Name: 細菌性前立腺炎のマウスモデルにおける接触性アロディニアの測定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: 学ぶ 細菌性前立腺炎マウスモデルにおける接触性アロディニア測定法。尿道内カテーテル法でUPECを感染させ、von Freyフィラメントで骨盤部の痛み反応を定量化する手法を解説。慢性骨盤痛症候群の病態理解と治療法開発に有用な実験系です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究は、NIH / NIDDKからの助成金1K01DK079019A2（PT）によってサポートされていました。

1。マウス接種のための細菌の準備以下は無菌条件下で行わなければなりません。 <ol><li>キャップで1 17×100mmのポリプロピレンチューブを取り、新鮮なルリア培地（LB）培地3 mlを加える。オートクレーブしたチップを使用して、ひずみCP1 2の一部凍結細菌のグリセロールストックを取り、LB培地を含むチューブに培養液の少量を転送します。酸素がまだ管を入力することができるように、チューブのキャップを交換します - 文化は好気的条件下で成長する必要がある。で37箇所管℃で一晩220rpmで振盪インキュベーターのC。 </li><li>翌日、3 mlのLB培地で新しいチューブに一晩培養した培養液の5μlを転送し、37℃で一晩インキュベーター内の静的条件下で増殖</li><li> 40mlのLB培地それぞれを含むAA 50mlチューブに培養液40μlの3日目の転送で。一晩37℃のインキュベーター内で静的な場所。 </li><li>電源をオンにして、4℃に遠心分離機を設定一度遠心機が最終温度に達しており、40ミリリットルナルゲン遠心管にそれぞれ40 mlの培養液を移す。 </li><li> LB培地で音量を調整して、必要に応じて - 遠心分離機のバランスをとるためにチューブの重量を量る。 20分間6,000 rpmでチューブを軽くスピン。 </li><li>上清を慎重に除去し、穏やかに40ミリリットル滅菌PBSに細菌ペレットを中断します。 </li><li> PBSでステップ1.5を繰り返します。 </li><li>上清を吸引除去し、500μlの滅菌PBS中の細菌を一時停止。 1.5 mlのマイクロチューブに溶液を移します。懸濁液10μlを取り、氷冷したPBS 990μlに希釈します。接種に必要な量を決定するために、OD 420 nmを読み取るために分光光度計を使用しています。の適切な音量を決定するために、氷冷PBSでペレットを一時停止するには：外径420 nmの番号 （mlで）に乗り、細菌ペレット[元の推定量を減算します。 ODを420nmで = 0.545、ペレット約0.075ミリリットル。 0.545から0.075 = 0.470]。 </li><li>細菌懸濁液10μlを取り出して、ディ990μlの氷冷PBSでリュート。 OD 420 nmをお読みください。目標は1.000±0.010希釈懸濁液のOD 420 nmの値を達成することです。あなたの希釈の数がこの目標を上回っている場合、懸濁液に複数のボリュームを追加し、別の値を読み取ります。数が0.990を下回っている場合は、懸濁液をスピンダウンし、所望の読み取り値を取得するまで、外径420 nmの読みを繰り返す。 </li></ol> 2。動物の感染症マウス（5から7週齢、グループ当たり10）はジャクソン研究所（バーハーバー、メイン州）から購入した。 <ol><li>マウスはプレキシグラス室におけるイソフルラン1〜4％の吸入により麻酔し、リカンベントまで監視されています。 </li><li>一度マウスはガラスハミルトンシリンジ（1.5〜2.0センチメートルの長さ）の変更された30gの針に取り付けポリエチレン（PE10）カテーテルとカテーテル法によって細菌の点滴のために取られています。カテーテルは針のハブに挿入されます。マウスはplacですedは麻酔下で背側表面にノーズコーンを使用して維持。 </li><li>マウスの陰​​茎は陰茎尿道の入り口の潤滑に使用されている穏やかな圧力と綿棒で、潤滑剤のリベラルな量によって押し出される。 </li><li> 1×10 8個の細菌を含有するリン酸緩衝生理食塩水、10μlのカテーテル挿入に続いて麻酔したマウスの尿道内に導入される。 </li><li>細菌の付着を可能にするために、直ちに排尿を防ぐために、細菌の導入後マウスはプレキシグラス室中で15分間、麻酔状態に維持されている。 </li><li>マウスをケージに戻し、次の24時間監視されています。 </li></ol> 3。動作テストマウスは、感染前（ベースライン）へと3日、7日、14日、21日、感染後28日に試験した。呼ば痛覚過敏と触覚アロディニアは、腹部と足11,12 Rに適用von Freyフィラメントを用いて試験した後足13 egion。テストは固定時刻、​​標準的な方法論と、すべての動物の単一実験試験採用された時に施行した。グループの盲検試験は、動物モデルにおいて行動ベースの痛み試験の限界と戦うために利用された。グラム（Stoelting、米国）が撤退応答の腹部と周波数に適用されていた0.04、0.16、0.4、1.0、4.0の力を持つ5つの個々のvon Freyフィラメントを算出した。 <ol><li>順応の30分の期間の後、マウスはステンレススチールワイヤーグリッドの床が社内で行われた個々のプレキシグラス室（6×10×12 cm）で配置されます。 </li><li>呼ば痛覚過敏と触覚アロディニア5 von Freyフィラメントを用いて試験した。各フィラメントは合計10回に5秒の間刺激間隔で1〜2秒のために適用され、毛は力の昇順で試験した。 </li><li>各フィラメントは前立腺の一般付近で下腹部領域に適用されると注意が脱感作を回避したり、エフェクトを &quot;巻き上げる&quot;ために、この領域内の異なる領域を刺激するために取られた。フィラメントは、10回の合計のための刺激の間に少なくとも5秒の間隔をおいて1〜2秒のための力の低い順に適用された。 </li><li>行動は、3種類のフィラメント刺激に対する肯定的な反応であると考えています：腹部の1）鋭い引き込み、2）即時舐めるまたはフィラメント刺激の面積の傷、3）ジャンプ。 </li><li>応答周波数は、肯定応答の割合（10点、10 = 50％の例えば 5回答）として算出したとのデータが応答周波数の平均パーセンテージ±SEとして報告されました</li><li> 25以上の正の合計ベースライン応答を持つ動物は研究から除外されます。 </li><li>接触性アロディニアは0.04、0.16、0.4、1.0と4.0グラムの力とvon Freyフィラメントを用いて後肢の足の領域でテストされました。中央値50％引っ込め閾値（5）は、アップダウンを用いて評価したフィラメントが少し曲げるまでテストが0.04グラムのフィラメントで開始されたメソッドは、後肢の足底表面に垂直に印加。フィラメントは、肯定的な反応が観察されるまで、昇順で試験した。フィラメントへの積極的な応答は試験足の足や舐めるのシャープ撤退のいずれかとして定義されていました。肯定応答が記録されたときに次の弱いフィラメントが適用され、否定応答が観察された場合は、次の強いフィラメントを適用した。 </li><li>記載された実験と方法論は、ノースウェスタン大学の動物のケアと使用委員会によって審査され、承認されています。 </li></ol>

<ol><li>Yamamoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+epidemiology+of+uropathogenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+infection+and+chemotherapy+official+journal+of+the+Japan+Society+of+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Molecular epidemiology of uropathogenic Escherichia coli.</a> Journal of infection and chemotherapy official journal of the Japan Society of Chemotherapy. 13, 68-73 (2007).</li>
<li>Rudick, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uropathogenic+Escherichia+coli+induces+chronic+pelvic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Uropathogenic Escherichia coli induces chronic pelvic pain.</a> Infect. Immun. 79, 628-635 (2011).</li>
<li>Pontari, M. A., Ruggieri, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+in+prostatitis%2Fchronic+pelvic+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+urology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms in prostatitis/chronic pelvic pain syndrome.</a> The Journal of urology. 172, 839-845 (2004).</li>
<li>Schaeffer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice.+Chronic+prostatitis+and+the+chronic+pelvic+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical practice. Chronic prostatitis and the chronic pelvic pain syndrome.</a> The New England journal of medicine. 355, 1690-1698 (2006).</li>
<li>Rudick, C. N., Schaeffer, A. J., Thumbikat, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+prostatitis+induces+chronic+pelvic+pain.+American+journal+of+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Regulatory%2C+integrative+and+comparative+physiology%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune prostatitis induces chronic pelvic pain. American journal of physiology.</a> Regulatory, integrative and comparative physiology. 294, R1268-R1275 (2008).</li>
<li>Elkahwaji, J. E., Ott, C. J., Janda, L. M., Hopkins, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+for+acute+bacterial+prostatitis+in+genetically+distinct+inbred+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Mouse model for acute bacterial prostatitis in genetically distinct inbred strains.</a> Urology. 66, 883-887 (2005).</li>
<li>Hultgren, S. J., Porter, T. N., Schaeffer, A. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+type+1+pili+and+effects+of+phase+variation+on+lower+urinary+tract+infections+produced+by+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Role of type 1 pili and effects of phase variation on lower urinary tract infections produced by Escherichia coli.</a> Infect. Immun. 50, 370-377 (1985).</li>
<li>Jarrell, J., Giamberardino, M. A., Robert, M., Nasr-Esfahani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bedside+testing+for+chronic+pelvic+pain%3A+discriminating+visceral+from+somatic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+research+and+treatment%22%5BJournal%5D)">Bedside testing for chronic pelvic pain: discriminating visceral from somatic pain.</a> Pain research and treatment. 2011, 692102(2011).</li>
<li>Jarrell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+Cutaneous+Allodynia+in+Association+with+Chronic+Pelvic+Pain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain.</a> J. Vis. Exp. (28), e1232(2009).</li>
<li>Giamberardino, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscero-visceral+hyperalgesia%3A+characterization+in+different+clinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Viscero-visceral hyperalgesia: characterization in different clinical models.</a> Pain. 151, 307-322 (2010).</li>
<li>Laird, J. M., Martinez-Caro, L., Garcia-Nicas, E., Cervero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+visceral+pain+and+referred+hyperalgesia+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A new model of visceral pain and referred hyperalgesia in the mouse.</a> Pain. 92, 335-342 (2001).</li>
<li>Laird, J. M., Souslova, V., Wood, J. N., Cervero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficits+in+visceral+pain+and+referred+hyperalgesia+in+Nav1.8+%28SNS%2FPN3%29-null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Deficits in visceral pain and referred hyperalgesia in Nav1.8 (SNS/PN3)-null mice.</a> J. Neurosci. 22, 8352-8356 (2002).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of neuroscience. 53, 55-63 (1994).</li>
<li>Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+type+1+pilus+expression+in+Escherichia+coli+to+ascending+urinary+tract+infections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice.</a> Infect. Immun. 55, 373-380 (1987).</li>
<li>Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+bacterial+inflammation+of+the+mouse+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">Acute bacterial inflammation of the mouse prostate.</a> The Prostate. 72, 307-317 (2012).</li>
<li>Rivero, V. E., Cailleau, C., Depiante-Depaoli, M., Riera, C. M., Carnaud, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-obese+diabetic+%28NOD%29+mice+are+genetically+susceptible+to+experimental+autoimmune+prostatitis+%28EAP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Non-obese diabetic (NOD) mice are genetically susceptible to experimental autoimmune prostatitis (EAP).</a> Journal of autoimmunity. 11, 603-610 (1998).</li>
<li>Pakarainen, T., Zhang, F. P., Makela, S., Poutanen, M., Huhtaniemi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testosterone+replacement+therapy+induces+spermatogenesis+and+partially+restores+fertility+in+luteinizing+hormone+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Testosterone replacement therapy induces spermatogenesis and partially restores fertility in luteinizing hormone receptor knockout mice.</a> Endocrinology. 146, 596-606 (2005).</li>
<li>Taguchi, O., Kojima, A., Nishizuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+prostatitis+after+neonatal+thymectomy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+experimental+immunology%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune prostatitis after neonatal thymectomy in the mouse.</a> Clinical and experimental immunology. 60, 123-129 (1985).</li>
</ol>

特別な利害関係は宣言されません。

UPECによるマウス前立腺の感染における生体内細菌性前立腺炎の病態に関与している可能性のある事象のモデリング、CP / CPPSまたは慢性炎症における素因イベントなどが可能になります。方法は女性の尿路感染症7,14でUPECモデルに文学の大きな体によって細菌準備や点滴の引き分けに記載。モデルは、潜在的なワクチン候補と免疫調節のメカニズムをテストする、病因を研究するための幅広い適用性を持っています。定量化可能な方法で痛みの動作を詳細に追跡する能力は、感染によって誘発される痛みの病因の研究のために、潜在的に痛みの治療をテストするための前臨床モデルとしてできます。 マウス感染モデルの成功を決定するいくつかの重要なステップがあります。揺れや静的文化を持つ3日間の培養方法は、UPECために重要であることが知られている毛の最適な発現のために実行され上皮細胞への付着。それはUPECが成功臓器植民地化のための重要なステップを表します。細菌の成長のための技術は、1×10 8細菌7を含有するリン...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>培養管</td><td> BDファルコン</td><td> 352059 </td></tr><tr><td> LBブロスミラー</td><td> EMD </td><td> EM1.10285.0500 </td></tr><tr><td>ナルゲン遠心管</td><td>サーモ</td><td> 3118-0050 </td></tr><tr><td>イソフルレン</td><td>バトラーシャイン</td><td> NDC 11695-6776-1 </td></tr><tr><td>カテーテルニードル30G </td><td>ハミルトン</td><td> 91030 </td></tr><tr><td> PE10チューブ</td><td> BD intramedic </td><td> 427400 </td></tr><tr><td> von Freyフィラメント</td><td> Stoelting </td><td> 58025から31 </td></tr></tbody></table>

細菌性前立腺炎のマウスモデルにおける接触性アロディニアの測定

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

尿路病原性大腸菌 （UPEC）は、尿路感染症や細菌性前立腺炎1に重要な役割を果たしている病原体である。我々は最近、UPECは、慢性骨盤痛2、慢性前立腺炎/慢性骨盤痛症候群（CP / CPPS）3,4の機能の開始に重要な役割を持っていることが示されている。臨床的に関連UPECによる前立腺の感染は、組織の損傷および自己免疫のメカニズム5の開始を含むことができるメカニズムを介して慢性痛を開始し、確立することができます。 前立腺内UPECの病因を理解するための課題は、操作に前立腺の相対的な到達不能です。我々は、それによって前立腺の上行性感染を確立雄マウスにUPECの臨床株を提供するために前述の尿道感染症法6を利用した 。ここでは、BAを標準化するための私達のプロトコルを記述cterial接種7と同様に細菌の点滴のために麻酔雄マウスをcatheterizingするための手順。 CP / CPPSは主に触覚アロディニア4の存在によって特徴付けられる。動作テストは呼ば内臓痛8-10起因する皮膚の痛覚過敏の概念に基づいていた。内臓組織における過敏焦点は通常非痛み刺激（アロディニア）に誇張された応答を可能にする皮膚の疼痛閾値を低減します。基盤となる内臓痛の強度に伴って増加する傾向がある異常反応で皮膚の結果に垂直力の応用。我々はUPEC細菌を持つ単一の感染に応答して時間をかけて接触性アロディニアを定量化するためのvon Frey繊維を利用したNOD / ShiLtJマウスでの方法論を記述する。

<html>我々は、細菌感染時に慢性的な痛みの有無をNOD / ShiLtjおよびC57BL/6J雄マウスを調べた。雄性マウス（5〜7週齢）尿道（ 図1）に生理食塩水や細菌を注入した。生理食塩水をたらしC57BL/6JマウスとUPEC感染C57BL/6Jマウスのvon Freyフィラメントと骨盤領域の機械的刺激は、実験の28日間コース（ 図1）の間に変更されなかった応答周波数が得られた。これとは対照的に、UPEC感染NODマウスは有意に大きかった骨盤の刺激に対する応答を示し、28日目（P &lt;0.05、 図3）まで有意に上昇して推移しました。細菌感染は後足（データは示していない）の足底領域の触覚感度に変化なしとなりました。 tp_upload/50158/50158fig1.jpg &quot;/&gt; 図1。実験的なフローチャート。3日間培養することに...

前立腺の感染は、慢性前立腺炎における骨盤痛を媒介する要因かもしれません。我々は時間をかけて、マウスにおける接触性アロディニアを測定するための雄マウスと方法論の尿道への細菌の点滴、標準化された細菌の接種物の調製のための手順を記述している。

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

この手順の全体的な目的は、前立腺の細菌感染に起因するマウスの触覚性異痛症を測定することです。これは、最初に麻酔下に置かれたオスのマウスに取り付けるための細菌懸濁液を準備することによって達成されます。2番目のステップは、マウスの陰茎を穏やかに押し出し、続いて尿道内カテーテル法を行うことです。次に細菌が点眼され、マウス前立腺の上行感染を開始します。最後のステップは、感染後の触覚異痛症の測定です。最終的に、骨盤領域に適用された vray 線維に対する応答頻度の増加は、細菌性前立腺炎に応答して骨盤領域の触覚 elo DIA の強化を示すために使用されます。ホルモン誘発性経路前立腺炎や自己免疫性前立腺炎などの既存の方法に対するこの技術の主な利点は、臨床的に無関係な細菌と、前立腺疾患の病因にとって本当に重要な自然な上昇感染方法論を使用する場合、一般的に、この方法に不慣れな個人は、vray線維刺激に対する肯定的な反応を一貫して登録できないため、苦労します。この議定書のすべての手続きは、機関および政府のガイドラインに従って実行する必要があります。参照痛覚過敏および触覚性異痛症の検査は、標準的な方法を使用して決まった時間に行われ、1人の実験者がすべての動物を検査します。動物モデルにおける行動に基づく疼痛試験の限界に対抗するために、集団のブラインド試験を利用すべきである。実験に参加したすべての動物のベースライン測定値を取得するには、まず5〜7週齢の雄マウスを試験室に30分間順応させ、次に各マウスをステンレス鋼線グリッド床のある個々のプレキシガラスチャンバーに入れて触覚性異痛症をテストします。0.04、0.16、0.4、1.0、および4.0グラムの力で個々のフォンフレイフィラメントを前立腺の一般的な近くの下腹部に塗布します。各フィラメントを力の増順で1〜2秒間、刺激の間に少なくとも5秒の間隔で合計10回適用します。この領域内のさまざまな領域を刺激するように注意して、鈍感化や巻き上げ効果を避けてください。3つのタイプの行動は、フィラメント刺激に対する肯定的な反応と考えられています。腹部の急激な収縮、2つの、フィラメント刺激の領域の即時の舐めまたは引っ掻き傷。3。ジャンピングは、応答頻度を正の応答の割合として計算し、データを応答の平均の割合として報告します。周波数プラスマイナス標準誤差。ベースライン反応が25個を超える陽性反応を持つ動物は、異痛症反応の特異性を調べるために研究から除外されます。細孔領域の触覚異痛反応は、骨盤領域試験の直後に、フィラメントがわずかに曲がるまで後孔のプランター領域にフォンフレイフィラメントを適用することによりテストされます。テスト孔の急激な引き抜きまたは舐めのいずれかとして定義される肯定的な応答が観察されるまで、フィラメントを昇順でテストします。肯定的な反応が観察されたら、弱いフィラメントを適用して、反応を引き起こさない力が最大の繊維を特定します。まず、プレキシガラスチャンバー内で1〜4%のフッ素を麻酔した後、細菌懸濁液を充填したガラス製の1.5〜2センチメートルのハミルトンシリンジに取り付けられた30ゲージの針のハブにポリエチレンカテーテルを挿入してカテーテルを準備します。麻酔の維持のために鼻円錐背側を下にして移動量を、穏やかな圧力を加えて陰茎を押し出します。次に、綿棒を使用して、陰茎尿道の入り口に潤滑剤として人工涙液をたっぷりと塗ります。カテーテルを尿道に慎重に挿入します。次に、注射器のプランジャーをゆっくりと減圧することにより、8つのCP1細菌に1×10を含む10マイクロリットルのPBSを尿道に導入します。細菌懸濁液が投与されたら、カテーテルを慎重に取り外します。マウスを麻酔室に15分間戻して、細菌の付着を防ぎ、即時の排尿を防ぎます。15分が経過したら、マウスをホームケージに戻し、次の24時間監視します。参照された痛覚過敏および触覚異痛症の反応について、適切な間隔でテストを繰り返します。感染後3日目、7日目、14日目、21日目、28日目の検査が推奨されます。触覚EALは、5つの較正された力のフォンフレイフィラメントを使用して、骨盤領域の機械的刺激に対する応答を測定しました。データは、肯定的な回答の平均パーセンテージとして報告されます。細菌の植え付け前と感染後7日目、14日目、21日目、28日目以上でのプラスマイナス標準誤差は、マウスではなくUPEC感染でテストされたすべてのフィラメントのベースライン時と比較して、感染後7日目から28日目の応答頻度が大幅に増加したことを示しました。各PIDでの応答率は、ベースライン応答に対するすべての繊維に対する合計応答として計算されました。このビデオを見た後、雄のマウスで細菌性前立腺炎を開始する方法と、これらのマウスの骨盤触覚ニアを測定するための行動テストについてよく理解しているはずです。

measurement-tactile-allodynia-murine-model-bacterial

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

電子フォンフレイ装置を用いたマウス後肢の触覚感度の変化の測定

私たちは、オピオイド誘発性痛覚過敏およびマウスにおける耐性の発生を調べるためのプロトコルを記述します。ナイーブおよびモルヒネで処置した動物の熱的および機械的な侵害刺激反応の測定に基づいて、疼痛感受性（痛覚過敏）の増加を定量化および慢性アヘン剤投与に関連した痛覚脱失（許容範囲）が減少することを可能にする。...

熱的·機械的侵害受容性モダリティを用いて、マウスにおけるモルヒネ誘発痛覚過敏および鎮痛耐性の評価

神経因性疼痛は、体性感覚系に影響を及ぼす病変または疾患の結果である。マウスでは神経因性疼痛の「カフモデル」は坐骨神経の主枝の周囲にポリエチレンカフの注入で構成されています。機械的異痛は、von Freyフィラメントを使用してテストされています。...

マウスにおける神経因性疼痛の坐骨神経細胞浸潤モデル

慢性前立腺炎/慢性骨盤痛症候群の前臨床モデルを誘導するために、新生児の母体の分離 - 私たちは、初期生活ストレスパラダイムを受けた雄のC57BL / 6マウスの前立腺におけるperigenital機械的感度および肥満細胞の活性化を測定しています。...

新生児母子分離のマウスモデルにおけるPerigenital感度と前立腺肥満細胞の活性化の評価

ここでは、慢性虚血後疼痛(CPIP)の動物モデルを確立するためのステップを詳しく説明するプロトコルです。これは、ヒト複合局所疼痛症候群タイプIを模倣したよく知っているモデルである。機械的および熱過敏症はさらに評価され、CPIPラットモデルで観察されるカプサイシン誘発性ノシフェンシブ挙動も評価される。...

ラットにおける複雑な局所疼痛症候群タイプIに対する慢性虚血後疼痛モデル

腰痛の予防と管理のための新しい治療的介入を開発するためには、動物モデルがトランスレーショナルの観点からこれらの治療法のメカニズムと有効性を調べる必要があります。本プロトコールは、ラットにおける背部機械的感受性を評価するための標準化された方法であるBMS試験を記載する。...

慢性腰痛の機構的検討のためのラットの背部機械的感受性評価

ここでは、尿中プラスミノーゲン活性化因子の靭帯内注射を用いて、マウスの腰痛モデルを簡便かつ迅速に誘導する方法を提供する。...

ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子誘発マウス腰痛モデル

部分的な坐骨神経結紮は、熱的および機械的刺激に対する誇張された反応を特徴とする、長期にわたる慢性神経因性疼痛を誘発する。神経因性疼痛のこのマウスモデルは、疼痛管理のための革新的な治療法を研究するために一般的に使用されています。この記事では、標準化と再現性を向上させるための外科的手順について詳しく説明します。...

坐骨神経部分結紮術:新規治療法の抗侵害受容効果を研究するための慢性神経因性疼痛のマウスモデル

ここでは、 トリパノソーマ エバンシに感染したマウスの侵害受容を評価するためのプロトコルを紹介します。電子フォン...

トリパノソーマ・エバンシ感染マウスにおけるアロディニアと疼痛を評価するためのマウスしかめっ面尺度に関連する電子フォン・フレイ

このプロトコルでは、マウスの膝の痛覚過敏を測定する方法が説明されています。急性膝痛のマウスモデルと変形性関節症(OA)のモデルで例を示しています。...

Pressure Application Measurementを用いたマウスの膝痛覚過敏の評価

学ぶ 細菌性前立腺炎マウスモデルにおける接触性アロディニア測定法。尿道内カテーテル法でUPECを感染させ、von Freyフィラメントで骨盤部の痛み反応を定量化する手法を解説。慢性骨盤痛症候群の病態理解と治療法開発に有用な実験系です。

細菌性前立腺炎のマウスモデルにおける接触性アロディニアの測定

さらに動画を探す