Name: 敗血症性関節炎の経時的評価のためにMRターゲット造影剤を用いたin vivoイメージングのマクロファージ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-20T21:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: 学ぶ USPIO造影剤を用いたMRイメージングによる敗血症性関節炎のマクロファージ浸潤の経時的評価法。ウサギモデルで抗生剤治療効果を非侵襲的にモニタリングする技術を習得できます。

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私たちは心からのビデオ制作や編集の支援のためにF. Bierryに感謝します。

動物を対象とするすべての手順は、大学病院制度動物ケア委員会によって承認されている。 1。関節内細菌接種<ol><li>注射前に、脊柱起立筋の筋肉内キシラジン（4 mg / kg体重）と混合ケタミンの筋肉内注射（30 mg / kg体重）を用いてウサギを麻酔。動物は、彼らは足のピンチに反応しないことをチェックすることによって、完全に麻酔であることを確認してください。このプロトコルは、膝関節の関節内注射のために十分な麻酔を提供します。麻酔時に酸素マスクの下に動物を配置します。 </li><li>動物の膝を剃る。ポビドンヨード溶液の塗布に続いポビドンヨードスクラブとアルコールの3交互ワイプによって無菌注射のために膝を準備します。 </li><li>手動で図のように滅菌針キャップまたは滅菌プローブを用いた膝の前方側面に弾性構造として膝蓋腱を識別します。 </li><lI&gt;ビジュアルコントロール付きと前方アプローチを使用することにより、膝蓋腱12〜ウサギのそれぞれの右膝に経皮的に25 G針を配置。 </li><li> 10 6の濃度UFC / mlで黄色ブドウ球菌の細菌懸濁液（ノイマン株）1mlでそれぞれ膝を注入。抵抗なく注入は、針の先端の関節位置を確認します。 </li><li>注射の手続きの後、熱損失を回避し、胸の動きを観察することによって、呼吸数を監視するために対流ソースの下に動物を保つ。いったん目を覚まし、食料と水への無料アクセスをケージに動物を飼う。 </li><li> 8時間毎に0.1 mg / kgをブプレノルフィンの筋肉内注射を投与することによって痛みを管理する。 </li><li>臨床的に食物および水、体重減少、温度、および一般的な挙動の消費量を監視して、毎日ウサギを観察する。 </li><li>画像への感染の急性期には、すぐに最初のMRイメージングセッションを行う動物としてかなりの体重減少（10％）を提示、一般的に、これは約2日後に発生します。 </li><li>静脈内薬物投与はMRI検査前に必要とされている場合は、耳介静脈アクセスが（参照以下）をインストールすることができます。 </li></ol> 2。 MRI検査イメージングは​​動物を生きているときは、慎重に動物のインストールでは、動物の快適性と最適な麻酔を確保するための重要な機能です。これは最高のイメージング結果を可能にし、縦断的研究のための生殖の画像取得が保証されます。動物の大きさに起因し、臨床サイズのMR部（1.5 T 3またはT）の使用が最も好適である。それは、ウサギの膝探査するのに適した解像度とコントラスト対ノイズ比を提供するように8チャンネル臨床膝コイルが使用される。 <ol><li>イメージング·システムにインストールする前に、耳介静脈を通じて末梢静脈アクセスをインストールしてください。このアクセ​​スは、造影剤を注入するのに役立つであろう。 <ol><li>剃ると耳を消毒。 </li><l私は&gt;リドカインを皮下注射することにより局所麻酔を行います。 </li><li>横耳介静脈の内側25 Gカテーテルを挿入します。 </li><li> 1ミリリットル滅菌生理血清を注射することにより浸透性を評価する。 </li><li>接着タッピングとカテーテルを維持。 </li></ol></li><li>キシラジン（4 mg / kg体重）と混合ケタミンの筋肉内注射（30 mg / kg体重）を用いて動物を麻酔。彼らは足のピンチへの応答に失敗した後の動物は完全に麻酔する。 200ml /分の流量でそれを酸素を与え、ウサギに顔のマスクを配置する。 </li><li>一度完全に麻酔、MRイメージング装置に動物を取る。膝がMRコイルの中心部に位置されるように動物を配置します。脛骨の長軸はMR撮像部テーブルと平行になるように、完全な拡張で動物の足を置く。最適な足の位置を維持するために、ベルクロファスナーや砂袋を使用してください。 </li><li>心肺動物のモニタリングは、次のようにする必要はありません麻酔プロトコルは、自発呼吸に深い麻酔を可能にしますが、動物は麻酔誘発性熱損失を避けるために、カバーされなければならない。 </li><li> MRプロトコルは、表1に詳述されている。最適なインストールを含む総取得のための平均時間は約20分です。 </li><li>異なる平面でMRイメージングを実行します。それはシーケンシャル縦検査用画像位置の解剖学的再現性を確保し、組織学的スライスを最適な相関が許す限りそれにもかかわらず、膝（脛骨に直交）の横断面は参考プランです。 </li><li>非造影シーケンスの完了時に、耳介静脈アクセスを介してUPSIO造影剤を注入する。ゆっくり150モルのFe / kgを単回用量で酸化鉄粒子を管理します。滅菌生理血清を1mlの注入によってカテーテルをすすぐ。 </li><li>注射後に強化されたGRE加重シーケンス24時間を繰り返します。この遅延は、粒子はで貪食することができるマクロファージ。 </li><li>薬物の効果（抗生物質、ステロイド、抗マクロファージ抗体等 ）を評価長手研究のために、上述したプロトコルを用いて順次MR検査を繰り返す。 </li></ol> 3。画像解析<ol><li>縦評価のために、同じ解剖学的レベルで測定を行い、容易に識別マークを定義します。例えば、膝蓋骨の最大直径が観測される軸平面を通じて買収は、再現性のある測定（ 図1）を得た信頼性の高い方法である。 </li><li> DICOMベースのソフトウェア（例えば、OsiriXのような）又は画像処理ソフト（ImageJの）を用いて画像解析を行う。 </li><li> ImageJのソフトウェアを使用して、 &quot;不規則なエリア&quot;描画ツールを使用してUSPIO強化GRE T2強調画像上の信号損失を示して滑膜領域のセグメンテーションを行う。暗信号と滑膜が概説されたら、/面積を得るために、 &quot;分析&quot;をクリック画素数（ 図2）。 </li></ol>

<ol><li>Madri, J. Inflammation and healing. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMadri%2C+J+%22Anderson%27s+Pathology%22">Anderson's Pathology</a>. Kissane, J. , 67-110 (1990).</li>
<li>Sephel, G., Woodward, S. Repair, regeneration, and fibrosis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSephel%2C+G+%22Rubin%27s+Pathology%22">Rubin's Pathology</a>. Rubin, R., Strayer, D. , 5th ed, Lippincott Williams & Wilkins. Philadelphia, PA. 71-98 (2008).</li>
<li>Verdrengh, M., Tarkowski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+macrophages+in+Staphylococcus+aureus-induced+arthritis+and+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Role of macrophages in Staphylococcus aureus-induced arthritis and sepsis.</a> Arthritis Rheum. 43 (10), 2276-2282 (2000).</li>
<li>Heale, J., Speert, D. Macrophages in bacterial infection. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHeale%2C+J+%22The+Macrophage%22">The Macrophage</a>. Burke, B., Lewis, C. , Oxford University Press. Oxford, England. 210-252 (2008).</li>
<li>Bierry, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+activity+in+infected+areas+of+an+experimental+vertebral+osteomyelitis+model%3A+USPIO-enhanced+MR+imaging--feasibility+study%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Macrophage activity in infected areas of an experimental vertebral osteomyelitis model: USPIO-enhanced MR imaging--feasibility study.</a> Radiology. 248 (1), 114-123 (2008).</li>
<li>Bierry, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+of+macrophages+in+infectious+knee+synovitis%5BTitle%5D)+AND+%22AJR+Am.+J.+Roentgenol%22%5BJournal%5D)">MRI of macrophages in infectious knee synovitis.</a> AJR Am. J. Roentgenol. 194 (6), W521-W526 (2010).</li>
<li>Lutz, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+synovial+macrophages+in+an+experimental+rabbit+model+of+antigen-induced+arthritis%3A+ultrasmall+superparamagnetic+iron+oxide-enhanced+MR+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Detection of synovial macrophages in an experimental rabbit model of antigen-induced arthritis: ultrasmall superparamagnetic iron oxide-enhanced MR imaging.</a> Radiology. 233 (1), 149-1457 (2004).</li>
<li>Weissleder, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasmall+superparamagnetic+iron+oxide%3A+an+intravenous+contrast+agent+for+assessing+lymph+nodes+with+MR+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Ultrasmall superparamagnetic iron oxide: an intravenous contrast agent for assessing lymph nodes with MR imaging.</a> Radiology. 175 (2), 494-498 (1990).</li>
<li>Lefevre, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septic+arthritis%3A+monitoring+with+USPIO-enhanced+macrophage+MR+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Septic arthritis: monitoring with USPIO-enhanced macrophage MR imaging.</a> Radiology. 258 (3), 722-728 (2011).</li>
<li>Sigovan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid-clearance+iron+nanoparticles+for+inflammation+imaging+of+atherosclerotic+plaque%3A+initial+experience+in+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Rapid-clearance iron nanoparticles for inflammation imaging of atherosclerotic plaque: initial experience in animal model.</a> Radiology. 252 (2), 401-409 (2009).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

非特異ガドリニウムベースの造影剤は、細胞外の空間の容積と血流に関する情報を提供しながら、USPIO強化MRによってマクロファージイメージングは、組織採取9を必要とせずに感染した滑膜内の正確な解剖学的局在とマクロファージ浸潤の定性的な評価を可能にします。その高感度のため、USPIOも微妙セルラー、感染の初期段階に存在する潜入発揮できる。病原体が徐々に削除される成功した抗生物質療法の下で、この浸潤が滑膜内USPIO取り込みの減少につながる、減少すると考えられる。暗信号としての面積がUSPIO投与後の滑信号が10長手評価することができる細胞浸潤の定量的表現、バイオマーカーとして考えることができる、tissular鉄含有量と相関している。また、このようなオプトなどの他の撮像モダリティとは対照的にiCalの撮像又は同位体イメージングは​​、細胞のMRイメージングは​​、細胞に関連する信号の変化の正確な局在を可能にする高解像度の解剖学的画像を生成する能力を有する。 マクロファージイメージングは​​、組織採取を必要とせず、関心のある組織内の細胞の存在と...

磁気共鳴イメージング（MRI）は、その高い空間分解能及び軟組織コントラストに起因する感染性滑膜炎の実証のための選択の撮像モダリティであると考えられる。血管拡張と血管新生1に増加した血管のせいでの組織学的所見と一致して関節炎低いT1および細胞外の水分含量の増加存在を反映して高いT2信号、及びガドリニウムベース·造影剤投与後の顕著な増強をMRIで観察された信号の変化、。それにもかかわらず、MRIは拡大された細胞外空間（肉芽組織、線維性瘢痕）2の持続のために臨床的および生物学的に治癒した敗血症性関節炎患者の関節で観察することができ、多くの場合、永続的な拡張として抗生物質治療中に感染の分解能を発揮することができません。細胞外の変化に加えて、マクロファージの強烈な動員を含む炎症性細胞が大量に潜入滑液をフェクト。マクロファージは細菌感染3の急性および慢性期の両方で重要な役割を果たす。彼らは、病原微生物を根絶するために必要な炎症反応を誘発し、マクロファージ誘発性炎症が4を開始し修復を防止、壊死組織が ​​除去されない限り解消されないように、炎症の解像度を調整します。したがって、効率的な治療後に感染した滑液内のマクロファージ浸潤の減少は感染の分解能の信頼できる指標となることができます。細胞イメージングは​​、病理組織内の特定細胞浸潤を発揮することができます。標的造影剤を使用して、特定のマクロファージMRイメージングが広く検討されており、関節の炎症や感染5-7を実証する能力を実証した。静脈内注射、例えばUSPIO（超小型、超常磁性酸化鉄）粒子はマクロファージなどの食細胞によって取り込まれるような標的造影剤と、後その磁気特性のために、マクロファージ浸潤8を提示する組織における信号変化を誘導する。 生体侵襲マクロファージ浸潤の評価、及びUSPIOロードされ、マクロファージの削減関連信号変化における治療の成功を証明するであろうため、これらのMR信号の変化治療のフォローアップ縦が可能になります。この報告書の目的は、非侵襲的に滑膜内のマクロファージ浸潤の低減を示すことによって、敗血症性関節炎を監視するマクロファージMRイメージングを実行する方法を提示することである。

<table><tbody><tr><td>試薬/材料の名前</td><td>会社</td><td>カタログ番号</td><td>コメント</td></tr><tr><td>P904</td><td>ゲルベット</td><td></td><td>投与量: 150 &mu;mol Fe/kg</td></tr><tr><td>ケタミン (500 mg/ml ケタミン)</td><td>ビルバック</td><td></td><td>用量: 30 mg/kg</td></tr><tr><td>ロンプン (20 mg/ml キシラジン)</td><td>アクシエンス</td><td></td><td>用量: 4 mg/kg</td></tr><tr><td>ブプレノルフィン</td><td>ベトキノール</td><td></td><td>用量: 0.1 mg/kg/8 時間</td></tr><tr><td>BD 22 G、1 インチ</td><td>BD バイオサイエンス</td><td>381423</td><td></td></tr><tr><td>BD 25 G、5/8 インチ</td><td>BD バイオサイエンス</td><td>305122</td><td></td></tr></tbody></table>

敗血症性関節炎の経時的評価のためにmrターゲット造影剤を用いたin vivoイメージングのマクロファージ

In vivo Macrophage Imaging Using MR Targeted Contrast Agent for Longitudinal Evaluation of Septic Arthritis

マクロファージは、開始、開発、細菌感染に対する炎症反応の調節に重要な細胞である。マクロファージは、ますます集中感染の初期段階から敗血症関節で募集され、浸潤が病原体の効率的な除去が得られる一度退縮することになっている。治療の急性滑膜炎及び監視の早期発見：感染した関節インビボマクロファージ活性を識別する能力は、したがって、二つのアプリケーションを提供することができる。 インビボでマクロファージの非侵襲的検出は、例えば、超小型、超常磁性酸化鉄（USPIO）などの鉄ナノ粒子を用いた磁気共鳴イメージングを行うことができる。 USPIOが具体的に活性化マクロファージによる貪食、そして、それらの磁気特性に起因している血管内または関節内投与後、マクロファージ浸潤を提示組織における信号の変化を誘導する。 quantitativ粒子噴射が組織内の鉄の量と相関するので、USPIO負荷された細胞の数を反映した後、信号損失を有する領域（暗い画素数）は勾配エコーMR画像で観察されるように浸潤の電子評価は、実現可能である。 我々は、マクロファージの浸潤および治療 ​​作用の評価のインビボで非侵襲的評価の初期及び長手方向を可能にする、ここで敗血症性関節炎の動物モデルにおいてUSPIOが強化されたMRイメージングを用いたマクロファージ撮影を行うためのプロトコルを提示する。

非造影画像に、感染した膝の滑膜は、大腿骨と膝蓋骨が低信号構造（ 図1）のように表示されている間、軟部組織の周囲から区別ないです中間信号の拡散腫れを提示します。 USPIO-強調画像、造影剤投与の24時間後に、USPIO担持マクロファージを含む滑領域は、信号損失（ 図1および2）を実証する。 滑膜内のマクロファージ浸潤は特定の免疫染色（ 図3）を使用して証明することができる。シミパールズ&#39;プルシアンブルーは、青い点（ 図4）のように表示され、鉄粒子を検出することができます。 <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> GRE T2は重み付け </td></tr><tr><td>繰り返し時間（ミリ秒） </td><td> 450 </td></tr><tr><td>エコー...

我々は最初のと縦ができ、化膿性関節炎で超小型、超常磁性造影剤（USPIO）を使用してマクロファージMRイメージングを実行する方法を示し<em生体内で&gt;</emマクロファージの浸潤および治療効果の評価の&gt;非侵襲的評価。

敗血症性関節炎の経時的評価のためにMRターゲット造影剤を用いたin vivoイメージングのマクロファージ

Macrophages are key-cells in the initiation, the development and the regulation of the inflammatory response to bacterial infection. Macrophages are ...

この実験の全体的な目的は、滑膜内へのマクロファージ浸潤を縦断的に評価することです。敗血性関節炎のウサギモデルにおいて、MR画像を用いて、マクロファージにラベル付けし、その存在を明らかにする酸化鉄粒子を使用することで、この評価を行うことが可能です。マクロファージは、関節炎、特に敗血性関節炎の発症、増幅、および消退における重要な細胞です。感染した関節内におけるそれらの存在と分布をin vivoで実証することは、モニタリングのための有用なツールとなり得ます。抗生物質治療を受けている関節は、マクロファージが大量に浸潤しているとは想定されません。マクロファージは、細胞を消失させることで利用可能になります。US PIOや超小型超常磁性酸化鉄などのHe R造影剤があります。血管内投与後、これらは活性化マクロファージに特異的に取り込まれます。U-S-P-I-Oは、結晶サイズ約 40 nanometers の酸化鉄コアで構成されています。これらは小さな磁石として機能し、マクロファージを含む組織とともにMR信号の変化を生成します。ウサギの膝のこれら2つの軸方向Mr.Mags像では、USPIO投与の24時間後に、滑膜の存在と強烈かつびまん性の信号消失が確認できます。SPIONをに取り込んだマクロファージが存在するため、MR画像で観察される暗いピクセルの数は、組織内の鉄含有量、したがってマクロファージの数と相関します。したがって、USPIOに関連するR信号変化を縦断的に追跡することで、治療中の関節内におけるマクロファージの存在をin vivoで評価できる可能性があります。こんにちは、Guian Biiです。フランスのストラスブール大学病院の放射線科助教授を務めております。本日は、敗血性関節炎の動物モデルにおけるMRIを用いたマクロファージイメージングの手法について解説します。まず第1部では、リサーチフェローと共に、ブドウ球菌を関節内に直接投与してウサギの膝に敗血性関節炎を誘発させる方法を説明します。続いて第2部では、MRI検査の実施方法、造影剤の注入方法、そして最終的にその結果をどのように解析するかについて実演します。動物を専用の拘束ケージに入れ、チレミジンとケタミンを注射して麻酔をかけます。これにより30分間の外科的麻酔が可能です。膝を剃毛し、ポビドンで洗浄します。前方の弾性伸展体として膝蓋靭帯を確認します。次に、35ゲージの針をそこから刺して関節内に導入します。細菌懸濁液を1 mL注入してください。針が正しく関節内に位置していることを確認するため、抵抗なく注入できなければなりません。動物をケージに戻し、牛由来の鎮痛剤を筋肉内注射により毎日投与します。一定期間後、2日が経過します。動物の自発的な睡眠運動が減少しており、関節感染の存在が確認されます。したがって、R検査を実施すること

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