Name: ショウジョウバエアダルト嗅覚ショックラーニング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-07T19:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: 学ぶショウジョウバエアダルト嗅覚ショックラーニング法。電気ショックと臭気を組み合わせた条件付けにより、Drosophilaの連合記憶を測定し、神経科学と行動生物学の研究に応用できます。

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私たちは、ハエ株についてブルーミントンストックセンターを認めている。この作品は、BBSRC（BB / G008973 / 1）からの研究助成金によってサポートされていました。

1。フライの準備<ol><li>遺伝的背景26をコントロールするために行動実験の前に少なくとも6つの世代のために、全ての変異体、GAL4 / UASなどCSw-などの野生株と他の行を、異系交配。 </li><li>具体的な操作が異なる温度を必要としない限り、25℃で12時12分時間の明暗サイクル下で標準的なコーンミール、酵母および糖蜜食品食のハエを育てる。 <ol><li>開発を通じたGal4 GAL80 TS（ターゲットシステム）に導入遺伝子の発現を防止した後、1〜2日間の行動実験の前に30℃のインキュベーターにハエを移動するために使用し、18℃：導入遺伝子発現の効果を判定すること。導入遺伝子発現3,4,6,7,14の効果を決定するために、30℃で実験を行う。 </li><li>神経細胞を刺激するために、熱活性化TRPA1チャネルを用いた実験の場合：既知の温度である23℃、でハエを上げる非アクティブなチャネルを維持し、その後発現ニューロン、TRPA1を活性化するために、30℃で行動室に移行する。 </li><li> 18℃でリアハエし、30℃でテストを実施：シナプス出力11、14,24をブロックする敏感 Shibire 温度を用いて実験のため。 </li></ol></li><li> 1〜2日後、実験前にハエを集め、光、CO 2麻酔下で、約25のグループでそれらを数える。 （具体的な操作が異なる温度を必要とした場合を除く）、25℃で（酵母なしで）食品用バイアル中にハエ少なくともO / Nを格納し、午前12時12時間の明を持つ環境的に制御された部屋の中で70％の相対湿度：暗い時まで実験の。 注：このストレージは、ハエがショウジョウバエの学習のための最適な条件を持っていた環境制御されたクリーンルームで行うその後の学習テストに順応することを可能にし、重要なのは、どんな毎日ENVIを削除します行動的表現型に影響した可能性があり境バリエーション。 </li></ol>実験前2。準備<ol><li>カスタムメイドのパースペックスT-迷路における実験（ 図1）を実行します。 </li><li>定期的に気密シールが実験中に得られることを保証するために、管継手をご確認ください。必要であれば、T-迷路の内側コンパートメントをシール、Oリングを変更してください。 </li><li>トレーニングチューブの内側にカスタムメイドの銅グリッドを配置します。確認し、定期的にこれらのグリッドをきれいにし、酸化された場合には交換してください。電気刺激装置に接続されたスイッチボックスに実行するワニ口クリップを介して、配線に銅グリッドを取り付けます。装置が必要なショックを配信していることを保証するために電圧計を使用してください。 </li><li>どんな空気漏れを避けるために、しっかりと迷路を保持するために、G-クランプを使用してください。 </li><li>匂いがハエを越え引かれ、その後、T-迷路から削除されるように、空気ポンプを結ぶ配管に、T-迷路を取り付けます。穏やかな空気を維持〜2リットル/分で流し</li></ol> 3臭気希釈液<ol><li>ハエは両方の臭いに対して等しい優先性を示すことがこのような濃度で二つの異なる匂いを使用してください。鉱物油7,13で希釈した：（100 1）4 -メチルシクロヘキサノール（1:67）、および3-オクタノールを使用してください。 注：慎重に研究室によって異なりますこれらの濃度を決定する。例えば他の人は、両方の匂い24 1:10を使用しています。他の一般的に使用される悪臭を酢酸エチルおよびイソ - アミルアセテートが挙げられる。 </li><li>ピペットこうして臭気プルームにハエを暴露、空気がカップに臭い上に描画することを可能にする有孔上部とプラスチックチューブで覆われた臭気ブロックに入り、カスタムメイドの匂いカップに希釈された臭気を30μl。 </li></ol> 4訓練プロトコル（図1および2） <ol><li>大人の嗅覚衝撃コンディショニングのために、暗赤色灯の下ですべての実験（ すなわち 、赤色LED）、研究者は見ることができます実行しますが、FLを防ぐこのように視覚的な入力とは対照的に、ハエは嗅覚に集中することができ、見てからのy。 </li><li>トレーニングチューブにハエを導入してから、T-迷路にアタッチし、それらを90秒間チューブと空気の流れに適応することができます。 </li><li> 60秒の合計持続時間（3.75秒パルス間間隔で12 1.25秒のパルスからなる）60-Vのショックで最初の匂い（4 - メチルシクロヘキ、MCH）を提示。 </li><li>匂いやショックなしに30秒の休止期間とショックに従ってください。 </li><li>ショックのない60秒間二臭（3 - オクタノール、OCT）を提示。 </li><li>匂いやショックなしに30秒の休止期間とショックに従ってください。 </li><li>その側にT-迷路を回し、ゆっくりとそのような古いマウスマットなどの柔らかい物の上のT-迷路の底部を強打することにより、T-迷路の中央チャンバー内にトレーニング室からハエを移動します。 90秒間中央室にハエを維持します。 </li><li> BOへの選択肢チューブを取り付け装置のttomは、T-迷路を形成する。 </li><li>学習を測定するために、それらは同時に匂いに暴露し、1に向かって移動し、T-迷路、選択ポイントにハエを移動します。 120秒間の試験期間を実施する。 </li><li>それによって選択肢管の端部を遮断する中央チャンバを上にスライドさせてトラップの選択管内でハエ。食品バイアルに、T-迷路の各アームと中央コンパートメント内のハエを収集し、カウントされます。 </li><li> 、メモリを測定する訓練（4.6）の後にハエを収集し、酵母なしで食料バイアルに、T-迷路からそれらを転送するには。ストア（導入を参照）、25℃で暗く、興味のあるメモリ位相を決定するのに必要な残りの時間、70％の湿度に飛ぶ。ステージ4.7のように、T-迷路にハエを再導入。 </li><li>長期記憶のために、ハエのいくつかのバッチを同時に訓練することができるカスタム構築された迷路を使用しています。 15分間のサイクル間隔（スパと訓練の5サイクルの管理CED）またはインターサイクル間隔なしで（密集）。試験まで、暗所で18℃、ハエおよび70％の湿度を維持します。試験の前に、25℃にハエを移動し、それらが少なくとも1時間順応することができます。訓練の後、長期記憶の24時間を評価する。 </li><li>行動実験の後、お湯と洗剤で無臭臭いカップを清掃してください。乾燥後、10μlのシグマコートでコートカップを。電子レンジで加熱することにより、シグマコートを乾燥させる。時折お湯と洗剤で無臭のT-迷路パースペックス管や臭気ブロックを清掃してください。 </li></ol>性能指数の5。計算：ハエ &#39;記憶の測定<ol><li>マイナスハエ（CSの総数で割った衝撃対に匂い（CS +）を選択するハエの数-ショックペア匂い（CS）を回避ハエの数などの条件ごとに性能指数（PI）を計算する- + CS +）1。 ペーrformance指数（PI）=（＃CS -ハエ- ＃CS +が飛ぶ）/（＃合計ハエ） </li><li> MCHはショックペア臭いと10月には衝撃ペア臭いだったものであった実験のPIを平均化することによって、実験の最終PIを計算します。これは、1つの臭いのために、より高い優先順位を持つハエのいずれかのバイアスを除去。 </li></ol> 6。感覚コントロール<ol><li> T-迷路6,7,17 ​​へ〜40-50ハエを導入することにより、臭気視力を実行します。 </li><li> 90秒後に、選択点にハエを移動し、純粋な匂いと空気のどちらかを選択する彼らに2分を可能にします。 </li><li>ハエを収集し、カウントされます。試験に参加したものによって臭気を選んだハエの合計数を割ることによって回避率を計算します。 </li><li>ショック反応性6,7,17 ​​の場合、ショックチャンバーにハエを導入。 </li><li>残りの90秒後に、ハエが同様に逃げることができる、そこから60-V D​​C電気ショックを、管理するショックのないチューブ。 </li><li>ハエが選択するための2分を許可する。ハエを収集し、カウントされます。実験でのハエの総数で衝撃波管をエスケープすることで衝撃を避けハエの数を割ることによって衝撃回避率を計算します。電気ショックを免れたものを合計で中央室に残ってハエを含めます。 </li></ol>

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</ol>

著者らは、開示することは何もない。

ここに提示ショウジョウバエ成体嗅覚ショック学習アッセイは、長期メモリ15〜17を含むメモリの異なる位相を、根底にある分子メカニズムの分析を可能にする。同様に概日リズム18の効果の決定など、メモリ上に19、ダイエット20,21、老化11-13、神経変性疾患5と薬物治療5,6,19眠る 。 多くの強力なアプローチは、最近、ハエ3,4,7,11,16,27に嗅覚記憶を仲介する神経回路の機能イメージングのために開発されている。これらの光遺伝学的技術は、ショウジョウバエ 14,16で利用可能な異なるプロモーターの膨大なレパートリーを使用しています。これらのプロモーターは、メモリ·トレース上の特定の遺伝子変異の影響を研究するために、メモリニューロン16,27に遺伝的にコードされたカルシウムおよびcAMPレポーターを発現するために使用される。 目成人では、条件付きプロモーターおよび変異のEの使用はメモリ3,4,6,7,13,14における遺伝子産物のポスト発達役割の研究を可能にする。イメージングと行動のアプローチは、さらにその機能を解明するために、メモリ回路11,14,16,22-24の異なるニューロンを刺激するかまたは阻害するために光-及び熱活性化チャネルと組み合わせることができます。また、キノコ体メモリニューロンは、 ショウジョウバエ嗅覚メモリ29をモデル化するために使用されている全細胞パッチクランプ記録28、および数学的計算技術にアクセス可能である。 ここで紹介する連想メモリ·プロトコルの異なる形と組み合わせるこれらの実験の進歩は、老化や病気、 ショウジョウバエは 、罰、モチベーション、中毒に報いるために応答して発生連想メモリ内molecular-と回路レベルの変化をモデル化するために使用できるようにする5,6,11-13,16,30-31。

ここで紹介する方法は、いくつかの小さな変更を1とタリーとクインによって記載されているものである。ハエが第一段階で訓練されており、訓練を受けたハエは、第2段階でテストされています。実験は2段階で行われます。トレーニング中、ハエのグループが同時に臭気にさらされている1（CS +）とトレーニングチューブ内の電気ショック（US）。電気ショックなしで-ハエはその後臭い2（CS）を受け取る。ショック特定の臭いのこの単一のペアリングが1サイクルトレーニングと呼ばれ、最も頻繁に使用される臭気は、4 - メチルシクロヘキサノール（MCH）および3 - オクタノール（OCT）である。 1サイクル訓練は、最大7時間を検出することができるメモリの不安定相の形成をもたらす;ただし、メモリは通常、学習、取得又は2分のメモリと呼ばれるものを決定するために、すぐにテストされています。 30分または1時間で測定されたメモリが、一方、短期記憶と呼ばれ3時間のメモリは、中期メモリと呼ばれる。トレーニングサイクル（間隔の訓練）との間のギャップを反復的な訓練サイクルハエの露出はCREB転写依存しており、週まで持続長期記憶の連結形につながる。ギャップのないトレーニング（密集訓練）は、典型的には、訓練7,13,15-17,20,21 5サイクルの24時間後に測定される長期記憶と同様に、麻酔耐性記憶（ARM）の形成をもたらす。 このアプローチでは、メモリのこれらの異なる位相におけるさまざまな遺伝子の変異の効果を決定することができる。特定のニューロンの神経活動の活性化やブロックする軽または温度感受性遺伝子のプロモーター駆動発現は、人は記憶獲得、統合と検索3,4,11,15,16,20のために必要とされる神経細胞を調べることができます22-24。このFので加齢に伴う記憶障害を研究する際に、1時間でのメモリーは、一般的に測定され、メモリのORMは11-13高齢化の影響を特に受けが表示されます。行動的および遺伝的コントロールの完全な範囲は、性能不良が原因で中央メモリ欠陥やショックや嗅覚キュー5-7を感知するハエを防ぎ、末梢感覚欠陥であるかどうかを決定するために、例えば、メモリの実験を用いて行われる1〜7、25,26。

<table><tbody><tr><td>3-オクタノール</td><td>Σ</td><td>218405</td><td></td></tr><tr><td>4-メチルシクロヘキサノール</td><td></td><td>Σ15309-5</td><td></td></tr>ベン<tr><td>ズアルデヒド</td><td>Σ</td><td>418099</td><td></td></tr><tr><td>鉱油</td><td>Fluka</td><td>BP2629-1</td><td></td></tr><tr><td>酢酸ヘキシル</td><td>Σ</td><td>108154</td><td></td></tr><tr><td>フルクトース</td><td></td><td>ΣF0127</td><td></td></tr><tr><td>アガロー</td><td>スバイオライン</td><td>BIO-41025</td><td></td></tr></tbody></table>

ショウジョウバエアダルト嗅覚ショックラーニング

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

ショウジョウバエは、このように大幅に認知疾患1-7に関与する分子メカニズムの解明を含め、メモリの理解を容易にする、40年以上にわたり、古典的条件付け実験に使用されている。学習と記憶は、大人可塑性遺伝子1-7の寄与を測定するために、神経発達遺伝子8-10とハエにおけるの効果を研究するために幼虫でアッセイすることができる。さらに、 ショウジョウバエの短い寿命は加齢に伴う記憶障害5,11-13を仲介する遺伝子の解析が容易になる。 ショウジョウバエ神経系を細分多くの誘導性プロモーターの利用可能性は、いつ、どこで、目的の遺伝子は、通常のメモリと同様に強化信号3,4,14,16の異なる側面の中継に必要とされるかを決定することを可能にする。 大人のショウジョウバエでメモリを学ぶことの詳細な分析が可能に行動と関連する回路および長期記憶15 -17の測定。成虫段階の長さは、メモリ3-6,11-13,15-21上の加齢および神経変性疾患の効果を決定することに加えて、メモリの長期的、遺伝的、行動、食事および薬理学的操作に対応しています。 古典的条件付けは、動物によって相互に関連付けられているようになるの中性臭気キュー（条件刺激、CS +）の同時提示と強化刺激、 例えば 、感電、ショ糖、（無条件刺激、US）によって誘導される1,16。第二条件刺激（CSが- ）、その後、米国なしで提示されている。テストフェーズでは、 ショウジョウバエを同時にCS +とCS-臭いされています。 ショウジョウバエ臭気の間で選択するための時間を提供した後、動物の分布が記録される。この手順はアル安値は確実に条件刺激のいずれかのための生得的な好みによって導入された偏りなく測定することが、嫌悪や食欲調節を連想。各種制御実験はまた、全ての遺伝子型は、臭いや単独の強化に正常に応答するかどうかを試験するために行われる。

性能指数（PI）は、メモリの尺度として役立つ。表1は、PIの代表計算を示す。 <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> MCHは、ショックと対になって </td><td> 3-OCTは、ショックと対になって </td></tr><tr><td> （OCTチューブ中）MCHを避けたハエ= 80 MCH（MCH管内で）= 20を好むハエ PI 1 - （80-20）/ 80 + 20） = 0.6 </td><td> （MCH管内の）10月= 75を避けハエ （10月管内の）10月= 25を好むハエ PI 2 =（75-25）/（75 + 25） = 0.5 </td></tr><tr><td> 実験=（0.6 + 0.5）のPI /2=0.55 </td><td></td></tr></tbody></table> 表1の例示的なデータを使用して、性能指数の代表的な計算。異なる実験のための性能指数は、メモリ効果を解明するために比較することができる。そのような一度比較はカントンS野生型成虫ハエ（WT）および劣等生 1ハエ変異体、大人の学習で行った一連の実験からの結果が含まれています。図3に示されている。 10 PIの平均値を平均値の標準誤差（SEM）を表すエラーバーを、備えている。これらの結果は、 劣等生のハエは、野生型と比較して、学習の減少を示すことを実証している。 <img alt="図1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50107/50107fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig1.jpg" /> 図1：大人の実験設定。ハエが訓練とT迷路で試験する。訓練は、電気ショックのない第二臭気Bに続いて電気ショックで臭気Aを提示することを含む。中間室での休息期間の後ハエは同時に臭いの両方が表示されます。ハエは捕獲される2管に採取し、学習/記憶のスコアを取得するためにカウントされ、。 <img alt="図2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50107/50107fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig2.jpg" /> 大人のトレーニングプロトコル。図。ハエは、二段階で訓練されています。ハエは臭い（CS +）を​​受け取る最初のステップは、60秒間の電気ショック（US）と対をなす。次のステップでは、ハエが感電することなく第二の匂い（CS-）を受け取る。ハエは、その後彼らは、CS +とCS-の間に彼らの選択のためにテストされた後、90秒間休ませている。 <img alt="図3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig3highres.jpg" width="400" /> 図3 ショウジョウバエ成虫に劣等生および野生型学習を示す代表的なグラフ。 </strong&gt; WT及び劣等生ハエは、トレーニングの一つのセッション、次 ​​の試験を行った。 劣等生のハエは、WT（N = 10）と比較して学習の減少を示す。

ショウジョウバエ成虫連想メモリを測定する方法について説明する。アッセイは、負の強化（電気ショック）を提示した後、メモリを測定することができるように、後でこの情報を呼び出し臭気を関連付けるハエの能力に基づいている。

Drosophila have been used in classical conditioning experiments for over 40 years, thus greatly facilitating our understanding of memory, including the ...

この手順の全体的な目的は、成体ショウジョウバエの嗅覚ショックアッセイを用いて連合記憶を測定することです。まず、二酸化炭素麻酔下でハエを回収します。次に、チームAのハエを電気ショックと1種類目の臭気Aに同時にさらします。その後、ハエをショックなしで2種類目の臭気Bにさらします。最後に、ハエをチームAの選択点へと移動させ、臭気Aと臭気Bの両方に同時に曝露させます。2分間の分散時間の後、臭気Aを選択したハエと臭気Bを選択したハエを個別に回収し、二酸化炭素下でカウントします。これにより、各臭気のパフォーマンス指数（PI）を算出することが可能になります。最終的なPIは、臭気Aを電気ショックと対呈示した実験と、臭気Bを電気ショックと対呈示した実験という、2つの独立した実験のPIを平均して求めます。この手法は、動物の内部状態や記憶の影響に関する知見を提供することができます。例えば、年齢、食事、睡眠などの条件を変化させることで、他の系にも適用可能です。また、昆虫と哺乳類の間では学習に関わる遺伝子やメカニズムが高度に保存されているため、本手法はげっ歯類などの恐怖条件付けアッセイに類似しています。本法の視覚的なデモンストレーションは極めて重要です。というのも、アッセイに向けてハエを準備し、さらにハエをチームメイト（teammates）の中や外へと移動させる操作は、習得が困難であり、記述されたプロトコルだけではその方法を正しく理解することが容易ではないためです。まず、標準的な飼料を用いて、25 °C、12時間明暗サイクルの条件下でハエを育成します。実験の1〜2日前に、二酸化炭素でハエを麻酔し、25匹ずつ4群に分けます。これらのハエを、酵母を含まない飼料 vial に入れ、環境制御室にて25 °C、湿度70%、12時間明暗サイクルの条件下で一晩保管します。次に、カスタム製のPerspexチームMAsを準備し、実験中に気密シールが確保されているか、チューブの継手（フィッティング）を定期的に確認します。トレーニングチューブ内にカスタムメイドの銅グリッドを配置します。グリッドは定期的に洗浄し、酸化した場合は交換してください。ワニ口クリップを使用して、銅グリッドを電気刺激装置に接続されたスイッチボックスへつながる配線に取り付けます。次に、電圧計を用いて、装置が必要な衝撃を与えているかを確認します。続いて、Gクランプで迷路をしっかりと固定します。空気漏れを防ぐため、T迷路をエアポンプに繋がるチューブに取り付け、臭気がハエ側へ引き込まれ、装置から除去されるようにします。空気流量を毎分2リットルに維持し、4-メチルシクロヘキサノール（MCH）を1:67の比率で、3-オクタノール（OCT）を1:100の比率でミネラルオイルで希釈します。次に、希釈した臭気物質30 µLを臭気カップにピペットで分注します。特製の臭気カップを用意し、上部に穴を開けたプラスチックチューブで臭気ブロックを覆います。特注の臭気カップを臭気ブロックに設置します。このメカニズムにより、カップ内の臭気の上に空気が引き込まれ、ショウジョウバエが臭気プルームにさらされます。成虫の嗅覚ショック条件付け実験はすべて、暗い赤色光の下で実施してください。これにより、研究者は視認できつつ、ハエは視覚情報を遮断され、視覚的入力ではなく嗅覚に集中することが保証されます。次に、ハエをTMAに接続されたトレーニングチューブに入れ、チューブ内および気流に90秒間順応させます。最初の臭気であるMCHを提示し、1.25秒のパルスを12回、パルス間隔3.75秒、合計時間60秒で、60ボルトの電気ショックを与えます。電気ショックの後、32秒間の休止時間を設けます。次に、電気ショックを伴わずに、2回目のOCTの臭気を60秒間提示します。そして、電気ショックの後に32秒間の休止時間を設けます。次に、装置を横に向け、マウスパッドの上で底面を軽く叩き、ショウジョウバエをトレーニングチャンバーから中央チャンバーへ移動させます。ショウジョウバエを中央チャンバー内に90秒間保持した後、学習を測定するために、装置の底部に選択チューブを装着し、チームAを形成させます。ショウジョウバエを装置の選択点に移動させ、同時に両方の臭気に120秒間曝露させます。中央チャンバーをスライドさせて上げ、選択チューブ内でハエをトラップします。次に、中央コンパートメントおよび各アームからハエを回収し、それぞれ別の餌入りバイアルに入れます。バイアルにハエの種類と選択した臭いを明確に記載し、個体数を数えて記憶力を測定します。トレーニング後、ハエを回収し、チームメイトから酵母を含まない餌入りのバイアルに移動させます。付属のテキストプロトコルに記載されている通り、ハエを25 degrees Celsius、湿度70%の暗所で保存します。その後、ハエを再びチームメイトに導入します。長期記憶の測定のため、複数のハエのグループを同時にトレーニングできる自作の迷路を使用します。トレーニングを5サイクル行います。試験まで、ショウジョウバエを18 °C、湿度70%の暗所で維持します。試験前に、ハエを25 °Cに移し、少なくとも1時間順応させます。長期記憶を評価します。トレーニングの24時間後に行います。行動実験後、臭いカップを温水と無香料の洗剤で洗浄してください。乾燥後、オドールカップにsigma coatを10 µL塗布します。次に、電子レンジでオドールカップを加熱し、sigma coatを凝固させます。90秒後に100匹のハエをチームアゼ（team aze）に導入し、ハエを選択点に移動させて、純粋な臭気と空気のどちらかを選択させる時間を2分間設けることで、嗅覚鋭敏度試験を行います。その後、ハエを回収し、数を数えます。電気ショック反応性を調べるため、ハエをショックチャンバーに導入します。90秒間の休止後、60 Vの直流電撃を与えます。一部のショウジョウバエは、電撃のない同様のチューブへ逃避します。ハエが選択を行うまで2分間待ちます。その後、ショックチューブから脱出したハエを回収してカウントし、学習効果を明らかにします。一連の実験をCanton s野生型成飛およびDS変異体成飛を用いて行いました。Duns飛は、野生型飛と比較して学習能力の低下を示します。この手順を行う際は、どの個体がどの群に属し、どのような処理が施されたかを正確に記録しておくことが重要です。個体の準備、訓練、およびテストの過程で、ショウジョウバエが容易にストレスを受ける可能性があることに注意してください。ストレスを最小限に抑え、一貫性のある操作を心がけてください。Joslinの学習能には日ごとの変動があることに留意してください。したがって、コントロール群および実験群の手順は、ほぼ同じ時間帯に、かつ同じ条件下で実施するように注意してください。もしコントロール群の学習が停止した場合は、実験が成功した日と比べて何が異なっていたかを分析するようにしてください。変数を単離できたら、メモリアッセイを行う際はその変数をより一貫して扱うようにしてください。今後の研究の成功をお祈りします。

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ショウジョウバエアダルト嗅覚ショックラーニング

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