Name: 培養大人の背根神経節ニューロンの軸索再生の遺伝学的研究 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: 学ぶ 軸索再生の遺伝学的研究法。マウス背根神経節ニューロンを電気穿孔で遺伝子導入し、再培養後に顕微鏡観察で軸索伸長を解析する。この手法は機能喪失研究に有用である。

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この作品は、NIH（R01NS064288）とクレイグ·H.ニールセン財団からFZへの補助金によって支えられている。

1。カバーガラス、培養培地、消化酵素の調製<ol><li>の12 mmラウンド第1カバーガラスは、神経細胞の培養に使用されています。カバーガラスは一晩に3回（20分/時間）の蒸留脱イオン水と超音波洗浄、続いて10％塩酸で洗浄されています。きれいにカバースリップは、将来の使用のために70％エタノールに格納されています。各実験前に、カバーガラスは、空気乾燥させ、培養プレートに配置されます。 </li><li>コー​​トに乾燥させたカバーガラスを、100μg/ mlのポリ-D-リジンと10μg/ mlのラミニン実用的なソリューションを含む塗布液の100μlを各カバースリップの上に追加され、培養プレートを37℃のインキュベーターに転送されます。 1〜2時間後、コーティング溶液を除去し、カバースリップは、滅菌1X PBSで3回洗浄されています。 </li><li>培地、最小必須培地（MEM）を調製するが5％ウシ胎児血清（FBS）、1Xペニシリン - ストレプトマイシン溶液（房毛の500台で補足されるLINおよびストレプトマイシン500μg）を、1Xグルタミン-Iサプリメント、および20μM5 - フルオロ-2 - デオキシウリジンおよび20μMウリジン（FDU / R）を含む抗有糸分裂試薬。無血清培地では、FBSが補足B27に置き換えられます。 </li><li>コラゲナーゼは、溶液を1 mg / mlのワーキング濃度を作るためにコラゲナーゼのMEMと粉末を溶解して調製されています。トリプシンでは、1X TrypLE Expressが使用されています。 </li></ol> 2。成体マウスDRGニューロンの解剖と収穫<ol><li> 6安楽死した後 - 10週齢の成体マウスに、背部皮膚を除去し、全脊柱を切った。 1 X PBSに2-3回で削除脊柱を洗浄します。 </li><li>腹側アップ、と解剖プレートに削除脊柱を固定し、慎重に解剖顕微鏡下で感覚神経を露出させる筋肉を削除します。木材レベルでDRGSに接続されている神経が太いと見つけやすいです。したがって、ほとんどの実験のために腰椎のみDRGSは、収穫されます。 </li><li>小さなハサミで中心線に沿って各椎骨を切って、慎重に椎間板を除去します。脊髄を露出するために、各椎骨を分割するために鉗子を使用します。 </li><li>木材DRGSを解剖するには、鉗子でそれぞれの木材の神経を持ち上げると、関連腰椎DRGSを（L1からL6まで）を見つけるために脊髄に向かってトレースします。 </li><li>接続された末梢神経、春のはさみで背腹根から各DRGを切断し、氷上に置いたMEM培地で遠心管に入れて保管してください。必要なときに別の脊髄レベル（ 例えば胸部DRGS）でより多くのDRGSは、同様の方法で切り出しすることができます。 </li></ol> 3。成体マウスDRGニューロンの消化と解離<ol><li>すべての解剖DRGSを収集した後、1 mlのコラゲナーゼ溶液をMEM培地を交換し、90分間37℃で遠心チューブをインキュベートします。 </li><li>ので、500μlの1X TrypLE Expressを使用してコラゲナーゼ溶液を交換する37 lutionとインキュベート°C 15〜20分間。 </li><li> TrypLE Expressソリューションを削除し、3回のために1ミリリットル準備培地（5％FBSを含む）でDRGSを洗う。 </li><li> 600μlの培養液を加え、穏やかに1ミリリットル青を使用して20〜30倍のために組織をひいて粉にするために上下にピペッティングし、ピペットチップは卒業しました。 </li><li>粉砕した後、非解離組織は微量の底に落ち着くと10 mlの滅菌チューブに細胞懸濁液を転送することができます。別の600μlの培養液を追加し、ほとんどの組織が解離されるまで摩手順を繰り返します。得られた細胞懸濁液は神経細胞と非神経細胞の両方が含まれています。ほとんどの場合、6 DRGS（〜5×10 4）からの細胞を1エレクトロポレーション反応に使用されています。 </li></ol> 4。エレクトロポレーションを介した神経細胞の遺伝子操作<ol><li> DNAプラスミド（〜10μgのマウスニューロンAmaxaのヌクレオソリューションを混合することにより、トランスフェクション溶液を調製場合）またはsiRNAオリゴは（〜0.2 nmol）をそれぞれトランスフェクションのために100μlの最終容量を作る。 </li><li>室温で7分間680 rpmで解離した細胞を遠心し、可能な限り上清を捨てる。準備されたトランスフェクション溶液を加え、穏やかに再懸濁細胞に200μlのピペットチップで3〜4回ピペッティングします。 </li><li>エレクトロポレーションキュベットにトランスフェクション溶液と混合した細胞懸濁液を転送しAmaxaのNucleofectorシステムプログラムG-013を用いて細胞をエレクトロポ。 </li><li>エレクトロポレーションした後、直ちにあらかじめ温めておいた（37℃）培養液をキュベットにFBSを含有し、所望の細胞密度でコーティングした培養プレートにすべての溶液（〜600μl）を移すの500μlを添加します。再懸濁および再メッキを必要とする実験では、ニューロンは、高密度（10000から20000細胞/ウェル）でプラスチック製の培養皿上で直接培養する。直接軸索の成長を調べた実験では、ニューロンがメッキONTです。低密度（3000-5000細胞/ウェル）でコーティングしたカバーガラスをO。インキュベーター（37℃、5％CO 2）に培養プレートを配置します。 </li><li>ニューロンは、基板に接続しためっき後四時間、静かに500μlの新鮮予め温めておいた培地で培養培地（Amaxaのヌクレオソリューションを含む）を交換して、追加の文化インキュベーターにプレートを戻す（37°C 、5％CO 2）。 FBSまたは無血清培地を含む培養培地の両方がこのステップで使用することができます。 </li></ol> 5。軸索成長解析のための培養成人DRGニューロン<ol><li> DNAプラスミドでトランスフェクションのニューロンについては、目的遺伝子（ 例えば、EGFP）の発現は、エレクトロポレーション後、数時間、早ければ観察することができます。 siRNAでトランスフェニューロンでは、我々は通常内因性タンパク質の十分な枯渇を可能にするために3-4日を待ちます。培養神経細胞は、直接バリオにおける軸索成長解析のために固定することができます我々の時点（エレクトロポレーション後1-4日）または再懸濁させ、軸索の再成長を分析するために再播種します（下記参照）。 </li><li> RNAiによる機能喪失研究のために、培養神経細胞を再懸濁することができると軸索が標的タンパク質がすでに枯渇されたニューロンから、再成長できるようにするために再播種した。これを行うには、培養皿から接続された神経細胞を再懸濁するために6-10回のために1ミリリットル予め温めておいた新鮮な培地とピペット優しく上下の高密度培養ニューロンの古い培地を交換してください。非神経細胞（ 例えばシュワン細胞）の神経細胞より培養皿にはるかに厳しい添付するので、再懸濁した細胞は、主に神経細胞があります。 </li><li>マイクロチューブに再懸濁した神経細胞を移し、静かに、単一細胞懸濁液中に細胞塊を再解離する10〜15倍をひいて粉にする。 </li><li>低密度（3000-5000細胞/ウェル）および培養で一晩、新しく調製したカバースリップ上に再プレートの再解離ニューロン（16-24時間）。 </li></ol> 6。固定、免疫染色し、蛍光イメージング<ol><li>培地を吸引除去し、室温で15〜20分間細胞を固定し、4％パラホルムアルデヒド（PFA）（200μl/ウェル）を追加します。固定した細胞は、その後3回の1X PBSで洗浄されています。 </li><li> PBSを吸引除去し、室温で60分間固定ニューロンにブロッキング液（1X PBS中1％ウシ血清アルブミン、0.1％トリトンX-100、2.0％正常ヤギ血清）を追加します。 </li><li>ラベルの軸索に、ニューロンは抗ニューロフィラメントまたは抗βIIIチューブリン抗体で免疫染色されている。これを行うには、各カバースリップのためにパラフィルム上で一次抗体溶液（-βIIIチューブリン抗体の1:1200希釈）の30μlドロップを配置します。カバースリップを反転し、室温で60分間一次抗体溶液の上に置きます。 </li><li>元の培養プレートにカバースリップを返し、3回1X PBSで洗い流してください。 </li><li>二次のために同じ手順を繰り返します。tibody。 </li><li> 3回蒸留水でカバーガラスを洗浄し、次にマウントソリューション（ 例えば Gold退色防止を延ばす）でスライドガラス上にカバースリップをマウントします。 </li><li>染色されたニューロンは、デジタルカメラを搭載するすべての蛍光顕微鏡システムで撮像することができます。軸索の長さを測定し、画像解析ソフトウェアで解析されています。 </li></ol> 7。代表的な結果追加されたすべての細胞増殖因子の不在下で、成体のDRGニューロンは通常、最初にメッキした後に軸索を48時間の成長を開始します。軸索は、しばしば分枝状の形態（ 図1）を示しています。対照的に、再メッキのニューロンは、めっき後のわずか数時間の軸索を拡張し、軸索は大幅に削減分岐（ 図2）と伸長を開始します。これらの結果は、再メッキニューロンはエアコン病変の神経細胞と同様の特性を共有することをお勧めします。このアプローチを使用することによって、我々は最近、損失を実行したの機能は、研究in vitroでの大人のDRGニューロンから軸索成長の軸索の再生に関連する転写因子c-Junの役割に調べることができます。結果は（-TARGETplus ON）c-Junの異なる領域を標的と4 ​​つの異なるsiRNAの群のエレクトロポレーションを示した顕著な3日間トランスフェクション（ 図3）9後の成人DRGニューロンにc-Junのタンパク質レベルを低下させた。 9：; c-Junのノックダウンニューロンからニューロンが再メッキと一晩培養し、軸索成長が著しく（262.32±15.69μmの、 図3 SI-c-Junの348.37±16.21ミリメートル制御）減少した。これらの結果は、培養された大人のDRGニューロンは成体ニューロンからの軸索成長を研究するための有用なモデルシステムを提供することを示しています。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/4141/4141fig1.jpg" /> 図1成体マウスのDRGニューロンは3日間低密度で培養した。ニューロンは抗で染色した - ＆Bη、IIIチューブリン抗体。ほとんどの軸索は分枝状の形態を示すことに注意してください。スケールバー：125μmである。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/4141/4141fig2.jpg" /> 図2。文化の中で3日後にDRGニューロンの再メッキ成体マウス。 （A）大人のDRGニューロンは3日間高い密度で培養した。 （B）再メッキ成人DRGニューロンは一晩のために低密度で培養した。そのほとんどの軸索はほとんど軸索分岐の細長い形態を示して注意してください。スケールバー：B.と125μmのでは250μm <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/4141/4141fig3.jpg" /> 図3。 試験管内で成人DRGニューロンから軸索成長におけるc-Junの役割。 （A）成体マウスにおけるc-Junのウェスタンブロット分析は、c-JunのsiRNAのエレクトロポレーション後のDRGニューロン。その結果、c-Junの著しく低下レベルを示します。 （B）EGFPをトランスフェクションコントロールニューロンは、再メッキ、一晩培養した後、長い軸索を成長した。 （C）のCo-トランスc-JunのsiRNAは、再メッキ、一晩培養後の成人DRGニューロンからEGFP障害軸索の成長クション。赤：TUJ-1染色、緑：EGFP。スケールバー：125μmである。これらの結果はSaijilafuらに公開されている9。

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<li>Zhou, F. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophins+support+regenerative+axon+assembly+over+CSPGs+by+an+ECM-integrin-independent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Neurotrophins support regenerative axon assembly over CSPGs by an ECM-integrin-independent mechanism.</a> J. Cell Sci. 119, 2787-2796 (2006).</li>
<li>Zou, H., Ho, C., Wong, K., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axotomy-induced+Smad1+activation+promotes+axonal+growth+in+adult+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Axotomy-induced Smad1 activation promotes axonal growth in adult sensory neurons.</a> J. Neurosci. 29, 7116-7123 (2009).</li>
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<li>Saijilafu,, Hur, E. M., Zhou, F. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+axon+regeneration+via+in+vivo+electroporation+of+adult+mouse+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of axon regeneration via in vivo electroporation of adult mouse sensory neurons.</a> Nat. Commun. 2, 543-54 (2011).</li>
<li>Costigan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replicate+high-density+rat+genome+oligonucleotide+microarrays+reveal+hundreds+of+regulated+genes+in+the+dorsal+root+ganglion+after+peripheral+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Replicate high-density rat genome oligonucleotide microarrays reveal hundreds of regulated genes in the dorsal root ganglion after peripheral nerve injury.</a> BMC Neurosci. 3, 16(2002).</li>
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<li>Michaelevski, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+to+transcription+networks+in+the+neuronal+retrograde+injury+response%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Signal%22%5BJournal%5D)">Signaling to transcription networks in the neuronal retrograde injury response.</a> Sci. Signal. 3, ra53(2010).</li>
</ol>

利害の衝突が宣言されません。

大人のDRGニューロンはこうして大人の動物では軸索の再生を研究するために有用なシステムを提供し、確実にin vivo及び in vitro における末梢神経損傷後に軸索を再生成します。大人のDRGニューロンのin vitro培養の分子メカニズムを調べるために広く使われている方式になってきているから軸索再生が規制されています。培養成体マウスDRGニューロンの in vitro の手順でここで、回生軸索の成長を迅速かつ効果的な遺伝学的研究を可能にし発表した。それは軸索が標的タンパク質が既に枯渇されているのニューロンから再成長することができますので、再懸濁および再メッキの手順では、機能喪失研究のために特に便利です。また、再度メッキ培養DRGニューロンはこのようにin vitroでの軸索の再生を研究する多くの生理学的に関連するアプローチを提供し、in vivoでのコンディショニング病変の効果によく似ています。 成人DRG nのトラ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td> MEM </td><td>インビトロジェン</td><td> 11090-081 </td></tr><tr><td>ポリ-D-リジン臭化水素酸塩</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> P6407 </td></tr><tr><td>ラミニン</td><td>インビトロジェン</td><td> 23017-015 </td></tr><tr><td> 5 - フルオロ-2 - デオキシウリジン</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> F0503 </td></tr><tr><td>ウリジン</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> U3003 </td></tr><tr><td>コラゲナーゼ</td><td>ロシュ社</td><td> 10103578001 </td></tr><tr><td> TrypLEエクスプレス</td><td>インビトロジェン</td><td> 12604-013 </td></tr><tr><td>ウシ胎仔血清</td><td>インビトロジェン</td><td> 10270-098 </td></tr><tr><td>ペニシリン - ストレプトマイシン（100X） </td><td>インビトロジェン</td><td> 15140-122</td></tr><tr><td>グルタミン-I（100X） </td><td>インビトロジェン</td><td> 35050-038 </td></tr><tr><td>ガラスカバースリップ（＃1） </td><td>電子顕微鏡学</td><td> 72196から12 </td></tr><tr><td> 24ウェル細胞培養プレート</td><td>ベクトン·ディッキンソン</td><td> 35から3047 </td></tr><tr><td> 1X PBS </td><td>メディアテック</td><td> 21から040-CV </td></tr><tr><td>無菌の蒸留脱イオン水</td><td>メディアテック</td><td> 25から055-CV </td></tr><tr><td>マウスのニューロンのNucleofectorとエレクトロポレーションキット</td><td>ロンザ</td><td> VPG-1001 </td></tr><tr><td> c-Junのに対してON-TARGETplus siRNAを</td><td> Dharmacon </td><td> L-043776 </td></tr><tr><td>抗 - βIIIチューブリン抗体（TUJ-1） </td><td> Covance </td><td> MMS-435P </td></tr><tr><td> Gold退色防止マウントソリューションを長引かせる</td><td>インビトロジェン</td><td> P36930 </td></tr></TBODY&gt; </table>

培養大人の背根神経節ニューロンの軸索再生の遺伝学的研究

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

それはよく、中枢神経系（CNS）の成熟したニューロンが成熟した中枢神経系の1,2軸索の成長と敵対的な環境をサポートするために減少した固有の能力に起因する負傷した後に軸索を再生成することができないことが知られている。対照的に、末梢神経系（PNS）の成熟したニューロンが傷害3の後に容易に再生成します。成人後根神経節（DRG）ニューロンはよく末梢神経損傷後、確実に再生することが知られています。周辺ターゲットと脊髄に延びる中央の分岐を支配末梢枝：各DRGニューロンは細胞体から、どの枝2軸索の枝に1軸索を成長します。実質的な軸索再生におけるDRGの末梢軸索結果の損傷は、脊髄の中心的な軸索のに対し、損傷後の不十分な再生成します。末梢軸索損傷は、脊髄損傷（プロセスがコンディショニング病変と呼ばれる）、中央の軸索の再生の前に発生した場合は、greatlです。yは4を改善しました 。また、DRGニューロンの中央の軸索は、脊髄での皮質脊髄軸索を降順同じ敵対的な環境を共有しています。一緒に、それは大人のDRGニューロンの軸索再生を制御する分子メカニズムは中枢神経系の軸索再生を向上させるために利用することができると仮定されています。その結果、成人DRGニューロンは、現在広く再生軸索成長5-7研究するモデル系として使用されています。 ここでは、in vitroでの軸索再生の遺伝学的研究に使用することができる大人のDRGニューロンの培養方法について説明します。このモデルでは、成人DRGニューロンは遺伝的にエレクトロポレーションによる遺伝子トランスフェクション6,8を介して操作されます。 DNAプラスミドまたはSI / shRNAを、このアプローチは大人のDRGニューロンからの軸索成長の任意の目的遺伝子の役割を調べるために、両方のゲインおよび機能喪失実験を可能にすると神経細胞をトランスフェクトすることにより。ニューロンは、SI / shRNAをトランスフェクトされると、対象となる内因性のタンパク質である通常あまり効果的で機能喪失の検討を進め、強固な軸索の成長が既に発生しているその間に、培養中の3-4日後の枯渇。この問題を解決するために、ここで説明する方法では、軸索が標的タンパク質の存在下でニューロンから再成長することができますトランスフェクション後の再懸濁および再メッキステップが含まれています。最後に、我々は成人DRGニューロンの9時から軸索成長を媒介する軸索再生関連遺伝子、c-Junの、の役割を研究するためにin vitroモデルでこれを使用する例を提供しています。

不定冠詞<em&gt; in vitroで</em培養された成体マウス後根神経節ニューロンを用いた軸索再生の遺伝学的研究のために&gt;モデルが記載されています。方法は、遺伝子操作を受けているニューロンから軸索の再成長を可能にするre-suspension/re-platingステップを含む。このアプローチは、RNAiベースのタンパク質のノックダウンを使用して、軸索再生の機能喪失研究のために特に便利です。

中枢神経系（CNS）の成熟ニューロンは、内在的な能力の低下により、損傷後に軸索を再生できないことがよく知られています...

本手順の総合的な目的は、成体後根神経節（DRG）ニューロンを用いて、哺乳類の軸索再生を研究するためのin vitroモデルを構築することです。まず、成体マウスからDRGを摘出し、それらを単一細胞に分散させます。次に、分散させたニューロンをエレクトロポレーションによってトランスフェクションし、数日間培養することで、遺伝子発現を遺伝学的に操作します。最終ステップは、ニューロンを再懸濁して再播種し、さらに一晩培養することです。最終的に、顕微鏡を用いた軸索長解析を行い、遺伝子操作したニューロンからの軸索再伸長を研究します。本手法で用いられる細胞の再懸濁とステップの反復の主な利点は、すでに遺伝子操作が行われたニューロンからの軸索成長を解析できる点にあります。この手法は、RNIアプローチを用いて目的遺伝子をダウンレギュレートさせる機能喪失研究に特に有用です。本手順のデモンストレーションは、当研究室のポストドクターであるDr.Sfuが行います。神経細胞培養用のカバーガラスを準備するには、まず10%塩酸に一晩浸します。翌日、蒸留水中で1時間的に超音波洗浄を行います。洗浄したカバーガラスを70% ethanolに20分間ずつ計3回浸して保存し、使用前に風乾させます。次に、乾燥したカバーガラスのコーティングを行います。マルチウェルプレートを用意し、1ウェルあたりカバーガラス1枚とコーティング溶液100 microlitersを分注します。プレートを攪拌せずに37 °Cで1〜2時間インキュベートします。インキュベート後、コーティング溶液を除去し、カバーガラスを滅菌1×PBSで3回洗浄します。痛みに対する反応がなくなった、十分に麻酔をかけた6〜10週齢の成マウスを安楽死させます。まず、背側の皮膚を除去します。次に、付随する組織を含め、頸部から尾部までのすべての椎骨を切り離します。最後に、組織の内側に付着している内臓を取り除きます。取り出した脊柱を1×PBSで2〜3回洗浄し、腹側を上にして解剖プレートにピンで固定します。慎重に筋肉を除去し、感覚神経を露出させます。腰髄レベルのDRGに接続している神経が最も太く、容易に特定できます。したがって、ほとんどの実験では腰髄のDRGのみを採取します。小さなはさみを用いて、各椎骨の中心線に沿って切開し、椎間板を慎重に取り除いて椎骨を単離します。L1から始めて、ピンセットで各椎骨を分割し、腰髄DRGを摘出します。ピンセットを用いて、各腰神経を脊髄に向かって辿り、DRGを特定します。この操作をL2からL6まで繰り返します。次に、スプリング剪刀を用いて、単離したDRGから末梢神経の背根および腹根を切り離します。必要に応じて、DRGをMEM培地で満たした冷却済みの1.5 milliliter遠心チューブに保存します。他の脊髄レベルからDRGを採取する場合

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神経科学

このプロトコルでは、我々は、ある軸索の成長にグ​​リア細胞の不均一性の影響を研究する新しい方法を説明...

新しい共培養法を用いた軸索の成長に関する研究グリア細胞の不均一性の影響

我々は、軸索損傷後の脊髄後根神経節の組織からクロマチン免疫沈降法を提示する。アプローチは、特定の転写因子結合部位と末梢および中枢神経系の両方で負傷した軸索の再生のための重要なヒストンとDNAのエピジェネティックな修飾を識別するために使用することができます。...

軸索損傷後の脊髄後根神経節の組織からのクロマチン免疫沈降

出典:Cheah, M., et al.感覚軸索再生のモデルとして、背根神経節注射と背根潰傷傷。J. Vis. Exp.

背根神経節注射と背根挫傷傷を用いたラットの感覚軸索再生のモデル化

出典: Portela-Lomba, M., et.al. 成人軸索再生のインビトロモデルとしての、嗅覚被覆グリアを用いた軸索化ラット網膜神経節ニューロンの共培養。J. Vis.

軸索切開ラット網膜神経節ニューロンにおける軸索再生のイメージングと定量化

出典: Li, Q. et al.ほ乳類の軸索再生の研究 成体マウス後根神経節のin vivoエレクトロポレーションJ. Vis.

感覚軸索再生を促進するマウス後根核のエレクトロポレーション媒介トランスフェクション

後根神経節（DRG）、末梢神経系の感覚ニューロンを含む構造である。解離した場合、それらは損傷部位でのインビボ環境を模倣し、in vitroでの神経再生及び髄鞘形成を研究するための貴重なモデルを提供し、SC-ような脂肪由来幹細胞（ASC）と共培養することができる。...

根神経節ニューロンと差別化された脂肪由来幹細胞を背：<em&gt;インビトロ</em末梢神経再生を研究するために&gt;共培養モデル

このプロトコルは、感覚軸索再生を研究するためのモデルとして、ウイルスベクターによる後根神経節(DRG)注射の使用と成体ラットの同時後根挫傷を示しています。このモデルは、感覚軸索再生を促進するための遺伝子治療の使用を調査するのに適しています。...

後根神経節インジェクションおよび後根感覚軸索再生のためのモデルとして傷害をつぶします

ここでは、としてショウジョウバエ感覚ニューロンの樹状分枝 (da) ニューロン損傷モデルは、体内を組み合わせたライブ イメージング、2...

再生に関する末梢および中枢神経系を研究するため生体内でショウジョウバエ損傷モデル

エレクトロポレーションは、興味の遺伝子を細胞に提供する効果的なアプローチです。このアプローチは生体内で成体マウス後根神経節 (DRG)...

成体マウス後根神経節の調査の哺乳類の軸索の再生: In Vivoエレクトロポレーション

シングルファイバー記録は、中枢および末梢神経系に適用可能な効果的な電気生理学的手法である。付着した坐骨神経を持つ無傷のDRGの調製と共に、伝導障害のメカニズムが調べられる。両方のプロトコルは、末梢神経系と痛みとの関係の理解を向上させます.

インビボシングルファイバー記録と無傷の後部根神経を用いて伝導障害のメカニズムを調べる

神経損傷後の嗅覚神経再生能力(OEG)の神経再生能力を評価するインビトロモデルを発表する。これは、OEG単層上のアキソトマイズ化された直上神経節ニューロン(RGN)の共培養と、RGN軸索およびソマト樹状マーカーを分析することによって、軸索再生のその後の研究に基づいています。...

アキソトマイズ化ラットレチナル神経節ニューロンの嗅覚エンシアシンググリアの共培養、成人軸索再生のインビトロモデルとしての

学ぶ 軸索再生の遺伝学的研究法。マウス背根神経節ニューロンを電気穿孔で遺伝子導入し、再培養後に顕微鏡観察で軸索伸長を解析する。この手法は機能喪失研究に有用である。

培養大人の背根神経節ニューロンの軸索再生の遺伝学的研究

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