Name: 圧力筋運動記録法を用いたマウス抵抗動脈機能を評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 25 s
Description: 学ぶ圧力筋運動記録法によるマウス抵抗動脈の血管反応性評価。生理学的条件下で内皮依存性血管拡張をリアルタイム測定し、心血管研究における血管機能解析に有用です。

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著者は博士に感謝します。 DMT圧力ミオグラフとDRSを使用するためのポール黄とドミトリAtochin。高脂肪食または標準食を与えたマウスを提供するためのBinglan Yuとチョンレイ。 資金源この作品は、ハーバードメディカルスクール（ESに買収）から医学学者サイエンティスト開発米国心臓協会（ESに買収）からグラント10SDG2610313、とエレノアとマイルズショア50周年記念フェローシッププログラムによってサポートされていました。

1。溶液の調製<ol><li> 500X EDTAストック：500mgのEDTA- の Na 2•2H 2 Oを比較検討し、50ミリリットルの脱イオン水に溶解する。室温で保管してください。 </li><li>塩化カリウムは、ソリューションを脱分極。 <ol><li> 3.69グラムのNaCl、18.64グラムのKCl、0.36グラム硫酸マグネシウム無水、0.41グラムのKH 2 PO 4、0.46グラムのCaCl 2•2H 2 O：K10Xストック溶液を調製250ミリリットルの脱イオン水に溶解する。室温で保管してください。 </li><li>ソリューション1Xを脱分極100ミリリットル最終のKClの場合：90ミリリットル脱イオン水0.21のNaHCO 3、0.18グラムのブドウ糖を溶かす。 K10X原液10mlのを追加します。 500X EDTA溶液95μLを加える。よく混ぜる。 4℃で保存一週間以内にご使用ください。 </li></ol></li><li>実験の日（1リットル用）に新鮮なHEPES-PSS溶液を調製。 <ol><li> 6.96グラムのNaCl、0.35グラムのKCl、0.288グラムし、MgSO 4·7H 2 O•、0.1605グラムKH 2 PO 4、2.38グラムHEPES。 100mlに溶解する脱イオン水。フラスコAとマーク</li><li> 0.312グラムのCaCl 2•2H 2 O脱イオン水100mlに溶解する。フラスコBとしてマーク</li><li> 1.25グラムのNaHCO 3、0.991グラムのブドウ糖。 98ミリリットルの脱イオン水に溶解する。フラスコC.としてマーク</li></ol></li><li> C.大きなフラスコ内の700ミリリットルの脱イオン水を取るフラスコ中500X EDTA 2 mlを加え。連続ボルテックス大きなフラスコにフラスコA、BおよびCの内容を注ぐ。 NaOHでpHを7.4に調整する。 </li></ol> 2。使用される薬剤<ol><li>フェニレフリン（10 -2 M）：10ミリリットルの脱イオン水に20.37ミリグラム溶かす。 -80アリコート1ミリリットルと店舗℃の直列実験の日に、10 -3、10 -4、10 -5〜10 -6モル/ Lを得るために希釈する。 </li><li>アセチルコリン（10 -2 M）：10ミリリットルの脱イオン水に18.17ミリグラム溶かす。 -80アリコート1ミリリットルと店舗℃のシリアル10 -3、10 -4、10 -5及び10 -6を得るために希釈する実験当日のモル/ L。 </li></ol> 3。マウス男性WTとsGCα1 - / - S6とB6の背景にマウスがこの研究を通して検討した。 sGCα1 - / -は4,5前述のように作製した。実験動物（マウス）を含むハウジングと手順はマサチューセッツ総合病院、ボストン、マサチューセッツ州の研究動物のケアに小委員会によって承認された。 4。腸間膜動脈における血管反応性の測定<ol><li> （200 mg / kg体重、腹腔内）ペントバルビタールでマウスを安楽死させる。腹腔を開き、腸間膜組織を解剖する。分離し、解剖結合および脂肪組織の自由3次の腸間膜動脈、および95％O 2/15分間、5％CO 2で予め平衡化し、氷冷HEPES-PSS溶液中の動脈を置く。無腸間から分岐して2〜3ミリメートルの長さのリングをカット動脈。血管内に血液が存在しない場合ミクロ血管レベルで動脈と静脈を区別することは問題である。したがって、我々はそれを解剖前に動物でまだそのままである一方、血管を識別をお勧めします。 </li><li>入口および出口弁を通しての10ml注射器の助けを借りて、HEPES-PSS溶液を用いて圧力ミオグラフ室（DMTモデル110P＆11Pバージョン1.31、 図2）におけるガラスカニューレに記入します。過度の圧力がカニューレに接続されている脆弱なトランスデューサーを破損する恐れがあるので、カニューレの充填を穏やかにし、慎重に行う必要があります。充填後カニューレはしっかり入口と出口バルブの両方を閉じます。 </li><li>右カニューレに容器の一方の端を取り付け、慎重にナイロン縫合糸の一つ細かい鎖とそれを結ぶ。注射器の助けを借りて、入口弁経由HEPES溶液を容器にフラッシュと記入。近い容器に左のカニューレに持参し、その上に容器のもう一方の端をマウントします。ナイロン縫合糸でそれを結ぶ。埋めるHEPES溶液で10ミリリットルまでとチャンバー。優しく注射器の助けを借りて、入口弁を介しHEPES溶液を押すことで漏れをチェックします。 </li><li>ミオグラフで、ビデオカメラの下でチャンバーをインストールします。チャンバー内の酸素や熱（37℃）を起動します。バルブが閉じている間、第HEPES液リザーバからチューブP1と入口弁を接続する。チューブ内に気泡がなくなるまで、チューブを介して任意のバブルとソリューションパスしましょう​​。バルブを開きます。 </li><li>チューブP2は圧力調整器から来るとチャンバーの左バルブを接続します。任意の気泡を再度確認してください。全体のシステム内の任意の気泡や漏れがあってはいけません。 </li><li>ミオインターフェイスパネル上またはソフトウェア内の圧力メニューに移動し、流れをOFFしながらポンプをONにしてください。 </li><li>プログラムを開いて、COLLECTをクリックします。容器（ 図3）現在画面に表示されるべきである。容器はmonitoriを可能にする、顕微鏡に取り付けられたカメラで可視化されるngのと血管腔、血管径、肉厚の分析。 </li><li>徐々にミオ - インターフェイスパネルまたはプログラムのP1の圧力を選択することにより、P1バルブ経由interluminal圧力を高め、次のように圧力値を入力します。5 mmHgの→10→20→40→60 mmHgの。容器はいつか圧力が増加している間にねじったり畳み込むする傾向;テンションを調整したり、垂直または縦マイクロポジショナー（ 図2）の助けを借りて、それに応じて負担。 60 mmHgので容器を平衡化し、37℃45分間、少なくとも。平衡時に予め温めHEPESで一度浴溶液を変更します。 </li><li>のKCl脱分極溶液10mlを適用し、完全に平滑筋細胞を脱分極および最大収縮を達成するために浴に、37℃で温め。安定したくびれた後、HEPES溶液3回、10分ごとにバスをすすいでください。 </li><li>安定して再現することにより内皮の血管と整合性の実行可能性を確認してくださいフェニレフリンの添加（10 -5 M）およびアセチルコリンへ撓応答（10 -5 M）。 HEPES溶液ごとに10分で3回すすいでください。 </li><li> -容器preconstrict、安定したくびれが得られた場合に、アセチルコリンの増加する用量（10 -9、3×10の逐次添加によって累積濃度血管拡張応答曲線（CRC）を実行するフェニレフリン（10 -5 M）を追加9、10 -8、3×10 -8、10 -7、3×10 -7、10 -6、3×10 -6および10 -5 M）。最終投与後、10分ごとに新しいCRCを開始する前にHEPES溶液で3回すすいでください。 </li><li> 2mMのEGTAを含むCa 2 +のフリーPSSを適用することにより、受動的な内腔の直径を決定します。すべてのパラメータを計算するために使用される各用量反応のための記録されたトレーシング対策ルーメン径（ 図4）から。 </li><li> PERCとしてすべてのアセチルコリン弛緩応答を表現以下の式を用いてフェニレフリン収縮後のカルシウムフリー直径と直径、の違いと比べてフェニレフリンpreconstriction後の内腔直径entageの変更： </li><li>パーセンテージ拡張= 100％X [（D X - D I）/（Dカルシウムフリー - D I）]、ここで、Dは測定された内腔直径およびXは、私であり、CA送料アゴニストの各用量で動脈の直径を表す（x）は、初期の直径以下はくびれは、（i）、およびCa 2 +を含まないバッファ（CA-無料）フェニレフリン。 </li></ol> 5。統計分析すべての連続測定は、平均±SEMとして表される。腸間膜動脈の血管反応性を反復測定の双方向分散分析によって分析される。すべての場合において、P &lt;0.05は統計的に有意であると考えられる。

<ol><li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis+.Exp%22%5BJournal%5D)">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> J. Vis .Exp. (55), e3119(2011).</li>
<li>Arribas, S. M., Daly, C. J., McGrath, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurements+of+vascular+remodeling+by+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Measurements of vascular remodeling by confocal microscopy.</a> Methods Enzymol. 307, 246-273 (1999).</li>
<li>Lei, C., Yu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhaled+Nitric+Oxide+Attenuates+the+Adverse+Effects+of+Transfusing+Stored+Syngeneic+Erythrocytes+in+Mice+with+Endothelial+Dysfunction+after+Hemorrhagic+Shock%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Inhaled Nitric Oxide Attenuates the Adverse Effects of Transfusing Stored Syngeneic Erythrocytes in Mice with Endothelial Dysfunction after Hemorrhagic Shock.</a> Anesthesiology. , (2012).</li>
<li>Buys, E. S., Cauwels, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((sGC%CE%B11%CE%B21+attenuates+cardiac+dysfunction+and+mortality+in+murine+inflammatory+shock+models%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">sGCα1β1 attenuates cardiac dysfunction and mortality in murine inflammatory shock models.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297 (2), H654-H663 (2009).</li>
<li>Buys, E. S., Sips, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender-specific+hypertension+and+responsiveness+to+nitric+oxide+in+sGC%CE%B11+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Gender-specific hypertension and responsiveness to nitric oxide in sGCα1 knockout mice.</a> Cardiovasc. Res. 79 (1), 179-186 (2008).</li>
<li>Panza, J. A., Quyyumi, A. A., Brush, J. E., Epstein, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+endothelium-dependent+vascular+relaxation+in+patients+with+essential+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Abnormal endothelium-dependent vascular relaxation in patients with essential hypertension.</a> N. Engl. J. Med. 323 (1), 22-27 (1990).</li>
<li>Huang, P. L., Huang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension+in+mice+lacking+the+gene+for+endothelial+nitric+oxide+synthase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hypertension in mice lacking the gene for endothelial nitric oxide synthase.</a> Nature. 377 (6546), 239-242 (1995).</li>
<li>Friebe, A., Koesling, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+function+of+NO-sensitive+guanylyl+cyclase%3A+what+we+can+learn+from+genetic+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">The function of NO-sensitive guanylyl cyclase: what we can learn from genetic mouse models.</a> Nitric Oxide. 21 (3-4), 149-156 (2009).</li>
<li>Ehret, G. B., Munroe, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+variants+in+novel+pathways+influence+blood+pressure+and+cardiovascular+disease+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genetic variants in novel pathways influence blood pressure and cardiovascular disease risk.</a> Nature. 478 (7367), 103-109 (2011).</li>
<li>Buys, E. S., Raher, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+modifiers+of+hypertension+in+soluble+guanylate+cyclase+alpha1-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Genetic modifiers of hypertension in soluble guanylate cyclase alpha1-deficient mice.</a> J. Clin. Invest. 122 (6), 2316-2325 (2012).</li>
<li>Kauffenstein, G., Laher, I., Matrougui, K., Guerineau, N. C., Henrion, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+role+of+G+protein-coupled+receptors+in+microvascular+myogenic+tone%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Emerging role of G protein-coupled receptors in microvascular myogenic tone.</a> Cardiovascular Research. 95 (2), 223-232 (2012).</li>
<li>Ruilope, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension+in+2010%3A+Blood+pressure+and+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Hypertension in 2010: Blood pressure and the kidney.</a> Nat. Rev. Nephrol. 7 (2), 73-74 (2011).</li>
<li>Michael, S. K., Surks, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li>
<li>Mendelsohn, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+hypertension%2C+the+kidney+is+not+always+the+heart+of+the+matter%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">In hypertension, the kidney is not always the heart of the matter.</a> J. Clin. Invest. 115 (4), 840-844 (2005).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

マウスは一部であるため、それによって人間の病態生理のためのマウスモデルを生成する遺伝子改変を導入する可能性があるため、多くの研究者のための選択の実験モデルである。血管小さい抵抗の状態ではなく、より大きな導管血管のは、主に脈管系11を通して血流の調節を画定する。マウスのような小動物の抵抗動脈、のサイズが微小血管の機能を研究するためのワイヤミオグラフの使用を防止します。圧力myographsはこの制限を克服するだけでなく、近い生理的条件下で血管機能の測定を可能にするだけでなく。 我々は以前時129S6（S6）背景（sGCα1 -/-S6）5ではなく、C57BL / 6（B6）バックグラウンド（sGCα1 -/-B6）上の上のsGCα1欠損雄マウスは、高血圧であることが報告4。私たちは、このSという仮説を立てた- / - B6とS6背景上でマウスの血圧の電車関連の格差がsGCα1の間の血管反応...

圧力ミオグラフシステムは小動脈、静脈及び他の血管の生理学的機能および特性を測定するために使用される。動脈または静脈の無傷の小セグメントは、2つの小さなガラスカニューレに取り付けられ、槽がインビボ特性（ 図1および2）のの大部分を維持することができ、適切な内腔の圧力に加圧される。圧力ミオグラフにおける生理学的状態の近くに孤立血管の本質的な性質（ 例えば筋トーン）の調査を可能にする、血管床の生体内挙動に反映されます。筋収縮力変換装置1への直接の機械的結合によって評価されるワイヤ筋運動記録法、過圧力筋運動記録法の利点のいくつかは、血管系で開発された全体の抵抗を定義するマイクロ抵抗動脈が、一方で、検討することができる（i）を含むワイヤーミオグラフは大きい導管動脈、（ⅱ）Tに限定されているまだワイヤが（iii）の容器の自然な形状が良好に維持される、血管内腔を通過する必要がないので、内皮細胞に損傷を与えるハット危険性が低減され、および（iv）した船舶寸法は、広範囲ので学ぶことができる圧力やせん断応力2。 微細血管を勉強することは、高血圧などの心血管疾患で、変更された血管緊張に貢献病態と分子メカニズムを理解するために大規模な導管動脈の勉強よりも有益なことができます。例えば、8週間のマウスに高脂肪食を供給するに関連付けられている血管内皮機能障害はなく、大動脈輪で2 回オーダー腸間膜動脈を3（ 図3）で実証することができます。圧力筋運動記録法の別の利点は、加圧容器の固有筋収縮が存在することであり、この現象内皮の役割と機能について検討することができる。ここでは、DESCR損なわれた一酸化窒素（NO）-cGMPのシグナリングの設定でマウスの腸間膜3次抵抗動脈の血管反応性を研究するために、圧力ミオグラフの使用をIBE。

<table><tbody><tr><td>NaCl</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>BP358</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 (2H2O)</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>C79-500</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>シグマ</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4 </td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>M65-500</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4 </td><td>Sigma</td><td>P3786</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3 </td><td>フィッシャー・サイエンティフィ</td>ック <td>BP328</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>S318</td><td></td></tr><tr><td>D-グルコース</td><td></td><td>Σ G8270</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>BP121</td><td></td></tr><tr><td>HEPES Σ</td><td></td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>フェニレフリン</td><td>アクロス オーガニクス AC20724</td><td></td><td></td></tr><tr><td>アセチルコリン</td><td>シグマ</td><td>A6625</td><td></td></tr><tr><td>圧力筋グラフシステム</td><td>DMT</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

圧力筋運動記録法を用いたマウス抵抗動脈機能を評価

Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography

圧力ミオグラフシステムは、適切な経壁圧に加小動脈の機能評価、で絶妙に便利です。圧力筋運動記録法で達成近い生理状態は血管床の生体内挙動に外挿することができる薬理学的および生理学的な刺激に固有の応答の詳細な特性評価を可能にします。圧力ミオグラフは、従来のワイヤmyographsに比べていくつかの利点を有する。例えば、小さい抵抗容器はしっかりと制御され、生理学的に適切な管腔内の圧力で研究することができる。ここでは、アセチルコリンに反応して血管リラックスするフェニレフリンで前収縮させた3次腸間膜動脈（長い3〜4ミリメートル）、、の能力を研究しています。腸間膜動脈を60 mmHgで一定の圧力に維持される加圧されてシールされたシステムに接続された2つのカニューレに取り付けられている。脈管の内腔と外径がcontinuouあるずるそうはそれぞれ、フェニレフリンおよびアセチルコリンに反応して血管収縮と血管弛緩のリアルタイム定量化を可能にし、ビデオカメラを用いて記録した。 心血管疾患の病因を研究するために、圧力筋運動記録法の適用可能性を実証するため、我々は、全身性高血圧症のマウスモデルにおける内皮依存性血管機能を評価した。可溶性グアニル酸シクラーゼ（ - / - sGCα1）のα1サブユニット欠損マウスは時129S6（S6）背景（sGCα1 -/-S6）に高血圧ですが、ないときはC57BL / 6（B6）背景（sGCαに1 -/-B6）。圧力筋運動記録法を用いて、障害内皮依存性血管弛緩におけるsGCα1欠乏の結果のことを示しています。血管の機能不全は、おそらくcontributisGCα1 -/-B6マウスよりsGCα1 -/-S6においてより顕著であるsGCα1 -/-B6マウスよりsGCα1 -/-S6が高い血圧にNG。 圧力筋運動記録法により、心血管疾患のメカニズムに私達の洞察力を増強、血管の収縮と弛緩に様々な刺激の効果を評価するために使用することができ、比較的簡単ですが、高感度かつ機構的に有用な技術である。

NOは集中人間6および動物モデル7の両方で血圧の恒常性の維持に関与していません。血管平滑筋の弛緩を制御するNOの能力は、可溶性グアニル酸シクラーゼ（sGCの）、cGMPの8を生成ヘム含有ヘテロ酵素によって媒介される。近年、血圧修飾遺伝的変異は、ヒト9の血圧を調節するのsGCの関連性を示す、sGCα1およびsGCβ1遺伝子を含む遺伝子座の同定された。興味深いことに、sGCの（sGCα1 - / - ）のα1サブユニット欠損雄マウスは、高血圧のとき129S6（S6）背景（sGCα1 -/-S6）5上ではなく、ときにC57BL / 6（B6）の背景に（sGCα1 -/-B6）4。私たちは、腸間膜住民でアセチルコリンに反応して血管の弛緩を勉強する圧力筋運動記録法を使用した- / - S6とB6背景やフェニレフリン（ 図4）<...

圧力筋運動記録法では、容器の無傷の小セグメントは、2つの小さなカニューレに取り付けられて、適切な内腔の圧力に加圧した。ここでは、マウス3の血管弛緩応答を測定する方法を説明<sup&gt; RD</supC57とsGCαで&gt;オーダー腸間膜動脈<sub&gt; 1</sub<sup&gt; - / -</sup&gt;圧力筋運動記録法を用いたマウス。

Pressure myograph systems are  exquisitely useful in the functional assessment of small arteries, pressurized  to a suitable transmural pressure. The  ...

本実験の全体的な目的は、生理的条件に近い状態で、マウス抵抗動脈のリアルタイムな血管反応性をin vitroで測定することです。これは、血管の短いセグメントを2本のマイクロカニューレに固定し、生理的な管腔内圧を維持することによって達成されます。その後、α1受容体作動薬であるフェニレフリンを用いて血管を収縮させ、任意の薬物が血管を拡張させる能力を検討します。アセチルコリンを用いて収縮した血管に負荷をかけることで、内皮依存性メカニズムを介した血管拡張能をリアルタイムで評価します。結果は、アセチルコリンに対する内腔径の変化率として示され、SGC alpha one 欠損が内皮依存性血管拡張能の低下を招くことを検証します。ワイヤーマイオグラフィーなどの既存の手法と比較した本手法の主な利点は、プレッシャーマイオグラフィーによって、より大きな伝導血管よりも血圧恒常性の維持に深く関与している小さな微小血管の特性評価が可能である点にあります。この手法は、大動脈抵抗血管が重要な役割を果たす高血圧など、心血管分野における主要な疑問の解決に役立ちます。まず、ペントバルビタールを用いてマウスを安楽死させます。次に、腹腔を開き、腸間膜組織の摘出を開始します。次に、第3分岐の腸間膜動脈を特定し、結合組織および脂肪組織から分離します。微小血管レベルでは、血管内に血液がない場合、動脈と静脈の区別が困難になります。そのため、生存個体でこの操作を行うことが望ましいです。次に、3次腸間膜動脈を2～3 mmの長さで切り取り、heaps PSS緩衝液を含むディッシュに入れます。この動脈セグメントに分枝が含まれていないようにしてください。入口バルブと出口バルブから、10 mLシリンジを用いてPSS溶液をゆっくりと注入し、カニューレ内を満たしてmyoチャンバーを準備します。この際、過剰な圧力をかけるとカニューレに接続された脆弱なトランスデューサーを損傷する可能性があるため注意してください。カニューレ内を完全に満たした後、両方のバルブを閉じます。次に、単離した動脈セグメントをチャンバー内に移し、血管の一端を右側のカニューレに固定します。シリンジを用いてフラッシュし、流入バルブからHEPES溶液を血管内に満たしながら、細いナイロン縫合糸で慎重に結紮します。次に、血管のもう一方の端を左カニューレに取り付け、ナイロン縫合糸でカニューレを血管に固定します。チャンバーに最大10 millilitersのHEPES溶液を満たします。シリンジを用いて、入口バルブからヒープ溶液をゆっくりと押し込み、漏れがないか確認します。次に、チャンバーをビデオカメラの下に設置します。入口バルブを閉じた状態で酸素を供給し、チャンバーを37 °Cに加熱します。なお、バルブは最初のヒープ溶液リザーバーからのP1チューブに接続されています。チュ

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自動ワイヤの筋運動記録法を用いた腸間膜動脈の収縮と弛緩の研究

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