Name: HCVの制限要因を発見するヘテロカリオンの形成の2つの方法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 49 s
Description: 学ぶHCV制限要因の探索法。ヘテロカリオン形成を用いて2つの細胞融合技術で、感染性ウイルス産生を阻害する優性制限要因を発見し、HCV複製サイクル完了への影響を解析します。

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我々は、それぞれ、JFH1とJ6CF分離株のTakaji脇田とイェンス·ブフに感謝しています。さらに我々は、チャールズホ-7.5セルのライスと9E10抗体、E2特異的抗体CBH-23のスティーブンFoung、および実験的ウイルス学、有用な提案や議論のためのTwincore学科のすべてのメンバーに感謝します。

<ol><li>Zhu, Q., Guo, J. T., Seeger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+of+hepatitis+C+virus+subgenomes+in+nonhepatic+epithelial+and+mouse+hepatoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Replication of hepatitis C virus subgenomes in nonhepatic epithelial and mouse hepatoma cells.</a> J. Virol. 77, 9204-9210 (2003).</li>
<li>Kato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonhepatic+cell+lines+HeLa+and+293+support+efficient+replication+of+the+hepatitis+C+virus+genotype+2a+subgenomic+replicon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Nonhepatic cell lines HeLa and 293 support efficient replication of the hepatitis C virus genotype 2a subgenomic replicon.</a> J. Virol. 79, 592-596 (2005).</li>
<li>Ali, S., Pellerin, C., Lamarre, D., Kukolj, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+C+virus+subgenomic+replicons+in+the+human+embryonic+kidney+293+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Hepatitis C virus subgenomic replicons in the human embryonic kidney 293 cell line.</a> J. Virol. 78, 491-501 (2004).</li>
<li>Date, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genotype+2a+hepatitis+C+virus+subgenomic+replicon+can+replicate+in+HepG2+and+IMY-N9+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Genotype 2a hepatitis C virus subgenomic replicon can replicate in HepG2 and IMY-N9 cells.</a> J. Biol. Chem. 279, 22371-22376 (2004).</li>
<li>Chang, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+of+hepatitis+C+virus+%28HCV%29+RNA+in+mouse+embryonic+fibroblasts%3A+protein+kinase+R+%28PKR%29-dependent+and+PKR-independent+mechanisms+for+controlling+HCV+RNA+replication+and+mediating+interferon+activities%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Replication of hepatitis C virus (HCV) RNA in mouse embryonic fibroblasts: protein kinase R (PKR)-dependent and PKR-independent mechanisms for controlling HCV RNA replication and mediating interferon activities.</a> J. Virol. 80, 7364-7374 (2006).</li>
<li>Zhong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+hepatitis+C+virus+infection+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Robust hepatitis C virus infection in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 9294-9299 (2005).</li>
<li>Lindenbach, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+replication+of+hepatitis+C+virus+in+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Complete replication of hepatitis C virus in cell culture.</a> Science. 309, 623-626 (2005).</li>
<li>Wakita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+infectious+hepatitis+C+virus+in+tissue+culture+from+a+cloned+viral+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Production of infectious hepatitis C virus in tissue culture from a cloned viral genome.</a> Nat. Med. 11, 791-796 (2005).</li>
<li>Witteveldt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD81+is+dispensable+for+hepatitis+C+virus+cell-to-cell+transmission+in+hepatoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">CD81 is dispensable for hepatitis C virus cell-to-cell transmission in hepatoma cells.</a> J. Gen. Virol. 90, 48-58 (2009).</li>
<li>Bitzegeio, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+hepatitis+C+virus+to+mouse+CD81+permits+infection+of+mouse+cells+in+the+absence+of+human+entry+factors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Adaptation of hepatitis C virus to mouse CD81 permits infection of mouse cells in the absence of human entry factors.</a> PLoS Pathog. 6, e1000978(2010).</li>
<li>Lindemann, D., Goepfert, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+foamy+virus+envelope+glycoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">The foamy virus envelope glycoproteins.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 277, 111-129 (2003).</li>
<li>Brohm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+determinants+important+for+hepatitis+C+virus+p7+function+in+morphogenesis+by+using+trans-complementation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of determinants important for hepatitis C virus p7 function in morphogenesis by using trans-complementation.</a> J. Virol. 83, 11682-11693 (2009).</li>
<li>Steinmann, E., Brohm, C., Kallis, S., Bartenschlager, R., Pietschmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+trans-encapsidation+of+hepatitis+C+virus+RNAs+into+infectious+virus-like+particles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Efficient trans-encapsidation of hepatitis C virus RNAs into infectious virus-like particles.</a> J. Virol. 82, 7034-7046 (2008).</li>
<li>Koutsoudakis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+early+steps+of+hepatitis+C+virus+infection+by+using+luciferase+reporter+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the early steps of hepatitis C virus infection by using luciferase reporter viruses.</a> J. Virol. 80, 5308-5320 (2006).</li>
<li>Frentzen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Completion+of+hepatitis+C+virus+replication+cycle+in+heterokaryons+excludes+dominant+restrictions+in+human+non-liver+and+mouse+liver+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Completion of hepatitis C virus replication cycle in heterokaryons excludes dominant restrictions in human non-liver and mouse liver cell lines.</a> PLoS Pathog. 7, e1002029(2011).</li>
<li>Lindemann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+particle-associated+glycoprotein+signal+peptide+essential+for+virus+maturation+and+infectivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">A particle-associated glycoprotein signal peptide essential for virus maturation and infectivity.</a> J. Virol. 75, 5762-5771 (2001).</li>
<li>Blight, K. J., McKeating, J. A., Rice, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+permissive+cell+lines+for+subgenomic+and+genomic+hepatitis+C+virus+RNA+replication%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Highly permissive cell lines for subgenomic and genomic hepatitis C virus RNA replication.</a> J. Virol. 76, 13001-13014 (2002).</li>
</ol>

TPはバイオテストから顧問料を受け取った。

我々は、HCVの複製を妨げるドミナントネガティブ制約の分析のために培養細胞におけるヘテロカリオンの形成を誘導する2つのメソッドを紹介します。これらの手順を使用して様々なヒト非肝臓およびマウス肝臓細胞株における支配的な恒常的に発現またはウイルス誘発因子の存在を除外した。制限要因は感染症の子孫のHCVアセンブリと放出を防止する場合、最初のアッセイでは、主に分析しています。このケースではパッケージング細胞はHCVレプリコン細胞に融合されているので、パッケージング細胞で発現可能な制限要因は、すでにウイルスRNAの高い負荷を持っている細胞の細胞質へのアクセスを取得します。したがって、ウイルスRNAの翻訳がなされたもので、多くの生産的なHCV複製複合体は、HCVの翻訳およびRNA複製の可能性の制限を検出するためのチャンスを減らすため、確立されている。実際には、これらの細胞におけるレプリコンRNAの高負荷は、その身分を示す証明を妨げる可能性があり、また、HCVアセンブリおよび/またはウイルス因子によって飽和によるリリースのための制限要因の検出を妨げる可能性があります。この制限を回避するために、我々はHCVの細胞のエントリのみがヘテロカリオンで ​​達...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td>インビトロジェン社、カールスルーエ、ドイツ</td><td> 41965-039 </td></tr><tr><td> L-グルタミン酸</td><td>インビトロジェン社、カールスルーエ、ドイツ</td><td> 25030-024 </td></tr><tr><td>非必須アミノ酸</td><td>インビトロジェン社、カールスルーエ、ドイツ</td><td> 11140-035 </td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>インビトロジェン社、カールスルーエ、ドイツ</td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td>ウシ胎仔血清</td><td> PAA、コルベ、ドイツ</td><td> A15151 </td></tr><tr><td> α-E2（CBH23） </td><td>親切にスティーブンFoung 10が提供する</td><td></td></tr><tr><td> ATP </td><td>シグマ、シュタインハイム、ドイツ</td><td> A2833-106 </td></tr><tr><td>グルタチオン</td><td>シグマ、シュタインハイム、ドイツ</td><td&gt; G4251-1G </td></tr><tr><td>ブラストサイジン</td><td> Invivoゲン、サンディエゴ、アメリカ合衆国</td><td> ANT-BL-1 </td></tr><tr><td> G418（ゲネチシン） </td><td>インビトロジェン社、カールスルーエ、ドイツ</td><td> 11811-064 </td></tr><tr><td>ポリエチレングリコール-1500 </td><td>ロシュ、マンハイム、ドイツ</td><td> 10783641001 </td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>ロス、カールスルーエ、ドイツ</td><td> 0335.3 </td></tr><tr><td>トリトンX-100 </td><td>ロス、カールスルーエ、ドイツ</td><td> 3051.2 </td></tr><tr><td>ヤギ血清</td><td>シグマ、シュタインハイム、ドイツ</td><td> G9023-5mLの</td></tr><tr><td> α-NS5A（9E10） </td><td>親切にチャールズ·ライス7が提供する</td><td></td></tr><tr><td> DAPI（4 &#39;、6&#39;-ジアミジノ-2 - フェニルインドール二塩酸塩） </td><td>インビトロジェン</td><td> D1306 </td></tr><tr><td>アレクサ·弗素546 - ヤギ抗ヒトIgG </td><td>インビトロジェン社、カールスルーエ、ドイツ</td><td> A21089 </tD&gt; </tr><tr><td>アレクサ·弗素488 - ヤギ抗マウスIgG </td><td>インビトロジェン社、カールスルーエ、ドイツ</td><td> A10680 </td></tr><tr><td>リポフェクタミン2000 </td><td>インビトロジェン社、カールスルーエ、ドイツ</td><td> 11668-019 </td></tr><tr><td> CellTracker CMTMR </td><td>インビトロジェン社、カールスルーエ、ドイツ</td><td> C2927 </td></tr><tr><td> CellTracker CMFDA </td><td>インビトロジェン社、カールスルーエ、ドイツ</td><td> C2925 </td></tr><tr><td> Fluoromount </td><td>シグマ、シュタインハイム、ドイツ</td><td> F4680-25ML </td></tr><tr><td>他のすべての化学物質</td><td>ロス、カールスルーエ、ドイツ</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養材料</td><td>ザルスタット、Nümbrecht、ドイツ</td><td></td></tr></tbody></table>

hcvの制限要因を発見するヘテロカリオンの形成の2つの方法

Two Methods of Heterokaryon Formation to Discover HCV Restriction Factors

C型肝炎ウイルス（HCV）は、ヒトとチンパンジーに制限宿主域を持つ肝炎ウイルスです。 HCV RNAの複製は、人間の非肝臓およびマウス細胞株で観察されているが、効率が非常に低く、HCVレプリコンを使用して、必要な長期的な選定方法については支配的な抗生物質選択マーカー1-5を発現して構築します。 in vitroでの研究で HCVしたがって、ウイルスのライフサイクルのウイルスのエントリと終了を許容するヒト肝癌細胞株に限定されています。狭い種の指向性をHCVsのため、完全なHCV複製サイクル6-8を維持使用可能な免疫小動物モデルは存在しません。マウス由来の例えば、非ヒト細胞中のHCVの非効率的な複製は、おそらく本質的なホストの依存因子および/または制限因子の発現の遺伝的不和合性の欠如によるものである。 我々はHCVの伝播が支配的な制限FAによって抑制されるかどうかを調べた非肝組織から、またはマウスの肝臓細胞株の由来のヒト細胞株のいずれかでctors。この目的のために、我々は、体細胞融合に頼るつの独立した条件付きのトランス相補方法を開発した。両方のケースでは、ウイルス複製サイクルの完了は、ヘテロカリオンでのみ可能です。その結果、感染性のウイルス子孫の de novoの生産を測定することによって決定される成功したトランス相補性は、支配的な制限がないことを示します。 具体的には、ルシフェラーゼ遺伝子を運ぶサブゲノムHCVレプリコンは非常に寛容なヒト肝癌細胞（ホ-7.5細胞）にトランスフェクトした。その後、これらの細胞は共培養し、HCV構造タンパク質コア、エンベロープ1および2（E1、E2）とアクセサリータンパク質P7とNS2を表現する種々のヒトおよびマウス細胞に融合させた。細胞融合は、ポリエチレングリコール（PEG）で処理することにより開始されている限り、文化は、感染性ウイルスのPAを発表受容体に依存する形でナイーブ細胞に感染rticles。 セルのエントリ、RNAの翻訳、複製およびウイルスのアセンブリを含む完全なウイルスのライフサイクル上の支配的な制限の影響を評価するために、我々は、CD81の内因性発現を欠いているヒト肝細胞株（ホ- 7 Lunet N細胞9）を利用したHCVの本質的な侵入因子。異所的に発現CD81の欠如では、これらの細胞は、HCV感染症の10〜本質的に難治性である。重要なのは、共培養し、少なくとも別の重要な細胞侵入因子（すなわち、SR-BI、CLDN1、OCLN）ヒトCD81が不足して発現する細胞と融合させたときにのみ、結果としてヘテロカリオンは、感染症のために必要なHCVエントリー因子の完全なセットを表示します。したがって、主要な制限因子はHCVの複製サイクルの完了を抑制するかどうかを分析するために、我々は、上記のcritを満たすヒトとマウスの原点からの様々な細胞でLunet N個の細胞を融合ERIA。共培養細胞は、プロトタイプの泡沫状ウイルスの変異性の高い融合ウイルスエンベロープタンパク質（PFV 11）でトランスフェクトし、その後、感染性HCV粒子（HCVcc）でチャレンジしたときに、感染性ウイルスの de novo生産が観察された。これは、HCVが成功し、これらの細胞株における主要な制限因子の発現を除外ヘテロカリオンでのレプリケーションサイクルを完了したことを示します。これらの新しい条件付きトランス相補方法は、HCV特有の主要な制限因子の発現のための細胞株および初代培養細胞の大型パネルをスクリーニングに有用であろう。

我々は、条件は、次の2つの方法について説明します。<em&gt;トランス</em&gt;-相補性C型肝炎ウイルス（HCV）は、アセンブリとヘテロカリオンの形成に依存している完全なウイルスのライフサイクルの完了。これらの技術は、感染性HCV子孫の生産を妨げる主要な制限因子を発現する細胞系の画面に適しています。

HCVの制限要因を発見するヘテロカリオンの形成の2つの方法

C型肝炎ウイルス（HCV）は、宿主範囲がヒトおよびチンパンジーに限定された肝親和性ウイルスである。HCV RNAの複製は……で観察されているが、

本手順の目的は、heca形成に依存する2つの手法を用いて、任意の細胞株におけるC型肝炎ウイルス（HCV）複製サイクルの完了に対する制限因子の影響を調査することです。まず、ヒト肝細胞ならびにHeal AおよびHep 56 1Dパッケージング細胞を培養します。次に、エレクトロポレーションによりC型肝炎ウイルスまたはHCV RNAを肝細胞に導入します。その後、2番目の融合法として、ポリエチレングリコールを用いてHCV複製細胞株をそれぞれのパッケージング細胞株に融合させます。最初のステップは、高タイターのHCVストックを調製することです。その後、異なる細胞株を共培養し、プロトタイプフォーム状ウイルス糖タンパク質をトランスフェクションして細胞融合を誘導します。次に、これらのヘテロカリオンにHCVを感染させます。どちらのヘテロカリオン形成方法においても、蛍光顕微鏡観察により融合を確認し、感染性粒子の産生量を定量します。この手法の主な利点は、HV特異的なドミナント制限因子の発現について、多くの細胞株および初代細胞のパネルをスクリーニングするのに有用であることです。この方法は、HCVの種特異性とゲノムに関する重要な疑問を解決するのに役立ちます。ポリエチレングリコールによる細胞融合を誘導する前に、2つの融合システムの基礎となる概念を理解しやすくするためには、この方法を視覚的に実演することが極めて重要です。HUH 7.5細胞に標準的なプロトコルに従ってHCV RNAをトランスフェクトし、37 °C、5% CO₂条件下で24時間培養します。翌日、サブゲノムレプリコンを保持するトランスフェクト済みHUH 7.5細胞、およびHuhR細胞とHep56.1Dパッキング細胞を回収します。これらのパッキング細胞は、HCVタンパク質のcore、E1、E2、p7、およびNS2を異所性に発現するように構築されています。トリプシン処理後、細胞をDMEM完全培地で再懸濁し、細胞懸濁液を以下の濃度に希釈します。HUH 7.5細胞は5 × 10⁵ cells/mL、HuhRおよびHep56.1D細胞は2 × 10⁵ cells/mLとします。次に、各ウェルに2〜3枚の滅菌済みガラスカバースリップを入れた6ウェル培養プレートを用意します。融合効率をさらに分析するため、トランスフェクションしたHUH 7.5細胞1 mLとパッケージング細胞1 mLを混合し、6ウェルプレートの1つのウェルに播種して、37 °C、5% carbon dioxideの条件下で24時間インキュベートします。24時間後、細胞密度を確認してください。細胞膜が融合するために細胞同士が近接している必要があるため、細胞融合を誘導する前の細胞密度は、共培養において60～80%のコンフルエンシーである必要があります。共培養細胞から培地を吸引し、1

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JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

細胞タイプ特異的タンパク質の局在化の特性評価と核細胞質間輸送のための柔軟かつ効率的な方法が記載されている。このヘテロカリオンのアプローチは、細胞融合後の画像の蛋白質のローカリゼーションへの蛍光標識融合タンパク質を使用しています。プロトコルは、定常状態の局在やライブセルイメージングに基づいて、より動的な決定に適している。...

細胞種特異的局在の解析のためのヘテロカリオンのテクニック

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates an immunofluorescence-based method to detect Hepatitis C virus replication in infected hepatoma cells. The protocol involves cell fixation, antibody staining for viral protein and double-stranded RNA, and visualization using fluorophore-tagged secondary antibodies. Dual signal detection under a fluorescence microscope confirms active viral replication within the host cells.

Immunofluorescence Assay to Detect Hepatitis C Virus Replication Complexes in Infected Cells

C型肝炎ウイルス(HCV)は、肝硬変や癌を含む肝障害を引き起こす主要なヒト病原体です。HCV感染性細胞培養システムは、HCV複製の分子メカニズムを理解し、新しい治療法を開発するために不可欠です。ここでは、HCV複製サイクルのさまざまな段階を調査するためのプロトコルについて説明します。...

C型肝炎ウイルスの複製を分析するためのプロトコル

HIV-1の病因は、ウイルスの特性と宿主の遺伝的要因の両方によって定義されます。ここでは、gag遺伝子配列の変異がウイルスのin...

評価するために制限酵素ベースのクローニング方法<em&gt;インビトロ</em&gt; HIV-1サブタイプC Gag特異MJ4キメラウイルスの複製能力

ここでは、HBVのライフサイクルの初期段階をモニターするために新たに開発されたB型肝炎ウイルス（HBV）レポーター系を記載します。 インビトロ系簡略化これは、高スループットの戦略を用いて、抗HBV薬のスクリーニングに役立ちます。...

複製サイクルの初期段階を監視するためにB型肝炎ウイルスのレポーターシステムの開発

脂肪滴は、C型肝炎ウイルス（HCV）を含むいくつかの病原体の複製のための重要な器官です。我々は、関連するタンパク質の定量的な質量分析のための脂質滴を単離する方法を記載します。そのようなウイルス感染、環境ストレス、または薬物治療などの条件の様々な環境下で使用することができます。...

定量的質量分析のための脂肪滴の分離

我々 はここで B 型肝炎ウイルス感染システムを介して HBV DNA の体外生成を記述して、逆行列を用いて、(1-2 コピー) 統合の高感度検出に PCR...

低コピーの検出数は B 型肝炎感染培養によって形成された統合ウイルス DNA

ここでは、スプリットルシフェラーゼアッセイ系を用いてHBx-DDB1相互作用を阻害する抗肝炎ウイルス剤をスクリーニングする方法を提示する。このシステムはタンパク質間相互作用の容易な検出を可能にし、そのような相互作用の阻害剤を同定するのに適している。...

スプリットルシフェラーゼアッセイ系を用いたHBx-DDB1相互作用の同定阻害剤

本稿では、新たに設計された293T細胞(293T-NE-3RS、ヒトNTCP、HNF4α、RXRαおよびPPARα)および伝統的な肝細胞(HepG2-NE、ヒトNTCPを発現する)におけるB型肝炎ウイルス(HBV)感染の詳細なプロトコルについて説明する。...

非肝細胞293T-NE-3NRs細胞におけるB型肝炎ウイルス感染のモデル化

プロトコルは間違いが傾向があるPCRおよび逆の遺伝学を使用して完全長の突然変異体のRNAの統合の結合によって肝炎のウイルスのゲノムの制御可能な遺伝の多様性をもたらすための方法を記述する。この方法は、表現型選択のモデルを提供し、長さ10...

ポジティブセンスRNAウイルス変異体を改変するためのリバースジェネティクス

等温滴定熱量測定を使用して、ウイルス侵入前後のライフサイクル段階を標的とする抗B型肝炎ウイルス(HBV)化合物をスクリーニングするためのプロトコルを提示し、宿主タウロコール酸ナトリウム共輸送ポリペプチドとの結合親和性(KD)を測定します。抗ウイルス効果は、ウイルスライフサイクルマーカー(cccDNA形成、転写、およびウイルス集合)の抑制によって決定されました。...

治療標的としてのタウロコール酸ナトリウム共輸送ポリペプチドを介したB型肝炎ウイルス侵入を調べるコンピテント肝細胞モデル

学ぶHCV制限要因の探索法。ヘテロカリオン形成を用いて2つの細胞融合技術で、感染性ウイルス産生を阻害する優性制限要因を発見し、HCV複製サイクル完了への影響を解析します。

HCVの制限要因を発見するヘテロカリオンの形成の2つの方法

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