Name: ラットの総頚動脈で外頚静脈グラフトの介在：洗練された顕微鏡下手術の訓練 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 21 s
Description: 学ぶカフ法による外頚静脈グラフトの総頚動脈介在術をSprague Dawleyラットで。新内膜肥厚の病因研究と血管外科の訓練に有用な簡略化プロトコルを示す。

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本研究では、アーヘン工科大学、ドイツ（：START 690753 &quot;ArterialisationvenöserGefäßeダイ&quot;タイトル）医学部の研究推進プログラム &quot;START&quot;によって賄われていた。私たちは、彼女の優秀な編集支援のため夫人メアリー·ジョアンBlümichに感謝したいと思います。

1。実験動物<ol><li>動物保護FELASAのガイドラインに従って、実行されるすべての実験のために地域の倫理委員会の承認を得る。 </li><li>いかなる商業ブリーダー（ 例えばチャールズリバーWiga GmbHはSulzfeld、Germany）から購入することが可能な雌Sprague-Dawleyラットを使用しています。私たちは7匹術後3,6および12週目に屠殺し、その各々の3つのグループに分かれて21頭を使用していました。購入時には、動物は12週齢であると250〜300グラムの重量を量るべきである。 </li><li> 21の周囲温度を有する気候制御室で動物を飼う℃、食品や水への無料アクセスを相対湿度60％と12時間明暗サイクル。 </li></ol> 2。麻酔や手術の準備<ol><li> 1L /分の酸素流量で設定され、麻酔器に接続されているプレキシグラスボックスを使用して、全身麻酔を誘導し、イソフルラン気化器ワットi番目の5パーセント麻酔ガス。 </li><li>動物の深い感覚の反射が抑制されているとすぐに1.5％イソフルラン気化器で麻酔を維持します。 </li><li>体の暖まる皿の上に仰臥位でラットを固定します。 </li><li> 胸骨柄下2cmに顎角から、脱毛クリームで、その毛皮を押し削除して、それぞれの動物の動作領域を準備します。 </li><li>手術領域、動物および外科医の前面に用意面積に着目して、無菌手術野を準備します。 </li><ul><li>消毒剤でベンチを清掃してください。 </li><li>手術時手洗い溶液（ 例えばクロルヘキシジンと70％イソプロピルアルコール）の複数のアプリケーションを使用して切開部位を準備します。クロルヘキシジン、第一、第二アルコールと、最終的には、スクラブのソリューションを適用する。 </li><li>以前にwを洗浄されている使い捨ての手術着と手術用手袋、またはその代わりに、試験用手袋を着用してくださいi番目の外科消毒。 </li></ul><li>操作手順で滅菌マイクロサージェリーの楽器を使用しています。 </li><li> 10から20倍の倍率で手術用顕微鏡（ワイルドHeerbrugg M650、ガイス、スイス）を使用します。 </li></ol> 3。解剖学 図1は、ラットの首の解剖を表しています。 1a）の右胸鎖乳突筋の切断前に内臓 。 1b）の右胸鎖乳突筋の切断後の内臓 。 4。カフの準備プラスチックチューブ（Portex、内径0.75ミリメートル、外径0.94ミリメートル、スミスメディカル、英国）から手で3mmの長さで袖口をカット。これらの袖口は、プラスチックチューブ、カフ量の半分から成るカフハンドルの完全なボリュームを含む管状カフ本体で構成されています。カフ本体とカフハンドルの両方が均等に経度であるべきグラム。カフハンドルは外科手術中にカフを操作するために不可欠です。カフを容器の上に滑った後は、ミニブルドッグクランプは、出血を防ぐ位置にカフを維持し、安定性を確保するために、カフハンドルと容器に同時に配置されます。 5。カフテクニック<ol><li>容器の上にカフを滑る。 </li><li>その直後、容器を裏返す、カフ本体の外側の上にそれを引くと7から0絹糸結紮で固定します。このように、カフの内腔は内皮細胞で覆われている。その後、カフ本体の上に静脈グラフトをスリップし、新しい7から0絹糸結紮で固定します。血栓形成を防止するためには、所定の位置に動脈を保持しているタイに連絡から血を避けるために、カフ余裕に非常に近い静脈グラフトタイを固定するために不可欠です。これは、血流方向による遠位吻合するために重要です。しかし、著者によれば、それは考慮されません同じ理由から、近位吻合するのに不可欠です。 </li></ol> 6。外科的処置右外頸静脈の6.1準備<ol><li>直接胸骨柄上約2.5センチ長い正中頸部切開を加えます。 </li><li>周囲の組織から右外頸静脈から1cm長セグメントを完全に分離</li><li> 7から0絹縫合糸と静脈支流をライゲーションする。 </li></ol>右総頸動脈の6.2準備<ol><li>胸鎖乳突筋の準備をして、途中でそれを横断する。 </li><li>動脈または迷走神経を圧迫しないように確認しながら、慎重に右総頸動脈を準備します。ダウン腕頭動脈に頸動脈分岐部からそれを動員する。 </li><li>その後、切断前に7から0絹縫合糸で真ん中に2回を連結。 </li><li>ナイロンカフconsistiスリップカフハンドルが（ 図2b）容器の内側にあることを確認することが重要であることによりボディと総頸動脈の遠位端にハンドル（ 図2a）のng、。 </li><li>まさに安定性（ 図2c）を確保するためのカフ·ハンドル上のミニブルドッグクランプ付き遠総頚動脈のカフの端をクランプします。 </li><li>続いて、得られた動脈の切り株がカフ本体と同じくらいの長さにする必要がありそれによってリガチャー、真後ろに動脈を切った。 </li><li>ヘパリン生理食塩液（20 IUヘパリン/ mlの0.9％NaCl）を使って動脈内腔を洗浄します。後で使用するために適切な位置に置いておき結紮ループを設定します。 </li><li>動脈切り株をプルアップし、カフ本体オーバースリーブのようにそれをスリップ。 </li><li>その後、ライゲーションループと結び目しっかり引き出します。 </li><li>その袖の抜け動脈を防ぐには、トリックを実装するかもしれません：右手sと動脈壁と縫合糸の両方を把握するimultaneouslyと左手のピンセットで（ 図2d）ノット（ 図2e）を作る。 </li><li>近位の動脈断端（ 図2f）についても同じ手順を繰り返します。 </li></ol> 6.3静脈グラフトポジショニング<ol><li>クランプ外頸静脈の消費税1センチメートル長セグメント</li><li> 2カフ、動脈が静脈介在のために互いから離れすぎているので、おおよそこの手順の正しい距離は3-0 VICRYL-縫合糸を使用しているお客様べき各ミニブルドッグクランプの周りにループ。 </li><li>十字両方縫合。 </li><li>続いて、カフ、動脈切り株（ 図2G）の適切な位置決めを可能にし、反対方向に縫合糸を引く</li><li>ヘパリン生理食塩水で静脈部分を洗浄します。 </li><li>カフ遠位頚動脈の上に以前に逆転静脈部分の一方の端をスリップし、正しい位置に固定シルク7から0リガチャーとる。 </li><li>静脈の周囲が完全に均等に把握する必要があることをここで注意することが重要です。 </li><li>ヘパリン生理食塩溶液で静脈セグメントをリンスした後、近位頸動切り株の上に静脈セグメントのもう一方の端をスリップ。 </li><li>ライゲーション（ 図2H）を完了; </li><li>それによって妨げられていない血流と静脈グラフトの動脈化（ 図2I）が可能遠頚動脈切り株にしてから、近位1の最初のミニブルドッグクランプ他の後に1を削除します。血流や脈動がグラフトと総頸動脈（視覚的に評価し）内で観察された場合手術は成功したとみなされます。 </li></ol> 6.4。創縫合皮下縫合実行については、4から0 VICRYLを使用しています。皮膚縫合のためにランニングを3-0 VICRYLを使用しています。 7。リカバリおよび術後管理&lt;/ P&gt; <ol><li>動物は赤外線加温ランプ下で平らな紙の寝具に麻酔から回復しましょう​​。すべての動物が正常に見えるまでの間、家畜の保持領域に手術動物を返しません。 </li><li>術後2日間毎に8月12日HRは0.03から0.05 mg / kg体重scの濃度でブプレノルフィン（Temgesic）を管理する。ブプレノルフィンはちょうどイソフルラン誘導前に投与することができます。 </li><li>彼らの一般的な条件や、病気や感染症の徴候について術後の動物を監視します。 </li></ol> 8。血流測定血管周囲flowprobe（3ミリメートル、MA3PSB）で：移植の術後の開存性を研究遷音速血流計測システム（TS420、トランソニックシステムズヨーロッパBV、マーストリヒト、オランダモデル）を用いて、血流測定で証明された。システムは、ドップラー原理に基づいています。 9。代表的な結果 Fによってaithfully命令は前述のまま、手術の平均持続時間は約65分であった。動物は、優れた物理的条件を提示し、実験全体を通して予想通り体重が増えた：操作の開始時点で動物は312の重量を量った±20.39グラム。 3週間の犠牲時点で、手術後の動物は6週目で、325.2±28.7グラムの重量を量った333±39.9グラム、12週の時点で362.22±29グラム。 いいえ感染は手術部位と先進ない傷では観察されなかった。操作傷は予想された時間で完全に治癒した。神経制御は、脳梗塞や運動の欠乏の徴候を示さなかった。動物は頸動脈で運転され、2つの外頚静脈のいずれかが削除され、自動移植として使用されていたので、後で重要なポイントだった。術後疼痛緩和の治療に全くアレルギー反応は認められなかった。 &gt;全ての動物は、実験全体を通して警戒し、社会的なされた。食べ物や水を得ることに関する彼らの習慣は、全体の時間を通して変わらなかった。 すべての実験の生存率は犠牲の時点で100％であった。グラフト開存率は、最初の10個の手術動物のための60％、残りの11の動物のためのそれに応じて82％であった。合計グラフト開存率は71％であった。 arterialized静脈グラフトにおける血流が犠牲の時点で測定し、8歳の±3犠牲時点の間の統計的有意差なしの3ミリリットル/分であった。 <img src="/files/ftp_upload/4124/4124fig1.jpg" alt="図1" /> 図1ラットの首の解剖学。 1a）の右胸鎖乳突筋の切断前に内臓 。 1b）の右胸鎖乳突筋の切断後の内臓 。 e_content &quot;のfo：キープtogether.withinページ=&quot; always &quot;を&gt; <img src="/files/ftp_upload/4124/4124fig2.jpg" alt="図2" /> カフ遠総頸動脈の断端のクランプc）の工程と、b）カフは総頸動脈の遠位端上に滑って、カフ本体とカフハンドルから成る）カフd）の外転：2術中顕微鏡写真を図カフ上の総頸動脈の切り株と、e）リガチャーと外転総頸動脈の断端を固定して、f）の両方のカフ遠位お ​​よび近位の総頸動脈の切り株の外転後の内臓 、カフ2の近似g）は十字テクニック総頸動脈の切り株、h）を静脈介入後の内臓は、i）静脈介在グラフトの再灌流後の内臓 。 <img src="/files/ftp_upload/4124/4124fig3.jpg" alt="図3" /> 図3： 内臓の概略図静脈介在グラフトの再灌流後。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4124/4124fig3large.jpg" target="_blank">拡大図を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。

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</ol>

特別な利害関係は宣言されません。

総頸動脈で外頚静脈グラフトを介在させるには、高度なマイクロサージェリー技術です。このビデオでは、初心者外科医は実験動物の低い廃棄物と一緒に最小の時間で、このテクニックを習得するのに役立ちます。 それは、過度に深い麻酔ステージを回避うまく制御することができ、外科医に十分な時間が動作することができますので、吸入麻酔は、この操作のための最適なオプションです。またラットはマウスに比べて、はるかに簡単にこのような複雑な手術テクニックを練習するのに適したサイズを提供して実験動物です。 カフテクニックを使用することの利点は、異なる管腔の直径の血管を吻合することができることである。再灌流後の出血を避けるためにカフと外転船の全周を連結することが重要です。このモデルは、高い血流速度と低せん断応力の血行動態をシミュレートするために、勉強することは非常に適しています新生内膜過形成の発達に影響を与えるメカニズム。カフは、血管吻合改造を防止し、移植片内の乱流とそれによって新生内膜過形成の発達を誘導する。 <p class="jove_conten...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td>編んだシルク黒7から0 </td><td>エチコン製品</td><td> 892100 </td><td></td></tr><tr><td>ビクリル3から0 </td><td>エチコン製品</td><td> J285G </td><td></td></tr><tr><td> 4から0ビクリル</td><td>エチコン製品</td><td> J284G </td><td></td></tr><tr><td> Portex非滅菌ナイロンチューブ0.75ミリメートル、0.94ミリメートルファインボアポリエチレン（ポリエチレン）チューブ</td><td> Portex英国</td><td> 800/200/175/100 </td><td></td></tr><tr><td>イソフルオラン5パーセント</td><td></td><td></td><td>すべてgenericon </td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td></td><td></td><td>すべてgenericon </td></tr><tr><td> 0.9％生理食塩水</td><td></td><td&gt; </td><td>すべてgenericon </td></tr><tr><td>ブプレノルフィン</td><td></td><td></td><td>すべてgenericon </td></tr></tbody></table>

ラットの総頚動脈で外頚静脈グラフトの介在：洗練された顕微鏡下手術の訓練

Training a Sophisticated Microsurgical Technique: Interposition of External Jugular Vein Graft in the Common Carotid Artery in Rats

新生内膜過形成は、末梢動脈のバイパス手術で同様に動静脈瘻の動脈冠動脈バイパス手術において非常に重要であるarterialized静脈の狭窄の1主な原因です。1-5は、総頸動脈の静脈グラフト挿入の実験手順カフの手法を用いて新生内膜過形成とそれに対処するための治療法の選択肢の病因を調べるために、いくつかの研究プロジェクトに適用されています6-8カフは新生内膜過形成の発達、それによって血管吻合改造を防止し、移植片内で乱流を誘発します。 優れた静脈静脈グラフトを使用すると、静脈動脈化実験のための確立された小動物モデルである。9月11日これは、現在のプロトコルが確立された頚静脈グラフト介在第一Zou らによって記載された技術。、9と同様に他人を指します12月14日 </sup&gt;それにもかかわらず、これらの引用小動物プロトコルは複雑である。 手続きを簡素化するために、必要な実験動物の数を最小限にするため、ビデオトレーニングで詳細な動作プロトコルが表示されます。このビデオでは、カフテクニックと静脈グラフト介在両方を学ぶ初心者外科医を助ける必要があります。これにより、右外頸静脈は、それぞれ21日目、42および84に屠殺した3つの等しいグループに分類21雌性Sprague Dawleyラットの総頚動脈のカフの技術で移植した。自動移植が行われたため、特筆すべきは、NOドナー動物は、必要ありませんでした。生存率は犠牲の時点で100％であった。また、グラフト開存率は、最初の10個の手術動物のための60％、残りの11の動物のための82％であった。屠殺時に血液の流れが8±3ミリリットル/分であった。結論として、この外科的プロトコルはかなり簡素化され、このコンピュータを最適化し、標準化licated手順。それによって彼らは速く専門知識を獲得し、実験動物の無駄な犠牲を避けるために貢献し、可能な落とし穴を説明して、初心者の外科医に、簡単なステップバイステップの指示を与える。

新生内膜過形成はarterialized静脈の狭窄症の主な原因です。右外頸静脈は、Sprague Dawleyラットの総頚動脈のカフ手法を用いてグラフト化されることにより、我々は新しいプロトコルを提案する。生存率は犠牲の時点で100％であった。

新生内膜増殖は、冠動脈バイパス術において極めて重要な動脈化静脈における狭窄の主要な原因の一つであり、...

新生内膜増殖は、末梢動脈バイパス手術や冠動脈バイパス手術に使用される動脈化静脈、および動静脈瘻の静脈グラフトにおいて、狭窄を引き起こす主要な原因の一つです。新生内膜増殖の病因および現在の治療選択肢を研究するため、いくつかの研究プロジェクトにおいて総頸動脈への介在術が行われてきました。しかしながら、小動物モデルを用いた従来の微小外科的手技は複雑で困難であり、全工程を簡略化するために過剰な実験動物の犠牲を必要とします。このビデオでは、若手外科医が切除手技と静脈移植術を習得するのに役立つ詳細な操作プロトコルを解説します。総頸動脈へのインターポジション（間置術）を行い、市販の繁殖業者から入手した雌のSprague Dawleyラット21匹を3つの等分グループに分け、それぞれ21日目、42日目、84日目に手術および犠牲処理を行いました。動物の全身麻酔は、酸素流量1 L/minに設定された麻酔機と5%の麻酔ガスを供給するイソフルラン気化器に接続したプレキシガラス製ボックスを用いて導入しました。この図では、右胸鎖乳突筋を切断する前の様子が示されています。ここでは外頸静脈が確認できます。続いて、右胸鎖乳突筋を切断した後の様子が示されており、右総頸動脈と右迷走神経が露出しています。以下の操作では、カフ法を用いて吻合を行います。カフは、3 mmの長さに切断したプラスチックチューブを用いて手製で作成します。これらのカフは、プラスチックチューブの全容積を含む管状のカフ本体と、カフ容積の半分で構成されるカフハンドルで構成されています。カフ本体とカフハンドルは同じ長さです。カフを総頸動脈に被せます。血管とカフハンドルは、ミニブルドッグクランプを用いて一緒に安全にクランプできます。その後、血管を反転させ、カフ本体の外側に引き寄せます。次に、シルク結紮糸で固定します。これにより、カフの内腔が内皮細胞で覆われます。静脈グラフトを、カップ状になった両側の総頸動脈断端に被せ、シルク結紮糸で固定します。血栓形成、特に遠位吻合部での形成を防ぐためには、動脈を固定している結紮糸に血液が接触するのを避けるため、静脈グラフトの結紮をカフ縁の非常に近い位置で行うことが不可欠です。胸骨外側の胸鎖乳突筋の直上の位置に、長さ2.5 cmの中央頸部切開を加えます。周囲の組織から完全に分離された、太い外頸静脈を確認できます。ここでは、静脈分枝を7-0シルク縫合糸で結紮し、完全に遊離させた外頸静脈を確認できます。胸鎖乳突筋を切断した後、胸鎖乳突筋を準備します。これで、右総頸動脈を確認することができます。総頸動脈を、動脈や迷走神経を圧迫しないように注意深く剥離します。これにより、総頸動脈の全長が露出します。次に、血管の中央を7-0シルク糸を用いて2箇所結紮します。その後、これら2つの結紮部位の間で総頸動脈を切断します。次に、本体とハンドルからなるナイロン製カフを総角膜動脈の遠位端に被せ、カフのハンドルが血管の背面に位置するようにします。その後、総角膜動脈遠位端のカフ装着部位を、カフのハンドル上の位置でミニブルドッグクランプを用いて固定します。これにより安定性が確保されます。続いて、結紮部位の直後で動脈を切断し、得られた動脈断端の長さがカフ本体と同程度になるようにします。動脈腔内をヘパリン生理食塩水で洗浄した後、結紮ループを脇に除けます。その後直ちに、動脈端を上に引き上げ、カフ本体にスリーブのように被せます。続いて、結紮ループを強く引き締め、結節を作ることで動脈がスリーブから脱落するのを防ぎます。ここでは、動脈壁と縫合糸の両方を一度に鉗子で挟み、もう一方の鉗子を用いて結紮するという手法を用います。次に、同様の手順を近位動脈断端に対して繰り返し、カフをカフ付き総頸動脈の近位端に被せます。クランプ、動脈の切断、洗浄、結紮ループの動脈断端への配置、動脈断端へのカフの被せ、そして最後に結紮ループの結紮を行います。クランプした外頸静脈から1 cmのセグメントを切除します。2本のカフ付き動脈の間隔が離れすぎているため、静脈介在術で本手技に適した距離まで接近させることができません。3-0 Vicryl縫合糸を各ミニブルドッグクランプに掛け、2本の糸を交差させます。次に、糸を反対方向に引くことで、カップ状にした動脈断端を適切に配置します。ヘパリン生理食塩水で洗浄します。縫合糸をカップ状の遠位角膜動脈に回した後、逆転させすすぎを行った静脈セグメントの一端を、カフ状の遠位角膜動脈に被せます。次に、適切な位置で縫合糸を結紮します。この際、結紮が静脈グラフトの全周を包含していることを確認することが重要です。次に、静脈セグメントを再びヘパリン生理食塩水で洗浄し、静脈セグメントのもう一方の端を近位の角膜動脈断端に滑り込ませます。続いて、結紮を完了させます。ここで、完成した静脈介在移植片を確認できます。その後、2つのミニブルドッグクランプを取り除きます。まず遠位側のクランプを取り除き、次に近位側のクランプを取り除きます。これで、動静脈間インターポジショングラフトの配置が完了します。総頸動脈および静脈グラフトに拍動が確認されます。創閉鎖のためにクランプを取り除いた後、4-0 Vicrylを用いて皮下連続縫合を行い、さらに3-0 Vicrylを用いて皮膚の連続縫合を行います。動物は赤外線保温ランプの下、平らなペーパーベッディング上で回復させます。動物には術後に、体重1kgあたり0.03から0.05mgの濃度の塩化ノルフィネフリンを8〜12時間おきに2日間皮下投与したところ、安楽死時の生存率は100%であった。さらに、グラフト開存率は、最初の手術個体10匹で60%、残りの11匹で82%であった。安楽死時の血流量は8 ± 3 mL/minであった。カフ法を用いることで、管腔径の異なる血管同士を吻合させることができます。再灌流後の出血を避けるため、カフを施した血管およびTED血管の全周を確実に結紮することが重要です。血栓形成（特に遠位吻合部において）を防ぐには、静脈グラフトの結紮糸をカフの縁に極めて近くに固定し、血流が動脈を固定している結紮糸に接触しないようにすることが不可欠です。このモデルは、高血流速度および低せん断応力の血行動態をシミュレートし、内膜肥厚の発生に影響を与えるメカニズムを研究するのに非常に適しています。大静脈をグラフトとして使用する手法とは異なり、外頸静脈をグラフトとして用いるこの自家移植により、必要な実験動物数を半分に削減できます。最終的に、総頸動脈に外頸静脈グラフトを挿入することは、高度なマイクロサージャリー技術となります。このビデオは、実験動物の犠牲を最小限に抑えつつ、外科医が最短時間でソナタ法を習得することを目的としています。このモデルは、現在小動物の固形臓器移植で用いられているカフ法を、経験の浅い外科医が練習するための優れた手段となります。

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Medicine

医学

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