肝動脈再建を用いた部分同所性肝移植のラットモデルのための外科的処置

この手順の全体的な目的は、移植研究の再現可能な実験モデルとして、ラットに部分的な同所性肝移植を行うことです。これは、最初に例示して、ドナーラットからの肝臓によって達成されます。第2のステップは、50%肝臓切除を含む、肝臓移植片のex vivo調製です。

次に、レシピエントラットの天然肝臓を切除する。最後のステップは、部分的な肝臓移植片をレシピエントラットに移植することです。最終的に、血清アラニン、アミノトランスフェラーゼのレベルが測定され、移植後の肝移植片への肝細胞損傷が評価されます。

一般的に、この手順に不慣れな個人は、高度な顕微手術のスキルを必要とする全体の複雑さのために苦労します。この手順を開始するには、動物が完全に麻酔されていることをつま先でつま先をつまんで確認した後、麻酔をかけたドナーラットを加熱パッドに置き、磁気固定器引き込みシステムを使用して上腕を固定します。ラットの腹部全体から毛皮を剃り、対応する皮膚をポビドンヨウ素溶液で滅菌します。

両側のエクステンションで正中線切開で腹部を開きます。ラットの背中の下に5ミリリットルの注射器を置き、蚊の鉗子クランプを使用して肝上肝洞窟が腹側に上昇するようにし、プロセスを頭に向かって引っ張り、肋骨下開創器を適用して手術野を開きます。手術中にリトラクターと5ミリリットルの注射器を頻繁に操作する必要があるため、手術用ドレープは切開部の周りではなく、16倍の倍率で手術用顕微鏡で作業し、鎌状靭帯と左三角靭帯を8のように解剖し、左横隔静脈を分割し、濡れたガーゼ交換で正中葉と左側葉を上向きに引っ込めます。

バイポーラ鉗子を使用して、傍食道血管を凝固させ、左外側および前部座標葉の間で分割します。腹部の外側の腸をラットの左側に移動し、濡れたガーゼ綿棒で覆います。綿棒で拭き取り、濡れたゴア綿棒で右側葉を上方に引っ込めます。

後腹膜組織から肝下大静脈を分離し、移植片除去の直前に分裂して胆管にステントを挿入する右副腎静脈を結紮し、まず胃十二指腸動脈の分岐レベルで胆管を結紮します。結紮点の近位にある胆管の前壁に小さな切開を行い、左手でまっすぐなマイクロ鉗子で切開の前壁を保持しながら、右手で湾曲したマイクロ鉗子を使用してステントを管に挿入します。シックスゼロの絹糸で固定します。

胆管上の糸の切り口の1つを4ミリメートルの長さに保ち、後の吻合中に糸を保持することができるようにします。胃十二指腸動脈を結紮して分割することにより、ポラル静脈と脾静脈をポリと脾臓静脈から解放します。次に、総肝動脈を膵臓頭からその根元まで分離します。

綿棒で肝臓を右に回転させ、準備が完了したら肝臓と食道の後ろの靭帯を解剖します。肝臓の切除に。リトラクター、剣状突起用の蚊鉗子、およびラットの背中の下にある5ミリリットルの注射器を取り外します。

腸を腹腔に戻します。陰茎静脈から2ミリリットルの生理食塩水に500IUのヘパリンナトリウムを注入します。.約3分後、5ミリリットルの注射器をリセットし、蚊の鉗子と開創器が総肝動脈をその根元に近位に結紮します。

糸の切り口の1つを総肝動脈に結紮したままにしておきます。肝下部の大静脈洞窟をクランプしてからずっと後。蚊の鉗子で右腎静脈の近く。

脾臓静脈の切り株の下にある使い捨ての微小血管クランプで門脈をクランプします。門脈の前壁を切開し、18ゲージのカテーテルを門脈に挿入します。静脈は、60ミリリットルの冷たいヒスチジントリトファンケトグルタル酸溶液で肝臓をその場で灌流します。

20センチメートルの静水圧で、水はすぐに横隔膜を切断し、胸腔内大静脈洞窟と肝下部大静脈洞窟の前壁を開いて、灌流溶液を肝臓から洗い流すことができます。肝臓のすぐ下にあるマイクロ血管クランプで肝下部の大静脈をクランプします。肝下部大静脈を解剖して肝臓を切除します。

熊静脈、横隔膜、残りの靭帯、右副腎静脈、総肝動脈。砕いた氷のオルグでいっぱいのプラスチックの箱に取り付けられた金属カップに、冷たいHTK溶液に物品税肝臓を入れます。肝移植の手順は、門脈クランプにカフを取り付けるための氷冷HTK溶液で満たされた金属カップで行われ、門脈はDeBakeyブルドッグクランプで門脈幹をクランプし、クランプをカップ上のブリッジ位置に置きます。

カフにポラル静脈を通し、12時の位置でカフの延長とともにアルベインを再度クランプし、カフの上にポラル静脈の壁を避けて、脾臓静脈の切り株をカフの外側の7時の位置に配置し、シックスゼロシルクスレッドで門脈を固定して、肝動脈にステントを挿入します。横隔膜の両端を鉗子でクランプして肝臓を固定し、結紮された糸をまっすぐなマイクロハサミ付きのDeBakeyブルドッグクランプで保持して総肝臓動脈をまっすぐに引っ張ります。左手で総肝動脈の前壁に小さな切開を行います。

切開部の前壁をまっすぐなマイクロ鉗子で保持し、右手でステントを総肝動脈に挿入します。湾曲したマイクロ鉗子を使用して、シックスゼロシルク糸でステントを固定し、糸の切り口の1つを4ミリメートルの長さに保ちます。50%肝臓切除のために、動脈カテーテルを通して肝臓を5ミリリットルの冷たいHTK溶液で洗い流します。

まず、後部座標葉を蚊の鉗子で固定します。その後、ライゲーションします。その茎は4つのゼロシルク糸で、葉を切除します。

前部の衣状突起も同様に取り外します。次に、プラスチックの箱を90度回転させます。ダイヤフラムの右端と中央ローブの左側をクランプします。

内側葉の両側部分の境界の上端に小さな切開を行い、結紮後に左側の部分を取り除きます。4つのゼロシルク糸で茎を結紮した後、左側葉を取り除き、切除した肝臓表面をバイポーラ鉗子で慎重に焼灼します。肝臓の質量は、肝上大静脈の形成術のために約 50% 減少しました。

まず、横隔膜の両端を蚊の鉗子で固定して、肝臓の位置を固定します。次に、対応する横隔膜を取り外して、肝上大静脈の前壁をトリミングします。2 7 0 ポリプロピレン縫合糸を外側から両角の内側に取り付けて、後の吻合のためのステイ縫合糸として

その後、肝上大静脈の後壁をトリミングします。肝臓移植片を摂氏4度でHTK溶液に入れ、冷水浴で保存します。ドナー手術と同様の方法でレシピエントを手術に備え、正中線切開で腹部を開きます。

湿ったゴアスワブを十二指腸の右側と腸全体に置きます。下肝ベナ洞窟の周りの手術野を取得すること。左の側葉と正中葉を左の横隔膜下空洞に入れ、濡れた視線スワブで右の側葉を上向きに引っ込めます。

後腹膜組織閉鎖体から肝下大静脈を分離し、湿ったガーゼと綿棒で右副腎静脈を分割します。肝臓を左に回転させ、肝臓の後ろの周りの靭帯を解剖します。脊索葉からの枝のすぐ下にある胆管を横断します。

糸の切り口の1つを4ミリメートルの長さの結紮の胆管に結紮し、胃十二指腸動脈と適切な肝動脈を総肝動脈からの分岐まで3ミリメートルの距離で分割して、総肝動脈クランプの端にある動脈の広い構造を作ります右腎臓のすぐ上に金属製のマイクロ血管クランプを備えた肝静脈下洞窟蚊の鉗子による肝臓の門脈での分岐点のレベルでの静脈と門脈は、末梢血管クランプによって横隔膜と一緒に肝大静脈をクランプし、クランプを油性粘土の塊に固定します。isofフッ素による麻酔を0.4体積パーセントに減らします。sup肝大静脈と肝臓の境界でsup肝大静脈を解剖することにより、レシピエントの天然肝臓を切除します。

蚊の鉗子の顎のすぐ上にある門脈と、肝臓と右腎静脈の間の中間点のわずかに下にある肝下大静脈。肝移植片オルトを局所的に配置します。.船舶の再建は、この手順の中で最も困難で重要な部分です。

それは非常に慎重に、しかし迅速に行う必要があります 連続縫合による肝大静脈上部の吻合のために。移植片の右隅に付属の7ゼロポリプロピレンを使用して、レシピエント肝上肝大静脈にステー縫合糸を内側から外側に置き、続いて同様に結び目を作ります。2本目のステー縫合糸を左隅に置きます。

これは、ランニング縫合糸の開始ステッチになります。吻合を広げるには、両側の角でDeBakeyブルドッグクランプを使用して縫合糸をつかみ、維持し、横方向に優れた穏やかな牽引力を備えています。次に、左隅の縫合糸をグラフト側の壁を通して外側から内側に、結び目の外側に密接に突き刺し、右隅に7〜8針縫って、サティック大静脈腔内後列

内側の内腔が右隅で互いに向き合うように、最初の数針を慎重に縫います。セブンゼロポリプロピレンをグラフト側の容器を通して外側に突き刺します。前列を外側から右から左に約10針縫合します。

乳酸リンガー溶液で内部を洗い流します。気泡を取り除くには、最後のステッチをステイ縫合糸に近づけてから、門脈の再建のためにそれらを結び付け、門脈をマイクロ血管クランプで門脈をクランプし、蚊の鉗子を粘土に固定します。次に、蚊鉗子の顎のすぐ下にある門脈の前壁を切開します。

レシピエントの門脈の内側とカフを乳酸リンガー溶液で洗浄します。カフを門脈に挿入し、円周方向のシックスゼロシルク糸で固定します。最後に、肝臓を再灌流します。

ラットの背中から5ミリリットルの注射器を取り外し、ステント技術による肝臓の再建のために、イソフッ素の濃度を0.8体積パーセントに増やします。.まず、適切な肝動脈の糸を蚊の鉗子で保持し、粘土に固定します。次に、レシピエントの総肝動脈をクランプします。

総肝動脈の端にあるY構造の分岐部に小さな切開を行い、漏斗状の開口部を作ります。グラフト総肝動脈に留置されたステントを湾曲したマイクロ鉗子で保持します。ステントをレシピエント総肝動脈にスライドさせ、シックスゼロシルクスレッドタイで固定し、この糸の一端とグラフト総肝動脈の4ミリメートル糸を一緒に固定して、両方の総肝動脈が吻合部位の張力を軽減して互いに近づくようにします。

その後、肝上肝洞窟と同じ方法で連続縫合吻糸による肝下静脈洞窟の吻合用のクランプアンプを放出しますが、より細かい噛み合わせでより多くのステッチを使用します。DECクランプ後、胆管の再建のために麻酔の濃度を1.0体積パーセントに増やします。レシピエントの胆管の糸を蚊の鉗子で保持し、粘土に固定します。

再建された胆管が長くなりすぎないように、適切なレベルで胆管に小さな切開を行います。ステントを挿入し、シックスゼロの絹糸で固定します。この糸とグラフトダクトの糸を結びます。

これで、すべての再建手続きが完了しました。腹部切開部を閉じます 4 つのゼロ Vicryl 縫合糸を層に連続して。手術の直後に、レシピエントラットを合計1.5ミリリットルの生理食塩水にスフェロナトリウムとブプレノルフィンの皮下注射で治療します。.

ラットを通常のケージに戻す前に、暖かい空気と酸素供給のある特別な集中治療室のケージで60分間回復させます。すべてのレシピエントラットは、門脈再灌流後1、3、24、および168時間後に採血のための計画された安楽死まで生存しました。血清サンプルは、移植後の肝移植片に対する肝細胞の損傷の程度を反映するアラニンアミノトランスフェラーゼレベルについて分析されました。

このグラフトに示されているように、LTレベルは24時間でピークに達し、その後、正常限度の168時間以内まで低下しました。このビデオの後、移植研究の再現可能な実験モデルとしてラットに部分トピック肝移植を行う方法について十分に理解しているはずです。