Name: ラット同所性小腸移植 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: 学ぶラット同所性小腸移植の手技。血管吻合と腸管吻合を含むマイクロサージャリー技術を用いて、免疫学的・炎症性反応を評価し、長期生存と優れた移植片機能を達成する実験モデルを解説します。

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1。ドナー操作<ol><li>ドナーラットを24時間（水/グルコース溶液への無料アクセス）の絶食に保つ必要があります。 </li><li>イソフルラン吸入麻酔を誘導するために、標準のアトマイザーで2％で始まり、その後開腹術を行った後、1％まで減らすことができます。鎮静状態をチェックするためにつま先のピンチを実行します。 </li><li>腹部を剃ると皮膚の準備3回（講談）で清掃してください。その後、鎮痛剤の皮下投与後の正中切開を行います。 </li><li>移植片は生理食塩水に浸したガーゼでラップされた後、Q-ティップ（6X倍率の手術用顕微鏡下）で穏やかに膵臓と上行結腸の間の生理的な癒着を分離します。 </li><li>結紮すると7から0シルクを使用した回盲＆真ん中＆右結腸の血管を分割します。上行結腸は腸間膜静脈（SMV）の右側に広げられた後、回盲部、右および中結腸船は7から0の関係を用いてライゲーションおよび除算を識別することができます。 </li><li>全体SMVがまっすぐと露出するように、上向きに胃を縮める。引き込み用の蚊クランプを使用しています。クランプは、必要に応じた形状に形成された粘土の塊によって保持されている。 </li><li> SMVから来る膵十二指腸静脈を結紮し、分割します。膵組織が移植から削除することができます前に、SMVから発信されたすべての小さな膵十二指腸静脈は慎重に、識別された7から0シルクで結紮し、分割しなければなりません。 </li><li> SMVと腹部大動脈の間のすべてのリンパ管を含む失う結合組織を結紮し、分割します。まだ腹部の右側に移植すると、SMV、腹部大動脈がアクセス可能であるとの間のすべてのリンパ管を含む結合組織を失う。この結合組織は、7から0の絹を用いて連結し、腸移植から術後のリンパ漏を避けるために分割する必要があります。 </li><li>右腎動脈を結紮し、分割します。結合組織が分割された後、右腎動脈はaccessiblになるeと7から0絹を用いて連結し、分割されています。 </li><li>全身陰茎静脈を介してヘパリンIVの200台を用いたラットをheparinise。 </li><li>マージナル動脈を結紮し、十二指腸空腸接合時および回腸末端部で小腸を分割します。 </li><li>大動脈は、SMAの原点に近位に連結される。門脈は脾静脈に合流する地点に離断されています。その後、移植片は、大動脈セグメントを持つSMAのその血管茎から成ると収穫されます。 </li></ol> 2。 Backtable手順<ol><li> 4℃ウィスコンシンソリューション（UW）大学の3ミリリットルを用いて移植片を灌流大動脈導管を介してCと4℃で泌尿Nebacetin Nの溶液30mlと空腸端から腸管腔を灌漑（ルーメン灌漑は必須です） 。 </li></ol>直ちに移植を抽出した後、大動脈導管は3ミリリットルチルドUW液で灌流するために使用されます。で、このため、20G静脈カテーテル10mlの注射器が使用されます。灌流液は門脈から自由に流出することが観察されるべきである。 Nebacetinと腸の灌漑のために、50mlの注射器が使用されます。 <ol start="2"><li>受信者の準備中に4℃でUW液で移植を格納します。 </li></ol> 3。受信者動作<ol><li>レシピエントラットを24時間（水/グルコース溶液への無料アクセス）の絶食に保つ必要があります。 </li><li>イソフルラン吸入麻酔を誘導するために、標準のアトマイザーで2％で始まり、その後開腹術を行った後、1％まで減らすことができます。鎮静状態をチェックするためにつま先のピンチを実行します。 </li><li>腹部を剃ると皮膚の準備3回（講談）で清掃してください。その後術中鎮痛カルプロフェン5 mg / kg皮下の皮下投与後の正中切開を行います。 </li><li>生理食塩水に浸したガーゼで受信者の腸をラップして、受信者の胸の上に置きます。 </li><li>綿棒とぶっきらぼうに後腹膜を開き、abdomiを公開ただ、必要に応じてダウン腸骨血管のレベルに腎血管、以下NAL大動脈と下大静脈はまたmicroscissorsを使用しています。血液の損失を避けるために、7から0シルクを使用した大動脈と大静脈から小さな腰と脊椎tribuariesをライゲーションする。 （これを行うには、16倍に手術用顕微鏡のズームを変更してください。） </li><li>左腎血管近位および遠位微小血管クリップを使用して腸骨分岐上記下大動脈と下大静脈をクロスクランプ。唯一つのクランプを同時に両方の血管をクランプするために遠位ならびに近位使用されています。前方microknifeを使用して両方の血管を切開し、残りの血液を洗い流す。 </li><li>連続10から0 PROLENE縫合糸を用いて移植大動脈セグメントと受信者の大動脈大動脈の間に端側吻合を作成..当初、移植片は下ステー縫合の動脈吻合と抱き合わせの後ろの壁のステッチを実行するために腹部の右側（12時の位置に配置されたラットの頭）に配置されます。木曜日enは、グラフトは吻合部の前壁を露出し、縫合する腹部の左側（9時位置に配置されたラットの頭）に引き渡されます。 </li><li>グラフト門脈と受信者の間でIVC端側吻合が10から0 PROLENEを使用して縫合を実行することにより、同様に実行されます。ラットまだ横向きに横たわって（9時の位置でヘッド）と、グラフトは、腹部の左側に配置され、下ステー縫合が配置されます。吻合は血管の内側から後ろの壁を使って起動されます。下ステー縫合糸が結ばれた後は、前壁のステッチは外側から行うことができます。 </li><li>アッパークランプ続いた最初の遠位クランプを取り外します。すべて吻合出血は綿棒を使用して直接圧力によって制御される。移植片は、平等かつ迅速な再灌流をチェックする必要があります。 </li><li>腸間膜血管の結紮後全体受取人の小腸を切除。受信者は、プロの2-3センチメートルを維持したまま、小計腸切除を受けるximal空腸及び回腸遠位部の1cm。 </li><li> 6から0 Monocrylで中断1層縫合糸を用いて腸吻合を終了するには、エンド·近（空腸空腸吻合術）と遠位（回腸造設）により腸の連続性を復元します。約16の縫合糸は、吻合を完了するために必要とされる。 </li><li>きれいになるまでは通常の生理食塩水で腹腔内を洗浄してください。水分補給のために腹腔内に生理食塩水2mlを管理します。その後3から0筋層用VICRYLプラス連続皮膚縫合糸で連続縫合を使用して腹部を閉じます。 </li><li>術後のラットは標準ラット飼料と水を自由に摂取上で再起動し、別の24時間絶食（水とグルコース溶液へのアクセス権を持つ）に保つ必要があります。カルプロフェンと鎮痛は3日（以下の用量を参照）のために投与されるべきである。 </li></ol>

<ol><li>Abu-Elmagd, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Five+Hundred+Intestinal+and+Multivisceral+Transplantations+at+a+Single+Center%3A+Major+Advances+With+New+Challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Five Hundred Intestinal and Multivisceral Transplantations at a Single Center: Major Advances With New Challenges.</a> Ann. Surg. 250 (4), 567-56 (2009).</li>
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<li>Pech, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+infliximab+application+ameliorates+acute+rejection+associated+inflammation+after+intestinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Perioperative infliximab application ameliorates acute rejection associated inflammation after intestinal transplantation.</a> Am. J. Transplant. 10 (11), 2431(2010).</li>
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<li>Schaefer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+and+impact+of+organ+harvesting+and+ischemia-reperfusion+injury+within+the+graft+muscularis+in+rat+small+bowel+transplantation.+Transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Proc%22%5BJournal%5D)">Mechanism and impact of organ harvesting and ischemia-reperfusion injury within the graft muscularis in rat small bowel transplantation. Transplant.</a> Proc. 38 (6), 1821(2006).</li>
<li>Schaefer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+rejection+and+the+muscularis+propria+after+intestinal+transplantation%3A+the+alloresponse%2C+inflammation%2C+and+smooth+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Acute rejection and the muscularis propria after intestinal transplantation: the alloresponse, inflammation, and smooth muscle function.</a> Transplantation. 85 (10), 1465(2008).</li>
<li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+experience+of+refined+3-cuff+technique+for+orthotopic+small-bowel+transplantation+in+rat%3A+a+report+of+270+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Surgical experience of refined 3-cuff technique for orthotopic small-bowel transplantation in rat: a report of 270 cases.</a> Am. J. Surg. 198 (1), 110(2009).</li>
<li>Zhang, X. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+techniques+in+rat+heterotopic+small+bowel+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant.+Proc%22%5BJournal%5D)">Simplified techniques in rat heterotopic small bowel transplantation.</a> Transplant. Proc. 38 (6), 1840(2006).</li>
<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+establishment+of+a+new+en+bloc+combined+liver-small+bowel+transplantation+model+in+rats.+Transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Proc%22%5BJournal%5D)">The establishment of a new en bloc combined liver-small bowel transplantation model in rats. Transplant.</a> Proc. 39 (1), 278(2007).</li>
</ol>

特別な利害関係は宣言されません。

ラットにおける腸移植モデルが1970ies 5のように早く説明してきたが、最近採用のモデルのほとんどは、さまざまなテクニックを13を用いて異所性腸移植を伴う。一般的に異手順は簡単顕微技術や評価のための移植の容易なアクセス可能性の利点を持っているが、異所性腸移植が考慮移植小腸と収縮活性のように、その機能面の複数の相互作用を考慮しないという大きな欠点を持っており、共生と病原菌の広大なホストのコンテキストに同所移植を特徴付ける粘膜のバリア機能。当社グループは、本明細書に記載され同所性モデルと我々の知見を持つ大規模な経験を得ていることは、炎症性および適応免疫応答によって引き起こされる特定の変化の多くは、機能的なプロのコンテキスト内で評価されなければならないことを示唆している収縮や粘膜の整合性のような、移植された小腸のperties。注目すべきは、ここで用いた吻合技術は手続きを容易にし、特にmultivisceral移植12,14のモデルでは、重要な温虚血時間を短縮することが示されているそのうちのいくつかは動脈または静脈の袖口、の使用が含まれていません。それは...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント（オプション） </td></tr><tr><td>ウィスコンシン大学（UW）液（ViaSpan） </td><td>ブリストル·マイヤーズスクイブ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>泌尿Nebacetin Nのソリューション</td><td>ナイコメッド</td><td> 6967855 </td><td></td></tr><tr><td>アンピシリン</td><td> Ratiopharm </td><td></td><td></td></tr><tr><td>カルプロフェン（Rimadyl） </td><td>ファイザー</td><td></td><td></td></tr><tr><td>プロレン10から0 unresorbable縫合</td><td>エチコン</td><td></td><td></td></tr><tr><td> Monocryl 6から0吸収性縫合糸</td><td>エチコン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ビクリル3から0吸収性縫合糸</td><td>エチコン</td><td></td><td></td></tr><tr><td> IVカテーテルG 20 1.1x33ミリメートル</td><td>ブラウン</td><td></td><td></td></tr><tr><td> IVカテーテルG 22 0.9x25ミリメートル</td><td>ブラウン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>講談スキンプレップ</td><td> Schülke </td><td></td><td></td></tr><tr><td> NaClの0.9％輸液</td><td>ブラウン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>小さな湾曲鉗子</td><td> FineScienceTools </td><td> 11009から13 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロ鉗子は、湾曲</td><td> AESCULAP </td><td> BD 333 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロ鉗子は、湾曲</td><td> AESCULAP </td><td> FD281R </td><td></td></tr><tr><td> Microはストレート1鉗子</td><td> WPI </td><td> 5 </td><td></td></tr><tr><td> Microはストレート2鉗子</td><td> WPI </td><td> 2 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロニードルホルダー</td><td> WPI </td> &lt;TD&gt; 14081 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロ剪刀</td><td> FineScienceTools </td><td> 15006から09 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロメス</td><td> MANI </td><td>眼科用ナイフ</td><td></td></tr><tr><td>マイクロクランプ</td><td> AESCULAP </td><td> FB329R </td><td></td></tr></tbody></table>

ラット同所性小腸移植

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

小腸移植は、非経口栄養の短腸症候群と障害（不可逆性腸疾患）の患者さんのために受け入れられている臨床検査オプションになっています。専門センターで手術を改善し、寿命1,3の高品質を提供しながら管理する戦略が優れた短期および中期患者および移植片の生存につながっている。他の固形臓器のより一般的な移植とは異なり（ すなわち心臓、肝臓）腸移植により誘導される腎機能および免疫学的変化の多くの根本的なメカニズムは完全に知られている6,7はありません。急性拒絶反応、敗血症および慢性移植片障害のエピソードはまだ不利な長期転帰に寄与し、潜在的にそのような移植の恩恵を受けるだろう在宅中心静脈栄養法を受けている患者が増えているにもかかわらず、手続きのより広範な雇用を妨げる主な障害となっている。小腸は含まれています乗客の白血球の数が多い一般的に腸関連リンパ系（GALT）腸移植の高いimmunogenity理由のこの部分の一部であると呼ばれる。移植粘膜の整合性が損なわれると、腸内で存在し、多くの共生および病原体の近接している（拒否するなどして）敗血症のエピソードの重症度を説明しています。信頼性と実現可能な動物モデルから生成される腸や臓器移植、より多くのデータのフィールドを進めるために必要とされる。モデルはここに一度標準化された方法で確立された信頼性と実現可能性の両方を兼ね備えていますし、腸の移植によってトリガされ、基礎となる複雑な分子、細胞および機能メカニズムに貴重な洞察を提供することができます提供しました。我々は、正常に我々の研究室で8月11日で5年以上にわたって記載されている手順を使用し、洗練されてきた。 Joveのビデオベースの形式は複雑proceを実証するために特に有用であるdureおよび腸管移植を調査同所齧歯類モデルを確立することを計画してグループのための初期の落とし穴を避けることができます。

通常の術後経過移植された動物は約1時間熱ランプ下の手順から迅速に回復する必要があります。低体温は術後死亡の主要な原因であるため、慎重に内および術後に避けるべきである。術中流体損失は2.5ミリリットル生理食塩水の皮下注射プラス2.5ミリリットルグルコース5パーセント最初の24時間毎に8時間に置き換えなければなりません。ラットはまた、術後最初の24時間のためにグルコース溶液（またはゲルダイエット）と水POへの無料アクセスを提供しなければなりません。この期間の後、彼らは標準ラット飼料と水を自由に摂取への無料アクセスを正常な摂食行動を取り戻す必要があります。痛みは麻酔導入時に投与されるべき1枚目の撮影で、三日間カルプロフェン5 mg / kg皮下毎日の投与によって制御されます。周術期の抗生物質の予防的投与は、同種の設定で必要とされ、その5-7日（アンピシリン15 mg / kg皮下、qの12時間）にわたって投与することができます。一般外観、毛皮の条件など、粘膜の外観が正常である必要があります。 PODの1後の活動レベルは、術前の状態に戻す必要があり、無関心のまたは異常な動作が早期手術合併症を示唆...

小腸移植は、不可逆的な腸の障害を持つ患者のための受け入れられる治療の選択肢となっています。ラットにおける同所性小腸移植の私達の実験モデルは、腸移植を複雑に基礎免疫および炎症プロセスに対処するための信頼性の高いツールとして機能します。

小腸移植は、短腸症候群および静脈栄養不全の患者にとって、認められた臨床的選択肢となっています...

本手順の全体的な目的は、ラットにおいて腸管の同所移植を行うことです。まず、ドナー動物から小腸を摘出します。次に、移植に先立ち、いわゆるバックテーブルでの腸管グラフトの調製を行います。手順の第3段階は、動脈および静脈の吻合を行い、続いてグラフトの再灌流を行う植え込みです。手順の最終段階は、胃切開術および回腸回腸吻合術に基づき、それぞれ端端吻合形式で腸吻合を完了させ、腸管の連続性を再確立することです。最終的に、同系移植した動物において、優れたグラフト機能とアレルゲン組み合わせにおける十分な経口栄養吸収を通じて、長期生存を示す結果を得ることができます。しかしながら、急性および慢性腸移植拒絶反応のさまざまな側面を研究することが可能です。本手法は、移植片の不全を招き臨床結果を悪化させる急性および慢性拒絶反応のメカニズムなど、腸移植分野における重要な疑問を解決するのに役立ちます。この手法を視覚的に提示することは極めて重要です。重要なステップの習得が困難である主な理由は、血管径が小さいこと、および温虚血時間を最小限に抑えるために迅速かつ正確なマイクロサージャリー技術を用いる必要があるためです。ドナーラットの手術前に、24時間絶食させ、水とグルコース溶液のみを自由に摂取できるようにします。2% isof fluorine の吸入により動物を麻酔した後、足趾への刺激により鎮静状態を確認します。腹部をつまんで毛を剃り、スキンプレップで皮膚を3回消毒します。次に、鎮痛剤を皮下投与し、メスを用いて正中切開を行います。手術用顕微鏡下で正中切開を施行してください。小腸を生理食塩水で浸したガーゼで包み、滅菌した綿球とスワブを用いて腹部の左側に配置します。必要に応じて、7-0のシルク（8文字結び）を用いたマイクロ鉗子で、膵臓と上行結腸の間の生理的な癒着を慎重に剥離します。上行結腸を上腸間膜静脈（SMV）の右側へ広げた後、7-0の結紮糸（8文字結び）を用いて回盲動脈および右中結腸動脈を切断します。また、形状を整えたプラスターキャストで固定した蚊鉗子（モスキートクランプ）を用いて、右結腸動脈および中結腸動脈を切断します。胃を上方へ牽引し、SMV全体が直線状に伸びて露出するようにします。次に、SMVから出ている膵十二指腸静脈を結紮し、切断します。その後、グラフトを腹部の右側へ反転させます。グラフトを腹部右側に置いた状態で、SMVと腹部大動脈の間のすべてのリンパ管を含む緩い結合組織にアクセスできるようになります。7-0シルクを用いて組織を結紮し、切断することで、腸管グラフトからの術後リンパ漏を防止します。結合組織を切り開き、右腎動脈を結紮して切断します。陰茎静脈から200 unitsのヘパリンをIV投与し、ラットを全身ヘパリン化します。辺縁動脈を結紮し、十二指腸空腸接合部および末端回腸の小腸を切断します。SMAの起始部より近位側で大動脈を結紮し、脾静脈との合流部で門脈を切断します。大動脈セグメントを含むSMAの血管柄とともにグラフトを採取します。大動脈管を介して、10 mLシリンジに取り付けた20ゲージのIVカテーテルを使用します。3 mLの冷却したUniversity of Wisconsin溶液（UW溶液）を用いてグラフトを灌流します。次に、レシピエントの準備を行う間に、50 mLシリンジを用いて、腸管腔のAL端から30 mLの冷たいセチン溶液で洗浄します。レシピエントラットの手術まで、グラフトを冷たいUW溶液中で保存してください。2%isof fluorineで動物を麻酔した後、水とグルコース溶液を自由にとれる状態で24時間絶食させます。術中鎮痛のためにカロプロフェンを投与します。腹部を剃毛し、スキンプレップで皮膚を3回消毒します。次に、正中切開を行います。レシピエントの腸管を生理食塩水に浸したGREで包み、レシピエントの胸の上に置きます。滅菌綿球とスワブを使用して後腹膜を鈍的に開いて、腎血管の直下から腸骨血管のレベルまで、腹大動脈と下大静脈を露出させ、出血を回避します。大動脈および下大静脈からの小さな腰部および脊髄の枝を、マイクロクリップで遮断します。左腎血管の下方かつ腸骨動脈分岐部の上方で、大動脈と下大静脈を近位側でクロスクランプします。次に遠位側で両血管の前壁を切開し、残存している血液を洗い流します。グラフトを術野に移動させ、グラフトの大動脈セグメントとレシピエントの腎下大動脈との間で端端吻合を行います。10-0プロリン縫合糸を用いて連続縫合します。グラフトを腹部右側に配置し、動脈吻合の後壁縫合を行い、下側の固定糸を結紮します。次に、グラフトを腹部左側に反転させ、グラフトを左側に保持したまま吻合部の前壁を露出させます。まず下側に保持縫合を配置し、ポーターケーブル吻合を開始します。その後、10-0 prolineを用いて、グラフト門脈とレシピエントの下大静脈（IVC）の間で端端吻合を行います。その後、すべての縫合が完了したら、外側から前壁のステッチを固定します。遠位クランプを取り除き、続いて上部のクランプを取り除きます。吻合部の出血がある場合は、綿棒を用いて直接圧迫止血を行います。腸間膜血管の結紮後、グラフトに均等かつ迅速な再灌流が認められるかを確認し、約16本の6-0 Monocryl 連続縫合糸を用いて、近位空腸2〜3 cmおよび遠位回腸1 cmを残して、レシピエントの小腸全体を切除します。近位側および遠位側の腸管端端吻合を行い、腸管の連続性を回復させます。腹腔内を生理食塩水で洗浄し、汚れがなくなるまで洗い流します。水分補給のため、生理食塩水を2 mL腹腔内投与します。次に、筋肉層に3-0 Vicrylを用い、さらに連続縫合で皮膚を閉じて手術後の腹部を閉じます。早期回復のため、ラットをヒートランプの下に置きます。動物を絶食させ、水とグルコース溶液を自由に摂取させ、2日目の最初の24時間は8時間ごとに生理食塩水とグルコースを皮下投与します。移植処置後、ラットフードと水を自由摂取できるように戻します。術後1日目以降、外見、被毛の状態、および粘膜の外見が正常であることを確認してください。活動レベルが術前の状態に戻る必要があります。しかしながら、無気力または異常な行動は、早期の手術合併症が疑われる兆候です。この図は、同所性小腸移植後の平均術後体重を示しています。初期に最大20%の体重減少が見られますが、術後6日から8日頃にラットは再び体重が増加し始め、通常は術後14日頃までに術前体重の約90%に達します。この手技を行う際は、出血を最小限に抑え、温虚血時間を短縮することに集中することが重要です。手技習得後の成功には時間を要します。この手法は、腸移植分野の研究者が齧歯類モデルを用いて急性および慢性の拒絶反応を探索するための道を切り拓きました。

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ラットにおける同所性左肺移植

このプロトコルは、移植片拒絶反応に対する薬物介入の経時的評価のための回腸造設術によるラットベースの腸移植モデルについて説明しています。...

縦断的予後評価のための外部回腸造設術による腸移植のラット移植拒絶モデル

学ぶラット同所性小腸移植の手技。血管吻合と腸管吻合を含むマイクロサージャリー技術を用いて、免疫学的・炎症性反応を評価し、長期生存と優れた移植片機能を達成する実験モデルを解説します。

ラット同所性小腸移植

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