Name: Bio - Rad社のTotal RNA Kitを使用してNeuroprecursor細胞からのRNA抽出 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-31T23:51:30.000+00:00
Duration: 17 min 25 s
Description: 学ぶ神経前駆細胞からのRNA抽出法。Bio-Rad Total RNA Kitを用いて、胚性大脳皮質由来細胞から高収率・高品質なRNAを一貫して得る実験手順を解説。神経科学および細胞生物学研究に有用です。

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bio - rad社のtotal rna kitを使​​用してneuroprecursor細胞からのrna抽出

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

Bio - Rad社のTotal RNA Kitを使​​用してNeuroprecursor細胞からのRNA抽出

こんにちは。私はカリフォルニア大学アーバイン校のEd Maki博士の研究室に所属する大学院生のJosh Shです。ここでは、BioRad社のRNA mini kitを用いて、神経前駆細胞からRNAを抽出する方法を説明します。私はこの研究室で数年前からこのキットを使用していますが、常に高い収量で安定した結果が得られています。使用する細胞は、胚皮質から急性解離させたE14.5神経前駆細胞です。通常、PDLおよびラミネートでコーティングされた24ウェル組織培養処理プレートに播種し、1ウェルあたり10万個の細胞でプレートします。開始する前に、RNA作業専用のベンチで作業する必要があることをお伝えしておきます。まず最初に、RNAベンチが清潔であることを確認してください。ベンチを洗浄する適切な方法は、このRNA zapを使用することです。基本的に、これはすべてのRNAを分解します。その理由は、RNaseがRNAを破壊するためです。もう一点は、抽出操作を行う際は常に手袋を着用することです。皮膚にはこれらのRNAが大量に存在しているためです。ですから、それは絶対に避けてください。さて、ここにBioRad total RNA mini kitを用意しています。中身を取り出しましたので、何が入っているかお見せしましょう。まず、X dep C処理済みのPBSと、70% DEP処理済みのエタノールを用意します。次に、エタノールを添加した全RNA溶解溶液を用意します。続いて、100%エタノールを添加した低ストリンジェンシー洗浄液、高ストリンジェンシー洗浄液、DNA希釈溶液、DNA本体、および全RNA溶出液を用意します。この溶液を70°Cのヒートブロックに入れます。他に準備するものとして、1.5 mLのキャップ付きチューブがあります。これらにDNAやRNAが含まれていないことを確認し、それらが混入していないチューブを使用してください。そして、2 mLのキャップレスチューブが2本あります。そして何よりも重要なのが、RNAカラム自体です。これ 없なければ、RNA抽出を行うことはできません。これらのカラムを組み立てるには、RNAカラムと2 mLのキャップレスチューブが必要であり、このように組み合わせれば準備完了です。さて、最後に常に必要となるのがこれらの細胞です。ここで使用する細胞は、Eton 1.5 神経前駆細胞です。胚皮質から急性解離させました。これらの細胞を数日間、培養液で培養しました。37°Cのインキュベーターから細胞を取り出しました。このプロトコルは接着細胞に特化したものです。これらの細胞は、PDLおよびラミネートでコーティングされた組織培養処理済みの0.4ウェルプレートで培養されました。それでは、バキュームホースを使用して培地を吸引除去します。次のステップは、dep SEA PB

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生物学

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低分子RNAの定量のためのAQRNA-seq

学ぶ神経前駆細胞からのRNA抽出法。Bio-Rad Total RNA Kitを用いて、胚性大脳皮質由来細胞から高収率・高品質なRNAを一貫して得る実験手順を解説。神経科学および細胞生物学研究に有用です。

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