Name: 感染を防ぐための新しいアプローチとして、PRP：準備とインビトロ抗菌特性 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 36 s
Description: 学ぶ血小板豊富な血漿（PRP）の調製法とインビトロ抗菌特性。ウサギからのPRP分離、トロンビン活性化、CFU測定による抗菌効果評価。インプラント関連感染症予防への応用可能性を示す。

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著者は、実験的な支援を提供してくださったTherwa Hamzaさん、John E. Tidwellさん、Nina Clovisさん、Suzanne Smithさん、校正してくださったSuzanne Smithさんに感謝します。また、著者らは、細菌の臨床分離株を提供してくれたJohn Thomas博士と、ウェストバージニア大学の微生物学・免疫学・細胞生物学部の生物学的安全性研究室を支援し、利用してくれたJohn B. Barnett博士にも感謝しています。著者らは、Osteosynthesis and Trauma Care FoundationおよびNational Science Foundation(#1003907)からの財政的支援を認めています。顕微鏡実験と画像解析は、メアリーバブランドルフがんセンターとNIH助成金P20 RR016440によって部分的にサポートされているウェストバージニア大学イメージング施設でも行われました。
採血のための動物の使用は、ウェストバージニア大学の動物管理および使用委員会によって承認されました。すべての実験は、関連するすべてのガイドライン、規制、および規制当局に準拠して実施されました。

1。 PRPの作製とその活性化 1.1採血<ol><li>イソフルランの吸入（誘導のためのO 2中2％、保守のための1％）でウサギを麻酔。 </li><li> 20mlのシリンジに2ミリリットル0.129 Mのクエン酸三ナトリウムを（anticoagulentソリューション）を描画します。クエン酸三ナトリウム溶液を50 mlの蒸留H 2 O中の1.897グラムクエン酸三ナトリウムを溶解し、0.22μmの滅菌フィルターで濾過することによって調製される。 </li><li> 70％エタノールを用いてウサギの耳を殺菌。 </li><li>翼状針（25g）をシリンジに接続を介して、ウサギの耳静脈から（ 例えば 5ミリリットル）の血を引く。 </li><li>穏やかな攪拌によってクエン酸三ナトリウム溶液を用いて血液を混ぜる。血液とクエン酸三ナトリウム水溶液の体積比は9:1である。 </li></ol> 1.2 PRPの調製（ 図1） <ol><li> 50mlプラスチック遠心管に抗凝固処理血液を転送します。 10μlのアリコートを取る血球計算法を用いてベースライン血小板数を決定するために、血液。 </li><li>スイングアウトローター付き遠心機で室温（RT）で10分間、300×gで血液を遠心分離します。低い（ 図1）への加速とブレーキの速度を設定します。 </li><li>遠心後、血液は3層に分かれています。底層は、中間層（一般的に &quot;バフィーコート&quot;と呼ばれる）は、主に赤血球で濃縮血小板や白血球から構成され、最上位層は、主に血液の液体成分である血漿、血小板である（ 図1）。細胞培養用フードに遠心管を慎重に輸送;層を乱すことがありません。 1ミリリットルプラスチックピペットを用いて、15​​ mlプラスチックチューブに、血漿、バフィーコート、および2-3 mm厚赤血球層のすべてを転送します。 </li><li>室温で15分間3000 xgで転送サンプルをもう一度遠心します。上層（上清）を乏血小板血漿（PPP）と見なされますdは、新しいチューブに移す。 </li><li> 2.0×10 6血小板/μlを（血球計算法によって決定される）を得るために、PPPを使用して、残りの血液サンプル中の血小板濃度を調整することによって、PRPを得る。 </li></ol> 1.3 PRPの活性化<ol><li> 1,000 IU / mlの濃度になるように取り組んで5ミリリットル10％塩化カルシウムで5,000 IUウシトロンビンを溶解させることによって、PRPの活性化溶液を調製します。 </li><li> PRPとPPPにライセンス認証ソリューションを追加して、繰り返して、PRP-およびPPP-ゲルを形成するために、ピペッティングにより溶液を混ぜて使用する。 PRPまたはPPPへの活性化溶液の体積比は1:4です。 </li></ol> 2キルカーブアッセイを使用して、PRP の in vitro抗菌試験（ 図2） では、 <ol><li>無菌接種ループを使用して、Sのいくつかのコロニーを追加プラスチックチューブでミューラーヒントンブロス（MHB）5mlにその晩平板培養から黄色ブドウ球菌 。 Vortexは簡潔にしてから、37℃で2時間サンプルをインキュベート次の、細菌のメディアの光学濃度を分光光度計を用いて決定し、予め決められた標準曲線に基づいて〜1×10 8 cfu / mlに等しい光学密度に調整した。 </li><li> 1×10 6 CFU / mlを取得し、氷の上で接種を配置するPBSを用いて100倍希釈を作る。 </li><li>セットアップおよび滅菌、使い捨て5ミリリットル丸底ポリスチレンチューブにラベルなど、各チューブに2 mlの最終容積については、 表1に示されている以下のサンプル·グループを準備。 </li><li>活性化のためのトロンビン溶液（ゲル形成）が続いポリスチレンチューブにPRP、PPP、またはPBSを最初に追加します。次に、MHBを追加してから、S.球菌接種（1×10 6 CFU / ml）を1×10 5 CFU / mlの最終濃度を得ることができる。 </li><li> ℃で150rpmで攪拌​​しながら軌道37でチューブをインキュベートする。 </li><li>予め決められた時点（ 例えば 0,1、および2時間）で、繰り返しピペッティング（これを経由して各チューブ内の溶液を混合細菌は、PRPゲルの内部に閉じ込められるかもしれないので、ステップ）が重要である。 、サンプルの10μlを取り滅菌0.9％生理食塩水で順次希釈し、トリプシン大豆寒天（TSA、5％羊血液付き）CFUカウントのためのプレート上に各希釈液の100μlアリコートをピペット。 </li><li> 37℃で一晩培養寒天プレート°Cは、その後プレートのコロニーをカウントし、記録します。 y軸上のx軸およびCFU / mlの上の時間（hr）とlogarithimicスケールでデータをプロットします。 </li></ol>

<ol><li>Gristina, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterial-centered+infection%3A+microbial+adhesion+versus+tissue+integration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Biomaterial-centered infection: microbial adhesion versus tissue integration.</a> Science. 237, 1588-1595 (1987).</li>
<li>Gristina, A. G., Costerton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+adherence+to+biomaterials+and+tissue.+The+significance+of+its+role+in+clinical+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone+Joint+Surg.+Am%22%5BJournal%5D)">Bacterial adherence to biomaterials and tissue. The significance of its role in clinical sepsis.</a> J. Bone Joint Surg. Am. 67, 264-273 (1985).</li>
<li>Everts, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reviewing+the+structural+features+of+autologous+platelet-leukocyte+gel+and+suggestions+for+use+in+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Reviewing the structural features of autologous platelet-leukocyte gel and suggestions for use in surgery.</a> Eur. Surg. Res. 39, 199-207 (2007).</li>
<li>Marx, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+plasma+%28PRP%29%3A+what+is+PRP+and+what+is+not+PRP%5BTitle%5D)+AND+%22Implant.+Dent%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich plasma (PRP): what is PRP and what is not PRP.</a> Implant. Dent. 10, 225-228 (2001).</li>
<li>Toscano, N., Holtzclaw, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+considerations+in+the+use+of+platelet-rich+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Compend.+Contin.+Educ.+Dent%22%5BJournal%5D)">Surgical considerations in the use of platelet-rich plasma.</a> Compend. Contin. Educ. Dent. 29, 182-185 (2008).</li>
<li>Cieslik-Bielecka, A., Gazdzik, T. S., Bielecki, T. M., Cieslik, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+the+platelet-rich+gel+has+antimicrobial+activity%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Surg.+Oral+Med.+Oral+Pathol.+Oral+Radiol.+Endod%22%5BJournal%5D)">Why the platelet-rich gel has antimicrobial activity?</a> Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. Oral Radiol. Endod. 103, 303-306 (2007).</li>
<li>Yeaman, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+platelets+in+antimicrobial+host+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">The role of platelets in antimicrobial host defense.</a> Clin. Infect. Dis. 25, 951-970 (1997).</li>
<li>Tang, Y. Q., Yeaman, M. R., Selsted, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+peptides+from+human+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial peptides from human platelets.</a> Infect Immun. 70, 6524-6533 (2002).</li>
<li>El-Sharkawy, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+plasma%3A+growth+factors+and+pro-+and+anti-inflammatory+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich plasma: growth factors and pro- and anti-inflammatory properties.</a> J. Periodontol. 78, 661-669 (2007).</li>
<li>Krijgsveld, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombocidins%2C+microbicidal+proteins+from+human+blood+platelets%2C+are+C-terminal+deletion+products+of+CXC+chemokines%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Thrombocidins, microbicidal proteins from human blood platelets, are C-terminal deletion products of CXC chemokines.</a> J. Biol. Chem. 275, 20374-20381 (2000).</li>
<li>Trowbridge, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+platelet+gel+and+its+effects+on+infection+in+cardiac+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Extra+Corpor.+Technol%22%5BJournal%5D)">Use of platelet gel and its effects on infection in cardiac surgery.</a> J. Extra Corpor. Technol. 37, 381-386 (2005).</li>
<li>Gristina, A. G., Naylor, P., Myrvik, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infections+from+biomaterials+and+implants%3A+a+race+for+the+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Prog.+Technol%22%5BJournal%5D)">Infections from biomaterials and implants: a race for the surface.</a> Med. Prog. Technol. 14, 205-224 (1988).</li>
<li>Subbiahdoss, G., Kuijer, R., Grijpma, D. W., vander Mei, H. C., Busscher, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+biofilm+growth+vs.+tissue+integration%3A+%22the+race+for+the+surface%22+experimentally+studied%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Microbial biofilm growth vs. tissue integration: "the race for the surface" experimentally studied.</a> Acta Biomater. 5, 1399-1404 (2009).</li>
<li>Klevens, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasive+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+infections+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Invasive methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections in the United States.</a> JAMA. 298, 1763-1771 (2007).</li>
<li>Foster, T. E., Puskas, B. L., Mandelbaum, B. R., Gerhardt, M. B., Rodeo, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+plasma%3A+from+basic+science+to+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich plasma: from basic science to clinical applications.</a> Am. J. Sports Med. 37, 2259-2272 (2009).</li>
<li>Carlson, N. E., Roach, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+plasma%3A+clinical+applications+in+dentistry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Dent.+Assoc%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich plasma: clinical applications in dentistry.</a> J. Am. Dent. Assoc. 133, 1383-1386 (2002).</li>
<li>Man, D., Plosker, H., Winland-Brown, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+autologous+platelet-rich+plasma+%28platelet+gel%29+and+autologous+platelet-poor+plasma+%28fibrin+glue%29+in+cosmetic+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Plast.+Reconstr.+Surg%22%5BJournal%5D)">The use of autologous platelet-rich plasma (platelet gel) and autologous platelet-poor plasma (fibrin glue) in cosmetic surgery.</a> Plast. Reconstr. Surg. 107, 229-237 (2001).</li>
<li>Fridkin, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiological+and+microbiological+characterization+of+infections+caused+by+Staphylococcus+aureus+with+reduced+susceptibility+to+vancomycin%2C+United+States%2C+1997-2001%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Epidemiological and microbiological characterization of infections caused by Staphylococcus aureus with reduced susceptibility to vancomycin, United States, 1997-2001.</a> Clin. Infect. Dis. 36, 429-439 (1997).</li>
<li>Jackson, C. R., Fedorka-Cray, P. J., Davis, J. A., Barrett, J. B., Frye, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence%2C+species+distribution+and+antimicrobial+resistance+of+enterococci+isolated+from+dogs+and+cats+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Prevalence, species distribution and antimicrobial resistance of enterococci isolated from dogs and cats in the United States.</a> J. Appl. Microbiol. 107, 1269-1278 (2009).</li>
<li>Murray, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+multidrug-resistant+bacteria+from+combat+personnel+evacuated+from+Iraq+and+Afghanistan+at+a+single+military+treatment+facility%5BTitle%5D)+AND+%22Mil.+Med%22%5BJournal%5D)">Recovery of multidrug-resistant bacteria from combat personnel evacuated from Iraq and Afghanistan at a single military treatment facility.</a> Mil. Med. 174, 598-604 (2009).</li>
<li>Durr, M., Peschel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+meet+defensins%3A+the+merging+concepts+of+chemoattractants+and+antimicrobial+peptides+in+host+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Chemokines meet defensins: the merging concepts of chemoattractants and antimicrobial peptides in host defense.</a> Infect Immun. 70, 6515-6517 (2002).</li>
<li>Hancock, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Peptide antibiotics.</a> Lancet. 349, 418-422 (1997).</li>
<li>Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+platelet+concentrates%3A+from+pure+platelet-rich+plasma+%28P-PRP%29+to+leucocyte-+and+platelet-rich+fibrin+%28L-PRF%29%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF).</a> Trends Biotechnol. 27, 158-167 (2009).</li>
<li>Kalen, A., Wahlstrom, O., Linder, C. H., Magnusson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+content+of+bone+morphogenetic+proteins+in+platelets+varies+greatly+between+different+platelet+donors%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">The content of bone morphogenetic proteins in platelets varies greatly between different platelet donors.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 375, 261-264 (2008).</li>
<li>Weibrich, G., Kleis, W. K., Hafner, G., Hitzler, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+factor+levels+in+platelet-rich+plasma+and+correlations+with+donor+age%2C+sex%2C+and+platelet+count%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Craniomaxillofac.+Surg%22%5BJournal%5D)">Growth factor levels in platelet-rich plasma and correlations with donor age, sex, and platelet count.</a> J. Craniomaxillofac. Surg. 30, 97-102 (2002).</li>
<li>Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Not+every+PRP-gel+is+born+equal.+Evaluation+of+growth+factor+availability+for+tissues+through+four+PRP-gel+preparations%3A+Fibrinet%2C+RegenPRP-Kit%2C+Plateltex+and+one+manual+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Not every PRP-gel is born equal. Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure.</a> Vox Sang. 97, 110-118 (2009).</li>
<li>Lei, H., Gui, L., Xiao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+anticoagulants+on+the+quality+and+biological+efficacy+of+platelet-rich+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Biochem%22%5BJournal%5D)">The effect of anticoagulants on the quality and biological efficacy of platelet-rich plasma.</a> Clin. Biochem. 42, 1452-1460 (2009).</li>
<li>Redler, L. H., Thompson, S. A., Hsu, S. H., Ahmad, C. S., Levine, W. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+plasma+therapy%3A+a+systematic+literature+review+and+evidence+for+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Sportsmed%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich plasma therapy: a systematic literature review and evidence for clinical use.</a> Phys. Sportsmed. 39, 42-51 (2011).</li>
<li>Whitman, D. H., Berry, R. L., Green, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+gel%3A+an+autologous+alternative+to+fibrin+glue+with+applications+in+oral+and+maxillofacial+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Oral+Maxillofac.+Surg%22%5BJournal%5D)">Platelet gel: an autologous alternative to fibrin glue with applications in oral and maxillofacial surgery.</a> J. Oral Maxillofac. Surg. 55, 1294-1299 (1997).</li>
<li>Anitua, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+rich+in+growth+factors%3A+preliminary+results+of+use+in+the+preparation+of+future+sites+for+implants%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Oral+Maxillofac.+Implants%22%5BJournal%5D)">Plasma rich in growth factors: preliminary results of use in the preparation of future sites for implants.</a> Int. J. Oral Maxillofac. Implants. 14, 529-535 (1999).</li>
<li>Whitman, D. H., Berry, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+improving+the+handling+of+particulate+cancellous+bone+and+marrow+grafts+using+platelet+gel%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Oral.+Maxillofac.+Surg%22%5BJournal%5D)">A technique for improving the handling of particulate cancellous bone and marrow grafts using platelet gel.</a> J. Oral. Maxillofac. Surg. 56, 1217-1218 (1998).</li>
<li>Currie, L. J., Sharpe, J. R., Martin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+fibrin+glue+in+skin+grafts+and+tissue-engineered+skin+replacements%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Plast.+Reconstr.+Surg%22%5BJournal%5D)">The use of fibrin glue in skin grafts and tissue-engineered skin replacements: a review.</a> Plast. Reconstr. Surg. 108, 1713-1726 (2001).</li>
<li>Nikulin, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+calcium%2C+thrombin+and+nucleotides+%28ADP%2C+cAMP%2C+cGMP%29+on+blood+platelet+glycolysis+and+energy+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Farmakol.+Toksikol%22%5BJournal%5D)">Effect of calcium, thrombin and nucleotides (ADP, cAMP, cGMP) on blood platelet glycolysis and energy metabolism.</a> Farmakol. Toksikol. 43, 585-590 (1980).</li>
<li>Hantgan, R. R., Taylor, R. G., Lewis, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets+interact+with+fibrin+only+after+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Platelets interact with fibrin only after activation.</a> Blood. 65, 1299-1311 (1985).</li>
<li>Hantgan, R., Fowler, W., Erickson, H., Hermans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+assembly%3A+a+comparison+of+electron+microscopic+and+light+scattering+results%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb.+Haemost%22%5BJournal%5D)">Fibrin assembly: a comparison of electron microscopic and light scattering results.</a> Thromb. Haemost. 44, 119-124 (1980).</li>
<li>Li, B., Jiang, B., Boyce, B. M., Lindsey, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilayer+polypeptide+nanoscale+coatings+incorporating+IL-12+for+the+prevention+of+biomedical+device-associated+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Multilayer polypeptide nanoscale coatings incorporating IL-12 for the prevention of biomedical device-associated infections.</a> Biomaterials. 30, 2552-2558 (2009).</li>
<li>Li, B., Jiang, B., Dietz, M. J., Smith, E. S., Clovis, N. B., Rao, K. M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+local+MCP-1+and+IL-12+nanocoatings+for+infection+prevention+in+open+fractures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Orthop.+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of local MCP-1 and IL-12 nanocoatings for infection prevention in open fractures.</a> J. Orthop. Res. 28, 48-54 (2010).</li>
<li>Boyce, B. M., Lindsey, B. A., Clovis, N. B., Smith, E. S., Hobbs, G. R., Hubbard, D. F., Emery, S. E., Barnett, J. B., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Additive+effects+of+exogenous+IL-12+supplementation+and+antibiotic+treatment+in+infection+prophylaxis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Orthop.+Res%22%5BJournal%5D)">Additive effects of exogenous IL-12 supplementation and antibiotic treatment in infection prophylaxis.</a> J. Orthop. Res. 30 (2), 196-202 (2012).</li>
</ol>

著者らは、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。

多血小板血漿は、ますますその治癒促進特性15から17に起因する臨床応用に使用されている。本研究では、PRPは、感染予防のための新しいアプローチとして提示された。 PRPは、MRSA、MSSA、A群連鎖球菌 、および淋菌に対しても強い抗菌性を有することが見出された。感染予防のための従来の抗生物質治療と比較して、PRPの主な利点は、以下を含む：（1）現在の抗生物質療法はますます報告抗生物質耐性14,18-20含む課題に直面しています。 PRPは、血小板（i）は 、PRPの血小板殺菌タンパク質は、好中球、単球、および病原体の侵入21からの防御に重要な役割を果たすT細胞などの免疫細胞に対する走化性特性を有する可能性があるため、高度な代替すること、及び（ii）従来の抗生物質に比べて可能性があり殺菌タンパク質は私の可能性も低くなります細菌の膜構造22を変更する際の難しさに起因する細菌の耐性をnducing。 （2）PRPが感染症を減少させるだけでなく、創傷治癒を促進するのみならず、どちらも外...

インプラント関連感染は重要な臨床合併症である。 黄色ブドウ球菌 （ 黄色ブドウ球菌 ） は、インプラント関連感染症から分離された最も一般的な微生物の一つである。これは、インプラントの表面をカバーし、抗生物質耐性感染1,2につながる可能性がバイオフィルムを製造することができる。インプラント関連感染症の治療は、頻繁に繰り返さdebridementsかつ長期の非経口抗生物質治療のために長期入院を必要とします。抗生物質耐性例では、インプラントの除去が必要になることがあります。抗生物質に対する細菌の耐性が上昇するとしても、疾病管理予防センター（CDC）によって参照されている &quot;世界で最も緊急の健康問題の一つ。&quot;時間では、新しい効果的な抗菌治療法の開発がなければ、多剤耐性病原体は、従来の抗生物質による治療不可能となる可能性があります。インプラント関連の防止感染症は、ことが重要であると新規予防剤またはアプローチはこのような感染症を予防するために必要とされる。 多血小板血漿（PRP）は、骨と骨移植の治癒3から5を助けることができる30以上の成長因子が含まれている自己血の濃度である。骨再生や軟組織の成熟を高めるために、PRPの応用はますますため血小板がリリースし、様々な成長因子のその高濃度の診療所で報告されています。 PRPのいくつかの特徴では、PRPも抗菌特性6-9を持っているかもしれないことを示します。 PRPは、血小板の数が多い、白血球の高濃度（細菌および真菌に対する宿主防御アクションを持っているかもしれない）、複数の抗菌ペプチド7,8,10が含まれています。心臓外科患者の大規模コホートの最近の研究では、創傷閉鎖signif時PRPゲルの術中使用することが明らかになったicantly浅と深い胸骨感染11の発生率を減少させた。これらの理由及び観察のために、私たちは、PRPは、そのよく研究された治癒促進特性以外にも、抗菌特性を持っているという仮説を立てた。感染を防ぐためにPRPを使用しての潜在的な利点があり得る：（i）PRPが従来の抗生物質治療に比べて抵抗性を誘発する可能性が低くなります。 （ⅱ）PRPがまた感染予防に相乗効果があるかもしれ治癒を促進する性質をもっています。PRPの治癒促進特性は、病原体とヒトの細胞がインプラント表面12にはレースをしていると感染の確率を減らすことにより、細菌の付着を防止するためにシールを提供することができます、13。 （ⅲ）PRPは本質的に、生体適合性、安全かつ伝染性疾患のリスクがない。 私たちの長期的な目標は、インプラント関連infectiを防ぐための新たなアプローチとして、PRPを使用することですアドオン。本研究の目的は、PRP は 、in vitro抗菌特性の PRPのを調べるために、二回遠心分離のアプローチを使用して、そのような抗菌性を評価するためのプロトコルを記述するために準備することでした。

<table><tbody><tr><td>牛トロンビン</td><td>キングファーマシューティカルズ</td><td>60793-215-05</td><td>トロンビン(ウシ由来)</td></tr><tr><td>塩化カルシウム</td><td>キングファーマシューティカルズ株式会社</td><td>60793-215-05</td><td>10%塩化カルシウム</td></tr><tr><td>エタノール</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>バクスター</td><td>1001936060</td><td></td></tr><tr><td>ミューラーヒントンブロス</td><td>ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー</td><td>275710</td><td></td></tr>リン<tr><td>酸塩緩衝生理食塩水</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8662</td><td></td></tr>ク<tr><td>エン酸三ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td> W302600<td></td></tr><tr><td>トリプシン大豆寒天培</td>地フィ<td>ッシャーサイエンティフィック</td><td>R01202</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>ケンドロ実験室製品</td><td>750043077</td><td></td></tr><tr><td>シリンジフィルター</td><td>ミリポア</td><td>SLGP033RS</td><td></td></tr></tbody></table>

感染を防ぐための新しいアプローチとして、prp：準備と<em&gt;インビトロ</emprpの&gt;抗菌特性

PRP as a New Approach to Prevent Infection: Preparation and In vitro Antimicrobial Properties of PRP

インプラント関連感染が増加して抗生物質耐性、動物と人間の間に抗生物質耐性菌の伝送、および感染症の治療コストの高さに起因する世界的なヘルスケア産業にますます困難になってきています。 そこで本研究では、多血小板血漿（PRP）の潜在的な抗菌特性に基づいてインプラント関連感染の予防に有効である可能性がある新たな戦略を開示している。治癒を促進するためのよく研究された特性のために、PRP（生物学的製剤）はますます整形外科手術、歯と口腔の手術、顎顔面手術、整形手術、スポーツ医学などを含む臨床応用に使用されている PRPはインプラント関連感染の防止に従来の抗生物質治療に高度な代替手段である可能性があります。 PRPを使用することにより、従来の抗生物質治療Siに比べて有利であるかもしれないPRPのNCE抗生物質耐性を誘導する可能性が低いとPRPの抗菌と癒しの促進特性は感染予防上の相乗効果があるかもしれません。それも病原体とヒトの細胞がインプラント表面のためにレースをしていることが知られており、治癒を促進するのPRPのプロパティには、それによって感染の確率を減らす人間の細胞接着を向上させることができます。また、PRPは本質的に、生体適合性、安全かつ伝染性疾患の危険性から自由である。 我々の研究のために、私たちは一般的に整形外科の感染症で発見され、PRPは、in vitroでこれらの細菌に対する抗菌性を持っているかどうかを検討されているいくつかの臨床菌株を選択しました。我々は、同じ血小板濃度がすべてのサンプルを得ることができるようになり二回遠心分離のアプローチを使用してPRPを用意しました。我々は、一貫性のある抗菌性の調査結果を達成し、PRPは、in vitroでメティのような細菌に対する抗菌性を強いていることを発見したウイルスバスター感受性およびメチシリン耐性黄色ブドウ球菌、A群連鎖球菌 、および淋菌 。したがって、PRPの使用は、感染を防ぐために、インプラント関連感染の高価な術後治療の必要性を低減する可能性を秘めているかもしれません。

PRPは、再現性回遠心分離法（ 図1）を用いて調製される。 PRPは、メチシリン耐性S.に対する in vitro抗菌特性で （CFUsで最大100倍の減少）は、強力な存在が判明した一般的に世界中の病院14に見られる黄色ブドウ球菌 （MRSA）（ 図3）。同様に、PRPはメチシリン感受性球菌に対して強い抗菌性を持って黄色ブドウ球菌 （MSSA）、A群連鎖球菌 、および淋菌 。 二回の遠心分離の方法は、同じ血小板濃度（ すなわち、2.0×10 6血小板/μL）が、濃縮された（〜10倍の血液中のベースラインより上の、 図4）PRPの取得を許可せず、私たちは一貫して抗菌性の知見を得ることを可能にする、有意差異なる個々の動物（ すなわち</...

インプラント関連感染は重要な臨床合併症である。この研究は、インプラント関連感染を防ぐために、多血小板血漿（PRP）を用いたアプローチを説明し、一定の血小板濃度でPRPを調製するためのプロトコルを提示して、PRPの新たに同定された抗菌性や抗菌性を調べるための関連プロトコルを報告<emin vitroで&gt;。</em

感染を防ぐための新しいアプローチとして、PRP：準備と<em&gt;インビトロ</emPRPの&gt;抗菌特性

Implant-associated infection is becoming more and more challenging to the healthcare industry worldwide due to increasing antibiotic resistance, ...

本手順の全体的な目的は、多血小板血漿（PRP）のin vitroにおける抗菌性を検証することです。まず、ドナーラビットから多血小板血漿を分離します。次に、細菌接種液を調製し、トロンビンを用いてPRPを活性化させ、それを細菌接種液と混合します。混合物をインキュベートしてサンプルを採取し、得られたコロニー形成単位を測定します。PRP処理したサンプルにおいて、対照サンプルと比較してCFUが減少していることで、PRPの抗菌特性が証明されます。PRP処理を行わない場合、血小板豊富血漿は従来のBOL処理と比較して、BOL耐性を誘発する可能性が低くなります。また、本剤は創傷治癒を促進する特性を有しており、これが感染予防に対して相乗効果を及ぼす可能性があります。今回のプロトコルでは、2回の濃縮処置を行い、PRPの血小板濃度を、血液中のベースラインの約10倍に相当する2 × 10⁶ platelets/µLに標準化した白血球除去PRPを使用しました。白血球もまた、直接的な細菌殺傷および抗原特異的な免疫応答に関与しており、これがPRPの抗菌特性に寄与している可能性があるためです。まず、イソフルランの吸入によりウサギを麻酔します。0.129 moles per literのクエン酸三ナトリウム2 mLを20 mLシリンジに採取します。ウサギの耳を70% ethanolで滅菌します。25ゲージのバタフライ針を使用します。ウサギの耳静脈から採血し、緩やかに撹拌して血液をクエン酸三ナトリウム溶液と混合します。抗凝固処理した血液を50 mLのプラスチック製遠心チューブに移します。スイングローターを用いて血球計数によりベースラインの血小板数を決定するため、10 µLの血液を採取します。加速および減速速度を「低」に設定し、血液を300 Gsで10分間遠心分離します。室温にて、層を乱さないように注意しながら遠心管を細胞培養フードへ運搬します。血漿バフィーコートと2〜3 mm厚の赤血球層をすべて15 mLプラスチックチューブに移します。移したサンプルを3000 Gで15分間遠心分離します。室温で、血小板減少血漿の上澄み液を新しいチューブに移します。PPPを用いて、残りの血液サンプル中の血小板濃度を調整し、ヘモサイトメーターによる測定で1µLあたり2×10⁶個の血小板となるように調整して、血小板豊富血漿を得る。S. reusを塗布して一晩培養した血液寒天平板から、5つのコロニーを5mLのMueller Hintonブロスに接種し、ボルテックスで混合する。キャップを緩めた状態で、37°Cで2時間インキュベートする。分光光度計を用いて吸光度を測定します。あらかじめ作成した標準曲線に基づき、接種液の吸光度を調整します。PBSで100倍に希釈して1×10⁶ CFU/mLとし、接種液を氷上に置きます。滅菌済みの使い捨て5 mLラウンド底ポリスチレンチューブを準備し、ラベルを貼ります。指定したサンプル群に合わせて、まずP-R-P-P-P-PまたはPBSを加え、次に活性化用のトロンビン溶液を加えます。次に、Mueller hinton brothを加え、続いてESU接種液を添加し、最終濃度を1 × 10⁵ CFU/mLにします。チューブを37 °Cで、150 RPMの軌道振盪条件下にて、あらかじめ設定した時間ポイントでインキュベートします。各チューブ内の溶液を混ぜ合わせ、細菌がPRPゲル内部に閉じ込められていないことを確認してください。各サンプルの10 µLを分取します。滅菌済み0.9%生理食塩水を用いて段階希釈を行い、各希釈液の100 µLをトリプチコン大豆寒天培地プレートにピペッティングします。CFU測定のため、プレートを37 °Cで一晩培養します。その後、プレート上のコロニー数を計測し、記録します。データを対数スケールでプロットし、X軸に時間、Y軸に1 mLあたりのCFUを配します。血小板豊富血漿は、2回の遠心分離法を用いて再現性よく調製されます。PRPは、メチシリン耐性および感受性黄色ブドウ球菌、グループB連鎖球菌、および淋菌などの複数の細菌に対して、1時間および2時間の時点で強力な抗菌特性を示します。MRSA（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）は、世界中の病院で一般的に見られます。この殺菌アッセイでは、以下のことが示されます。PRPは、1時間および2時間の時点でMRSAに対して強力なインビトロ抗菌特性を示します。定量分析により、1時間の時点において、PPPおよびPBSコントロールと比較して、PRPを用いることでCFUが最大100倍減少することが示されています。2回の遠心分離法で調製したPRPの血液塗沫標本では、全血と比較して血小板数が約10倍となっており、これにより一貫した再現性のある結果が得られます。血小板の数と質は、本実験の成否を左右する重要な要因となります。本手順に従うことで、他の細菌株の評価が可能となり、また、作製後のPRPをin vivoで検討し、動物感染モデルにおける抗微生物特性を探索することも可能です。この手法は、PRP分野の研究者が、動物および臨床現場における感染予防および創傷治癒促進へのPRPの潜在的な利用を探索するための道を開きました。

prp-as-new-approach-to-prevent-infection-preparation-vitro

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

ここでは、同義語DNA配列への制限酵素部位の挿入および機能的プラスミド回収に基づくプロトコルであるプラスミド回収および制限酵素部位挿入（CAPRRESI）によるキメラアセンブリを提示する。このプロトコールは、タンパク質コード遺伝子を融合するための迅速かつ低コストの方法である。...

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本稿の目的医療インジェクター ガンを装備した 30 ゲージ針を使用して 5 mm の深さでアンドロゲン性脱毛症の影響を受ける 23 患者の頭皮の検自己血小板血漿注射 (cm2x 0.20 mL) を記述する 3...

アンドロゲン性脱毛症の影響を受ける患者における力学と制御された PRP 注射

プロトコルを提示大腸菌-lactococcal ・抗菌ペプチド ・ ナイシンに非正規アミノ酸類 (ncAAs) の選択的な圧力の取り込みをベースします。そのプロパティは、定義された成長媒体の目的の ncAAs...

非正規のアミノ酸類の選択的な圧力の取り込みによって生成される抗菌ペプチド

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黄色 ブドウ球菌 内在化と抗菌性化合物の細胞内有効性を研究するための酵素保護アッセイの改善

ナノ粒子やナノ構造表面の抗菌活性を in vitro...

in vitroでのナノ粒子およびナノ構造表面の抗菌活性の評価

このプロトコルは、クリーンルーム環境で微生物のバイオバーデンを最小限に抑えるためのベストプラクティスを要約し、環境モニタリング、プロセスモニタリング、製品無菌試験などの戦略が含まれています。これは、現在の適正組織慣行基準および現在の適正製造基準を満たす必要がある製造および試験施設に関連しています。...

クリーンルーム環境と細胞療法のための微生物制御およびモニタリング戦略

実験室で一般的に使用される領域をプリオン汚染と効果的な除染のために評価する方法が不足しています。ここで説明するプロトコルは、特定のラボの個々のニーズに合わせて簡単に変更できるラボプリオン安全性スワイプテストを実装するための重要な基本を提供します。...

プリオン安全研究所 スワイプ試験

我々はレトロウイルス導入を用いて抗原特異的マウスT細胞を生成するためにプロトコルを提示...

マウスT細胞におけるT細胞受容体のレトロウイルス導入

学ぶ血小板豊富な血漿（PRP）の調製法とインビトロ抗菌特性。ウサギからのPRP分離、トロンビン活性化、CFU測定による抗菌効果評価。インプラント関連感染症予防への応用可能性を示す。

感染を防ぐための新しいアプローチとして、PRP：準備と

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