Name: に基づいて、タンパク質 - タンパク質相互作用の同定のためのプロトコル 15 Nの代謝標識、免疫沈降法、定量的質量分析法と親和性調節 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 44 s
Description: 学ぶ、¹⁵N代謝標識と免疫沈降法、定量質量分析法を組み合わせたQUICK法でタンパク質間相互作用を正確に同定する手法。Chlamydomonas細胞を用いて真の相互作用と汚染物質を区別し、生化学・プロテオミクス研究に応用可能です。

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我々はCF1βに対する抗血清に対してオリビエヴァロンに感謝します。この作品は、マックス·プランク協会とドイツ学術振興（SCHR 617/5-1）とBundesministeriumエリーゼのためBildung undのForschung（システムバイオロジーイニシアティブFORSYS、プロジェクトGoFORSYS）からの補助金によって支えられている。

<ol><li>Perrakis, A., Musacchio, A., Cusack, S., Petosa, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+a+macromolecular+complex%3A+the+toolkit+of+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Struct.+Biol%22%5BJournal%5D)">Investigating a macromolecular complex: the toolkit of methods.</a> J. Struct. Biol. 175, 106-112 (2011).</li>
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</ol>

特別な利害関係は宣言されません。

一過性のタンパク質-タンパク質相互作用（QUICK-X）を捕捉するための架橋工程、及び不平等降水効率6を標準化するための制御降水量：我々は最近、2つの簡単なアプローチへの改良を導入しています。ここでは、クイックの2以上の改善が含まれているプロトコル提示します：最初に、我々は、15 Nの代謝標識用SILAC 5を交換してください 。利点は、15 Nは単純な無機塩として提供されている場合は、15 N代謝標識は、SILACよりもはるかに安価であるということです。更に、早い15 N代謝標識で最も植物、菌類やバクテリアのように、すべてのアミノ酸のための生物の原栄養に適用することができます。そして最後に、SILAC 5,6に固有アルギニン·ツー·プロリン相互変換は、15 N標識ペプチドの定量化のための問題を提示しません。 15 Nプロテオミクスデータを定量的に評価するのに適したツールの例としては、12アールMSQUANTまたはIOMIQS 13。 第二に、我々は、特に別の対つのサンプル内の指定された標的タンパク質と相互作用するタンパク質の量を減らすための手段として、親和性の変調をご紹介します。このアプローチの利点は、それはいくつかのモデル·システムのために生成することが困難であるか、すべての本質的な標的タンパク質の場合では生成されませんノックダウン変異体の建設を回避することである。また、それは潜在的に標的タンパク質をノックダウンに対する細胞の応答として発生する差動タンパク質発現によって引き起こされる誤解を避けることができます他のタンパク質も同様にダウンレギュレートされ、免疫沈降に使用する抗血清と交差反応するなら、それらは解釈されてしまう標的タンパク質の真の相互作用パートナーとして。最後に、親和性の変調は、適切な抗体に抗原比を見つけることの必要性を消失させる。 我々は、モデル生物としてクラミドモナスに我々のプロトコルを適用していますが、それは容易に細胞培養で増殖させ、窒素源としてアンモニアや硝酸を使用することができますすることができる任意の他の生物に適応させることができます。 ATP / ADPによるタンパク質複合体の親和性は、直接変調GroEL/HSP60/Cpn60またはHSP90シャペロンシステム14,15のように、場所や他のシステムに、その相互作用基質およびコホートタンパク質とATPの状態に依存する他のシャペロンにも適用することができる結合親和性は、ATPによって変調される。親和性調節は、タンパク質間相互作用の間の親和性は、HSP90システム15の場合ラディシコールまたはゲルダナマイシンのような特定の薬によって変更される場合のために働く必要があります。 我々のプロトコルの明確な制限は、パートナータンパク質に対する親和性を調節する特定の治療/薬物に敏感であることが知られている標的タンパク質に対してアフィニティー精製抗体を必要とするということです。したがって、それはハイスループット法ではありません。

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント（オプション） </td></tr><tr><td>プロテインAセファロース</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> P3391 </td><td></td></tr><tr><td> DMP（ジメチルpimelimidate） </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> D8388 </td><td> -20℃で乾燥保管し、使用する前に直接溶かす</td></tr><tr><td>プロテアーゼ阻害剤（完全、EDTAを含まない） </td><td>ロシュ·ダイアグノスティックス</td><td> 11873580001 </td><td></td></tr><tr><td> ATP（アデノシン-5&#39;-triphosphat） </td><td>カール·ロート</td><td> K054 </td><td></td></tr><tr><td>クレアチンリン酸</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> 27920 </td><td></td></tr><tr><td>クレアチンホスホキナーゼ</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> C7886 </td><td>; </td></tr><tr><td> DSPジチオビス[スクシンイミジルプロピオネート] </td><td> Sientificサーモ</td><td> 22585 </td><td> 4で乾燥℃で保存</td></tr><tr><td> 15 NH 4 Clを </td><td>ケンブリッジアイソトープラボラトリーズ、アンドーバー、マサチューセッツ州</td><td> NLM-467 </td><td></td></tr><tr><td>のLys-C（エンドプロテイナーゼ のLys-C） </td><td>ロシュ·ダイアグノスティックス</td><td> 11047825001 </td><td></td></tr><tr><td>トリプシンビーズ（Poroszymeはトリプシンを固定化） </td><td>アプライドバイオシステムズ</td><td> 2-3127-00 </td><td>直接使用する前に、精力的に混ぜる</td></tr><tr><td> C 18 47ミリメートルディスクをEmpore </td><td>バリアン</td><td> 12145004 </td><td></td></tr></tbody></table>

に基づいて、タンパク質 - タンパク質相互作用の同定のためのプロトコル<sup&gt; 15</sup&gt; nの代謝標識、免疫沈降法、定量的質量分析法と親和性調節

A Protocol for the Identification of Protein-protein Interactions Based on 15N Metabolic Labeling, Immunoprecipitation, Quantitative Mass Spectrometry and Affinity Modulation

タンパク質 - タンパク質相互作用は、細胞内の多くの生物学的プロセスのための基本となります。したがって、それらの特性は、現在の研究に重要な役割を果たしており、その調査のための方法の茄多が1利用可能です。タンパク質-タンパク質相互作用は、しばしば非常に動的であり、細胞内局在、翻訳後修飾と局所的なタンパク質の環境2に依存するかもしれません。したがって、これらは共免疫沈降アプローチは選択肢3の方法であるため、それらの自然環境の中で検討すべきである。共沈相互作用パートナーが関連性の低い方法でターゲットを絞ったアプローチで、または質量分析（LC-MS/MS）によるイムノブロッティングのいずれかで識別されています。後者の戦略は、しばしば悪影響を自信を持って、主に非特異的にタンパク質を沈殿させるの痕跡を検出現代の質量分析計の高感度に由来する偽陽性発見、大量の数に影響されます。 recenこの問題を克服するためのtのアプローチが考えに基づいている非特異的に沈殿するタンパク質の量は影響を受けなければならないときに、特定の相互作用パートナーの減少量は、細胞内濃度RNAiにより低減され与えられた標的タンパク質と共沈すること。このアプローチは、ノック4と組み合わせることで定量的な免疫沈降のためのクイックと呼ばれる野生型およびノックダウン株から免疫沈降したタンパク質の量を定量化するための安定同位体細胞培養におけるアミノ酸のラベリング（SILAC）5とMSを採用しています。 1:1の比率で見つかったタンパク質は、汚染物質、標的タンパク質の特異的な相互作用パートナーとして野生型から沈殿に富んだものとみなすことができる。革新が、QUICKは、いくつかの制限を負います：まず最初に、SILACはコストがかかり、理想的にはアルギニン及び/またはリジン要求性である生物に制限されています。 ADDITでまた、重いアルギニンが供給され、アルギニンからプロリン相互変換の結果ペプチドの各プロリンionalマスのシフトと若干5,6定量がもっと退屈であまり正確になり光アルギニン、と重い薄め。第二に、QUICKは、抗体は、彼らがノックダウン変異体からの抽出物中の標的タンパク質で飽和しないように滴定されている必要があります。 ここでは、15 Nの代謝標識用SILACを置き換えることにより、タンパク質-タンパク質相互作用の親和性の変調のためにRNAiによるノックダウンを置き換えることにより、QUICK上記の限界を克服する修正されたクイックプロトコルを紹介します。我々は、単細胞緑藻クラミドモナスのモデル生物と標的タンパク質7（ 図1）のような葉緑体HSP70Bシャペロンとしてクラミドモナス使用して、このプロトコルの適用性を実証する。 HSP70sのみのADP状態8で特定の共同シャペロンと基質と相互作用することが知られている。我々は、特定性を確認する手段として、この性質を利用そのヌクレオチド交換因子CGE1 9とHSP70Bの相互作用。

私たちは、真と偽のタンパク質 - タンパク質相互作用を区別する以前に導入されたクイック（ノックダウンと組み合わせる定量免疫沈降）アプローチのバリエーションを提示します。私たちのアプローチはに基づいている<sup&gt; 15N</sup&gt;代謝標識ATPの存在/不在によるタンパク質 - タンパク質相互作用の親和性の調節、免疫沈降、および定量的質量分析。

に基づいて、タンパク質 - タンパク質相互作用の同定のためのプロトコル<sup&gt; 15</sup&gt; Nの代謝標識、免疫沈降法、定量的質量分析法と親和性調節

タンパク質間相互作用は、細胞内における多くの生物学的プロセスにとって不可欠です。したがって、その特性解析は…において重要な役割を果たしています。

本実験の目的は、水溶性タンパク質および膜タンパク質を含む細胞抽出液中で、特定の標的タンパク質と特異的に相互作用するタンパク質を同定することです。まず、クロレラ（chlamydomonas）細胞を窒素14および窒素15を用いて完全に代謝標識し、TPを含む細胞溶解物と含まない細胞溶解物を調製します。オプションの架橋ステップを行うことで、一過性のタンパク質間相互作用を安定化させることができます。次に、細胞溶解物を分画し、不溶性タンパク質および膜タンパク質を濃縮し、そこから標的タンパク質およびその特異的な相互作用パートナーを分離します。コントロールタンパク質および混入タンパク質を免疫沈降させ、エルートします。次に、免疫沈降させたタンパク質を混合して3重消化を行い、タンデムLCMSで分析します。その結果、標的タンパク質と特異的に相互作用するタンパク質では $^{14}\text{N}$ と $^{15}\text{N}$ のペプチド比が異なり、それ以外では等しくなるため、真の相互作用パートナーと偽の相互作用パートナーを区別することができました。標的タンパク質、コントロールタンパク質、および混入タンパク質における14N/15Nペプチド比。タンパク質間相互作用を解析するための最適な手法は、細胞抽出液中で本来の立体構造と濃度で存在する標的タンパク質を、その相互作用パートナーと共に直接免疫沈降させることです。しかしながら、その手法を用いると、現代の質量分析計は極めて感度が高いため、主に抗体と相互作用することで混入タンパク質までもが共沈してしまいます。その結果、混入タンパク質も明確に検出されてしまい、偽陽性と真の相互作用パートナーを区別することが不可能になります。この問題は、本手法によって解決されます。本手法は、¹⁵N代謝標識免疫沈降アフィニティー変調（ここではATP状態で媒介）および定量質量分析に基づいています。この手法は、私の研究室のシニア博士課程学生であるStefan SCH Malingerによって実演されます。10世代にわたって細胞をラベル化した後、窒素14および窒素15でラベル化したChlamydomonas細胞を、それぞれ2つの分注量ずつ4G SAチューブに移し、遠心分離によって回収します。ペレットを2 mLの氷冷ライシスバッファーで再懸濁し、懸濁液を15 mLのFalconチューブに移します。さらに、各分注量に対して1 mLのライシスバッファーを追加して、残りの細胞を回収します。そこに50 µLの25xプロテアーゼインヒビターと12.5 µLの1 M塩化マグネシウムを加えます。細胞を完全に溶解させるため、冷却時間を設ける目的で20秒間の間隔を空けながら、氷上で20秒間の超音波処理を4回行います。SW 41 TI薄壁チューブに、6 mLのスクロースクッションを4本分調製します。細胞溶解液の全量をスクロースクッションの上に慎重に重ねます。溶解バッファーでバランスを調整し、遠心分離して可溶性タンパク質複合体と膜分画を分離します。勾配の上層にある可溶性タンパク質複合体を、4本の15 mLファルコンチューブに回収します。この際、スクロースクッションの一部が混入しないように注意してください。次に、各サンプルに10% Triton X 100を最終濃度0.5%になるように添加します。慎重に混合し、溶出バッファーを加えて全量を7 mLにします。SDS-PAGEおよび免疫血液分析用として、各可溶性細胞抽出液から70 µLを新しい1.5 mLコニカルチューブに分注し、2×SDSサンプルバッファーを70 µL加えます。次に、SW 41 TI薄壁チューブからショ糖クッションを除去し、各ペレットに3 mLの溶解バッファーを加えます。10% Triton X-100を1 mL加え、最終濃度を2%にします。超音波処理により各ペレットを溶解させた後、ライシスバッファーを加えて全量を5 mLとし、遠心分離を行います。前と同様に、膜タンパク質複合体の最上層画分を15 mLファルコンチューブに回収します。2% Triton X-100を含むライシスバッファーを加え、最終容量を7 mLにします。これらのサンプルの70 µLを、SDS-PAGEおよび免疫学的血液分析に使用します。まず、抗体結合タンパク質を平衡化します。ライシスバッファーで2回（各4 mL）洗浄し、8 mLに希釈して分注したsero beadsを使用します。TP充足およびTP欠乏の$^{14}\text{N}$および$^{15}\text{N}$標識細胞から得られた可溶性または膜タンパク質複合体を含む8本の15 mLファルコンチューブに、懸濁液を1 mLずつ分注する。チューブローラーを用いて4 °Cで2時間インキュベートし、タンパク質複合体を沈殿させる。遠心分離によりビーズをペレット化し、上澄みを除去する。この際、プラスチック壁面に付着したタンパク質による汚染を防ぐため、ビーズの上に少量の液体を残しておく。ファルコンチューブ内の残りのビーズをすべて回収するため、サンプルを新しい1.5 mLコニカルチューブに移す。0.1% Tritonを含む溶解バッファーをさらに0.8 mLずつ加え、ボルテックスした後に軽く遠心分離し、残留ビーズを含むバッファーをエッペンドルフチューブに移す。数回の洗浄ステップの後、サンプルを4 °C、16,100 $\times\text{g}$で15秒間遠心分離する。まず、通常のピペットでサンプルの上清を除去します。次に、50 µLのハミルトンシリンジを用いて、残っている上清を完全に除去します。各サンプルに、調製したばかりの溶出バッファーを100 µL加え、サーモミキサーで800 RPM、25 °Cでインキュベートし、16,100 ×gで15秒間遠心分離します。次に、清潔な50 µLのHamiltonシリンジを用いて、各上清を新しいチューブに移します。また、以前のサンプルと同様に、ビーズの工程に50 µLの溶出バッファーを加え、それぞれの溶出液を回収してまとめます。すべてのサンプルEITのうち、30 µLをSDS-PAGEおよび免疫学的血液分析用に保存しておくことを忘れないでください。次に、A TP処理を行った窒素14および窒素15で標識された可溶性タンパク質および膜タンパク質の、プラスおよびマイナスの溶出沈殿物を混合します。その後、付属の論文に記載されている通り、還元アルキル化および初期の高尿素消化を行います。続いて、ローテーションホイールを用いて、少なくとも16時間のトリプシン消化を行います。37 °Cで反応させます。16,100 ×g、4 °Cで5分間遠心分離し、トリプシンビーズをペレット化します。上清を新しい2 mLのエッペンドルフチューブに移します。使用済みのチューブを 50 µL の 20 mM 重炭酸アンモニウムおよび 0.5% 酢酸で洗浄し、最初の上清と合わせて回収します。サンプルの脱塩用自家製 C 18 チップを準備するため、シリンジ針を用いて Emcor C 18 素材からディスクを 2 枚切り出し、200 µL ピペットチップに挿入します。次に、2 mL Eppendorf チューブ 4 本の蓋に穴を開けてチップを挿入し、C 18 ステージチップを 50 µL の溶液 B でプレコンディショニングします。その後、800 ×g、25 °C で 3 分間遠心分離します。次に、C 18ステージチップを100 µLの溶液で平衡化し、800 G、25 °Cで3分間遠心分離します。この平衡化ステップをもう一度繰り返します。続いて、トリプシン消化後のサンプル上清100 µLをC 18ステージチップにロードし、800 G、25 °Cで3分間遠心分離します。サンプル上清を完全に適用させるため、カラムへのロードを繰り返します。C 18 ステージチップを洗浄後、50 µL の溶液 B を用いてトリプシン消化ペプチドを新しい 1.5 mL エッペンドルフチューブに溶出させ、800 G、25 °C で 3 分間遠心分離します。この溶出ステップをもう一度繰り返し、その後、迅速真空濃縮機（speed VAC）を用いてペプチドを完全に乾燥させます。乾燥させたペプチドを20 µLの溶液Aに懸濁し、氷上で少なくとも1時間インキュベートします。その間、超音波バス遠心機を用いて16,100 ×g、4 °Cで20分間のインキュベーションを2回、それぞれ15分間隔で行い、Sennaをnano C-M-S-M-S HSP 70に適用します。熱衝撃タンパク質は、ATPが存在しない場合にのみ、特定の共シャペロンおよび基質と相互作用することが知られています。これらの窒素14標識細胞抽出物において、hsp 70 BおよびCGE 1は、ATPの状態にかかわらず、ほぼ排他的に可溶性画分に局在しています。対照的に、CF 1 betaは、可溶性画分と膜濃縮画分の両方に局在しています。ソニケーションにより、ATP合成酵素に位置する膜からCF1βの一部がせん断されるため、これは両画分のローディングコントロールとして機能します。ATPの状態に関わらず、窒素14および窒素15で標識された可溶性抽出液から、抗HSP70B抗体によって同程度の量のHSP70Bが沈殿しました。対照的に、膜画分から沈殿したHSP70Bタンパク質のレベルは低く、CGE1のHSP70Bに対する期待される親和性と同様に、ATP十分な膜画分と比較してATP枯渇膜画分由来の量がわずかに多くなりました。HSP70Bはコンテキスト依存的です。TPが十分にある可溶性画分または膜画分では、CGE1はHSP70Bと共に共沈しませんでした。一方、TP欠損の可溶性画分およびTP欠損の膜画分においてHSP70Bと共に共沈したCGE1タンパク質の量は、沈殿したHSP70Bの量と定量的に相関しています。CGE1がADP結合状態でのみHSP70Bと相互作用することは、質量分析による解析でも観察されています。この実験では、TPを欠いた窒素14標識抽出液と、A TPを含む窒素15標識抽出液の混合物を用いて沈殿物を調製しました。HS P 70 Bペプチドの重標識体と軽標識体は等しい強度で検出されましたが、A TP欠損抽出液由来のCGE oneペプチドは軽標識体のみが検出されました。相互に標識された可溶性細胞抽出液の混合物から得られたanti HS P 70 D DB沈殿物中の同様のペプチドをここに示します。その結果、TP欠損抽出液中のCGE oneペプチドは重標識体のみが検出され、HSP 70 Bペプチドは軽標識体と重標識体の両方が検出されました。このビデオを視聴することで、質量分析のためのサンプル調製を含む共沈殿実験の実施方法について、十分な理解を得ることができます。ヒトタンパク質、特にケラチンによる汚染は、質量分析計でのプロファイル測定を妨げるため、この手順を行う際は、手袋の着用、清潔な環境の維持、およびLCMSグレードの試薬の使用といった安全対策が極めて重要であることに留意してください。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

タンパク質相互作用：SILACの免疫沈降実験は、新規タンパク質を発見するための強力な手段を表す。対照および試験試料の両方におけるタンパク質存在量の正確な相対的定量を可能にすることによって、真の相互作用は、実験的な汚染物質から容易に区別することができ、低親和性相互作用は、あまりストリンジェントな緩衝液条件を使用することによって保存した。...

SILAC免疫沈降定量的プロテオミクスを用いて哺乳動物細胞におけるタンパク質相互作用パートナーの同定

ここでは、極低温固体ミリングによって、哺乳動物細胞を破壊し、得られた細胞粉末から細胞抽出物を生成し、そして抗体結合ミクロンスケールの常磁性ビーズ上にアフィニティー捕捉により、目的のタンパク質複合体を単離するためのプロトコルを説明します。...

Cryomilled哺乳動物細胞からのタンパク質複合体の親和性のキャプチャ

我々は、LC-MS / MSシステムを使用して共調節相互作用タンパク質の精製のための方法を確立しました。...

LC-MS / MS分析を用いた核補因子と相互作用するタンパク質のハイスループット同定のためのタンパク質調製方法

正確に高分解能質量分析計を接続した液体クロマトグラフィーによる定圧ラベリング、広範な分別、バイオインフォマティクス...

定圧ラベリング、豊富な液体クロマトグラフィー、質量分析法、およびソフトウェアによる定量化して深いプロテオームをプロファイリング

分割-BioID、近接ラベリング手法 BioID を用いたタンパク質断片否定回路試金のステップ バイ ステップのプロトコルを提供します。与えられた 2 つのタンパク質の相互作用活性化、彼らのネイティブ...

ネイティブな携帯電話環境におけるコンテキスト固有蛋白質複合体の分割-BioID-プロテオーム解析

タンパク質とタンパク質代謝の相互作用は携帯電話のすべての機能のために重要です。ここで、選択の蛋白質のこれらの相互作用の平行分析を可能にするプロトコルについて述べる。私達のプロトコルは、植物細胞培養用に最適化されたし、質量分析を用いたタンパク質と代謝物の検出と親和性の浄化を結合します。...

2 の 1: タンパク質・ タンパク質代謝物の複合体の並列解析のための親和性の浄化をワンステップ

ここでは、質量分析用サンプルの調製のための膜上消化技術のプロトコルを提示する。この技術は、タンパク質とタンパク質の相互作用の便利な分析を容易にします。...

膜上消化技術を用いてのタンパク質・タンパク質相互作用の評価

このプロトコルは、イノシトールリン酸塩またはホスホイノシチドに結合するタンパク質の同定に焦点を当てています。これは、アガロースまたは磁気ビーズにストレプトアビジンを介して固定化されたバイオチン化イノシトールリン酸塩またはリンオイノシチドとの親和性クロマトグラフィーを使用しています。イノシトールリン酸塩またはホスオイノシチド結合タンパク質は、ウェスタンブロッティングまたは質量分析によって同定される。...

アフィニティクロマトグラフィーによるインノシトールリン酸塩またはホスホイノシチド相互作用タンパク質の同定

定量多重免疫沈殿(QMI)は、2つのサンプル間の標的タンパク質相互作用の豊富さの違いを敏感に検出するためにフローサイトメトリーを使用します。QMIは、少量の生体材料を用いて行うことができ、遺伝子組み換えタグを必要とせず、以前に定義されたタンパク質相互作用ネットワークに適応させることができる。...

多重共免疫沈殿を用いたタンパク質相互作用ネットワークダイナミクスの定量化

記載されているプロテオミクスワークフローは、目的とするタンパク質の免疫親和性濃縮と標識フリー質量分析法を用いて核細胞内分画からタンパク質相互作用パートナーを同定するためのプロテオミクスワークフローである。このワークフローには、細胞内分画、免疫沈降、フィルター支援サンプル調製、オフラインクリーンアップ、質量分析、下流バイオインフォマティクスパイプラインが含まれます。...

大規模核インターロームプロファイリングのためのラベルフリー免疫沈降質量分析ワークフロー

ここでは、化学プローブと質量分析を使用して、天然細胞および組織からの疾患特異的タンパク質間相互作用の捕捉と同定を可能にするプロトコルを提示します。得られた相互作用データセットは、専用のWebベースのプラットフォームを介して分析され、動的なネットワーク機能不全と疾患に関連する経路の変化を明らかにします。...

疾患における機能不全タンパク質間相互作用のマッピング

学ぶ、¹⁵N代謝標識と免疫沈降法、定量質量分析法を組み合わせたQUICK法でタンパク質間相互作用を正確に同定する手法。Chlamydomonas細胞を用いて真の相互作用と汚染物質を区別し、生化学・プロテオミクス研究に応用可能です。

に基づいて、タンパク質 - タンパク質相互作用の同定のためのプロトコル

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