Name: アポトーシス細胞のクリアランスのイメージング中に生きるショウジョウバエ胚 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: 学ぶ アポトーシス細胞クリアランスの動態解析法。ショウジョウバエ胚を用いて共焦点顕微鏡でリアルタイム観察し、貪食細胞とアポトーシス細胞の挙動を可視化します。固定標本法では得られない動的プロセスの理解に貢献します。

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この作品は、マリーキュリー社会復帰グラント（IRG249084）によってサポートされていました。私たちは、Kurant研究所のすべてのメンバーに感謝します。

食細胞とアポトーシス細胞：細胞の2つの集団が標識されている必要があり、生体内でアポトーシス細胞クリアランスの力学に従ってください。 マクロファージ、グリア及び外胚葉8：貪食細胞集団をマークするために我々は胚で排他的に食細胞を標識シミュレーションcytGFPマーカーを含むショウジョウバエラインを使用。一つは、血球固有Gal4のドライバ（CRQ-Gal4の ）含む行またはグリア固有Gal4のドライバ（ レポGal4の ）とUAS制御（UAS-GFP）の下で遺伝的に符号化された蛍光レポーターを含む食細胞に対して異なるマーカーを使用することができます。 アポトーシス細胞のクリアランスの間にアポトーシス細胞を監視するために我々は異なったアポトーシス/貪食マーカーを使用。アネキシンV（Molecular Probes社）は10アポトーシス細胞の早期マーカーとして機能します。Phiphilux（OncoImmunin）は後でapoptoとして使用されている蛍光カスパーゼ-3基板であるSISマーカー、及びLysoTracker（Molecular Probes社）はファゴソームマーカーとして機能します。我々はマイクロインジェクションシステムPicoPump PV 820を使用して、これらの試薬を注入する。 1。準備中<ol><li>ヘプタンのり： 両面テープをアンロールし、シンチレーションバイアル中で、24時間のためにパラフィルムでバイアル、およびロックを封印、ヘプタンで埋めることができる限り置く。接着剤は厚すぎるヘプタン追加。 </li><li>我々は2時間ペースト+酵母ハエは予め温めグレープジュース寒天プレート上に置くことができ、その後°C 10-12時（所望の段階に依存します）のための事前のマイクロインジェクションと時間経過の録音を25にプレートを転送注入された胚の。そこで我々は、ステージ15や開発の16から胚を提供し、25℃に維持寒天プレートから胚を集める。 </li><li>針の調製： 注射用の針を準備するには、我々は &#39;サター楽器&#39;ニードルプラーと薄肉ガラスフィラメント（FHCキャピラリーチューブ）を使用します。プールされたキャピラリーの先端を破っている0.5ミクロンの直径からn。 </li><li>接着剤でカバースリップ： ピペットチップを使用すると、カバースリップの途中で一行でヘプタン接着剤のドロップを分散。数秒のためにそれが乾燥してみましょう。これらのカバースリップのいくつかを準備します。 </li></ol> 2。胚の準備<ol><li>寒天プレートから胚を集め、きれいなペイントブラシと流水を使ってセルストレーナー（SPLライフサイエンス）に転送します。ストレーナーは、廃水を収集するようにビーカーの上に保持されている。 </li><li>すべての酵母ペーストが除去されるまで水を使用してセルストレーナーで胚を洗浄します。 </li><li>キムワイプを用いたストレーナの外側を拭いて余分な水分を乾かします。 </li><li>きれいなペトリ皿内のセルストレーナーを置き、セルストレーナーで胚をカバーするのに十分な50％の漂白剤を追加します。時折2分（2-3回）、それらを攪拌するための胚をDechorionate。 </li><li>胚漂白剤の臭い緩いまで広範囲に水で洗い流してください。 </li><li>きれいにセルストレーナーを置きペトリ皿に、最大乾燥を防ぐために水で胚をカバーしています。 </li><li>胚の設定を開始する前に、2本の針（時々針が目詰まりすることができます）に必要な試薬1μlのをロードします。これは、針の先端に到達するための液体のため、約5分かかります。 </li><li>グレープジュース寒天の長方形の部分を切り取り、顕微鏡スライド上に置きます。ペトリ皿からきれいなペイントブラシを使って寒天ピースにdechorionated胚を転送します。 </li><li>蛍光解剖顕微鏡下で適切に選択し、ウェットペイントブラシを使用したGFPマーカーを発現胚を上演し、近くに別の（ 図1A）の後行1で寒天片の端に各胚を配置。胚は、中枢神経系（CNS）におけるグリアによるイメージング食作用のための彼らの腹側にまで配置する必要があります。 </li><li> 1行目には約10胚を設定します。 </li><li>ヘプタン接着剤のストリップ（ 図1B、Cで途中で被覆されたカバースリップに胚を取り付け</strong&gt;）。 </li><li>約5分（これは部屋の湿度と注入される量に依存します）のために脱水チャンバー内にカバースリップを置きます。 </li><li>さらに脱水症状を避けるためにハロカーボン油700（Sigma）で胚をカバーするまで乾燥した後。 </li><li>上向きに胚と顕微鏡スライド上にカバースリップを置きます。あなたは、カバースリップの移動を防止するために、スライド上に水滴を置いてもよい。胚は今注射のための準備が整いました。噴射位置は、胚の途中で側方に典型的である。 </li></ol> 3。胚インジェクション<ol><li>マイクロマニピュレータに針を取り付けます。 </li><li>針先を破るためには視野内にカバースリップの端を入れて、同じ焦点面に針を調整します。それは針の先端に当たって、それを壊すまで、非常に慎重にカバースリップを移動します。 </li><li>胚に着目し、油に針を配置し、針から液滴を得ることを確認してください。これは、針の先端がされていることを意味しよく壊れた。 </li><li>ニードルホルダーに触れることなく針に胚を移動し、胚にドロップを注入。離れて胚を移動し、すべての胚が注入されるまで、次のいずれかに進みます。 </li></ol> 4。イメージング 40Xまたは100Xを目的とした倒立共焦点顕微鏡で我々は画像胚を。我々は強力なGFPの発現と注射後アポトーシス細胞の良いラベルを示し途中でCNSとうまく配置胚、探します。 ライブ胚の時間経過の録音のために我々は通常、5〜6共焦点スライス（厚さ2μmのそれぞれ）を選択します。その後、我々は全体の細胞を観察するために3スライス（6ミクロン厚）の投影を行う。 我々は安定しており、簡単に漂白しないアポトーシス細胞のマーカーを使用しています。我々は60秒の間隔で録音を行う漂白GFPを避けるために。 場合によっては、胚は圧延開始することができる録画の時間の間。したがって、我々は、停止し、必要に応じて、最初からやり直すために、記録でたまに見てみましょう。

<ol><li>Kinchen, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+to+die+for%3A+signaling+to+apoptotic+cell+removal+in+worm%2C+fly+and+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">A model to die for: signaling to apoptotic cell removal in worm, fly and mouse.</a> Apoptosis. 15, 998-1006 (2010).</li>
<li>Kinchen, J. M., Ravichandran, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagosome+maturation%3A+going+through+the+acid+test%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Phagosome maturation: going through the acid test.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 9, 781-795 (2008).</li>
<li>Kinchen, J. M., Ravichandran, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytic+signaling%3A+you+can+touch%2C+but+you+can%27t+eat%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Phagocytic signaling: you can touch, but you can't eat.</a> Curr. Biol. 18, 521-524 (2008).</li>
<li>Stuart, L. M., Ezekowitz, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytosis%3A+elegant+complexity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Phagocytosis: elegant complexity.</a> Immunity. 22, 539-550 (2005).</li>
<li>Lauber, K., Blumenthal, S. G., Waibel, M., Wesselborg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clearance+of+apoptotic+cells%3A+getting+rid+of+the+corpses%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Clearance of apoptotic cells: getting rid of the corpses.</a> Mol. Cell. 14, 277-287 (2004).</li>
<li>Henson, P. M., Hume, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptotic+cell+removal+in+development+and+tissue+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Apoptotic cell removal in development and tissue homeostasis.</a> Trends Immunol. 27, 244-250 (2006).</li>
<li>Kurant, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keeping+the+CNS+clear%3A+glial+phagocytic+functions+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Keeping the CNS clear: glial phagocytic functions in Drosophila.</a> Glia. 59, 1304-1311 (2011).</li>
<li>Kurant, E., Axelrod, S., Leaman, D., Gaul, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Six-microns-under+acts+upstream+of+Draper+in+the+glial+phagocytosis+of+apoptotic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Six-microns-under acts upstream of Draper in the glial phagocytosis of apoptotic neurons.</a> Cell. 133, 498-509 (2008).</li>
<li>Mergliano, J., Minden, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caspase-independent+cell+engulfment+mirrors+cell+death+pattern+in+Drosophila+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Caspase-independent cell engulfment mirrors cell death pattern in Drosophila embryos.</a> Development. 130, 5779-5789 (2003).</li>
<li>van den Eijnde, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+surface+exposure+of+phosphatidylserine+during+apoptosis+is+phylogenetically+conserved%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Cell surface exposure of phosphatidylserine during apoptosis is phylogenetically conserved.</a> Apoptosis. 3, 9-16 (1998).</li>
</ol>

著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。

アポトーシス細胞のクリアランスは非常に動的であるアポトーシスの重要な最後の段階である。したがって、プロセスの実時間研究は極めて重要である。ここでは、開発してショウジョウバエの胚を生体内アポトーシス細胞のクリアランスの監視を可能にするプロトコルを記述します。アポトーシス細胞と食細胞：この手順では、細胞の2つの集団は、特異的なマーカーを使用してマークする必要があります。 シミュレーションcytGFPレポーターが同じ胚で同時に貪食マクロファージ、グリア及び外胚葉を監視するのに適している、wを HICHにより、同時に異なる食細胞集団をたどることができる。これは、速度、特異性および分解能力などのプロセスの特定の側面を比較し、同時に &#39;プロ&#39;と &#39;非専門&#39;クリアランスを研究するための大きな利点です。この方法の欠点は、 シミュレーションcytGFPマーカーがマクロファージに非常に強く発現し、はるかに弱いされることである同じ映画の中で調整するのが難しいかもしれませんグリア、。しかし、一つは、特定のGal4s（マクロファージおよびグリアのためレ...

アポトーシスとその後の食作用を通じて不要なまたは異常な細胞の適切な除去は、胚発生のためだけでなく、成人で組織の恒常性のために重要です。アポトーシス細胞やアポトーシス細胞の貪食クリアランスは4段階で進行する非常にダイナミックなプロセスである：アポトーシス細胞の貪食細胞の（1） 募集 （ &#39;見つける-私&#39;）、食作用の標的として細胞の（2） 認識 （ &#39; -私を食べて&#39;）、（3）の貪食 、アポトーシス粒子1-5の（4） ファゴソーム成熟と劣化が続く。 &#39;プロ&#39;マクロファージや未熟樹状細胞、および&#39;非専門家&#39;組織常駐隣接セル、後生動物の開発6,7時のアポトーシス細胞のクリアランスのために重要である：食細胞の2つのタイプがあります。 ショウジョウバエの開発では、アポトーシスを通して余分細胞の除去は、3メートルで発生後期胚の半ばで初めて、その後中旬蛹で、再び初期の成人におけるAINフェーズ、。胚発生の間にアポトーシス粒子は&#39;プロ&#39;食細胞、マクロファージ、および&#39;非専門家&#39;外胚葉およびグリア8,9によって除去される。 我々の以前の研究では、胚発生の間に食細胞にのみ発現している、（シミュレーション）六ミクロンアンダー、貪食受容体を同定した。 シミュレーションのプロモーターを用いて、我々は、ライブ胚8で同時に外胚葉およびグリア、マクロファージを監視することを可能に貪食細胞集団（ シミュレーションcytGFP）に特異的マーカーを生成しました。さらに、アポトーシスの異なる段階においてアポトーシス細胞に特異的なマーカーを用いて、我々は、 生体内のアポトーシス細胞クリアランスのダイナミクスに従うことができる。

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagent</td></tr><tr><td>Annexin V </td><td>Molecular Probes</td><td>A35108</td><td></td></tr><tr><td>PhiPhiLux G2D2</sub</td><td>>OncoImmunin</td><td>A304R2G-5</td><td></td></tr><tr><td>LysoTracker</td><td>Molecular Probes</td><td>L-7528</td><td></td></tr><tr><td>ハロカーボンオイル 700</td><td>Sigma</td><td>H8898</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Material</td></tr><tr><td>毛細管チューブ</td><td>FHC30-30-0</td><td></td><td></td></tr><tr><td>細胞ス</td><td>トレーナーSPL93100</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ペイントブラシ</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

アポトーシス細胞のクリアランスのイメージング中に生きる<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;胚

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

アポトーシスとその後の食作用を通じて不要なまたは異常な細胞の適切な除去（アポトーシス細胞のクリアランス）は、すべての後生生物の正常な発達のために重要です。アポトーシス細胞のクリアランスは密接に細胞死に関連付けられている非常にダイナミックなプロセスである; unengulfedアポトーシス細胞はほとんど通常の条件下では、生体内で見られる。アポトーシス細胞のクリアランスの異なるステップを理解し、 &#39;プロ&#39;食と比較するためには-にマクロファージや樹状細胞を&#39;非専門家&#39; -組織常駐隣接セルは、プロセスのin vivoライブイメージングでは、非常に貴重なものです。ここでは、ライブショウジョウバエ胚におけるアポトーシス細胞のクリアランスを研究するためのプロトコルを記述します。貪食に異なるステップのダイナミクスに追従するために、我々はアポトーシス細胞と食細胞に対して特異的なマーカーを使用しています。また、並行して2食のシステムを監視することができます： &#39;プロ&#39;マクロファージおよび &#39;セミプロフェッショナルエディション現像中枢神経系におけるssional &#39;グリア（CNS）。ここで説明する方法は、アポトーシス細胞クリアランスのリアルタイムの研究のための優れたモデルとしてショウジョウバエ胚を用いる。

アポトーシス細胞は、アネキシンVで標識されており、グリア、外胚葉およびマクロファージをシミュレーションcytGFPで標識された映画からの代表フレームが図2に示されている。各フレームは3スライス2μmとそれぞれの投影である。 ステージ15の胚を適切によくラベルグリア（g）のと途中で胚性CNSを示す配置されている。 CNS外にほとんどであるマクロファージ（m）は、強力な細胞質GFPの発現を示す。外胚葉細胞はまた、細胞質GFP（電子）で標識される。多くのアネキシンV陽性細胞は、CNSの内側と外側に見られている。貪食イベントをフォローするには容易ではありません。私たちは、グリア細胞がアポトーシス粒子を巻き込むている白い長方形で一つのイベントを強調した。グリア細胞のプロービング動作に注意してください：それを巻き込むことなく、数回アポトーシス粒子に触れた後、アネキシンV標識したアポトーシス細胞（ 図2の貪食で終わる</強い&gt;）。 別のアポトーシスス...

ここでは、アポトーシス細胞のクリアランスのダイナミクスを研究するための効果的な方法を説明<em生体内で&gt;</em&gt;。この方法では、住んで採用<em&gt;ショウジョウバエ</emアポトーシス細胞と食細胞の特異的標識を用いたアポトーシス細胞の貪食を監視するための強力なモデルとして&gt;胚。

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

この手順の全体的な目的は、ショウジョウバエ胚におけるアポトーシス細胞除去のダイナミクスを追跡することです。これは、食細胞集団を標識する細胞質GFPマーカーを持つ形質転換ハエを用いて行われます。Simio GFPマーカーを持つ胚を回収し、洗浄し、コーティングします。次に、胚を注射に適した位置に配置し、その後CNSをモニタリングします。第3ステップは、X in fiveなどの特異的なアポトーシス食作用マーカーを胚に注入し、アポトーシス細胞を標識することです。最終ステップでは、共焦点顕微鏡を用いて胚のCNS（中枢神経系）のタイムラプス記録を行います。最終的に、蛍光共焦点顕微鏡を通じて、アポトーシス細胞除去の異なる段階におけるアポトーシス細胞と食細胞の局在および挙動を示すことができます。固定胚を用いた免疫組織化学などの既存の手法に対する本手法の主な利点は、アポトーシス細胞除去のダイナミクスを追跡できる点にあります。アポトーシス細胞の除去は、多様な段階を含む非常にダイナミックなプロセスです。本手法では、アポトーシス細胞と食細胞の特異的マーカーを用いて、これらの異なる段階を追跡することができます。プロトコルの最初の手順として、一般的な試薬を用いて接着剤を作製し、市販の両面テープを一度剥がしてから、シンチレーションバイアルに適合するように巻き直します。バイアルにヘプタンを満たし、パラフィルムで密閉します。次に、バイアルをローテーターに取り付け、24時間緩やかに揺らします。翌日、室温で調製した接着剤を新しいバイアルに移します。ガラス製ピペットを使用して、調製した接着剤を新しいバイアルに移します。準備が整ったら、ピペットチップを使用して、カバーガラスに接着剤を塗布します。ヘプタン接着剤を1滴落とし、カバーガラスの中央に線を描くように広げます。接着剤を数秒間乾燥させます。その後、カバースリップは、二酸化炭素でハエを麻酔させた後、密閉容器に入れて室温で最大1か月間保存できます。約400匹のハエを、25 °Cで2時間温めたブドウジュース産卵プレートを入れた回収容器にまとめます。ブドウジュース産卵プレートを回収し、ハエの状態を維持するために、容器に新しいプレートを被せます。回収したプレートには、受精後0時間から2時間の胚が含まれています。胚が入ったブドウジュース産卵プレートを25 °Cのインキュベーターに戻し、目的の発育段階に達するまで静置します。この例では、胚を10時間から12時間インキュベートし、ステージ15または16まで発育させます。水道水と清潔な絵筆を使用して、胚をプレートからセルストレーナーに移動させます。こぼれた胚を回収できるよう、ストレーナーの下に容器を置いてください。集めた胚を、酵母ペーストが完全に取り除かれるまで洗浄します。次に、ストレーナーの外側を拭き取って余分な水分を除去します。卵膜を十分に除去するため、セルストレーナーを清潔なシャーレに置きます。セルストレーナー内の胚が浸るまで50%漂白剤を加え、2〜3回かき混ぜながら2分間待ちます。次に、胚から漂白剤の臭いがしなくなるまで洗い流します。胚が入ったセルコンテナを清潔なペトリ皿に移し、乾燥を防ぐために水で満たします。これで、胚への注入準備が整いました。ニードルプラーと薄壁ガラスフィラメントを用いて、あらかじめ注入用ニードルを準備します。希望の試薬を2本のニードルに1 µLずつ充填し、そのうち1本を予備として使用します。X in fiveのような、退色が少ない安定したマーカーが試薬として適しています。次に、長方形に切り出したブドウジュースアガーを顕微鏡の上に置きます。ストレーナーから胚をスライドさせてアガー上に移します。蛍光解剖顕微鏡下で清潔な絵筆を用い、GFPマーカーを利用して、注入に適したステージの胚を選択します。濡らした絵筆を用いて、選別した胚を腹側が上になるように10個一列に並べます。この列をアグロブロックの端に配置します。胚の中枢神経系にGFPが観察されます。次に、ヘプタン接着剤のストリップを用いて、胚をカバーガラスに固定します。注入を成功させるには、胚を正しい位置に配置することが非常に重要です。時間をかけて、胚が適切な方向で正確に一列に並んでいることを確認してください。次に、カバーガラスを脱水チャンバーに約5分間入れます。胚を乾燥させた後、さらなる脱水を防ぐためにHello carbon oil 700で覆います。最後に、顕微鏡スライドグラスの上に水の一滴を置きます。次に、胚を上にした状態でカバーリップを濡れた顕微鏡スライドの上に置きます。これで胚に注入する準備が整いました。まず、マイクロマニピュレーターとピコポンプに針を取り付けます。ポンプは、ニードル内に窒素を押し込むことで注入液量を制御します。顕微鏡下での窒素の間欠的な放出は、フットペダルで制御します。ニードルの先端に焦点を合わせ、ニードル先端とカバーガラスの両方に非常に慎重にピントを合わせた状態で、カバーガラスの端付近に配置します。カバーガラスを針先に当てて壊れるまで移動させます。開口径は0.5〜2 µmにする必要があります。次に、胚に焦点を合わせます。針をオイルの中に導入します。針先が正しく切断されていれば、オイル中に液滴が漏れ出しているはずです。ニードルホルダーに触れずにペダルを踏み込み、胚の側面端が針で貫通するようにステージを移動させます。溶液を胚に素早く1滴注入します。胚を移動させ、10個すべての胚に注入が終わるまで次の胚への操作を繰り返します。40倍または100倍の対物レンズを備えた倒立共焦点顕微鏡で、胚を撮影します。中枢神経系（CNS）が中央に位置し、強いGFP発現とアポトーシス細胞の標識が認められる、適切に配置された胚を探索します。タイムラプス記録を行うために、これらの位置でミクロンスティック（micron stick）を用いて固定する共焦点スライスを5〜6枚選択します。GFPの退色が問題にならない間隔である60秒ごとにスキャンを行います。その後、細胞全体を観察するために、厚さ6 µmのスライス3枚の投影図を作成します。場合によっては、ビデオ録画中に胚が回転し始めることがあります。そのため、胚の移動によって時間を浪費することがないよう、録画状況を監視してください。適切に配置されたステージ15の胚では、中央に胚のCNS（中枢神経系）が見え、グリア細胞がgで、CNSの主に外側に位置するマクロファージがMで明確に標識されています。強い細胞質GFP発現が認められます。外胚葉細胞Eもまた、細胞質GFPで標識されています。これらのフレームでは、Annexin Vでラベル付けされたアポトーシス細胞と、GFPでラベル付けされた外胚葉およびマクロファージが示されています。各フレームは3枚のスライスの投影であり、各スライスの厚さは2 µmです。多くのAnnexin V陽性細胞がCNSの内部および外部に存在しています。枠囲みのイベントは、グリア細胞がアポトーシス小体を包み込む様子を示しています。グリア細胞の探索行動に注目してください。グリア細胞はアポトーシス細胞の発達後、包み込みを開始する前に、数回アポトーシス小体に接触しています。この手法は、アポトーシス細胞除去の分野の研究者が、発生過程におけるアポトーシス細胞の食作用を探索する道を開きました。本手法を用いることで、アポトーシス細胞除去の非常にダイナミックな挙動を探索することが可能です。

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Research

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Biology

生物学

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