同所性肺移植のマウスモデルにおける閉塞性細気管支炎の開発

この手順の全体的な目標は、同所性肺移植をミラーリングする文学的な細気管支炎モデルを確立することです。これは、まずC 57 BL 10マウスからドナー肺を採取することによって達成されます。2番目のステップは、気管支肺動脈と吻合用の静脈のためのカフを準備することです。

次に、調製したドナー肺をレシピエントC57BL6マウスに移植する。最後のステップは、移植後21日間または28日間、移植したマウスを観察することです。最終的に、組織学的分析を使用して、移植された肺の文学的な細気管支炎病変を示します。

ミラーリングヘテロトピア気道移植モデルと比較したこのモデルの主な利点は、現在のモデルが人間の状態を模倣していることです。一般に、この方法に不慣れな個体は、マウスのより高い構造が非常に繊細で、ラットの質量の10分の1しか質量がないため、損傷を受けやすいため、ドナーマウスを密閉された保持チャンバーに入れ、5%イソフッ素で麻酔を誘発するため、苦労します。次に、20ゲージの静脈内カテーテルを使用してマウスまたはTraeを挿管し、げっ歯類の人工呼吸器に装着します。

〜2%のフッ素で麻酔を維持します。マウスが尻尾のフリックやつま先のつま先つまみに反応しないことで完全に麻酔されていることを確認した後、マウスを仰臥位に置き、腹部に70%アルコールを準備します。次に、腹部を覆う皮膚をハサミで切り取り、腹部の筋肉組織を露出させます。

次に、最初に腹壁を正中線切開し、次に胸骨を横切って切開することにより、腸を遠ざけ、肝臓のすぐ下にある下大静脈を見つけることにより、胸骨襟切開術を行います。ヘパリンを1キログラムあたり100マイクロリットルでIVCに注入します。次に、肝臓の鎌状靭帯を引き下げ、背骨に向かって腹側因状アタッチメントに沿って横隔膜を切断します。

胸壁の両側を首に切り込み、胸腔を露出させます。肺を保護しながら胸郭を両側に切り、胸腺を切除します。次に、胸腔内IVCを横隔膜のレベルで切断します。

次に、心臓の位置を特定し、右心房付属器を切除します。次に、肺動脈幹の根元で横切開を行い、その切開を使用して、2ミリリットルの冷却された乳酸リンガーと0.1ミリリットルのヘパリンで肺を洗い流します。気管を露出させてから、食道と一緒に切り取ります。

次に、終末潮汐インフレーションの3分の2で換気を停止します。ハートロングブロックを切除し、氷の上に保管します。切除した肺にガーゼを貼って、光から保護します。

肺靭帯を肺静脈またはpvまで切開します。食道と大動脈を切除して、裂孔の位置を特定します。肺門と付着した主気管支の最も頭蓋面に位置する肺動脈またはpaを見つけます。

気管支から離れて肺動脈を慎重に解剖します。次に、24ゲージのIVカテーテルからPAカフを作成し、0.7ミリメートルの延長で長さ0.5ミリメートルにカットします。袖口の表面はAB編みになっています。

吻合のための表面を提供するために、PAカフと同様の材料を使用して気管支のためのカフを作り、20ゲージのカテーテルを1ミリメートルの長さにカットし、0.7ミリメートルの延長を使用します。PVカフのサイズは、ドナーマウスの体重によって異なります。体重24〜27グラムのマウス用。

袖口のサイズは22ゲージで、体重は27〜32グラムのマウス用に長さ0.7ミリメートル、延長は0.7ミリメートルです。長さは同じですが、20ゲージのカテーテルが使用されます。次に、カフを肺動脈の遠位レンズに挿入し、肺静脈と気管支をそれぞれ9つのシルク縫合糸で固定します。

袖口がすべて適切に取り付けられた後。準備したドナー肺を乳酸リンガーに浸したガーゼで包み、移植まで氷の上に置きます。レシピエントマウスを準備するには、麻酔を誘発し、ドナーに使用したのと同じ方法で機械換気を行います。

左胸壁を剃り、アルコール70%で下準備をします。まず、左の第3肋間腔に開胸切開を行います。切開部を背側に伸ばし、背骨に近づけます。

手術野が無菌状態で覆われていることを確認し、心臓に隣接する左肺血管と気管支にマイクロ血管クランプを配置します。肺動脈は頭蓋面で、肺静脈は門のコドル端で、気管支はそれらの間で視覚化できます。次に、止血剤を穏やかに牽引して、pa、PV、気管支に軽度の緊張を引き起こします。

肺門部構造を固定したままにし、左肺を慎重に切除します。肺動脈、肺静脈、気管支を分離し、各構造の周囲にOH縫合糸を緩く配置します。PAをその外膜シースから完全に解剖し、次に血管の円周の約4分の1を前壁に小さな横切開を行います。

動脈の背側の部分の続きをそのままにして、冷たい乳酸リンガーに浸した綿ガーゼで包まれたドナー肺を取得し、胸腔内に配置します。次に、カフをレシピエントpa、PV、気管支に挿入して吻合を作成し、これらをナノ縫合で結紮します。次に、レシピエントの肺を取り出します。

次に、肺門クロスクランプを取り外して、再灌流と換気を可能にします。移植した肺をレシピエントの胸部に戻し、開胸切開を閉じます 5 OH縫合糸を使用すると、マウスは麻酔から回復するはずです。ブプレノルフィンは、マウスが意識を取り戻した後の痛みの緩和のために投与することができます。

この表は、急性拒絶反応の組織学的スコアと文学的細気管支炎またはOBの有病率を示しています。急性拒絶反応の移植後のスコアリングは、Aスコアと呼ばれます。同種移植片の組み合わせは、ISOグラフトと比較して、かなり多くの急性または慢性の拒絶病理を示します。さらに、移植後21日目と28日目の同種移植片の組み合わせでは、同種移植片の組み合わせの方が有意に高かった。

肺移植後28日目のマクロ所見と病理組織をここに示します。これらの画像は、マクロ所見とHおよびE染色されたISOグラフト肺、および右ナイーブ肺を表しています。これらの画像は、h と e と masen 三段櫂船で染色された BL 10 肺同種移植片を BL 6 マウスのレシピエントに移植したもので、それぞれ OB と非 OB を発症しました。

一方のBの白い矢印はOB病変を示しています。このパネルは、BL 10マウスレシピエントに移植されたBL6肺同種移植片をマスターしたものです。この手法は、適切に実行すれば、ほぼ30分で実行できます。

この技術の有用性は、一次移植片の機能不全、急性拒絶反応、および肺移植後の切除性細気管支炎に関するメカニズムの質問に答えるために利用できることです。