Measuring Cation Transport by Na,K- and H,K-ATPase in <em>Xenopus</em> Oocytes by Atomic Absorption Spectrophotometry: An Alternative to Radioisotope Assays

Katharina L. D&#252;rr; Neslihan N. Tavraz; Susan Spiller; Thomas Friedrich

doi:10.3791/50201

のNa、KとH、K-ATPaseのインによって陽イオン輸送を測定するアフリカツメガエル卵母：アイソト...

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Measuring Cation Transport by Na,K- and H,K-ATPase in Xenopus Oocytes by Atomic Absorption Spectrophotometry: An Alternative to Radioisotope Assays

のNa、KとH、K-ATPaseのインによって陽イオン輸送を測定するアフリカツメガエル卵母：アイソトープアッセイの代替

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12:48 min

February 19, 2013

DOI: 10.3791/50201-v

Katharina L. Dürr^1,2, Neslihan N. Tavraz¹, Susan Spiller¹, Thomas Friedrich¹

¹Institute of Chemistry,Technical University of Berlin, ²The Vollum Institute,Oregon Health & Science University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

私たちは、Xenopus卵子における酵素の不均一発現と、原子吸光分光光度法による個々の細胞へのRb⁺またはLi⁺の取り込みを測定することにより、K⁺逆輸送P型ATPaseの活性を定量化する方法を説明しています。この方法は、放射性同位元素フラックス実験に代わる高感度で安全な方法であり、複雑な速度論的研究を容易にします。

この手順では、カエルの細胞をin vivo発現系として使用します。カリウムカウンター輸送P型A型、TP型、ais、またはその他の微量元素膜トランスポーターの輸送活性を定量化するために、まずザップラビスでトランスポータータンパク質を発現します。次に、細胞は、輸送されたカチオンを一定濃度のフラックス溶液にインキュベートすることにより、一定の時間と温度でカチオン取り込みを誘導します。

あるいは、2電極電圧クランプ技術を使用して、膜電位制御下で取り込み実験を行います。細胞を洗浄した後、個々の卵子を1ミリリットルのミリポア水で均質化します。次に、横加熱されたグラファイト噴霧炉を備えた原子吸光分光光度計でサンプルを測定します。

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