Name: ヒト細胞から分泌タンパク質の生産のための便利で一般式プラットフォーム (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 9 s
Description: 学ぶ、HEK293T細胞を用いた分泌タンパク質発現の効率的な手法。ウェスタンブロットで検出し、10層セルファクトリーでスケールアップ可能なコスト効率の良いプラットフォームです。

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この作品は、JEL、およびHA、FCA、とJDCのトロントフェローシップの大学にオンタリオ州のHIV治療ネットワーク研究オペレーティング·グラント（ROG-G645）と保健研究の新しい奨励賞のカナダ研究所（MSH-113554）でサポートされていました。著者らは、細胞を提供するためのスクリップス研究所（カリフォルニア州ラホーヤ）、エボラウイルスGPの発現ベクターと一般的なアドバイスでマーニーフスコ、Dafnaアベルソン博士とエリカOllmannサファイアに感謝します。

<ol><li>Celik, E., Calik, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+recombinant+proteins+by+yeast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Adv%22%5BJournal%5D)">Production of recombinant proteins by yeast cells.</a> Biotechnol. Adv. , (2011).</li>
<li>Yokoyama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+expression+systems+for+structural+genomics+and+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Protein expression systems for structural genomics and proteomics.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 7, 39-43 (2003).</li>
<li>Nettleship, J. E., Assenberg, R., Diprose, J. M., Rahman-Huq, N., Owens, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+production+of+proteins+in+insect+and+mammalian+cells+for+structural+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Struct.+Biol%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the production of proteins in insect and mammalian cells for structural biology.</a> J. Struct. Biol. 172, 55-65 (2010).</li>
<li>Carlson, E. D., Gan, R., Hodgman, C. E., Jewett, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+protein+synthesis%3A+Applications+come+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Adv%22%5BJournal%5D)">Cell-free protein synthesis: Applications come of age.</a> Biotechnol. Adv. , (2011).</li>
<li>Lee, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+the+Ebola+virus+glycoprotein+bound+to+an+antibody+from+a+human+survivor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structure of the Ebola virus glycoprotein bound to an antibody from a human survivor.</a> Nature. 454, 177-182 (2008).</li>
<li>Bowden, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+Nipah+and+Hendra+virus+attachment+to+their+cell-surface+receptor+ephrin-B2%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Struct.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Structural basis of Nipah and Hendra virus attachment to their cell-surface receptor ephrin-B2.</a> Nat. Struct. Mol. Biol. 15, 567-572 (2008).</li>
<li>Evans, M. J., Hartman, S. L., Wolff, D. W., Rollins, S. A., Squinto, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+expression+of+an+anti-human+C5+chimeric+Fab+utilizing+a+vector+that+replicates+in+COS+and+293+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid expression of an anti-human C5 chimeric Fab utilizing a vector that replicates in COS and 293 cells.</a> J. Immunol. Methods. 184, 123-138 (1995).</li>
<li>Ye, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-level+protein+expression+in+scalable+CHO+transient+transfection%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">High-level protein expression in scalable CHO transient transfection.</a> Biotechnol. Bioeng. 103, 542-551 (2009).</li>
<li>Wurm, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+recombinant+protein+therapeutics+in+cultivated+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Production of recombinant protein therapeutics in cultivated mammalian cells.</a> Nat Biotechnol. 22, 1393-1398 (2004).</li>
<li>Lee, J. E., Fusco, M. H., Hessell, A. J., Burton, D. R., Saphire, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+and+tactics+used+in+determining+the+structure+of+trimeric%2C+prefusion+Ebola+virus+GP%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cryst%22%5BJournal%5D)">Techniques and tactics used in determining the structure of trimeric, prefusion Ebola virus GP.</a> Acta Cryst. 65, 1162-1180 (2009).</li>
<li>Aricescu, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eukaryotic+expression%3A+developments+for+structural+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Crystallogr.+D+Biol.+Crystallogr%22%5BJournal%5D)">Eukaryotic expression: developments for structural proteomics.</a> Acta. Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 62, 1114-1124 (2006).</li>
<li>Aricescu, A. R., Lu, W., Jones, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+time-+and+cost-efficient+system+for+high-level+protein+production+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Crystallogr.+D+Biol.+Crystallogr%22%5BJournal%5D)">A time- and cost-efficient system for high-level protein production in mammalian cells.</a> Acta. Crystallogr. D Biol. Crystallogr. D62, 1243-1250 (2006).</li>
<li>Chang, V. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycoprotein+structural+genomics%3A+solving+the+glycosylation+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Structure%22%5BJournal%5D)">Glycoprotein structural genomics: solving the glycosylation problem.</a> Structure. 15, 267-273 (2007).</li>
<li>Lee, J. E., Fusco, M. H., Saphire, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+platform+for+screening+expression+and+crystallization+of+glycoproteins+produced+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">An efficient platform for screening expression and crystallization of glycoproteins produced in human cells.</a> Nature Protocols. 4, 592-604 (2009).</li>
<li>Nettleship, J. E., Rahman-Huq, N., Owens, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+glycoproteins+by+transient+expression+in+Mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The production of glycoproteins by transient expression in Mammalian cells.</a> Methods Mol. Biol. 498, 245-263 (2009).</li>
<li>Neil, S. J., Zang, T., Bieniasz, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetherin+inhibits+retrovirus+release+and+is+antagonized+by+HIV-1+Vpu%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tetherin inhibits retrovirus release and is antagonized by HIV-1 Vpu.</a> Nature. 451, 425-430 (2008).</li>
<li>Nakamura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterodimerization+of+the+IL-2+receptor+beta-+and+gamma-chain+cytoplasmic+domains+is+required+for+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Heterodimerization of the IL-2 receptor beta- and gamma-chain cytoplasmic domains is required for signalling.</a> Nature. 369, 330-333 (1994).</li>
<li>Wang, X., Rickert, M., Garcia, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+the+quaternary+complex+of+interleukin-2+with+its+alpha%2C+beta%2C+and+gammac+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Structure of the quaternary complex of interleukin-2 with its alpha, beta, and gammac receptors.</a> Science. 310, 1159-1163 (2005).</li>
</ol>

利害の衝突が宣言されません。

10層の細胞の工場は、蛋白質のミリグラム量の生産のための効果的な容器です。このようなローラーボトル、振盪フラスコまたはスピナーフラスコのような他の伝統的な船、上のセルファクトリを使用する主な利点は、追加の実験装置を購入する必要がないということです。標準的なCO 2インキュベーター（〜6.0立方フィート）は、簡単に4つの10層の細胞工場（ 図2）を収容します。さらに、これらの血管は細胞やタンパク質を生成するためにディッシュ、フラスコ、ローラーボトルより少ない労働力やスペースを必要とします。1つの10層の細胞の工場は、7.5正規のローラーボトル（ 表1）の使用と同等です。さらに重要なことは、HEK 293T細胞は、血管内にうまく適応するため、市販のトランスフェクション試薬に低コストで効果的なオプションを提供し、PEIによる一過性トランスフェクションに非常に適している。セル工場は使い捨ての細胞培養プラスチック容器になるように設計されていますが、我々は、bを持っているしたがって、大幅に使用当たりのコストを削減し、汚染問題なく複数回これらの血管を効率的に清...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td>コメント</td></tr><tr><td>アルカリホスファターゼ（BCIP / NBT）液体基質溶液</td><td>シグマ</td><td> B6404 </td><td></td></tr><tr><td>抗生物質/抗真菌剤、100X </td><td>インビトロジェン</td><td> 15240062 </td><td></td></tr><tr><td>抗HAアフィニティマトリックス、クローン3F10 </td><td>ロシュ社</td><td> 1815016 </td><td></td></tr><tr><td>抗HAマウスmAb、クローン16B12 </td><td> Covance </td><td> MMS-101P </td><td></td></tr><tr><td>細胞培養フラスコ、処理されたT75 cm 2の組織培養</td><td>コー​​ニング</td><td> 430641 </td><td></td></tr><tr><td>細胞培養フラスコ、処理されたT225 cm 2の組織培養</td><td>コー​​ニング</td><td> 431082 </td><td></td></tr><tr><td>治療-1,6 - ウェル組織培養細胞培養プレート</td><td>コー​​ニング</td><td> 3516 </td><td></td></tr><tr><td>セルファクトリ、10層のCellSTACK </td><td>コー​​ニング</td><td> 3312 </td><td></td></tr><tr><td>セントラオメガ5Kカセット</td><td>ポール</td><td> OS005C12 </td><td></td></tr><tr><td>セントラオメガ30Kカセット</td><td>ポール</td><td> OS030C12 </td><td></td></tr><tr><td>クロマトグラフィーガラスカラム、1.0×10センチメートル</td><td> Kontes </td><td> 4204001010 </td><td></td></tr><tr><td>シプロフロキサシン</td><td>シグマ</td><td> 17850 </td><td></td></tr><tr><td> CO 2 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM） </td><td>シグマ</td><td> D5796 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清（FBS）、不活化熱</td><td>インビトロジェン</td><td> 12484-028 </td><td></td></tr><tr><td>トランスフェHDトランスフェクション試薬</td><td>プロメガ</td><td> 4709691001 </td><td></td></tr><tr><td> GeneJuiceトランスフェクション試薬</td><td> EMD /メルク</td><td> 70967から6 </td><td></td></tr><tr><td>グリシン</td><td>シグマ</td><td> G8898 </td><td></td></tr><tr><td>ヤギ抗マウスIgG F（ab &#39;）2をアルカリ性</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td> 31324 </td><td></td></tr><tr><td>ホスファターゼ標識抗体</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ヘマグルチニン（HA）ペプチド、100 mgの</td><td> Genscript </td><td>カスタム合成</td><td></td></tr><tr><td> （シーケンス：YPYDVPDYA 95％純度） </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> HEK 293T細胞</td><td> ATCC </td><td> CRL-11268 </td><td></td></tr><tr><td> HouseholD漂白剤（4％w / vの次亜塩素酸ナトリウム） </td><td>様々なブランドが利用可能です</td><td></td><td></td></tr><tr><td>イモビロン-P PVDF膜</td><td>ミリポア</td><td> IPVH07850 </td><td></td></tr><tr><td>ミニプレップのプラスミド精製キット、PureLinkクイック</td><td>インビトロジェン</td><td> K2100-11 </td><td></td></tr><tr><td> MaxiPrepプラスミド精製キットPureLink HiPure </td><td>インビトロジェン</td><td> K2100-07 </td><td></td></tr><tr><td> NaN 3を </td><td>シグマ</td><td> S8032 </td><td></td></tr><tr><td> pDISPLAY発現ベクター</td><td>インビトロジェン</td><td> V660-20 </td><td></td></tr><tr><td> 100Xペニシリン/ストレプトマイシン（ペン/連鎖球菌） </td><td>インビトロジェン</td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水（PBS）、滅菌1X </td><td>シグマ</td><td> D8537 </td><td></td></tr><tr><td>ポリエチレンイミン（PEI）、線形25kDaの</td><td> Polyscience </td><td> 23966 </td><td></td></tr><tr><td>ミルク乾燥粉末をすくい取る</td><td>カーネーション</td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stericup-GP PES真空ろ過装置、 </td><td>ミリポア</td><td> SCGPU05RE </td><td></td></tr><tr><td> 0.22μmの、500mlの容量</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>トリパンブルー</td><td>インビトロジェン</td><td> 15250061 </td><td></td></tr><tr><td>トリプシン-EDTA、0.05％（w / v）の</td><td>インビトロジェン</td><td> 25300-054 </td><td></td></tr><tr><td> Tween-20を</td><td>シグマ</td><td> P7949 </td><td></td></tr><tr><td>バルプロ酸</td><td>シグマ</td><td> P4543 </td><td></td></tr><tr><td>タンジェンシャルフローシステムセントラ</td><td>ポール</td><td></td><td></td></tr><tr><td> CO 2の加湿インキュベーター、標準6.0立方。フィート</td><td>様々なブランドが利用可能です</td><td></td><td></td></tr><tr><td>電気泳動およびトランスファーユニット</td><td>様々なブランドが利用可能です</td><td></td><td></td></tr><tr><td>インキュベーター、37°C </td><td>様々なブランドが利用可能です</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ヒト細胞から分泌タンパク質の生産のための便利で一般式プラットフォーム

A Convenient and General Expression Platform for the Production of Secreted Proteins from Human Cells

細菌における組換えタンパク質の発現、一般的にE.大腸菌は 、蛋白質のミリグラム量の発現のための最も成功した戦略であった。しかし、原核生物宿主は、多くの人間は、ウイルスまたは真核生物の外国の高分子の毒性に起因するタンパク質、タンパク質の折り畳み機構の違い、または特定のCO-または細菌の翻訳後修飾の不足のための発現に応じてではありません。酵母（P.パストリスもしくはS.セレビシエ ）1,2、バキュロウイルス感染昆虫（S. frugiperdaまたは T NI）セル3、 および in vitro翻訳システムにおいて 、無細胞に基づく発現系は、2,4は正常にするために使用されている哺乳動物のタンパク質を生成します。直感的に、ベストマッチは、適切な翻訳後修飾を含む組換えタンパク質の生産を確保するために哺乳動物宿主を使用することです。哺乳動物細胞株の数（ヒト胚キッドネイ（HEK）S V40 larget T-抗原（COS）、チャイニーズハムスター卵巣（CHO）などを運ぶO riginで293、C V-1細胞）は、正常ヒトタンパク質の数ミリグラムの量を過剰発現するように利用されてきた5-9しかし、哺乳動物細胞を使用することの利点は、多くの場合、安定発現細胞株を開発するコストが高く、特殊な実験装置の要件は、低タンパク質の収量と、長い時間によって打ち消されています。コストを低く維持しながら、より高速な収率と生産するタンパク質を増加し、多くの学術的、商業的な研究所の主要な要因である。 ここでは、時間とコスト効率に優れ、接着HEK 293T細胞から分泌されるヒトタンパ​​ク質の発現のための2つの部分から成る手順を説明します。このシステムは、構造生物物理学的および生化学的研究のために機能的な蛋白質のミリグラム量にグラムを生産することが可能です。最初の部分は、目的の遺伝子の複数の構文が生成さです。並行して一時的に小さなスケールの付着HEK 293T細胞にトランスフェクションのd。細胞培養培地中に分泌された組換えタンパク質の検出および分析は、ベクトルでエンコードされたタンパク質精製タグに対する市販の抗体を用いたウェスタンブロット分析によって実行されます。その後、大規模なタンパク質の生産に適したコンストラクトを一過性に10層の細胞工場でポリエチレンイミン（PEI）を用いてトランスフェクトされる。馴化培地リットルボリュームに分泌されるタンパク質は、抗-HAアフィニティークロマトグラフィーによって精製してタンジェンシャルフローろ過を使用して、管理しやすい量に集中している。このプラットフォームのユーティリティは、サイトカイン、サイトカイン受容体、細胞表面受容体、本質的な制限要因、およびウイルスの糖蛋白質のミリグラム量を表現する能力によって証明されています。このメソッドは、成功した三量体エボラウイルス糖タンパク質5,10の構造決定で使用されています。 2インキュベーター以外の追加の機器は、必要ありません。この手順は、急速にそのようなタンパク質複合体、抗原と抗体、ワクチン、または困難な細胞株の形質導入のためのアデノウイルスまたはレンチウイルスの生産のためのウイルス様粒子の生産の共発現として、より複雑なシステムに拡張することができます。

ポストヒトゲノム時代において、ネイティブコンフォメーションにおける組換えタンパク質の可用性は、構造、機能および治療の研究開発に不可欠である。ここでは、テストと組換えタンパク質のさまざまなを生成するために使用することができるヒト胚性腎臓293T細胞における大規模タンパク質発現系を記述します。

細菌（通常はE. coli）を用いた組換えタンパク質発現は、ミリグラム量のタンパク質を発現させるための最も成功した戦略となってきました。

このビデオでは、HEK 293T細胞を用いた分泌タンパク質の発現における、時間とコストを効率化した手順について説明します。まず、6ウェルプレートで40%コンフルエントのHEK 293T細胞培養液を準備します。次に、無血清培地でGeneJuiceとテスト用プラスミドを希釈し、トランスフェクション混合液を作成します。トランスフェクション混合物を細胞に添加し、37 °Cでインキュベートしてタンパク質を発現させます。上清中のタンパク質の検出は、ウェスタンブロッティングにより行うことができます。適切なコンストラクトが特定されたら、10層セルファクトリーを用いて手順をスケールアップすることが可能です。PEIをトランスフェクション試薬として用いて細胞にトランスフェクションを行います。タンパク質は、タンジェンシャルフローろ過に続きアフィニティークロマトグラフィーを行うことで、培養上清から回収できます。最終的に、このプラットフォームにより、広範囲のマクロ分子をミリグラム量で発現させることが可能になります。バクロウイルスを用いた昆虫細胞発現などの既存手法に対する本手法の主な利点は、多数のコンストラクトをスクリーニングし、発現に向けてスケールアップさせることができ、わずか3週間で結果が得られる点にあります。この手順の実演は、私の研究室の大学院生3名であるHello Aiden、Shada Zini、Jonathan Cookが行います。まず、6ウェルプレートの各ウェルに1 mLの容量で250,000個のHEK 293T細胞を播種します。次に、10% FBSとペプチドを添加したDMEMを各ウェルに1 mLずつ加え、プレートを揺らして細胞を均一に分散させます。その後、細胞を37 °Cの5%二酸化炭素加湿インキュベーターで一晩培養します。細胞のコンフルエンシーが約40%に達したら、SUP natumを2 mLの新鮮な培地に交換し、トランスフェクション混合液を調製します。まず、エンドルフチューブに90 µLの無血清DMEMを分注します。次に、3 µLのトランスフェクション試薬であるgene juiceを加え、チューブの内容物を穏やかに混ぜて、室温で5分間インキュベートします。続いて、トランスフェクションに用いる、100 ng/µLストックのmini-prep精製プラスミドDNAを10 µL加えます。チューブの内容物を混ぜ合わせ、室温で15分間静置します。トランスフェクションを行うため、混合液をHEC 2 9 3 T細胞に滴下します。プレートをゆっくりと揺らしながら1滴ずつ滴下し、トランスフェクション混合液を均一に分散させてください。その後、細胞を37°Cでインキュベートします。24時間後、各ウェルに1 mLの新鮮な培地を加え、さらに48時間インキュベートします。トランスフェクションの3日後に上清を回収し、ウェスタンブロッティングにより目的タンパク質の発現レベルを検出します。適切なコンストラクトが特定されたら、トランスフェクションの手順をスケールアップできます。10層のセルファクトリーを使用し、5% FBSを添加したDMEM 1.2リットルをセルファクトリーに満たします。次に、2億個のHEK 293T細胞を、すべての層に均等に分散させて加えます。100%コンフルエントまで増殖させた225 cm²のTフラスコ4本には、約2億個の細胞が含まれています。細胞を37 °Cで一晩インキュベートします。840 µgのDNAを84 mLの滅菌1×PBSで希釈し、T 75フラスコ内でトランスフェクション混合液を調製します。1 mg/mLのポリエチレンイミン（PEI）溶液を2.5 milliliters加え、混合液を室温で15分間インキュベートします。溶液は濁った状態になります。次に、トランスフェクション混合液をセルファクトリーにゆっくりと注ぎ、全体に均一に分散させます。全体の層。最終濃度が 4 mM になるようにバルプロ酸を添加します。これにより、トランスフェクション混合物の添加後、発現量が向上します。タンパク質を発現させるため、培養物を37°Cで4日間インキュベートします。トランスフェクションの4日後に培地を回収し、すぐにセルファクトリーを洗浄して再利用できるようにします。回収した培地を4°Cで6,000 G、30分間遠心分離し、0.22 µmのステリックカップ真空ろ過装置でろ過して粒子状物質を除去します。次に、CentraMateタンジェンシャルフローろ過システムを使用して、上清を75 mLまで濃縮します。上清を濃縮した後、アフィニティークロマトグラフィーによって目的タンパク質を精製できます。本実験では、ここに記載する大規模システムを用いて、ヒトAAL two受容体細胞外ドメインのHAタグ付きサブユニットを精製し、続いて高親和性抗HAクロマートグラフィーを行いました。これは、このクマシー染色SDS-PAGE解析に示されています。インターロイキン2受容体αおよびγサブユニットの細胞外ドメインは、40 kilodaltonsおよび46 kilodaltonsの分子量で移動します。IL2 RαおよびIL2 Rγに存在するEnLink糖鎖の不均一性により、SDS-PAGEゲル上でバンドの広がりが生じました。より高分子量のバンドは、混入したBSAを示しています。このビデオを視聴することで、10層セルファクトリーを用いてヒト細胞培養からタンパク質を発現させる方法について十分に理解できるはずです。HEK 293T細胞はバイオハザード物質とみなされ、バイオセーフティーレベル2で取り扱う必要があることに留意してください。常に適切な個人用保護具を着用し、表面の消毒は機関および政府のガイドラインに従って行ってください。

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