Name: 肝動脈再建を用いた部分同所性肝移植のラットモデルのための外科的処置 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 18 min 47 s
Description: 学ぶラットにおける部分同所性肝移植の外科的手法。肝動脈再建と50%部分移植片を用いた再現性のある実験モデルを確立し、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ測定で肝細胞障害を評価する方法です。

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作者は彼らの技術支援のためにパスカルPaschendaとMareikeシュルツに感謝します。

<ol><li>Puhl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+viscosity+histidine-tryptophan-ketoglutarate+graft+flush+improves+subsequent+extended+cold+storage+in+University+of+Wisconsin+solution+in+an+extracorporeal+rat+liver+perfusion+and+rat+liver+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Low viscosity histidine-tryptophan-ketoglutarate graft flush improves subsequent extended cold storage in University of Wisconsin solution in an extracorporeal rat liver perfusion and rat liver transplantation model.</a> Liver Transpl. 12, 1841-1849 (2006).</li>
<li>Yagi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Preservation+and+Microcirculation+with+POLYSOL+After+Partial+Liver+Transplantation+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Improved Preservation and Microcirculation with POLYSOL After Partial Liver Transplantation in Rats.</a> J Surg Res. 167, e375-e383 (2011).</li>
<li>Engemann, R., Ulrichs, K., Thiede, A., Muller-Ruchholtz, W., Hamelmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Value+of+a+physiological+liver+transplant+model+in+rats.+Induction+of+specific+graft+tolerance+in+a+fully+allogeneic+strain+combination%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Value of a physiological liver transplant model in rats. Induction of specific graft tolerance in a fully allogeneic strain combination.</a> Transplantation. 33, 566-568 (1982).</li>
<li>Sumimoto, R., Shinomiya, T., Yamaguchi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+hepatic+arterial+blood+flow+in+rats+with+liver+transplants.+Examination+of+donor+liver-derived+serum+class+I+MHC+antigen+in+rats+with+liver+transplants+with+or+without+hepatic+arterial+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Influence of hepatic arterial blood flow in rats with liver transplants. Examination of donor liver-derived serum class I MHC antigen in rats with liver transplants with or without hepatic arterial reconstruction.</a> Transplantation. 51, 1138-1139 (1991).</li>
<li>Chaland, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+with+hepatic+artery+anastomoses.+Hemodynamics+and+response+to+hemorrhage+in+conscious+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation with hepatic artery anastomoses. Hemodynamics and response to hemorrhage in conscious rats.</a> Transplantation. 49, 675-678 (1990).</li>
<li>Imamura, H., Rocheleau, B., Cote, J., Huet, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+consequence+of+rat+orthotopic+liver+transplantation+with+and+without+hepatic+arterial+reconstruction%3A+a+clinical%2C+pathological%2C+and+hemodynamic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Long-term consequence of rat orthotopic liver transplantation with and without hepatic arterial reconstruction: a clinical, pathological, and hemodynamic study.</a> Hepatology. 26, 198-205 (1997).</li>
<li>Zhong, Z., Theruvath, T. P., Currin, R. T., Waldmeier, P. C., Lemasters, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIM811%2C+a+mitochondrial+permeability+transition+inhibitor%2C+prevents+mitochondrial+depolarization+in+small-for-size+rat+liver+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">NIM811, a mitochondrial permeability transition inhibitor, prevents mitochondrial depolarization in small-for-size rat liver grafts.</a> Am. J. Transplant. 7, 1103-1111 (2007).</li>
<li>Spiegel, H. U., Palmes, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+techniques+of+orthotopic+rat+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Surg%22%5BJournal%5D)">Surgical techniques of orthotopic rat liver transplantation.</a> J. Invest. Surg. 11, 83-96 (1998).</li>
<li>Lee, S., Charters, A. C., Chandler, J. G., Orloff, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A technique for orthotopic liver transplantation in the rat.</a> Transplantation. 16, 664-669 (1973).</li>
<li>Lee, S., Charters, A. C. 3rd, Orloff, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+technic+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Simplified technic for orthotopic liver transplantation in the rat.</a> Am. J. Surg. 130, 38-40 (1975).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28, 47-50 (1979).</li>
<li>Howden, B., Jablonski, P., Grossman, H., Marshall, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+hepatic+artery+in+rat+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The importance of the hepatic artery in rat liver transplantation.</a> Transplantation. 47, 428-431 (1989).</li>
<li>Gao, W., Lemasters, J. J., Thurman, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+new+method+for+hepatic+rearterialization+in+rat+orthotopic+liver+transplantation.+Reduction+of+liver+injury+and+improvement+of+surgical+outcome+by+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Development of a new method for hepatic rearterialization in rat orthotopic liver transplantation. Reduction of liver injury and improvement of surgical outcome by arterialization.</a> Transplantation. 56, 19-24 (1993).</li>
<li>Zhao, D., Zimmermann, A., Wheatley, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometry+of+the+liver+after+liver+transplantation+in+the+rat%3A+significance+of+an+intact+arterial+supply%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Morphometry of the liver after liver transplantation in the rat: significance of an intact arterial supply.</a> Hepatology. 17, 310-317 (1993).</li>
<li>Omura, T., Ascher, N. L., Emond, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fifty-percent+partial+liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Fifty-percent partial liver transplantation in the rat.</a> Transplantation. 62, 292-293 (1996).</li>
<li>Lehmann, T. G., Bunzendahl, H., Langrehr, J. M., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterial+reconstruction+in+rat+liver+transplantation--development+of+a+new+tubing+technique+of+the+common+hepatic+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl.+Int%22%5BJournal%5D)">Arterial reconstruction in rat liver transplantation--development of a new tubing technique of the common hepatic artery.</a> Transpl. Int. 18, 56-64 (2005).</li>
<li>Reck, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+arterialization+on+hepatic+oxygen+supply%2C+tissue+energy+phosphates%2C+and+outcome+after+liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Impact of arterialization on hepatic oxygen supply, tissue energy phosphates, and outcome after liver transplantation in the rat.</a> Transplantation. 62, 582-587 (1996).</li>
<li>Hasuike, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+orthotopic+liver+transplantation+with+arterial+reconstruction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A simple method for orthotopic liver transplantation with arterial reconstruction in rats.</a> Transplantation. 45, 830-832 (1988).</li>
<li>Steffen, R., Ferguson, D. M., Krom, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+for+orthotopic+rat+liver+transplantation+with+arterial+cuff+anastomosis+to+the+recipient+common+hepatic+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A new method for orthotopic rat liver transplantation with arterial cuff anastomosis to the recipient common hepatic artery.</a> Transplantation. 48, 166-168 (1989).</li>
<li>Knoop, M., Bachmann, S., Keck, H., Steffen, R., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience+with+cuff+rearterialization+in+600+orthotopic+liver+grafts+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Experience with cuff rearterialization in 600 orthotopic liver grafts in the rat.</a> Am. J. Surg. 167, 360-363 (1994).</li>
<li>Hickman, R., Engelbrecht, G. H., Duminy, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A technique for liver transplantation in the rat.</a> Transplantation. 48, 1080(1989).</li>
<li>Liu, T., Freise, C. E., Ferrell, L., Ascher, N. L., Roberts, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+vascular+%22sleeve%22+anastomosis+for+rearterialization+in+orthotopic+liver+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A modified vascular "sleeve" anastomosis for rearterialization in orthotopic liver transplantation in rats.</a> Transplantation. 54, 179-180 (1992).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+sleeve+anastomosis+for+reconstruction+of+the+hepatic+artery+in+rat+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Modified sleeve anastomosis for reconstruction of the hepatic artery in rat liver transplantation.</a> Microsurgery. 22, 62-68 (2002).</li>
<li>Martins, P. N., Theruvath, T. P., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+partial+hepatectomies%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Rodent models of partial hepatectomies.</a> Liver Int. 28, 3-11 (2008).</li>
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</ol>

我々は、開示することは、競合する利害関係はありません。ラットは実験動物学協会（FELASA）の連盟のガイドラインによると、特定の病原体フリーの条件下で飼育されています。すべての実験は、動物の保護及び &quot;実験動物の管理と使用に関する指針&quot;（厚生公開番号86から23の国立研究所、1985年改訂）に関するドイツの連邦法に準拠して実施された。

ラットOLTの最初のモデルはLee らによって報告されました。1973年9において、肝動脈を含む、すべての船舶は手縫いの方法により再構築され、体外脈大循環シャントが使用されたインチこのモデルは、技術的に複雑であり、実行することが困難でした。次のモデルは、1975年に10同じ著者らによって開発された肝動脈再建と体外シャントなしの1だった。その後1979年に、鎌田らは肝rearterialization 11無しのモデルカフ吻合技術を導入しました。これらの変更により、ラットにおけるOLTは、受信者の操作で短縮肝外性の時間に簡略化され、広く受け入れられた実験モデルとして使用されてきた。 動脈化は厳しい作業だったが、しかし、ラットの肝動脈化OLT 8の意義の上、それ以来かなりの論争があったディ移植後の生存率に影響を及ぼさないと思います。様々な再構成技術を用いた肝動脈化に関する多くの研究は、このような大動脈セグメントツー大動脈吻合3,9,17、カフ吻合技術18,19,20、伸縮テクニック5、ステント技術13として、8が報告されている16、スリーブ吻合技術12,21-23。ラットOLT用技術は今日でも標準化されていないものの、arterializedモデルはますますその生理的優位8,12,13,14の点で好まれています。上記の技術の中で、実行するために簡単かつ迅速であったステント技術はレーマンらによって報告された2005年の16。研究では、優れた結果を示した：全く閉塞率は、再灌流後8時間、24時間、6ヶ月目に再構築された肝動脈では観察されなかった。そこで我々は、肝動脈化のためにこの技術を採用した。 我性能SHVCとIHVCの復興のためのミリアンペア手縫い吻合。この方法では、血栓症発生率の減少8に導く最適な生理条件と吻合部位を提供し、最高の顕微手術シミュレーションおよび外科医のためのトレーニングです。また、吻合は短い容器の切り株があっても可能であることができます。 IHVCの吻合に関しては、この方法は、カフ吻合技術と比較して移植側の長いIHVCを必要としません。したがって、ドナー腎静脈が長い移植IHVCを作るために解剖されている場合、このメソッドは、このような短い肝と右横と尾ローブで構成され、30％のグラフトとして、長いIHVCを必要とする小さな移植片の移植にも適用可能であるSHVC 2なし下大静脈。 いくつかの方法をこれまでに、ラットでは肝切除の手法について報告されている、2つの主要な技術は、古典的なマス結紮技術であると血管指向技術24。我々は50％の肝切除15の古典的な結紮法を実行しますが、手術用顕微鏡下に手順を細かくし、残りのローブと構造への損傷を避けるために。 我々は、我々のモデルでレシピエントラットからの代表的な結果を説明し、ラットは明らかな合併症はなく、7日間の観察期間中に生き残った。モデルは、長期冷蔵、心臓死の後に寄付を含む長時間の温虚血、および肝障害又は疾患の実験モデルから小さい肝臓移植片または移植片の使用など、さまざまな設定を選択することにより、実験の異なる目的のために修正することができます。 ;動作時間は、e失血量：我々の経験では、移植、ラットのOLTの転帰改善のための最も信頼性の高いパラメータの後に生存に影響を及ぼす可能性のあるプロシージャ全体で3つの主要な要因がありますおよび狭窄、血栓症、または出血につながる各容器の再建の妥当性、特に門脈とIHVCの時間をクランプする。このモデルの研修期間では、障害のほとんどは、おそらくこれらの要因に関連している可能性があります。このビデオの記事では、我々は肝動脈再建を持つ部分OLTの私たちのラットモデルのための外科的処置のためのステップバイステップの手順を紹介します。 OLTのラットモデルが複​​雑かつ高度な顕微スキルを必要とされていますが、この記事では、このモデルの訓練と学習のための良いガイドとなるべき実用的なたくさんの情報を提供しています。効率的に、このモデルを学習することで、学習期間を短縮する練習のために必要な動物やコストの数を減らすこと、およびそれ以降の実験で信頼性の高い結果を再現するために特に重要である。これはでRussellとBurchによって仮定された動物実験の3Rのコンセプト（交換·還元·改良）、に沿ったものである1959年25。

<table border="1"><tbody><tr><td> 名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td>外科用顕微鏡</td><td>ライカ</td><td> M651 </td><td></td></tr><tr><td>光源</td><td>ショット</td><td> KL1500LCD </td><td></td></tr><tr><td>綿棒</td><td> NOBA Verbandmittel </td><td> 974202 </td><td></td></tr><tr><td>ガーゼ綿棒（5x5のCM） </td><td>フールマン</td><td> 10002 </td><td></td></tr><tr><td>ポビドンヨード液</td><td>ムンディファーマ</td><td> 6108022.00.01 </td><td></td></tr><tr><td>油性粘土</td><td> Debika法人</td><td> 090148 </td><td></td></tr><tr><td> TachoSil </td><td>武田ファーマシューティカルズ·インターナショナル社</td><td> EU/1/04/277/001-004</td><td>切除された肝臓の表面に適用</td></tr><tr><td>メスの刃11号</td><td> PFM医療</td><td> 200130011 </td><td>カフとステントの作製</td></tr><tr><td> 14ゲージのカテーテル</td><td> B.ブラウン</td><td> 4268210S </td><td> PV用カフ</td></tr><tr><td> 18ゲージのカテーテル</td><td> B.ブラウン</td><td> 4268130S </td><td> PV経由灌流</td></tr><tr><td> 24ゲージのカテーテル</td><td> B.ブラウン</td><td> 4269071S </td><td> BDとHA用ステント</td></tr><tr><td> 4から0絹縫合</td><td> Resorba </td><td> H3F </td><td>肝臓切除術</td></tr><tr><td> 6から0絹縫合</td><td> Resorba </td><td> H1F </td><td></td></tr><tr><td> 7から0 PROLENE（ポリプロピレン）縫合</td><td>エチコン</td><td> 8701H </td><td> SHVCとIHVC </td></tr><tr><td> 4から0 VICRYL縫合</td><td>エチコン</td><td> V304H </td><td>腹部閉鎖</td></tr><tr><td> 5 mlシリンジ</td><td>テルモ</td><td> SS + T05ES1 </td><td>バック枕</td></tr><tr><td>加温パッド</td><td>サーモ</td><td> 190×260ミリメートル</td><td></td></tr><tr><td>磁気固定器退避システム</td><td>ファイン科学ツール株式会社</td><td> 18200から01 18200から02 18200から03 18200から12 </td><td></td></tr><tr><td>冷水浴</td><td>フーバー</td><td> 740.000X </td><td>移植保全</td></tr><tr><td>バイポーラ鉗子</td><td> Söring </td><td> MBC-200 </td><td></td></tr><tr><td>モスキート鉗子</td><td> BONIMED </td><td> 451-476-03 </td><td>使用される2つのペア</td></tr><tr><td>アドソンマイクロ鉗子</td><td> Dimeda </td><td> 10.176.12 </td><td></td></tr><tr><td>湾曲したマイルCRO鉗子</td><td> AESCULAP </td><td> FD281R </td><td></td></tr><tr><td>ストレートマイクロ鉗子</td><td> Bonimed </td><td> 451-476-03 </td><td></td></tr><tr><td>湾曲したマイクロ剪刀</td><td>メディコン</td><td> 05.15.83 </td><td></td></tr><tr><td>ストレートマイクロ剪刀</td><td> AESCULAP </td><td> FD12 </td><td>ファイン切開</td></tr><tr><td>はさみ</td><td> AESCULAP </td><td> BC211W </td><td></td></tr><tr><td>マイクロニードルホルダー</td><td> AESCULAP </td><td> FD241R </td><td>再建</td></tr><tr><td>市長·ヘーガーニードルホルダー</td><td>みずほIkakogyo </td><td> 06-798-00 </td><td>腹部閉鎖</td></tr><tr><td> DeBakeyブルドッグクランプ（ストレート） </td><td>ウルリッヒ</td><td> CV3054 </td><td></td></tr><tr><td> DeBakeyブルドッグクランプ（曲面） </td><td> CODMAN </td> &lt;TD&gt; 37から1062 </td><td></td></tr><tr><td> Satinskyクランプ</td><td> Mizuhoika </td><td> 09-230-24 </td><td></td></tr><tr><td>末梢血管クランプ</td><td>テレフレックスメディカル</td><td> 353494 </td><td>受信者SHVC </td></tr><tr><td>マイクロ血管クランプ（使い捨て） </td><td> AROSurgicalインスツルメンツ株式会社</td><td> TKM-1〜60グラム</td><td> PV、グラフトIHVC、および受信者のHA </td></tr><tr><td>マイクロ血管クランプ（金属製） </td><td>ファイン科学ツール株式会社</td><td> 18052から01 </td><td>受信者IHVC </td></tr><tr><td>乳酸リンゲル液</td><td>フレゼニウスカービ</td><td> 6150917.00.00 </td><td></td></tr><tr><td>生理食塩水</td><td> DeltaSelect </td><td> 1299.99.99 </td><td></td></tr><tr><td> HTKのソリューション</td><td>博士はフランツ·ケーラーケミー</td><td> 31268.00.00 </td><td>保存溶液</td></tr><tr><td>ヘパリンナトリウム</td><td> Ratiopharm </td><td> 5394.02.00 </td><td>グラフト灌流前500 IU </td></tr><tr><td> 8.4％重炭酸ナトリウム</td><td>フレゼニウスカービ</td><td> 4399.97.99 </td><td>再灌流後の0.5ミリリットル</td></tr><tr><td> 5％グルコース溶液</td><td> B.ブラウン</td><td> 6714567.06.00 </td><td>再灌流後の1.0ミリリットル</td></tr><tr><td> Cefuroximナトリウム</td><td>フレゼニウスカービ</td><td> 38985.01.00 </td><td>抗生物質、16 mg / kgの</td></tr><tr><td>ブプレノルフィン</td><td>エセックスファーマ</td><td> 997.00.00 </td><td>鎮痛剤は、0.1 mg / kgの</td></tr><tr><td>集中治療室のケージ</td><td> Brinseaプロダクツ</td><td> Vetario S10 </td><td>術後処置</td></tr></tbody></table>

肝動脈再建を用いた部分同所性肝移植のラットモデルのための外科的処置

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

全体または部分的な移植を用いたラットにおける同所性肝移植（OLT）は、このような移植保全や虚血再灌流障害の1,2の研究、免疫学的応答3,4、血行動態5,6として、移植の研究に欠かせない実験的なモデルであり、小型のためにサイズの症候群7。ラットOLTは、実験的な手術の中で最も困難な動物モデルの一つであると学ぶのに長い時間がかかる高度な顕微スキルが要求されます。したがって、このモデルの使用が制限されていた。結果の信頼性と再現性は、このような複雑な動物モデルが使用されている実験の主要なコンポーネントであるため、それがこのモデルのためのよく標準化され、洗練された手順の研修を受けたことが、ラットのOLTに関与している外科医のために不可欠です。 最初のモデルはdescrib頃から様々な技術とラットにおけるOLTの修正は8報告されているが彼らは偉大な程度に再建手続きを簡略化しているため、Lee らによって編 1973年9、肝動脈再建10、鎌田らによるカフ吻合技術の導入の排除11 は 、このモデルでは大きな進歩だった。鎌田らによるモデルでは、肝rearterializationも解消されました。ラットは、肝移植後の肝動脈流せずに生き残ることができたので、肝動脈化の価値を超えるかなりの論争があった。しかし、arterializedモデルの生理学的優位性はますます特に胆管システム8,12及び肝臓の整合8,13,14の保全の観点から、認められてきた。 本稿では、ex vivoで肝resec後に50％の部分移植を用い肝動脈再建とOLTのラットモデルの詳細な外科的処置を提示る。各血管、胆管のための再建手続は、次の方法により行われています：7から0ポリプロピレン連続用縫合前掲と肝臓下の下大静脈、門脈用カフ技術、および肝動脈用ステント技術と胆管。

すべてのレシピエントラット（n = 20）は（各時点でn = 5）にポータル再灌流後（7日）1、3、24、および168時間後に採血のための計画的安楽死まで明らかに合併症なく生き残った。血液サンプルは、27ゲージの針で直接穿刺によりIHVCから収集された。 10分間5340 xgで遠心分離後、血清サンプルが得られ、移植後の肝細胞障害の程度を反映アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT）レベルについて分析した。血清ALT値の変化の時間経過を図16に示します。 ALTレベルは24時間でピークに達した（±標準偏差平均：212.6±67.9 IU / L）をしてから168時間（33.6±6.8 IU / L）で正常範囲内に低下した。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig1.jpg" /> 図1：1から門脈（PV）用カフ4ゲージのカテーテル、および24ゲージのカテーテルから肝動脈（HA）と胆管（BD）用ステント。 <img alt="図2" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/4376/4376fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig2.jpg" /> 図2。ドナーラットから肝臓の除去のスキーマ 、BD、胆管; HA、肝動脈、IHVC、肝臓下の下大静脈、PV、門脈、SHVC、肝上の大静脈。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig3.jpg" /> 図3。ドナー操作。 aである。ラット固定器は、磁気リトラクションシステムと加熱パッド上に配置されます。腹部は二国間の拡張子を持つ正中切開により開かれる。ステントのb。挿入は、胆管に。門脈を介して肝臓のc。灌流。略語は説明アール図2のED。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig4.jpg" /> 図4。門脈にカフのアタッチメント。門脈幹を握っては、b。DeBakeyブルドッグクランプは金属カップの上に配置される。カップを砕いた氷で満たさプラスチックの箱に装着されています。C。門脈、カフ通されますd。門脈の壁が7でカフ外脾静脈の切り株にカフの上に外転さ時の位置と12時の位置にカフの拡張子は。 電子。門脈はカフ上の円周6から0絹糸で固定されています。黒い矢印は、脾静脈の切り株を示す。 <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig5.jpg" /> 図5。 エクスビボ肝動脈内ステントの挿入。 。肝臓は横隔膜の両エッジをクランプして固定されており、肝動脈は、直線動脈用結紮糸を保持することによってプルアップされています。bは。肝動脈に小さな切開の前壁がまっすぐマイクロ鉗子で保持されている。C、D。ステントは肝動脈に挿入し、6から0絹糸で固定されています。 <img alt="図6" fo:content-width="3.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4376/4376fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig6.jpg" /> 図6。 ex vivoで 50％肝切除のスキーマ。グレー色のローブが削除されます。 ACLは、前方の尾状葉、PCL、後部尾状葉、LLL、左側葉、LML、中葉の左部分;中葉のRML、右の部分と、SRLは、優れた右の側葉、IRL、劣って右側葉。 図7 エクスビボ 50％肝切除。中葉。cの左側部分の茎の。後部尾状葉の茎のライゲーションますb。ライゲーション、50％切除前肝ますd。を50％切除後の肝。 <img alt="図8" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig8.jpg" /> 図8。肝上の大静脈の ex vivo形成術。 。肝臓は蚊鉗子で横隔膜の両エッジをクランプして固定されていますb。滞在縫合7から0ポリプロピレンとは、両方の角に取り付けられている。 <img alt="図9" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/4376/4376fig9highres.jpg" srC = &quot;/ files/ftp_upload/4376/4376fig9.jpg&quot; /&gt; 図9。レシピエントラットにおける移植片移植のスキーマ。再建手続き7-0連続縫合、カフ法による門脈（PV）が、肝と前掲と肝臓下の下大静脈（SHVCとIHVC）に対して実行されるステント技術による動脈（HA）と胆管（BD）。 <img alt="図10" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig10.jpg" /> 図10。ネイティブ肝臓の除去まで、受信者の操作。 。腹部正中切開で開かれますb。右副腎静脈を結紮する。cは。ネイティブ肝臓を摘出されています。略語は図2で説明されています。 <img alt="図11" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig11.jpg" /> 図11。 supraheの吻合patic大静脈。は、b。肝上の下大静脈のための末梢血管クランプはオイルベースの粘土の塊で固定されている。両隅に滞在縫合が吻合を広げるsuperiolaterally穏やかなトラクションを維持しています。cは。進行中の後方の行の連続腔内縫合しますd。進行中の前の行の連続縫合。 <img alt="図12" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig12.jpg" /> 図12。門脈の再建。カフのは、b。門脈をクランプモスキート止血鉗子は、オイルベースの粘土で固定し、肝門部に向かって引っ張られているcf。挿入門脈に。 <img alt="図13" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig13.jpg" /> 図13。肝動脈の再建。は、b。 </stron<html>グラム固有肝動脈（PHA）と胃十二指腸動脈（GDA）の分岐点での受信総肝動脈（CHA）へのステントの&gt;挿入。 <img alt="図14" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig14.jpg" /> 図14。肝臓下の下大静脈の吻合。肝臓下の下大静脈の。両隅に滞在縫合ますb。後の行の連続縫合するc。前の行の連続縫合しますd。再潅流。略語は図2で説明されています。 <img alt="図15" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig15.jpg" /> 図15すべての再建手続きが終了している。略語は図2で説明されています。 <img alt="&lt;/ HTML">&quot;図16&quot; SRC = &quot;/ files/ftp_upload/4376/4376fig16.jpg&quot; /&gt; 図16血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT）レベルの変化の術後経時的（N = 20;各時点でn = 5）であった。。データは標準偏差を示すエラーバー付きの手段として表現さ​​れています。 ALT値は24時間（212.6±67.9 IU / L）でピークに達し、その後168時間（33.6±6.8 IU / L）で正常範囲内に低下した。

ラットにおける同所性肝移植は、生物医学研究のための不可欠な実験モデルである。ここで我々は50％の部分移植を用い肝動脈再建同所ラット肝移植のための私達の手術を提示します。

全肝または部分肝移植を用いたラットでの同所性肝移植（OLT）は、……などの移植研究において不可欠な実験モデルである。

本手順の目的は、移植研究のための再現可能な実験モデルとして、ラットにおける部分同所性肝移植を行うことです。これは、まずドナーラットから肝臓を摘出することで達成されます。第2のステップは、50%の肝切除を含む、肝移植片のex vivo（生体外）調製です。次に、レシピエントラットの本来の肝臓を摘出します。最後のステップは、部分肝移植片をレシピエントラットに移植することです。最終的に、移植後の肝移植片における肝細胞障害を評価するため、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ値を測定します。一般的に、この手技に不慣れな方は、高度なマイクロサージャリー技術を要する工程が多く、困難に直面します。本手技を開始するには、麻酔をかけたドナーラットをウォーミングパッドの上に置き、足趾へのピンチテストで完全に麻酔がかかっていることを確認した後、磁気固定リトラクションシステムを用いて前肢を固定します。ラットの腹部全体の被毛を剃毛し、該当する皮膚をポビドンヨード溶液で滅菌します。正中切開を行い、両側に延長して腹部を開きます。ラットの背側に5 mLシリンジを配置し、蚊鉗子を用いて上肝腔静脈を腹側に挙上させます。この状態で組織を頭側へ牽引し、肋骨下開創器を装着して術野を確保します。術中に開創器や5 mLシリンジを頻繁に操作する必要があるため、切開部位の周囲に手術用ドレープは使用しません。手術顕微鏡（16倍）下で、鎌状靭帯と左三角靭帯を剥離し、左横隔静脈を切断します。その後、湿らせたガーゼを用いて、肝臓の中葉および左外葉を上方に牽引します。バイポーラ鉗子を用いて、左側葉と前座標葉の間の食道傍血管を凝固し、切断します。腸管を腹腔外のラットの左側に移動させ、湿らせたガーゼで覆います。湿らせたガーゼを用いて、右側葉を上方に牽引します。下大静脈（肝下部）を後腹膜組織から剥離し、右副腎静脈を結紮します。この静脈は、後に胆管へステントを挿入するためのグラフト除去直前に切断します。まず、胃十二指腸動脈の分岐レベルで胆管を結紮します。結紮点より近位の胆管前壁に小さな切開を加えます。次に、左手の直線マイクロ鉗子で切開部の前壁を保持しながら、右手の弯曲マイクロ鉗子を用いて胆管内にステントを挿入します。6-0シルク糸を用いてステントを固定します。後の吻合時に保持できるよう、胆管に結紮した糸の切断端の一方を4 mmの長さに残します。門脈を門脈枝および脾静脈から遊離させるため、これらを結紮して切断し、胃十二指腸動脈を結紮して切断します。その後、膵頭部から根部にかけて総肝動脈を単離します。綿棒を用いて肝臓を右側に回転させ、準備が完了した時点で、肝臓の背面および食道周囲の靭帯を解剖します。肝切除のため、リトラクター、剣状突起を固定している蚊型鉗子、およびラットの背面に置いた5 mLシリンジを取り除きます。腸管を腹腔内に戻します。生理食塩水 2 mL に溶解したヘパリンナトリウム 500 IU を陰茎静脈から注入します。約 3 分後、5 mL シリンジ、蚊肢鉗子、および開創器を準備し、総肝動脈の根部近位側を結紮します。切断した糸の片端を、総肝動脈用に結紮したままにしておきます。下大静脈をクランプした後、時間を置いてから、蚊C型鉗子（モスキート鉗子）を用いて右腎静脈の近傍を遮断します。脾静脈の断端の下方で、門脈を使い捨ての微小血管クランプで遮断します。門脈の前壁を切開し、18ゲージのカテーテルを門脈内に挿入します。60 mLの冷却ヒスチジン・トリプトファン・ケトグルタル酸溶液を用いて、肝臓をin situで灌流します。20 cmの静水圧において、横隔膜、胸腔内大静脈、および肝下大静脈の前壁を直ちに切開し、灌流液が肝臓から洗い流されるようにします。肝臓の直下で微小血管クランプを用いて肝下大静脈を遮断します。肝下大静脈を剥離して肝臓を摘出します。門脈、横隔膜、残りの靭帯、右副腎静脈、および総肝動脈を切り離します。摘出した肝臓を、砕氷を満たしたプラスチック製ボックス内に設置した、冷HTK液入りのメタルカップに入れます。肝移植片の処置は、氷冷HTK液を満たしたメタルカップ内で行います。門脈へのカフ装着のため、門脈幹をDeBakeyブルドッグクランプで遮断し、カップの上でクランプをブリッジ位置に固定します。門脈をカフに通し、カフの延長部分と共に門脈を12時方向で再度クランプします。門脈壁をカフの上に折り返し、脾静脈の断端が7時方向でカフの外側に位置するように調整し、肝動脈にステントを挿入するために門脈を6-0シルク糸で固定します。横隔膜の両端を鉗子でクランプして肝臓を固定し、結紮糸をDeBakeyブルドッグクランプで保持しながら、直線的なマイクロ鋏を用いて総肝動脈を直線状に引っ張ります。左手で総肝動脈の前壁に小さな切開を加えます。直線マイクロフォーセップスで切開部位の前壁を保持し、右手で総肝動脈にステントを挿入する。弯曲マイクロフォーセップスを用いて、6-0シルク糸でステントを固定し、切断した糸の一方の端を4 mmの長さにしておく。50%肝切除のため、動脈カテーテルを通じて5 mLの冷却HTK溶液で肝臓をフラッシュする。まず、蚊鉗子で後座標葉をクランプして固定します。次に、4-0シルク糸でその茎を結紮し、葉を切除します。前方の冠状葉を同様に切除します。次に、プラスチック製のボックスを90度回転させます。横隔膜の右端と中葉の左側部分をクランプします。内側葉の両側部分の境界の上端に小さな切開を加え、結紮後に左側部分を除去します。4-0シルク糸で血管柄を結紮した後、左外側葉を除去し、切除した肝表面をバイポーラピンセットで慎重に焼灼します。これにより、肝上大静脈の形成術に向けて、肝重量を約50%減少させます。まず、蚊鉗子で横隔膜の両端をクランプし、肝臓の位置を固定します。次に、対応する横隔膜を除去して、肝上大静脈の前壁をトリミングします。後の吻合のための保持縫合として、2 7 0 ポリプロピレン縫合糸を用いて、両角の外側から内側へ縫い付けます。その後、上大静脈の後壁をトリミングします。肝移植片はHTK液に入れ、冷水バスを用いて4 °Cで保存します。レシピエントをドナーの手術と同様の方法で手術準備し、正中切開により腹腔を開きます。濡らしたガーゼ綿棒を十二指腸の右側と腸管全体に配置します。肝下大静脈周囲に手術視野を確保するため、左外葉と中葉を左横隔膜下腔に寄せ、右外葉を濡らしたガーゼ綿棒で上方に牽引します。後腹膜組織の結紮部位から肝下大静脈を遊離し、湿ったガーゼと綿球を用いて右副腎静脈を遮断します。肝臓を左側に回転させ、肝臓後方の靭帯を切開します。胆管を、尾状葉からの分枝の直下で切断します。切断した糸の一端を、4 mmの長さで胆管を結紮するために残しておきます。胃十二指腸動脈と固有肝動脈を、総肝動脈の分枝点から3 mmの距離で結紮および切断し、総肝動脈の末端に動脈の広い構造を作ります。右腎静脈の直上の肝下大静脈と、肝門の分枝レベルにある門脈を、金属製マイクロ血管クランプとモスキート鉗子でそれぞれクランプします。肝上大静脈を横隔膜とともに末梢血管クランプでクランプし、そのクランプを油粘土の塊で固定します。イソフルランによる麻酔を0.4 volume percentまで軽減します。肝上大静脈と肝臓の境界で肝上大静脈を剥離し、レシピエントの自己肝を切除します。蚊口鉗子の顎の直上の門脈と、肝臓と右腎静脈の中間点よりわずかに下方の肝下大静脈を同定します。肝移植片を正位に配置します。血管の再建は、この手技において最も困難かつ重要な工程です。上腔静脈の連続縫合による吻合は、非常に慎重かつ迅速に行う必要があります。グラフトの右角において、付属の7/0ポリプロピレン糸を用いて、レシピエントの上腔静脈の内側から外側へ留置縫合を行い、同様に結紮します。次に、左角に2つ目の留置縫合を行います。これが連続縫合の開始点となります。吻合部を広げるため、DeBakeyブルドッグクランプを用いて両角の縫合糸を把持し、外側上方に緩やかに牽引しながら保持します。次に、左角の縫合糸を、結節の外側近くでグラフト側の壁の外から内へと貫通させ、後壁の静脈洞内腔を7～8針で右角まで縫合します。内腔同士が右角で向かい合うように、最初の数針を慎重に縫ってください。7-0ポリプロピレン糸を、グラフト側の血管の内側から外側に向かって刺します。外側から右から左へ、約10針で前列を縫合します。内部を乳酸リンゲル液で洗浄します。気泡を取り除くため、最後の縫合をステイ縫合の近くに行い、門脈の再建に向けてそれらを一緒に結紮します。微小血管クランプで門脈を遮断し、蚊型鉗子を粘土に固定します。次に、蚊型鉗子の顎のすぐ下の門脈前壁を切開します。受容側の門脈内部とカフを乳酸リンゲル液で洗浄します。カフを門脈に挿入し、6-0のシルク糸で周囲を固定します。最後に、肝臓を再灌流させます。ラットの背面から5 mLシリンジを取り外し、ステント法による肝管再建のため、イソフルランの濃度を0.8 volume percentに上げます。まず、固有肝動脈の糸を蚊鉗子で保持し、粘土に固定します。次に、レシピエントの総肝動脈をクランプします。共通肝動脈末端のY字構造の分岐部に小さな切開を加え、漏斗状の開口部を作成します。移植片の共通肝動脈内に留置したステントを、湾曲マイクロ鉗子で保持します。ステントをレシピエントの共通肝動脈内にスライドさせて挿入し、6-0シルク糸で固定します。この糸の一端と、移植片共通肝動脈上の4 mmの糸を一緒に結び合わせ、吻合部位の緊張を軽減しながら、両者の共通肝動脈を互いに近づけます。その後、肝下大静脈の吻合のため、クランプを解除します。吻合は肝上大静脈と同様の手法で連続縫合により行いますが、より細い針目で縫合回数を増やして行います。クランプ解除後、胆管再建のため麻酔濃度を1.0 volume percentに上げます。レシピエント胆管の糸を蚊針鉗子で保持し、粘土で固定します。再建後の胆管が長くなりすぎないよう、適切な位置で胆管に小さな切開を加えます。ステントを挿入し、6-0シルク糸で固定します。この糸とグラフト胆管の糸を結束します。これで、すべての再建処置が完了しました。腹部の切開創を4-0 Vicryl縫合糸を用いて、層別に連続縫合で閉じます。手術直後、レシピエントラットに、生理食塩水合計1.5 millilitersに溶解した sphero sodium および buprenorphine を皮下注射します。ラットを通常のケージに戻す前に、温風と酸素供給を備えた専用の集中治療ユニットケージで60分間回復させます。移植後の門脈再灌流から1、3、24、および168時間後の血液採取のための計画的な安楽死まで、すべてのレシピエントラットが生存しました。血清サンプルを用いてアラニンアミノトランスフェラーゼレベルを分析し、移植後の肝移植片における肝細胞損傷の程度を評価しました。このグラフに示されているように、LTレベルは24時間でピークに達し、その後168時間までに正常範囲内まで低下しました。このビデオを視聴することで、移植研究のための再現性のある実験モデルとして、ラットにおける部分的な局所肝移植を行う方法を十分に理解できるはずです。

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