. F., Pal, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+Rapid+Transfer+and+Localization+of+Lyme+Disease+Pathogens+Within+the+Tick+Gut%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut.</a> J. Vis. Exp. (48), e2544(2011).</li>
<li>Edwards, K. T., Goddard, J., Varela-Stokes, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examination+of+the+internal+morphology+of+the+Ixodid+tick+Amblyomma+maculatum+koch%2C+%28Acari%3AIxodidae%29%3B+a+%22How-to%22+pictorial+dissection+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Midsouth+Entomologist%22%5BJournal%5D)">Examination of the internal morphology of the Ixodid tick Amblyomma maculatum koch, (Acari:Ixodidae); a "How-to" pictorial dissection guide.</a> Midsouth Entomologist. 2, 28-39 (2009).</li>
<li>Ledin, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Borreliacidal+activity+of+saliva+of+the+tick+Amblyomma+americanum%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Borreliacidal activity of saliva of the tick Amblyomma americanum.</a> Med. Vet. Entomol. 19, 90-95 (2005).</li>
<li>Ribeiro, J. M., Zeidner, N. S., Ledin, K., Dolan, M. C., Mather, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+much+pilocarpine+contaminates+pilocarpine-induced+tick+saliva%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">How much pilocarpine contaminates pilocarpine-induced tick saliva?</a> Med. Vet. Entomol. 18, 20-24 (2004).</li>
<li>Barker, R. W., Burris, E., Sauer, J. R., Hair, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+of+tick+oral+secretions+obtained+by+three+different+collection+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Composition of tick oral secretions obtained by three different collection methods.</a> J. Med. Entomol. 10, 198-201 (1973).</li>
<li>Burgdorfer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemolymph+test.+A+technique+for+detection+of+rickettsiae+in+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Hemolymph test. A technique for detection of rickettsiae in ticks.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 19, 1010-1014 (1970).</li>
</ol>

我々は、開示することは何もありません。

ダニの体液、唾液腺、唾液のコレクションはダニ媒介性病原体の伝播の研究に重要であり、有病率、普及、増殖、目盛り、およびホスト6,11-13,20,23,29両方の持続性。目盛り30,31を分析する方法はいくつかあります。しかし、唾液腺を収集するときに唾液腺が破裂したり、ダニの遺骨が失われないように適切に目盛りを細かくすることが重要です。唾液腺は、それらが腸の汚染を除去し、その後唾液腺抽出物（SGE）を取得するためにPBSで染色または接地用スライド上に固定することができます数回洗浄する必要がダニから削除されたら。 SGEは、唾液よりも収集することが容易で、唾液に類似した属性を持っているので、それは唾液の代替として使用することができます。しかし、SGEは、ダニの唾液中に存在しない唾液腺細胞由来の付加的なタンパク質を含んでいます。 SGEできるB内の余分なタンパク質のほか電子利点または実行されている調査に応じて不利ですが、研究者がSGEで作業する際に注意する必要があるものです。 SGEは、ピロカルピンは唾液腺の収集時に使用されていないという利点を持っています。ピロカルピン、救いのアゴニストとして作用す...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>過酸化水素</td><td>フィッシャー</td><td> H312-500 </td></tr><tr><td>エタノール</td><td>アクロス</td><td> 61509-5000 </td></tr><tr><td> PBS </td><td>ボストンのバイオ製品</td><td> BM-2205 </td></tr><tr><td>デュモンファイン鉗子（3C） </td><td>フィッシャー</td><td> NC9906085 </td></tr><tr><td>シラン処理顕微鏡スライド</td><td> Bioworld </td><td> 42763007から1 </td></tr><tr><td> PAPペン</td><td> Bioworld </td><td> 21750008から1 </td></tr><tr><td>スーパーフロストプラス顕微鏡スライド</td><td>フィッシャー</td><td> 12-550-18 </td></tr><tr><td>ピロカルピン</td><td>シグマ</td><td> P6503-5G </td></tr><tr><td>プロテアーゼ阻害剤カクテル</td><td>シグマ</td><td> P2714 </td></tr><tr><td> ＃11使い捨てメス</td><td>フェザー</td><td> 2975＃11 </td></tr><tr><td>無毒粘土</td><td&gt;フィッシャー</td><td> S17307 </td></tr><tr><td>キャピラリーチューブ</td><td>チェイス科学グラス株式会社</td><td> 40A502 </td></tr></tbody></table>

マダニscapularisダニの唾液、唾液腺、および体液コレクション

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

ダニは世界中に存在し、多くのダニ媒介性疾患を持つ人間を苦しめるされています。ダニはライム病とダニ媒介性回帰熱（ ボレリア属）、ロッキー山紅斑熱（ ロッキー山紅斑熱リケッチア ）、エーリキア症（ エールリヒアchaffeensisとE.エクイ ）、アナプラズマ病（ アナプラズマphagocytophilum）、脳炎（ダニの原因となる病原体のベクトルです。媒介性脳炎ウイルス）、バベシア症（ バベシア属）、コロラドダニ熱（Coltivirus）と、野兎病（ 野兎病菌 ）1-8。適切にホストに送信するこれらの感染性病原体は、差動、遺伝子発現を調節する目盛りのタンパク質と相互作用し、ダニ3,9-13を通して移行します。たとえば、ライム病剤、 ボレリアburgdorferiはは 、ダニの風土病サイクル14,15の祝宴と飢饉段階に差動遺伝子発現を介して適応します。また、 マダニティックとしては、消費吸血ボレリアは、唾液腺に移動すると追放された唾液9,16-19を使用してホストに送信され血体腔、腸内から複製と移行します。 ダニが供給されたホストは、通常、強力な止血及び先天性免疫応答11,13,20-22で応答します。これらのホストの応答にもかかわらず、I.ダニの唾液が3,11,20,21,23を供給するダニを支援するために免疫であるタンパク質、溶解剤、抗凝固剤、及びfibrinolysinsが含まれているため、scapularisは数日間供給できます。ダニの唾液や唾液腺抽出物（SGE）が保有する免疫調節活性は、多数のダニ媒介性病原体3,20,24-27の送信、増殖、普及を促進します。それは積極的に摂食ダニを分析し、ダニの唾液を収集することが不可欠である、さらにダニ媒介性感染症の病気を引き起こす方法を理解する。このビデオプロトコルは、解剖の技術を示しています体液の収集と積極的にIを供給から唾液腺の除去48時間および72時間後にマウスを配置した後scapularisニンフ。また、成人女性Iから唾液採取を実証scapularisダニ。

ダニ媒介性病原体が病気を引き起こす方法感染したダニの体液のコレクション、唾液腺、唾液は勉強することが重要です。このプロトコルでは、餌から体液と唾液腺を収集する方法を示しています<em&gt;イクソデス·スカプラリス</em&gt;ニンフ。また、女性から唾液採取を実証<em&gt; I. scapularis</em&gt;大人。

マダニScapularisダニの唾液、唾液腺、および体液コレクション

マダニは世界各地に生息しており、多くのマダニ媒介疾患を引き起こして人間に被害を与えます。マダニは、ライム病やマダニ媒介性の...を原因とする病原体の媒介者となります。

この手順の全体的な目的は、活発に吸血している ex ODI scapularis ダニから、ダニ本体、血リンパ、唾液腺、および唾液を回収することです。まず、ダニの脚の遠位関節を切断して血リンパを排出させます。次に、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）中でダニを解剖し、唾液腺を特定して、それらをきれいなPBSプールに回収します。ピロカルピンをマイクロピペットの背面に塗布し、マダニの口器をプールされたキャピラリーチューブに挿入して、チューブ内に唾液を分泌させることで唾液を回収します。最終的に、免疫蛍光法またはタンパク質解析を通じて、血リンパまたは唾液腺に存在する微生物を示す結果を得ることができます。また、唾液タンパク質とのタンパク質相互作用などの結果も得られます。一般的に、血リンパの採取に慣れていない人は、中腸を破裂させずにダニを固定することが困難であり、その結果、血リンパが汚染されてしまうため、苦労することがあります。また、すべてのダニが唾液を分泌するわけではないため、唾液の採取に苦労する場合もあります。したがって、飽食状態にあるか、それに近い状態のダニから唾液採取を試みることが重要です。一般的に、唾液腺の回収に慣れていない方は、ダニの残骸の中で唾液腺を特定することが困難であるため、苦労することがあります。また、特定できたとしても、これらの唾液腺は非常に壊れやすく、洗浄ステップの途中で破裂して紛失しやすい傾向があります。動物ホストから吸血中のダニを慎重に除去した後、3%の外用過酸化水素水に5分間浸してください。ダニを70% ethanolに10分間浸し、表面を滅菌します。ピペットを用いて、ダニを70% ethanolから濾紙の上に移します。スライドガラスの上に円を描きます。解剖顕微鏡下で、パットペンサークル内にダニをスライドさせて配置します。ピンセットを使用して、ダニの背面に軽く圧力をかけます。ダニの脚を露出させ、固定します。次に、使い捨ての精密メスを用いて、ダニの脚の遠位関節で脚を切断します。脚を切断した後も、ダニの背面に圧力を加え続け、血リンパが脚からスライド上に分泌されるようにします。スライド上のダニをゆっくりと動かして血リンパを広げ、ダニの部位から唾液腺を取り除きます。リン酸緩衝生理食塩水（PBS）を25 µLずつ数回、顕微鏡スライド上に滴下し、解剖顕微鏡下でダニをPBSの液滴の一つに配置します。先端の細いピンセットを使用して、口器または後端を固定し、マダニを安定させます。細いピンセットをマダニの後端に挿入し、背側を切り開いて内臓を露出させます。マダニの脚の脇に左右一対に位置している唾液腺を探します。ダニの組織片の中で腺が見当たらない場合は、腺が含まれているダニの本体部分を、微細先端ピンセットを用いて新しいPBSプールに移動させ、唾液腺の破砕や喪失を軽減しま

saliva-salivary-gland-hemolymph-collection-from-ixodes-scapularis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

健康的な実験室飼育の生産は、ダニの生物学の研究、およびダニ病原体相互作用に不可欠であるダニ。ここでは、費用対効果およびマウスにストレスの少ないです未熟ダニ供給のための単純なプロトコルを示しています。...

飼育<em&gt; Ixodes肩甲骨、</em&gt;ブラック・ティック・ティック：未熟期をマウスに与える

ここでは、空間的そして一時的変更されたホール マウント in situ...

ホール マウントIn Situハイブリダイゼーションによる目盛りの腸内微生物叢の可視化

ダニ hemolymph の分析は、いくつかの病原体が病気を引き起こす方法と、ダニ免疫学的がこの感染症にどのように反応するかに関する重要な情報源を表しています。本研究は、真菌 propagules を接種し、 Rhipicephalus microplusうっ積の雌から hemolymph...

無脊椎動物の病理学研究に向けた Hemolymph のMetarhizium Blastospores の収集とRhipicephalus Microplusダニへの接種の開示

本研究では、実験用マウスに付着したカプセルを用いて、硬ダニのニンファルおよび幼虫段階の給餌システムを開発した。供給カプセルは、柔軟な材料から作られ、少なくとも1週間はしっかりとマウスに取り付けられたままで、ダニの供給の快適なモニタリングを可能にします。...

実験室マウスにおける未熟なハードティックステージのカプセルベースモデル

本プロトコールは、ダニ唾液腺および精製された細胞外小胞からのマイクロRNAの単離を記載する。これは、一般的に使用される試薬と消耗品を組み合わせた普遍的な手順です。この方法はまた、少数のダニの使用を可能にし、容易に配列決定することができる高品質のマイクロRNAをもたらす。...

ダニ Ex Vivo 唾液腺培養物および細胞外小胞からのマイクロRNAの単離

ここに提示されるのは、様々なダニの生活段階の部分的または完全な充血を可能にするために、人工膜システム を介してインビトロで...

肩甲骨イクソデスのためのダニ人工膜給餌

我々は、その後の解析のために、小型節足動物から定量可能な血リンパを効率的に採取する方法について述べる。...

小型節足動物から血リンパを採取するための正確で定量可能な方法

この記事では、臨床研究のためにヒトを幼虫の Ixodes scapularis...

幼虫 Ixodes scapularis Ticsへのヒトの実験的曝露モデル

ここでは、与えられた個々のダニの解剖に続いて、唾液、血リンパ、唾液腺、および中腸を収集し、ダニ媒介病原体の組織特異的局在を研究して、ベクターコンピテンスと病原体とマイクロバイオームの相互作用の理解を進めるプロトコルを提示します。...

個々のマダニ(Acari:Ixodidae)からの唾液、血リンパ、唾液腺、および中腸の抽出

この方法は、3Dプリントされたチャンバーとラボで製造されたシリコーン膜を組み合わせた 、in vitro...

イソディッドダニ研究における人工膜を通って血液を供給するイソディッドマダニ研究

学ぶIxodes scapularisダニからの体液・唾液腺・唾液採取法。ピロカルピン刺激と毛細管を用いた唾液採取、解剖による唾液腺収集、脚切断による体液採取の手法を解説。病原体研究に活用可能です。

マダニScapularisダニの唾液、唾液腺、および体液コレクション

さらに動画を探す