Name: 不定冠詞のin vitro共同感染モデル熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）-HIV-1の相互作用 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: 学ぶ Plasmodium falciparum感染赤血球がヒト単球由来マクロファージにおけるHIV-1複製に与える影響をin vitroモデルで評価する手法。この方法はマラリアとHIVの共感染メカニズム解明に貢献します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この作品は、CatalystのCo-感染症や合併症の助成を通じて、健康研究のカナダの協会によってサポートされていました。ヒト赤血球は、センターHospitalierエトワールラヴァル大学血液バンクから提供されました。

<ol><li>WHO. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22World+Malaria+Report%22">World Malaria Report</a>. , (2005).</li>
<li>Kublin, J. G., Patnaik, P., Jere, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Plasmodium+falciparum+malaria+on+concentration+of+HIV-1-RNA+in+the+blood+of+adults+in+rural+Malawi%3A+a+prospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Effect of Plasmodium falciparum malaria on concentration of HIV-1-RNA in the blood of adults in rural Malawi: a prospective cohort study.</a> Lancet. 365, 233-240 (2005).</li>
<li>Cuadros, D. F., Branscum, A. J., Crowley, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-malaria+co-infection%3A+effects+of+malaria+on+the+prevalence+of+HIV+in+East+sub-Saharan+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">HIV-malaria co-infection: effects of malaria on the prevalence of HIV in East sub-Saharan Africa.</a> Int. J. Epidemiol. 40, 931-939 (2011).</li>
<li>Xiao, L., Owen, S. M., Rudolph, D. L., Lal, R. B., Lal, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodium+falciparum+antigen-induced+human+immunodeficiency+virus+type+1+replication+is+mediated+through+induction+of+tumor+necrosis+factor-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Plasmodium falciparum antigen-induced human immunodeficiency virus type 1 replication is mediated through induction of tumor necrosis factor-alpha.</a> J. Infect. Dis. 177, 437-445 (1998).</li>
<li>Froebel, K., Howard, W., Schafer, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+by+malaria+antigens+renders+mononuclear+cells+susceptible+to+HIV+infection+and+re-activates+replication+of+endogenous+HIV+in+cells+from+HIV-infected+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite+Immunol%22%5BJournal%5D)">Activation by malaria antigens renders mononuclear cells susceptible to HIV infection and re-activates replication of endogenous HIV in cells from HIV-infected adults.</a> Parasite Immunol. 26, 213-217 (2004).</li>
<li>Diou, J., Tardif, M. R., Barat, C., Tremblay, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+derived+from+hemozoin-loaded+monocytes+display+a+partial+maturation+phenotype+that+promotes+HIV-1+trans-infection+of+CD4%2B+T+cells+and+virus+replication%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells derived from hemozoin-loaded monocytes display a partial maturation phenotype that promotes HIV-1 trans-infection of CD4+ T cells and virus replication.</a> J. Immunol. 184, 2899-2907 (2010).</li>
<li>Diou, J., Tardif, M. R., Barat, C., Tremblay, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malaria+hemozoin+modulates+susceptibility+of+immature+monocyte-derived+dendritic+cells+to+HIV-1+infection+by+inducing+a+mature-like+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Malaria hemozoin modulates susceptibility of immature monocyte-derived dendritic cells to HIV-1 infection by inducing a mature-like phenotype.</a> Cell Microbiol. 12, 615-625 (2010).</li>
<li>Diou, J., Gauthier, S., Tardif, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ingestion+of+the+malaria+pigment+hemozoin+renders+human+macrophages+less+permissive+to+HIV-1+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Ingestion of the malaria pigment hemozoin renders human macrophages less permissive to HIV-1 infection.</a> Virology. 395, 56-66 (2009).</li>
<li>Davies, J. Q., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human macrophages.</a> Methods Mol. Biol. 290, 105-116 (2005).</li>
<li>Fortin, J. F., Cantin, R., Lamontagne, G., Tremblay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-derived+ICAM-1+glycoproteins+incorporated+on+human+immunodeficiency+virus+type+1+are+biologically+active+and+enhance+viral+infectivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Host-derived ICAM-1 glycoproteins incorporated on human immunodeficiency virus type 1 are biologically active and enhance viral infectivity.</a> J. Virol. 71, 3588-3596 (1997).</li>
<li>Bounou, S., Leclerc, J. E., Tremblay, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+host+ICAM-1+in+laboratory+and+clinical+strains+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+increases+virus+infectivity+and+CD4%28%2B%29-T-cell+depletion+in+human+lymphoid+tissue%2C+a+major+site+of+replication+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Presence of host ICAM-1 in laboratory and clinical strains of human immunodeficiency virus type 1 increases virus infectivity and CD4(+)-T-cell depletion in human lymphoid tissue, a major site of replication in vivo.</a> J. Virol. 76, 1004-1014 (2002).</li>
<li>Wei, X., Decker, J. M., Liu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+resistant+human+immunodeficiency+virus+type+1+in+patients+receiving+fusion+inhibitor+%28T-20%29+monotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Emergence of resistant human immunodeficiency virus type 1 in patients receiving fusion inhibitor (T-20) monotherapy.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 46, 1896-1905 (2002).</li>
<li>Trager, W., Jensen, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+malaria+parasites+in+continuous+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Human malaria parasites in continuous culture.</a> Science. 193, 673-675 (1976).</li>
<li>Turrini, F., Ginsburg, H., Bussolino, F., Pescarmona, G. P., Serra, M. V., Arese, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytosis+of+Plasmodium+falciparum-infected+human+red+blood+cells+by+human+monocytes%3A+involvement+of+immune+and+nonimmune+determinants+and+dependence+on+parasite+developmental+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Phagocytosis of Plasmodium falciparum-infected human red blood cells by human monocytes: involvement of immune and nonimmune determinants and dependence on parasite developmental stage.</a> Blood. 80, 801-808 (1992).</li>
<li>Akkina, R. K., Walton, R. M., Chen, M. L., Li, Q. X., Planelles, V., Chen, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-efficiency+gene+transfer+into+CD34%2B+cells+with+a+human+immunodeficiency+virus+type+1-based+retroviral+vector+pseudotyped+with+vesicular+stomatitis+virus+envelope+glycoprotein+G%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">High-efficiency gene transfer into CD34+ cells with a human immunodeficiency virus type 1-based retroviral vector pseudotyped with vesicular stomatitis virus envelope glycoprotein G.</a> J. Virol. 70, 2581-2585 (1996).</li>
<li>Zhao, C., Papadopoulou, B., Tremblay, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leishmania+infantum+enhances+human+immunodeficiency+virus+type-1+replication+in+primary+human+macrophages+through+a+complex+cytokine+network%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Immunol%22%5BJournal%5D)">Leishmania infantum enhances human immunodeficiency virus type-1 replication in primary human macrophages through a complex cytokine network.</a> Clinical Immunol. 113, 81-88 (2004).</li>
</ol>

利害の衝突が宣言されません。

我々は、ウイルス遺伝子の発現または単球由来マクロファージにおける子孫ウイルスの生産と複製のどちらかを分析することにより、HIV-1ウイルスのサイクル、すなわち上のマラリア原虫の影響を分析するためにここで2つの異なるアプローチを説明しました。同様のアプローチは、他のHIV-1寄生虫の共感染16のために使用されている。しかし、これらの新しいデータはマラリア、HIV-1の共感染の調査では一歩前進です。 実際 、Diou ら 8は、HIV-1複製に、hemozoinの効果ではなく、ライブの寄生虫を研究した。我々の結果と一致して、彼らはhemozoinはウイルスMDMによる生産ではなく、MDMSを阻害すること自体が十分であったことを観察した。 記載された実験レイアウトを使用して、我々は観察されたP.熱帯熱マラリア原虫はマクロファージにおけるHIV-1複製サイクルを明確に有害な効果を発揮する：ウイルス産生の有意な阻害は、マクロファージの寄生虫に事前に暴露さで観察される（Figur電子2A）およびウイルス転写における寄生虫の具体的な影響は、図2Bに示されています。しかし、我々は、ウイルスの侵入または融合（decapsidation）上、またはそのようなタンパク質合成またはウイルス粒子のアセンブリおよび出芽などのポスト統合メカニズムに寄生虫の任意の追加の影響を除外することはできません。さらに、寄生虫、ウイルスと同時にまたは次のMDM感染症のいずれかで追加された場合、HIV-1複製に異なる影響が得られるであろうことが可能である。 私たちは 、in vitro共感染モデルでのHIV-1 / Pの詳細な調査を実行する強力なツールを提供しています宿主細胞内での熱帯熱マラリア原虫の相互作用。例えば、宿主細胞ゲノムへのウイルスretrotranscriptionの具体的な手順とウイルスゲノムの統合を標的とし、定量化できるような定量的リアルタイムPCRのような他の技術とこの実験的なレイアウトの組み合わせは、非常に可能であり、さらにinsiが得られるはず共同の感染症に関与するメカニズムにghts。また、ウイルスのサイクル（ウイルス融合、decapsidation、エントリの定量）の初期段階を評価するための特異的なアッセイは、さらにウイルス複製に及ぼす影響を分析するためにこの基本的なプロトコルに適用することができます。トリチウム標識ヌクレオチドは、おそらくHIV-1 p24抗原のELISAを置き換えることができますを使用して実際にも、標準的なHIV-1逆転写定量アッセイ：これらの変更は、このプロトコルは、HIV-1定量と検出に関する方法を柔軟に表示されます。 MDMに加えて、我々のシステムがこのような単球や樹状細胞などのHIV-1マラリアの相互作用に関連する他の細胞型への適応になることを期待しています。 MDMは、接着細胞であるという事実は、任意のマクロファージを除去することなく、で撮影されていない、またはMDMとの接触にあることをIRBCの外に洗濯しやすいようにできるように、その操作を容易にします。このような利点は、それ自体を複雑に、懸濁液中で培養される樹状細胞や単球には適用されませんでしたそのような細胞とuRBCと自由IRBCのparation、我々は、現在この問題に取り組んでいる。私たちのシステムはまた、そのような共培養実験におけるCD4陽性T細胞のような他の免疫細胞におけるHIV-1ウイルスのサイクルでマラリアにさらされた単球由来細胞の効果など、より複雑な相互作用を研究するのに便利かもしれません。最後に、我々のプロトコルは、Pの影響を見て実験に適している可能性がHIV-1感染者のためのPBMCにおけるHIV-1再活性化で熱帯熱マラリア原虫の iRBCs。 倫理文ヒトPBMCは、センターHospitalierエトワールラヴァル大学研究センターの倫理委員会のガイドラインに従って、健康なドナーの血液から得られた。書面による同意は、すべての血液ドナーから得られた。

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td>マルチセル</td><td> 350から000-CL </td><td></td></tr><tr><td> PBS-エンドトキシンフリー</td><td>シグマ</td><td> D8662 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Wisent </td><td> 080から150 </td><td> 30分間56℃での熱不活化</td></tr><tr><td> Accutase </td><td> eBiosciences </td><td> 00-4555-56 </td><td></td></tr><tr><td> Albumax II </td><td>ギブコ</td><td> 11021-037 </td><td> RPMI 1640に溶解し、フィルター滅菌</td></tr><tr><td>リンパ球分離媒体</td><td>マルチセル</td><td> 305から010-CL </td><td></td></tr><tr><td>白色ルミノメータープレート</td><td>プロメガ</td><td> Z3291 </td><td></td></tr><tr><td> CSのMac分離columms </td><td>ミルテニーバイオテク</td><td> 130-041-305 </td><td></td></tr><tr><td> VarioMacsセパレータ</td><td>ミルテニーバイオテク</td><td> 130-090-282 </td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン溶液</td><td> Wisent </td><td> 450から201-EL </td><td></td></tr><tr><td> D-ソルビトール</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> S1876 </td><td></td></tr><tr><td>セルスクレーパー（25センチ） </td><td>ザルスタット</td><td> 83.1830 </td><td></td></tr><tr><td> 24ウェル細胞培養プレート</td><td> BDファルコン</td><td> 353047 </td><td></td></tr><tr><td> 150×20 mmの培養皿</td><td>ザルスタット</td><td> 83.1803.003 </td><td></td></tr><tr><td> M-CSF </td><td> Genscript </td><td> Z02001 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> H4034 </td><td></td></tr><tr><td>ヒト血清AB + </td><td>バレーメディカル</td><td> HP1022 </td><td></td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Wisent </td><td> 311から505-CL </td><td></td></tr><tr><td>ゲンタマイシン</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> G1397 </td><td></td></tr><tr><td>ヒポキサン​​チン</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> H9636 </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3を </td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> S5761 </td><td></td></tr><tr><td>ルシフェラーゼアッセイシステム</td><td>プロメガ</td><td> E1500 </td><td></td></tr><tr><td>ヒト赤血球</td><td></td><td></td><td>得は、哲血液バンクから精製された。 </td></tr></tbody></table>

不定冠詞<em&gt;のin vitro</em研究する&gt;共同感染モデル<em&gt;熱帯熱マラリア原虫（plasmodium falciparum）</emヒトの第一次単球由来の免疫細胞に&gt;-hiv-1の相互作用

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

熱帯熱マラリア原虫 、マラリアの最悪の形態の病原体、およびヒト免疫不全ウイルス1型（HIV-1）は、毎年1〜4万人が死亡の合計責任がある、世界的に最も重要な健康問題の一つです。特に開発途上地域、サハラ以南のアフリカでの大規模な重複のために、マラリア、HIV-1との共感染が一般的ですが、2つの疾患の間の相互作用は十分に理解されています。疫学的な報告書は、マラリア感染は一過性HIV-1複製を高めると共感染した個体2,3のHIV-1ウイルス量を増加させることが示唆されている。このウイルス血症は、抗マラリア薬による治療後数週間にわたって高いままなので、この現象は疾患の進行および伝送に影響を及ぼす可能性があります。 これらの観​​察の背後にある細胞の免疫学的メカニズムは、ほとんど研究されていない。 in vitro試験investig のいくつかのHIV-1にマラリアの影響をatingは、水溶性のマラリア抗原への曝露が免疫細胞にHIV-1感染と再活性化を高めることができることを実証した。しかし、これらの研究は、Pの全細胞抽出物を使用熱帯熱マラリア原虫シゾント段階の寄生虫および末梢血単核細胞（PBMC）、マラリア成分（s）が観測された効果とどのようなターゲット·ホスト細胞は4,5であったために責任があった解読が困難となっています。最近の仕事はマラリア色素の未熟単球由来樹状細胞の暴露を実証してきましたhemozoinは、CD4 + T細胞の6,7にHIV-1を転送する能力を増加したが、それはマクロファージ8のHIV-1感染を減少させている。この複雑なプロセス、マラリア原虫と異なった、関連するヒト初代細胞集団におけるHIV-1の間の相互作用の体系的な分析に光を当てるために決定的に必要とされる。 Hの影響を調査するためのいくつかのテクニック微生物の貪食におけるIV-1とHIV-1複製にそのような病原体の効果が記載されている。ここではPの影響を調査する手法を提案ヒトの第一次単球由来マクロファージにおけるHIV-1の複製に熱帯熱マラリア原虫に感染した赤血球。感染したマクロファージによって放出ウイルス量への影響は測定することによって決定される一方、HIV-1転写/翻訳のイベントの寄生虫暴露の影響は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子は、env遺伝子に置き換えられていた単一サイクルシュードウイルスを使用して監視されてい細胞上清中のELISAによるp24のHIV-1キャプシドタンパク質。

我々は開発した<em&gt; in vitroで</emの影響を研究する&gt;マラリア、HIV-1の共感染モデル<em&gt;熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）</em&gt;ヒトの第一次単球由来マクロファージにおけるHIV-1複製サイクルで。この汎用性の高いシステムを簡単​​にHIV-1感染に感受性で他の主要な細胞型に適合させることができます。

不定冠詞<em&gt;のin vitro</em研究する&gt;共同感染モデル<em&gt;熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）</emヒトの第一次単球由来の免疫細胞に&gt;-HIV-1の相互作用

最も致死率の高いマラリアの病原体である熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）およびヒト免疫不全ウイルス1型（HIV-1）は、最も重要な...

本手順の目的は、ヒト一次単球由来マクロファージにおけるHIV-1の複製に対する、Plasmodium falciparum感染赤血球の影響を研究するためのin vitroモデルを構築することです。まず、VEACシステムを用いてPlasmodium falciparum感染赤血球を分離し、次いでヒト単球由来マクロファージをこれらの感染細胞にさらすことでこれを達成します。続いて、赤血球にさらした単球由来マクロファージに、完全複製能を持つHIVまたは単一複製能のルシフェラーゼコードHIVを感染させます。最後に、完全複製能を有するウイルスおよびルシフェラーゼコードウイルスを用いて、感染後3、6、9、12日目に培養上清を回収します。感染細胞は感染から72時間後に溶解させます。最終的に、上清中のHIV-1 p24カプシドタンパク質量をELISAで定量することでウイルス複製をモニタリングし、細胞溶解液のルシフェラーゼ定量によってウイルス転写をモニタリングすることができます。この手法は、マラリアとHIVの共感染分野における重要な疑問への回答に役立ちます。例えば、プラスモジウム寄生虫への感染がHIVの複製にどのような影響を与えるか、といった点です。本手法はマクロファージにおけるプラスモジウムとHIVの相互作用を研究するために開発されましたが、他の細胞型にも適用可能です。例えば、樹状細胞、単球、またはCD4 T細胞を用いた本手順のデモンストレーションを行うのは、研究室のポストドクターであるGuadalupe Andreaniです。まず、培養プレートから赤血球を回収し、回収した細胞を10 mLの単球由来マクロファージ培地で洗浄した後、ペレットを12 mLの単球由来マクロファージ培養培地に再懸濁します。次に、細胞懸濁液をMilton ECSカラムにゆっくりと添加し、懸濁液を流します。新鮮な培地で一度カラムを洗浄した後、マグネットから取り外し、12 mLの単球由来マクロファージ培養培地でフラッシュします。カラムに培地を通し、感染した赤血球を滅菌チューブに溶出させ、単球由来マクロファージを感染赤血球または非感染赤血球に曝露させます。あらかじめ準備した単球由来マクロファージを含む24ウェルプレートの各ウェルに、適切な量の赤血球懸濁液を添加します。共培養物を37 °C、5% CO2条件下でインキュベートします。4時間後、赤血球を含む培地を除去し、各ウェルにエンドトキシンフリーのPBSを600 µLずつ静かに加え、洗浄の都度、直ちにPBSを吸引することを3回繰り返します。次に、各ウェルに氷冷した滅菌水を200 µLずつ加え、赤血球を溶血させ、20秒後に水を吸引して除去します。その後、各ウェルに単球由来マクロファージ培養液を600 µLずつ加え、37 °C、5% CO₂の条件下で24時間培養します。単球由来マクロファージにおけるHIV-1複製に対するPlasmodium falciparumの影響を評価するため、この図に示すプロトコルと同様に、NL4-3 BO HIV-1ウイルスを含む単球由来マクロファージ培地300 µLを適切なウェルに加えます。共培養を2時間インキュベートした後、エンドトキシンフリーPBS 600 µLで細胞を3回洗浄します。次に、各ウェルに新鮮な単球由来マクロファージ培地 600 µLを加え、共培養を3日目、6日目、9日目、および12日目にわたって引き続きインキュベートします。初期のウイルス感染後、各上清 200 µLを回収し、回収した細胞懸濁液を新鮮な単球由来マクロファージ培地 200 µLに置き換えます。その後、回収した上清を-20 °Cで保存し、後日ELISAを用いて分析します。寄生虫が単球由来マクロファージにおけるHIV-1遺伝子発現に及ぼす影響を決定するため、ここに示 illustrate したプロトコルと同様に、ルシフェラーゼENC被覆標的ウイルスのp24を含む単球由来マクロファージ培地 300 µLを対応するウェルに分注します。非ルシフェラーゼENC被覆ウイルスの例と同様に共培養系のインキュベーションと洗浄を行った後、感染から 72 時間後に培地を除去し、200 µLのルシフェラーゼアッセイ用溶解バッファーを添加します。室温で緩やかに振盪して細胞を溶解させた後、共培養系を -20 °C で保存します。プレートを解凍した後、各ウェルから40 µLのライセートを、対応する96ウェルルミノメータープレートのウェルに分注します。次に、各ウェルにルシフェラーゼアッセイキットのルシフェラーゼ基質を100 µLずつ加えます。最後に、ルミノメーターを用いてホタルルシフェラーゼ活性を測定します。本実験における製造者の指示に従い、単球由来マクロファージを感染または非感染の赤血球に曝露させた後、NL 4-3 株を感染させました。先に示したように、初期ウイルス感染後の異なる時点で、細胞除去上清中の HIV-1 p24 に対する ELISA により、ウイルス蛋白 P24 の産生をモニタリングしました。寄生虫で前処理した単球由来マクロファージの上清において、HIV-1 p24 カプシド蛋白で測定したウイルス粒子の放出量が、12日目に有意に減少していることに注目してください。本実験では、単球由来マクロファージを感染および非感染の赤血球に曝露させ、その後、前述の通りルシフェラーゼをコードするウイルスに感染させました。そして、初期ウイルス感染から72時間後に、細胞溶解液中のルシフェラーゼ発現を評価しました。外来性のVSVGまたはHIV-1糖タンパク質を保持するこのようなウイルスによる単球由来マクロファージへの感染では、p false sparに曝露された細胞においてルシフェラーゼ産生が有意に低下しました。なお、VSVG擬似型粒子は感染効率が高いため、JRFL-1対照よりもVSVG擬似型ウイルスの方がはるかに高いルシフェラーゼ活性を示したことは注目に値します。この手法により、マラリアおよびHIVの共感染分野の研究者は、複数の免疫細胞種の研究に適応可能なin vitroモデルを用いて、これら2つの病原体間の相互作用を探索することが可能になります。

an-vitro-co-infection-model-to-study-plasmodium-falciparum-hiv-1

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

の選択熱帯熱マラリア原虫</em人間の脳内皮細胞へのCytoadhesion用>寄生虫

このビデオは、ヒト免疫不全ウイルス1型、HIV-1によるヒト子宮粘膜組織の生体外感染と、ゼラチンスポンジの上での気液界面でのそれらの維持を示しています。この方法により、ヒト組織内でのHIV-1の複製と病因のモニタリングが可能になります。...

ex vivo条件でのHIV病因を研究するためのヒト子宮頸部粘膜感染モデル

マラリア-HIV同時感染のin vitro細胞培養モデルの生成

ヒト呼吸器合胞体ウイルス(HRSV)は、幼児に重度の細気管支炎を引き起こす可能性があります。重度のHRSV疾患の病因の一部は、宿主の免疫応答によって引き起こされます。HRSVによるヒト初代免疫細胞の刺激は、炎症経路と感染の活性化を研究するための迅速で再現性の高いモデルシステムを提供します。...

ヒト呼吸器合胞体ウイルス感染に対するヒト末梢血単核細胞の免疫応答を研究するためのインビトロモデル

無細胞HIV-1粒子とは異なり、感染したCD4 + T細胞を効果的に形質細胞様樹状細胞（pDC）によって感知されます。この原稿は、I型​​IFNの放出によって評価した末梢血単核細胞（PBMC）または単離されたpDCは、pDCにすることにより先天的センスを評価するためにHIV-1感染T細胞と共培養する方法が記載されています。...

HIV-1感染CD4の生得センシングを評価<sup&gt; +</sup&gt;使用して形質細胞様樹状細胞によるT細胞<em&gt;エクスビボ</em&gt;共培養系。

ヒトの同時感染はin vitroで再現するのが困難です。しかし、ヒトマラリア原虫は、新たに分離されたヒト末梢血単核細胞がHIVに自然に感染したのと同様に、in...

アン<em&gt;インビトロ</em&gt; HIV重感染のコンテキストでのマラリアに対する免疫応答を測定するためのモデル

このプロトコルは、HIV感染に対する幹細胞ベースの操作免疫を持つヒト化骨髄/肝臓/胸腺マウスモデルを構築する方法を説明しています。...

ヒト化マウスモデルにおけるHIV感染に対する幹細胞ベースの設計さイミュニティ

人間組織前のヴィヴォひと免疫不全ウイルス (HIV) の感染は、ウイルスの病因の貴重な 3 D モデルを提供します。ここでは、処理や扁桃腺 HIV - 1...

Ex Vivoひと免疫不全ウイルス 1 における抗癌剤感受性との人間のリンパ組織と女性の性器粘膜の感染症

ここでは、HIVに感染した個体および健全なコントロールからヒト一次単球を分離、培養、トランスフェクション、および区別するための最適化されたプロトコルです。...

原発性ヒト単球の単離、トランスフェクション、培養

ここでは、感染の血液期における マラリア原虫 に対する細胞性免疫のメカニズムを解明するのに役立つ新しい方法について説明します。これは、細胞傷害性リンパ球による感染した赤血球の死滅を測定する in vitro...

インビトロ 細胞傷害性リンパ球による マラリア原虫感染赤血球殺傷のアッセイ

このプロトコルでは、EcoHIV感染と Tmem119-EGFP...

ミクログリア操作トランスジェニックマウスにおけるエコHIV感染細胞の同定

学ぶ Plasmodium falciparum感染赤血球がヒト単球由来マクロファージにおけるHIV-1複製に与える影響をin vitroモデルで評価する手法。この方法はマラリアとHIVの共感染メカニズム解明に貢献します。

不定冠詞

さらに動画を探す