Name: 鳥類胚性内耳神経における聴覚繊維の選択的なトレース (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-18T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: 学ぶ 鳥類胚の聴覚繊維選択的トレース法。微小解剖と蛍光色素注入により、音響神経節から中枢神経系への軸索投射を可視化し、聴覚経路の発生機構を解明する。

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著者らは、初期胚発生時にひよこ内耳の解剖学上の専門知識のためのイメージング技術と博士ドリス·ウーとの提案と支援博士キャンディHsieh氏に感謝したいと思います。この作品は、NSF、IOS-0642346、NIH T32-DC010775、NIH T32-GM008620、NIHのR01-DC010796、とDOE GAANN P200A120165によってサポートされていました。

1。以下解剖ツールおよび試薬を準備<ul><li>連続して95％Oを流し込んで、人工脳脊髄液（130mMのNaCl、3mMのKClを、1.2mMのKH 2 PO 4、20mMのNaHCO 3を 、3 mMのHEPES、10mMグルコース、2mMのCaCl 2、1.3mMのMgSO 4を ACSF）室温で2/5％CO 2で 。点滴は、2月3日ふたに穴を開けた500ml広口ナルゲン瓶に記入してください。タンクは瓶のふたの穴に通しACSFを貫通ガラスステムバブラーにチューブで接続されます。液体の約1/3に達するが、リムの上に飛散引き起こすのに十分な説得力がありません泡の一定のストリームを取得するために圧力を調整します。互いから、ガス流の乱れから、個々のサンプルを分離するナルゲン瓶に沈める5ミリリットルガラスバイアル（最大6）。 ACSFは、どの組織のインキュベーションの前に少なくとも20分間酸素化されるべきである。 </li><li>小さなシリコーン解剖皿（35ミリメートル×10小さな六角形のポリスチレンに配置された2つの解剖ピン付きシルガード弾性体キットを使用してmmペトリコーティング）（47ミリメートルの下）ボートの重量を量る。 </li><li>二つ精密チップ·鉗子、1湾曲先端鉗子、50mlビーカー、および組織廃棄用のコンテナ。 </li><li>ガラスマイクロピペット（1.2外径/ 0.9 ID）の先端の開口は約20から50程度に分割して0.4パーセントと6.25パーセント·ソリューションのトリトンX-100、PBS中におけるローダミンデキストランアミン（RDA、MW = 3000、Invitrogen社製）を充填した引っ張ら。マイクロマニピュレーターにpicospritzerして安定化する細かいチューブで取り付けます。 </li></ul> 2。顕微解剖E8 4,5で乳頭基部を明らかにする<ol><li>湾曲したピンセットで、ボートの重量を量る内にシリコーン被覆解剖皿に直接頭を置いて、ちょうど脳幹下E8胚を切った。 </li><li>興味のある側の耳が少し見えるように位置腹望むヘッドは、解剖のピンを使って、頭がわずかに背側に傾けて、CEから10から30度を指しているNTER（ 図2A）。すぐにピンと頭を固定します。二国間のトレースは、中心0度ヘッド、または両側がアクセスできるように、完全な腹ビューを希望する場合は。左側がアクセスしやすいように同様に、左サイド注入のために、中心から-30度〜-10で頭部を固定します。 </li><li> 50ミリリットルのビーカーを使用して、完全に組織を浸漬、皿に酸素化ACSFの30ミリリットルを転送します。 </li><li>そっとつかんで、精密チップ·鉗子を用いて下顎ダウンはがし、次に興味のある側に下瞼を削除します。 </li><li>残りの口蓋と食道を含め、上層の血管組織を削除します。これらの軟部組織が剥がれ、その表面に独特の椎骨動脈と軟骨頭蓋の開発の滑らかな表面を明らかにする必要があります。この時点では、特徴的な白いotoconial質量が見えるはずです。 </li><li>に残したまま、慎重に外尿道口、顎関節の軟骨、中耳の周りの​​皮膚を切開NERの耳無傷。そっとこれらの軟骨構造を切り取るために鉗子を使用しています。 </li><li>椎骨動脈を外し、細かい鉗子のヒントと穏やかな弧を描く動きを用いて血液をプール。血がビューと凝固がインジェクションピペットの開口部を塞ぐことが見えにくくなる場合があります。 </li><li>隣接感覚上皮（乳頭基部）と聴神経節と蝸牛管は軟骨頭蓋6の直下に位置し、前方の近くの最も遠位の先端（頂点）で、腹側内耳から延びる細長い指状の突起として可視化することができる正中線5。視覚化するのを助けることができる蝸牛管（ 図2B）の頂点に解離および/ ​​またはotolithic石灰（白）から少量の血液プーリング（赤）があるかもしれません。頂点にlagenar黄斑ですが、感覚パッチは前庭機能7,8であると思った。 </li></ol> 3。 CN VIII聴覚繊維の選択的標識<ol><li&gt;蝸牛管と乳頭基部領域における胚の表面付近インジェクションピペットを置きます。 </li><li>最初はゆっくり穿刺頭蓋にマイクロピペットを下げます。この頭蓋領域は、周辺地域よりも薄く、小さい力が浸透している必要があります。マイクロピペットは現在、蝸牛管の内側になければなりません。オプション：トレース染料の小さな注射は乳頭基部を視覚化するのを助けるためにここで行うことができます。 </li><li>マイクロピペットの位置を変更せずに、単に侵害それまで蝸牛管（ 図1）の深い境界線を下げ続けている。ここに注射を行うと前庭つぼが置かれている最も近位チップを除く、乳頭基部（ 図2C、2D）の長さ方向に沿って複数の地域で繰り返す。 10から30 psiの間に設定picospritzerで、いくつかの注射が行われます。注入された色素の流体の体積は変化し、所望の標識の程度に依存する。各注射は蛍光色素ラをもたらすべきである約200のbeledスポット- 400μmの直径（ 図2D）。 </li><li>注入が完了すると、脳幹上記サンプルを横断すると、継続的に95％O 2/5％CO 2下で灌流さACSFのコンテナ内に小さな瓶に尾部を配置するためにホールピペットを使用する鉗子を使用しています。 </li><li>各胚については、目的の中央トレースの距離に応じて、移染のために20-30分を許可します。 </li><li>組織を除去し、組織学的切片の準備をします。ここに示す例では、組織は4％パラホルムアルデヒド（1X PBS中）を一晩一晩、30％スクロース（1X PBS中）に浸漬されている。 </li></ol> 4。対比と分析<ol><li>対比は、解剖学的位置に向きをオブザーバを助けるだけでなく、関心のある特定の領域を識別するのに便利です。この製剤における有効対比を強くリットルニューロフィラメント免疫標識（ 図1、図3B、3E）であり、abelsは、軸索と中枢神経の軸索路の区分を可能にします。 </li><li>予測はrostrocaudal軸に沿って数百ミクロン以上を拡張することができますように分析は、標識された地域全体で行うべきである。基本的な分析のいくつかの例は以下のとおりです。ターゲットエラーレート、タイミングおよび/または投影パターンの発散の変化。 RDA-標識軸索は、高解像度（ 図3A、3D）と末梢および中枢神経系において可視化される。 </li></ol>

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<li>Milo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+analysis+of+the+function+of+the+transcription+factor+gata3+during+development+of+the+mammalian+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Genomic analysis of the function of the transcription factor gata3 during development of the mammalian inner ear.</a> PloS One. 4, e7144(2009).</li>
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<li>Huang, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brn3a+is+a+transcriptional+regulator+of+soma+size%2C+target+field+innervation+and+axon+pathfinding+of+inner+ear+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Brn3a is a transcriptional regulator of soma size, target field innervation and axon pathfinding of inner ear sensory neurons.</a> Development. 128, 2421-2432 (2001).</li>
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</ol>

利害の衝突は宣言されていません。

VIIIth神経の早期開発の研究があるため、複数の別個の神経節から生じる胚軸索を識別するのに難しさの一部に限られていた。いくつかの研究は、初期の開発中に、聴覚と前庭感覚細胞と神経節細胞の運命を導く分子シグナル、5,11,12を検討されているが、中枢神経支配を規制するプロセスがまだ決定されています。レスがプライマリ核に投射する中央のプロセスについてはほとんど知られていないのに対し、音響神経節細胞突起のレポートは、通常、感覚上皮13から15に周辺プロセスについて説明します。胚発生時の中央に突出する第VIII因子の細分の研究では、哺乳類の組織切片17にニワトリ胚後脳16またはカルシウムイメージングでは、このような光学録音のように、頻繁に電気生理学的であるが、神経回路の完了前に実行することはできません。ラベルへの免疫学的マーカーの使用ひよこVIIIth神経における聴覚軸索は現在可能ではありません。転写因子の異なるグループが前庭ニューロン18から23対聴覚との相関が発見されましたが、これらの因子の発現は、軸索から除...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/材料の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td>ポリスチレンは皿を計量</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 02-202-101 </td><td></td></tr><tr><td>シャーレ、35 X 10ミリメートル</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 50820644 </td><td>シリコーン解剖皿を作るために使用</td></tr><tr><td>シルガードシリコーンエラストマーキット</td><td>ワールド·精密機器</td><td> SYLG184 </td><td>コー​​トペトリは、解剖皿を作る</td></tr><tr><td>解剖ピン</td><td>さまざまな</td><td></td><td>解剖時に所定の位置に胚を保持</td></tr><tr><td> NACL </td><td>さまざまな</td><td></td><td> ACSFレシピの一部</td></tr><tr><td> KClを</td><td>さまざまな</td><td></td><td> ACSFレシピの一部</TD&gt; </tr><tr><td> KH 2 PO 4 </td><td>さまざまな</td><td></td><td> ACSFレシピの一部</td></tr><tr><td> NaHCO 3を </td><td>さまざまな</td><td></td><td> ACSFレシピの一部</td></tr><tr><td>グルコース</td><td>さまざまな</td><td></td><td> ACSFレシピの一部</td></tr><tr><td> CaCl 2を </td><td>さまざまな</td><td></td><td> ACSFレシピの一部</td></tr><tr><td> MgSO 4を </td><td>さまざまな</td><td></td><td> ACSFレシピの一部</td></tr><tr><td> ACSF用のコンテナ。蓋付き透明広口ナルゲン瓶、500ミリリットル（16オンス）を示唆している。 </td><td> CPLabSafety </td><td> QP-PLC-03717 </td><td>液体浸透するガラスbublingステム用蓋の上部の穴の開口部をドリル</td></tr><tr><td>空の5ミリリットルのガラスバイアルまたは同等の透明バイアル</td><td>アメリカの製薬パートナーズ株式会社</td><td> 6332300105 </td><tD&gt;互いにおよびバブリングストリームからサンプルを別々に保管するACSFのインキュベーション中に使用</td></tr><tr><td>バブラーにチューブで接続されたcarbogenのタンク（95％O 2/5％CO 2）で</td><td>さまざまな</td><td></td><td> ACSFへの注入用ガラス幹バブラーに管によってアタッチ</td></tr><tr><td>ガラス幹バブラー</td><td>さまざまな</td><td></td><td> ACSFにcarbogenを注入する</td></tr><tr><td>先の曲がった鉗子</td><td>ワールド·精密機器</td><td> 501008 </td><td>卵から胚の頭部を削除するには</td></tr><tr><td>二つ精密チップ·鉗子</td><td>ワールド·精密機器</td><td> 501985 </td><td>顕微解剖用</td></tr><tr><td> 50mlビーカー</td><td>さまざまな</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ローダミンデキストランアミン（RDA） </td><td>インビトロジェン</td><td>さまざまな</td><td>蛍光軸索トレーサー</td></tr><tr><td>トリトンX-100 </td><td> ICNバイオメディカル</td><td></td><td></td></tr><tr><td>リン酸塩は、（1×PBS）、緩衝生理食塩水</td><td>さまざまな</td><td></td><td>標準的な実験用試薬</td></tr><tr><td>薄壁ガラスキャピラリー、外径1.2、0.9番号4 &quot;（100mm）の長さ</td><td>ワールド·精密機器</td><td> TW120F-4 </td><td> RDAを使用したロード。各キャピラリーは、2枚のガラスマイクロピペットを作る</td></tr><tr><td>ニードル/ピペットプラー</td><td>デビッドKopfはインスツルメンツ</td><td>モデル720 </td><td>使用される設定：熱16.4、ソレノイド2.2 </td></tr><tr><td> Picospritzer </td><td>パーカー計装用</td><td>さまざまな</td><td>ガラスマイクロピペットを微管によって取り付け</td></tr><tr><td>極微操作装置</td><td>ナリシゲ</td><td>さまざまな</td><td></td></tr><tr><td>蛍光と解剖顕微鏡</td><td>さまざまな</td><td></td><td></td&gt; </tr><tr><td> 4％パラホルムアルデヒド</td><td>さまざまな</td><td></td><td>標準的な実験用試薬</td></tr><tr><td>抗ニューロフィラメント抗体、オプション</td><td>ミリポア</td><td> AB1991 </td><td>メーカーが推奨する組織学的なプロトコルに従ってください</td></tr><tr><td>クライオスタットとセクショニングの関連材料</td><td>ライカ</td><td>さまざまな</td><td></td></tr><tr><td>イメージングのための落射蛍光顕微鏡</td><td>ツァイスは、様々な</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

鳥類胚性内耳神経における聴覚繊維の選択的なトレース

Selective Tracing of Auditory Fibers in the Avian Embryonic Vestibulocochlear Nerve

ニワトリ胚は、末梢および中枢神経節細胞の突起の研究のために広く使用されているモデルです。聴覚系では、VIIIth脳神経内聴覚軸索の選択的標識は、中枢聴覚回路発達の研究を強化するであろう。内耳の複数の感覚器官がVIIIth神経1に貢献するため、この方法は困難である。また、確実に鳥VIIIth神経軸索内の前庭グループに対して聴覚を区別するマーカーが同定されていない。回路が形成される前に、感覚誘発反応が存在していないとして、聴覚と前庭の経路は、初期胚において機能的に区別することはできません。一元的に突出したVIIIth神経軸索は、いくつかの研究でトレースされているが、聴覚軸索標識は他のVIIIth神経コンポーネント2,3からラベリングを伴っていた。ここでは、音響神経節から選択ラベへのトレースを順行するための方法を説明します開発VIIIth神経内のL聴覚軸索。まず、酸素人工脳脊髄液中に浸漬し、8日、ニワトリ胚の前頭部の部分切開した後、蝸牛管は、解剖学的なランドマークによって識別されます。次に、罰金引かガラスマイクロピペットは、音響神経節細胞が配置されているダクトと隣接深い領域にローダミンデキストランアミンを少量注入するように配置されている。注射後30分以内に、聴覚軸索は後脳に集中的に追跡され、後に、次の組織学的準備を可視化することができる。この方法では、中枢聴覚回路形成に周辺の発達研究のための便利なツールを提供します。

VIIIth神経と神経自体の解剖学的構造のコンポーネント（ 図1、図3）、複雑で入り組んである。選択的に音響神経節細胞から生じる繊維をトレースすることにより、脳幹内VIIIth神経だけでなく、一次聴覚求心性神経のセグメントがきれいにトレースすることができるとその前庭の対応（ 図2、図3）とは区別される。同様に、この技術は、音響神経節細胞の周辺の突起（ 図3G）を研究するために使用、または個々の前庭器官から生じる予測を研究するために変更することができます。軸索が正常に彼らの全体の長さに沿ってトレースされますので、正確な定量分析を加えて、聴覚繊維標識の前のアプローチとは異なり、初期の神経支配の正確なタイミングやパターンなど、開発時前庭予測、ターゲティングエラー率などから区別聴覚を行うことができますこのアプローチは、性能です非固定、生体組織のMEDとは、このようにin vitroの実験で 、他に同時使用することができます。 このテク...

ここでは、神経と後脳における聴覚軸索線維の選択的なトレースのための初期のニワトリ胚の音響神経節への蛍光色素を注入し顕微解剖法を説明します。

The embryonic chick is a widely used model for the study of peripheral and central ganglion cell projections. In the auditory system, selective labeling ...

本手順の目的は、胚において末梢神経系から中枢神経系への聴覚線維を選択的に追跡することです。まず、マイクロドーズ切断を行い、腹側軟骨頭蓋を露出させて鳥類の蝸牛管を特定します。次に、その下層にある聴神経節細胞およびその軸索へマイクロインジェクションを行います。次に、DIAの移行を促すため、サンプルを酸素供給済みの人工脳脊髄液で20分間インキュベートします。最後に、組織の組織学的調製と切片作成を行い、音響神経節の中心投射を顕微鏡で可視化します。既存の手法に対する本手法の主な利点は、第8脳神経を選択的にトレースできることです。高解像度の聴覚線維を用いることで、生体組織内での迅速な色素転移が可能となり、発生の初期段階における実験が行えます。この手法は、聴覚研究分野における重要な疑問の解決に寄与します。例えば、軸索を中心標的に導く分子は何であるか、といった点です。あるいは、神経回路は損傷や耳毒性物質への曝露にどのように反応するのでしょうか。まず、500 mLの広口Nalgeneボトルに、ボトルの3分の2が満たされるまで人工脳脊髄液を加えます。穴が開いた蓋をボトルに締め直します。95%酸素および5%二酸化炭素のタンクに接続したステムバブラーを、蓋の穴を通してA CSFの中に入れます。ガスを供給し、気泡が液面の約3分の1まで一定に上昇し、かつ縁から液が飛び散らない程度の圧力に調整します。個々のサンプルを分離するため、5 mLのガラスバイアルを最大6本までジャーの中に浸します。また、ガス流の乱流からも注意してください。A CSFを少なくとも20分間酸素化させます。A CSFの酸素化が進む間に、ガラスマイクロピペットを準備し、0.4% Triton XXを含むPBSで調製した6.25% rhodamine dextranおよび免疫溶液でマイクロピペットを充填します。マイクロピペットをマイクロマニピュレーターに取り付け、微細ピンセットで先端を砕いて20～50 micronの開口部を作ります。細いチューブを用いて、固定したマイクロマニピュレーターをピコスプリッツァーに接続してください。セットアップの残りを完了させるため、ピコスプリッツァーを10〜30 PSIに設定します。小さなシリコン解剖皿に、2本の解剖ピンを小さな六角形を描くように配置してください。また、2本の微細先端ピンセットを用意します。解剖エリアに、湾曲先端ピンセット、50 milliliterのビーカー、および組織廃棄物用容器を用意します。卵からニワトリ胚を取り出した後、頭部をシリコンコーティングされた解剖皿の上に置きます。ウェーボート内で、関心のある側（この場合は右側）の耳が見えるように、頭部を腹側から見える位置に配置します。正しい位置に配置したら、後脳領域を避けて解剖ピンで組織を固定します。50 milliliterのビーカーを使用して、酸素飽和A CSFを30 millilitersディッシュに移し、組織を完全に浸します。次に、先端の細いピンセットを用いて、下顎をそっと掴んで下に剥がします。次に、目的側の下眼瞼を除去します。続いて、残っている口蓋や喉を含む、上層の血管および軟組織を除去します。これらの組織を除去すると、腹側頭蓋の平滑な表面と特徴的な椎骨動脈が現れます。外耳道、顎関節の軟骨、および中耳の周囲の皮膚を注意深く剥離し、内耳はそのまま残します。ピンセットを用いて、顎と中耳の軟骨構造を慎重に切り離します。次に、微細ピンセットの先端で優しく掃くように動かし、椎骨動脈と溜まった血液を除去します。血液によって視界が遮られたり、凝固によって注入用ピペットの開口部が塞がれたりする可能性があるため、この操作は重要です。この時点で、特徴的な白い蝸牛塊が確認できるはずです。この図の矢印は、隣接する感覚上皮および聴神経節を伴う蝸牛管を示しています。これはchondra craniumの直下に位置しており、ここで見られるように、内耳から腹側に伸び、先端が前方正中線付近にある細長い指状の突起として視覚化でき、聴覚線維を標識します。まず、注入用ピペットを蝸牛管とbaula papular領域の胚表面の近くに配置し、マイクロピペットをゆっくりと下げて、まず頭蓋骨を穿刺します。頭蓋骨のこの領域は周囲よりも薄いため、貫通させるのに必要な力は少なくて済みます。マイクロピペットが蝸牛管内にあることを確認します。必要に応じて、ここで少量のトレーシング色素を注入し、マイクロピペットを再配置することなく基底膜または pillar（柱状細胞）の可視化を容易にします。その後、蝸牛管の深部境界にちょうど達するまで、さらにゆっくりと下降させます。この画像は、聴覚神経節の適切な領域におけるピペットの理想的な位置を示しています。この地点で注入を行い、その後、基底乳頭の長さに沿った複数の領域で同様の操作を繰り返します。これは、目的とする標識の範囲に応じて行い、前庭神経が存在する最も近位の先端部分は除外してください。ピコスプリッツァーを10から30 PSIに設定し、注入を行うと、ここで示されているように、直径約200から400 µmの蛍光DIA標識スポットが形成されます。注入が完了したら、ここで示されているように、ピンセットを用いて脳幹より上のサンプルを切断し、転送ピペットを使用して、脊髄部分を灌流CSFが入った容器内の小型ジャーのいずれかに移します。胚ごとに、目的とする中心追跡の距離に応じて、20～30分間色素を移行させます。インキュベーション時間が経過したら、組織を取り出して組織切片作成の準備をします。ここでは、組織を4%パラアルデヒド含有1xPBSに一晩浸漬し、続いて30%スクロース含有1xPBSで一晩脱水させます。組織を30% sucroseで一晩平衡化した後、冠状断で凍結切片を作成します。切片作成後、適切な抗体を用いて免疫染色を行うことで、解剖学的な位置の確認および特定の関心領域の特定が可能になります。この画像は、両側の聴神経節が保持されたE6脳幹の冠状面を示しています。模式図の赤色のピペットは、背外側からの刺入による音響神経節細胞への正確な標的設定を示しています。切片はアンチニューロフィラメントで免疫染色され、軸索投射が強調されています。前庭器官は、示されている切片よりも吻側に位置しています。前庭蝸牛神経、および前庭神経節と蝸牛神経節を標識しています。背面が上で、スケールバーは300 micronsに相当します。以下に、25 micron切片におけるE8胚の選択的聴覚神経線維追跡の代表的な低倍率および高倍率画像を示します。同一の胚から採取した冠状断切片は、ここで示されるように異なる平面となります。矢印頭で示された注入部位から、矢印で示された脳神経を通り、二重矢印頭で示された一次聴覚核標的へと向かうRDA標識軸索を追跡できます。スケールバーは 300 microns に相当します。抗ニューロフィラメント抗体を用いた免疫標識により、すべての軸索投射が強調されており、前画像で追跡されたRDA標識線維は聴覚投射経路内に位置しています。APおよびVPは、それぞれ神経進入点より末梢側の聴覚成分および前庭成分を示しています。合成カラー画像は、RDAで標識された軸索が局所解剖学的構造にどのように適合しているかを示しています。同一胚のより脊髄側の位置における高倍率画像では、矢印で示された神経進入点および二重矢頭で示された中心経路に沿った繊維の高解像度が確認できます。すべての軸索をニューロフィラメントで染色することで、P-N-S-C-N-Sの境界および、推定される聴覚投射と前庭投射の区別が可能になります。ここでも、APおよびVPは神経進入点より末梢側の聴覚および前庭成分をそれぞれ示し、ACおよびVCは神経進入点より中枢側の聴覚および前庭投射をそれぞれ示しています。また、個別のチャンネルを重ね合わせたものはカラーマージとして表示されています。聴神経節の組織学的検討により、前述のトレーシングで標識された聴神経節細胞の位置と、アスタリスクで示されたその末梢への投射が明らかになります。逆行性にトレーシングされた神経は、基底乳頭まで大きく伸びています。ここで、AGは聴神経節、bpは基底乳頭、lmは斑状膜を示します。スケールバーは100 micronsに相当します。最後に、この図は、胎生8日目（E8）における聴覚特異的な第八神経標識で予想される700 µmの追跡経路を示しています。赤色の円で示された注入部位は神経進入点に相当し、中心投射は吻側および背側に進みます。後脳に入った後のスケールバーは300 µmに相当します。この手順を試行する際は、解析基準に最も適するように注入条件を調整してください。また、サンプル間で、追跡軸索の正確な数や位置に多少の個体差があることに留意してください。

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鳥類胚性内耳神経における聴覚繊維の選択的なトレース

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