ラットとマウスにおける卵巣摘出および17β-エストラジオールの交換：ビジュアルデモ
2012年6月7日
シラスティックカプセル及び経口ヌテッラによる卵巣摘出および17β-エストラジオールの後続の置換は、ラットとマウスで実証されています。
この手順の全体的な目標は、雌ラットとマウスの変動する血清エストロゲン濃度を厳密に制御することです。これは、最初に背根によって卵巣を取り除くことによって達成されます。次に、セル弾性カプセルとヌテラ混合物を調製します。
最後に、カプセルを皮下挿入するか、ヌテラ混合物を経口投与します。最終的には、カプセル法とヌテラ法でそれぞれ安定または変動する血清17ベータエストラジオール濃度を示すラジオイムノアッセイを使用して結果を得ることができます。徐放性ペレットのような既存の方法に対するこれらの技術の主な利点は、それらが長期間にわたってエストラジオールの生理学的濃度を生成することが証明されていることです。
この方法は、投与、根、用量間の効果の違いなど、エストロゲン分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。動物に麻酔をかけた後、直腸体温計に接続された加熱プレートの上で腹たくなった位置に置きます。IGELを適用し、術後の救済のために動物の首の外側側面に皮下投与します。
腸骨稜シェーバーの前方に生理食塩水に1キログラムあたり5ミリグラムのILを4×4センチメートルの領域から投与します。次に、消毒剤でその領域を消毒してから、動物を4 x 4センチの開口部の手術シートで覆います。正中線を2〜3センチ切開し、正中線の1センチ横にある下にある顔面の下から皮膚を鈍く解剖します。
筋膜を通して別の切開を行います。次に、できるだけ表面的に、腹腔に達するまで、この筋膜の下で横方向に鈍く解剖します。ピンセットを使って、腹腔内の卵巣を囲む脂肪組織をつかみ、そっと引き出します。
卵巣を特定し、子宮の角と血管を結紮します。この構造に近位0.5〜1センチメートル。卵巣と結紮した脂肪組織を切り取り、残りの組織を腹腔に戻します。
反対側の筋膜に別の切開を行い、もう一方の卵巣を切除します。傷口を閉じ、そうでない場合は直ちに17ベータエストラジオールを投与します。動物を麻酔から目覚めさせます。
手術後少なくとも2時間は動物を加熱されたケージに入れます。術後最初の数日間、ラットを別々に飼育しました。手術後24時間で皮下手術。
動物にキログラムあたりさらに5ミリグラムのILを注射して、学力カプセルを通じて17個のベータエストラジオールを投与します。ごま油に適量をよく混ぜます。鉗子を使用して、3センチメートルの長さのスコラスティックと5ミリメートルの長さの木製アプリケータースティックを切断して差し込みます。
17ベータエストラジオールゴマ油溶液を注入する前に、1つの木製プラグをスコラスティックカプセルに押し込みます。全長を埋めるには、別の木製のプラグで開いた端のスコラスティックカプセルをそっとキャップします。移植前に、残りの17個のベータエストラジオール溶液でカプセルを一晩インキュベートします。
切除切開を閉じた後、ラットの首の背側にある2 x 2センチメートル四方の領域を剃って消毒します。1センチの切開を行い、コードを横方向かつ鈍くします。皮下ポケットを解剖し、カプセルのための十分なスペースを作ります。
スコラスティックカプセルを拭き取り、切開部からそっと挿入します。次に、縫合糸で切開部を閉じます。カプセルが皮膚、特に傷口の周りにできるだけ負担をかけないようにしてください。.
エストロゲン投与の媒体としてナッツクリームNutellaを使用するには、ゴマ油に17ベータエストラジオールを完全に溶解し、次にゴマ油をナッツクリームと混合します。実験の5日前に、17ベータエストラジオールを含まないプラセボナッツクリームを準備します。1日目から3日目までホルモンフリーのナッツクリームを食べるようにラットを訓練します。
4日目と5日目に動物をグループで訓練します。実験全体を通して、ナッツクリームを別々のケージに入れて与えます。ナッツクリーム生理学的血清を与えられたら、動物を別々のケージに入れます。
現在の方法で再現することを目指している17ベータエストラジオール濃度は、ラットでは1ミリリットルあたり約5〜140ピコグラム、マウスではミリリットルあたり5〜35ピコグラムです。ここに示すように。300グラムの雌のスプレッドドイラットに投与した場合。
皮下弾性カプセルは、2日目の1ミリリットルあたり約40ピコグラムから35日目までにミリリットルあたり10ピコグラムまで、17のベータエストラジオール血清濃度をゆっくりと減少させます。しかし、投与直後は、25グラムの女性にカプセルを投与した場合、8時間以内に生理学的範囲まで低下することが予想されます。C 57 黒 6 マウス。
血清濃度は、ナッツクリームを介して投与した場合、2日目の約90ピコグラム/ミリリットルから35日目の25ピコグラム/ミリリットルにゆっくりと減少しました。.スプラはラットをします。17ベータエストラジオールの生理学的レベルは、マウスでミリリットルあたり10〜70ピコグラムの間で毎日変動しました。
17のベータエストラジオールのレベルはミリリットルあたり20から120ピコグラムの間で変動した一度習得すると、エクトミーとカプセル移植の技術は、適切に実行すれば10分で行うことができます。この手順を試みるときは、衛生ガイドラインを厳守することを覚えておくことが重要です。
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概要
この研究では、卵巣摘出術とその後のホルモン補充を通じて、雌ラットとマウスの血清エストロゲン濃度を制御する方法を実証します。この技術には、シリコーンカプセルと経口ヌテラ混合物の使用が含まれ、安定したエストラジオールレベルを維持します。
主要な研究要素
科学分野
- 神経科学
- 内分泌学
- 動物モデル
背景
- 卵巣摘出術はエストロゲン効果を研究するための一般的な手順です。
- 安定したホルモンレベルを維持することは実験の正確性にとって重要です。
- 従来の方法は一貫したホルモン投与を提供しない可能性があります。
- 新しい技術は研究における生理学的関連性を向上させることを目指しています。
研究の目的
- 動物モデルにおけるエストロゲン補充の信頼できる方法を確立すること。
- シリコーンカプセルと経口投与の有効性を比較すること。
- これらの方法が血清エストラジオール濃度に与える影響を評価すること。
使用した方法
- 雌ラットとマウスに卵巣摘出術を施行。
- ホルモン投与のためのシリコーンカプセルとヌテラ混合物の準備。
- カプセルの皮下挿入またはヌテラの経口投与。
- 放射免疫測定法を用いた血清エストラジオールレベルの測定。
主要な結果
- シリコーンカプセルは安定した血清エストラジオール濃度を提供します。
- 経口ヌテラ投与は変動するホルモンレベルをもたらします。
- 両方の方法は従来の緩徐放出ペレットと比較して効果的です。
- エストラジオールの生理学的濃度を長期間維持することができます。
結論
- 新しい技術は研究におけるエストロゲンレベルの制御を改善します。
- シリコーンカプセルは安定したホルモン投与に適しています。
- 経口ヌテラは使用できますが、ホルモンレベルの変動をもたらす可能性があります。
よくある質問
Executive Industry Relevance
Controlling serum estrogen concentrations is critical for reproducible preclinical studies in neuroscience and endocrinology, where hormonal variability can confound target validation and mechanistic de-risking. This method enables stable or physiologically fluctuating estradiol levels, supporting predictive confidence in early discovery and translational biomarker alignment. By providing validated hormone administration techniques, it reduces biological noise and improves go/no-go decisions in portfolio triage.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of estrogen-dependent pathways by eliminating endogenous hormone fluctuations.
- Operational Value: Provides standardized hormone replacement to isolate independent variables in target validation assays.
- Predictive Value: Supports mechanistic de-risking through controlled hormone exposure that mimics clinical replacement scenarios.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Delivers quantitative, measurable estradiol outputs via radioimmunoassay for assay standardization.
- Operational Value: Silastic capsules offer prolonged, stable release suitable for longitudinal screening campaigns.
- Reproducibility: Nutella method allows oral, non-invasive dosing for high-throughput phenotypic screening when fluctuating levels are acceptable.
Translational & Preclinical Research
- Disease Relevance: Models physiological estrogen exposure relevant to women's health and neuroendocrine disorders.
- Translational Continuity: Oral Nutella administration resembles clinical hormone replacement therapy, improving preclinical-to-clinical extrapolation.
- Risk-Adjusted Advancement: Stable capsule delivery reduces variability in preclinical efficacy and safety readouts.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into discovery biology for hypothesis testing, supports screening via standardized hormone priming, and enables translational research through clinically relevant delivery routes.
- Discovery Biology: Facilitates pathway clarification by removing confounding hormonal noise in female animal models.
- Screening: Ensures assay readiness through consistent endocrine background, reducing false positives/negatives in compound evaluation.
- Analytics: Radioimmunoassay readouts provide quantitative dependent variable measurements for cross-condition comparison.
- Translational Research: Oral Nutella route supports biomarker alignment with clinical hormone replacement paradigms.
- Enterprise Reuse: Capsule preparation and surgical protocol are reusable across studies requiring endocrine control.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence through reduced mechanistic ambiguity in estrogen-mediated signaling.
- Operational Value: Standardized surgical and dosing procedures improve reproducibility across sites and teams.
- Strategic Value: Enables better go/no-go decisions by minimizing biological variability in efficacy studies.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization via reliable hormone-controlled disease models.
Implementation Considerations
- Requires expertise in rodent surgery and aseptic technique for ovariectomy and capsule implantation.
- Depends on access to silastic tubing, sesame oil, radioimmunoassay, and Nutella or equivalent matrix.
- Necessitates cross-team standardization of dosing schedules and serum sampling timing.
- Adaptation across species (rats vs. mice) requires dose adjustment based on body weight and metabolic rate.
- Practical limitation: Nutella method produces fluctuating levels, unsuitable for studies demanding strict hormonal control.
