Name: Photothrombotic虚：マウス脳卒中研究のための低侵襲かつ再現性の光化学皮質病変モデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: 学ぶフォトスロンボーシス法によるマウス局所脳虚血モデルの作製。ローズベンガール光活性化で血管血栓を誘導し、低侵襲かつ再現性の高い皮質虚血病変を作成できます。脳卒中後の可塑性評価に適しています。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

私たちは、洞察力に富んだ提案やコメント、マウリツィオGrassano、マリーナBoido、撮影のためにErmira PajajためAnnalisaオペラの道化役に感謝します。この作品は、FP7-MC-214003から2（マリーキュリー初期研修ネットワークAXREGEN）とCompagniaはディサンパオロ、gliarepプロジェクトによって資金を供給された。

1。手術前<ol><li> 1.5mlチューブにローズベンガルを秤量し、15 mg / mlの最終濃度に達するまで無菌食塩水に溶解する。 0.2μmのフィルターを通して滅菌をフィルタリングして、最大2ヶ月、室温で暗所に保管してください。 </li><li>オートクレーブですべての手術器具を殺菌する。手術領域は、手術を開始する前に、1時間未満で消毒されるべきである。 </li><li>注入されるローズベンガルの投与量を調節するために、マウスの体重を記録します。我々は現在のプロトコルで12週齢の雌CD1マウスに10μlの/ gの動物体重を注入した。ローズベンガルの量は、所望の皮質病変の大きさを容易異なる投与量（典型的に2μlの/ gであり、5μlの/ g以上は10g /μlの体重）試験することによって予備実験の別個のセットを決定することができる生成するために必要とされる。注入されるローズベンガルの量は、特に実験条件、光源の種類に大きく依存することに留意使用され、露光の期間。本研究では、10グラム/液（150μgの/ g）の用量は、その他のグループは、報告されたのに対し、15分間露光によりphotothrombosisを誘導するのに必要であることが分かった50μgの/ gの6,8および100μg/ml/ gのどちら10腹腔内注射はphotothrombotic病変を誘導するために十分であった。 </li></ol> 2。麻酔の手順<ol><li> 50％の透明な誘導室（誘導3.5から4パーセント、維持するための1.5から2パーセント）（v / v）のoxygen/50％（v / v）の一酸化二窒素ガス混合物中のイソフルランでマウスを麻酔。気体の麻酔動物の迅速なウェイクアップを可能にし、麻酔ガスのレベルを容易に調整することができる。また、マウスはまたケタミンキシラジン混合により麻酔することができます。 </li><li>深い麻酔に到達すると、誘導室から麻酔した動物を除去定位フレームに配置し、フェースマスクを用いて麻酔を維持する。 isofluraを調整十分な麻酔レベルを達成するためにね線量。手続き全体の呼吸速度を監視し、それが一定である（40 - 毎分60回の呼吸）を確認してください。 </li><li>動物が深く麻酔であることを確認するために、つま先のピンチを使用してください。 </li><li>乾燥から目を防ぐために、眼軟膏を適用する。 </li><li>優しく外科手術全体の温度を監視するために直腸プローブを挿入します。 37℃でのマウスの体温を維持するための関連するフィードバック制御加熱パッド±0.5℃に設定する</li></ol> 3。対象領域の照明のための手術<ol><li>電気かみそりでマウスの頭皮を剃る。 </li><li>しっかりと頭を保護し、外部の道に耳棒を挿入します。損傷鼓膜ないように注意してください。 </li><li>綿棒を使用して、70％エタノールおよびベタジンのスワイプを交互に表面に皮膚を消毒する。 </li><li>目ルから正中線に沿って切開をするメスを使用首までVEL。頭蓋骨を露出保つために皮膚のリトラクタを適用します。 </li><li>優しくメスで頭蓋骨の端に骨膜を撤回し、頭蓋骨の表面は滅菌綿棒を使用して乾燥させます。ブレグマとラムダを識別します。基準点としてブレグマたガラスマイクロピペットを置き、その後、興味のある領域の座標に移動します。この記事のために選択された関心領域は、ほぼ丸く形ですブレグマへ横約2mmを中心に、そしてフランクリンによるマウス脳アトラスによると感覚運動皮質の大部分を含む約30mm 2の領域をカバーし、 Paxinos 11。 </li><li>基準点と利益の位置をマークし、光の散乱を防ぐため、それに圧力を発揮しないように注意を払うために頭蓋骨の表面に密着して光ファイバを置く。照射領域は光ファイバーGUIの先端に小さなアパーチャまたはキャップを頭蓋骨にマスクを適用することによって制限することができますデ。 </li></ol> 4。ローズベンガルインジェクションとアクティベーション<ol><li> 1ミリリットルの注射器にローズベンガルソリューションをロードし、体重を10μl/ gでの投与量に応じて注入される量を計算。 </li><li>遅い腹腔内注射に進みます。 </li><li>染料拡散しましょう​​と、血流を入力してください。 5分後、冷光照明に切り替える。光の他のソースによって動物の照明を避けてください。私たちは、150 Wの強さの光ファイバ照明器を使用していました。 </li><li>照射の15分後、露光を停止し、創傷を縫合。照明分は既に心筋梗塞を生成し、10分で最大効果12を得るのに十分である可能性が高い。ばらつきを最小限にするために、我々は15分間照射することを選択する。 </li></ol> 5。縫合<ol><li>皮膚トラクターを取り外し、脱水症状を避けるために、滅菌生理食塩水を適用します。 </li><li>逆切断needlを使って傷を閉じるまでeとシルクやナイロン縫合糸。 </li><li>麻酔の配信を中断し、慎重に定位固定装置からマウスを削除して、それが完全に目を覚ましになるまで予め温め加熱パッドの上に置くと、そのケージに戻します。体温は、梗塞拡張の変動を制限するための手順全体を注意深く監視する必要があります。濃度および投与経路に従って、ベンガルはまだ13注射後数時間の血流を検出することができるローズ。潜在的な二次的な損害（ローズベンガル吸収波長は緑色スペクトルにある）を回避するために、温暖化ランプに加熱毛布を好む。 </li></ol>

<ol><li>Lopez, A. D., Mathers, C. D., Ezzati, M., Jamison, D. T., Murray, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+burden+of+disease+and+risk+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global and regional burden of disease and risk factors.</a> Lancet. 367, 1747-1757 (2001).</li>
<li>Mathers, C. D., Boerma, T., Ma Fat, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+causes+of+death%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+Med.+Bull%22%5BJournal%5D)">Global and regional causes of death.</a> Br. Med. Bull. 92, 7-32 (2009).</li>
<li>Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+aggregation+in+the+cerebral+microcirculation%3A+effect+of+aspirin+and+other+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents.</a> Circ. Res. 40, 320-328 (1977).</li>
<li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Ann. Neurol. 17, 497-504 (1985).</li>
<li>Bergeron, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+photochemical+cortical+lesions+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Inducing photochemical cortical lesions in rat brain.</a> Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 9, Unit 9 16(2003).</li>
<li>Lee, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+cerebral+ischemia+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Surg.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced cerebral ischemia in a mouse model.</a> Surg. Neurol. 67, 620-625 (2007).</li>
<li>Dietrich, W. D., Watson, B. D., Busto, R., Ginsberg, M. D., Bethea, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+cerebral+infarction.+I.+Early+microvascular+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced cerebral infarction. I. Early microvascular alterations.</a> Acta Neuropathol. 72, 315-325 (1987).</li>
<li>Schroeter, M., Jander, S., Stoll, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+induction+of+focal+cerebral+ischemia+in+mice+by+photothrombosis+of+cortical+microvessels%3A+characterization+of+inflammatory+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Non-invasive induction of focal cerebral ischemia in mice by photothrombosis of cortical microvessels: characterization of inflammatory responses.</a> J. Neurosci. Methods. 117, 43-49 (2002).</li>
<li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice%3A+evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 18, 570-579 (1998).</li>
<li>Sigler, A., Goroshkov, A., Murphy, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hardware+and+methodology+for+targeting+single+brain+arterioles+for+photothrombotic+stroke+on+an+upright+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Hardware and methodology for targeting single brain arterioles for photothrombotic stroke on an upright microscope.</a> J. Neurosci. Methods. 170, 35-44 (2008).</li>
<li>Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+KBJ+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , 1st, Academic Press. New York. (1997).</li>
<li>Piao, M. S., Lee, J. K., Jang, J. W., Kim, S. H., Kim, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+photochemically+induced+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Korean+Neurosurg.+Soc%22%5BJournal%5D)">A mouse model of photochemically induced spinal cord injury.</a> J. Korean Neurosurg. Soc. 46, 479-483 (2009).</li>
<li>Silva, V. M., Corson, N., Elder, A., Oberdorster, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rat+ear+vein+model+for+investigating+in+vivo+thrombogenicity+of+ultrafine+particles+%28UFP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The rat ear vein model for investigating in vivo thrombogenicity of ultrafine particles (UFP).</a> Toxicol. Sci. 85, 983-989 (2005).</li>
<li>Watson, B. D., Prado, R., Dietrich, W. D., Ginsberg, M. D., Green, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+spinal+cord+injury+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced spinal cord injury in the rat.</a> Brain Res. 367, 296-300 (1986).</li>
<li>Van Reempts, J., Van Deuren, B., Van de Ven, M., Cornelissen, F., Borgers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flunarizine+reduces+cerebral+infarct+size+after+photochemically+induced+thrombosis+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Flunarizine reduces cerebral infarct size after photochemically induced thrombosis in spontaneously hypertensive rats.</a> Stroke. 18, 1113-1119 (1987).</li>
<li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+stroke%3A+size%2C+mechanism%2C+and+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li>
<li>Kleinschnitz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+of+platelets+or+intrinsic+coagulation+pathway-driven+thrombosis+does+not+prevent+cerebral+infarctions+induced+by+photothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Blocking of platelets or intrinsic coagulation pathway-driven thrombosis does not prevent cerebral infarctions induced by photothrombosis.</a> Stroke. 39, 1262-1268 (2008).</li>
<li>Porritt, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photothrombosis-induced+infarction+of+the+mouse+cerebral+cortex+is+not+affected+by+the+Nrf2-activator+sulforaphane%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Photothrombosis-induced infarction of the mouse cerebral cortex is not affected by the Nrf2-activator sulforaphane.</a> PLoS One. 7, e41090(2012).</li>
<li>Baskin, Y. K., Dietrich, W. D., Green, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+effective+behavioral+tasks+for+evaluating+sensorimotor+dysfunction+following+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Two effective behavioral tasks for evaluating sensorimotor dysfunction following traumatic brain injury in mice.</a> J. Neurosci Methods. 129, 87-93 (2003).</li>
<li>Markgraf, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+histopathologic+consequences+of+photothrombotic+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+artery+in+Sprague-Dawley+and+Wistar+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Comparative histopathologic consequences of photothrombotic occlusion of the distal middle cerebral artery in Sprague-Dawley and Wistar rats.</a> Stroke. 24, 286-292 (1993).</li>
<li>Wester, P., Watson, B. D., Prado, R., Dietrich, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+photothrombotic+%27ring%27+model+of+rat+stroke-in-evolution+displaying+putative+penumbral+inversion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A photothrombotic 'ring' model of rat stroke-in-evolution displaying putative penumbral inversion.</a> Stroke. 26, 444-450 (1995).</li>
<li>Hu, X., Wester, P., Brannstrom, T., Watson, B. D., Gu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+and+reproducible+focal+cortical+ischemia+with+or+without+late+spontaneous+reperfusion+generated+by+a+ring-shaped%2C+laser-driven+photothrombotic+lesion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Brain+Res.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Progressive and reproducible focal cortical ischemia with or without late spontaneous reperfusion generated by a ring-shaped, laser-driven photothrombotic lesion in rats.</a> Brain Res. Brain Res. Protoc. 7, 76-85 (2001).</li>
<li>Maxwell, K. A., Dyck, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+reproducible+focal+ischemic+lesions+in+neonatal+mice+by+photothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Induction of reproducible focal ischemic lesions in neonatal mice by photothrombosis.</a> Dev. Neurosci. 27, 121-126 (2005).</li>
<li>Kuroiwa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+rat+model+of+photothrombotic+ischemia+and+infarction+within+the+caudoputamen%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Development of a rat model of photothrombotic ischemia and infarction within the caudoputamen.</a> Stroke. 40, 248-253 (2009).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されていない。

修正や代用なぜなら562 nmでの吸収ピークから、濾過キセノンアークランプからの緑色光レーザーは、もともと感光ローズベンガルを照射するように選ばれた。レーザー媒介励起がまだrecently5を用いたが、それはまた、色素の励起10,15を確実に冷光ランプに置き換えることができます。冷光光ファイバは、レーザー光源より操作しやすく、安価である。しかし、レーザーは、一般的に生体内で血管固有凝固10のため開頭後に個々の表面の細動脈を標的とするために使用されていることに気づいたことがあります。 感受性色素の送達は、通常、均一で再現性のある結果を得るためのいくつかの訓練を必要と尾静脈注射によって達成される。対照的に、腹腔内注射によって行うことが容易で、ローズベンガル、数分13後の血流中の検出可能である。実効photothrombosisを色素5分間腹腔内注射した後、8励磁することによって達成することができる、ラットにおけるローズベンガルしかし...

21世紀の初めには、虚血性脳卒中は、長期障害1とストロークは、2004年2で約5,7万人が死亡を占めている死亡、世界中の第二の原因の第二の原因を表して壊滅的な疾患である。に入れ、多くの努力にもかかわらず、脳卒中後の機能回復を改善するために利用できる有効な治療法はまだありません。それらは虚血性障害の病態のモデル化を可能にし、in vivoで異なる神経保護戦略の有効性を試験するようにストロークの動物モデルが広くストローク研究の分野で使用されている。これらのモデルのほとんどは、他のモデルは、通常、特定の領域、モータと体性感覚野に小型の病変を研究するために開発されたのに対し、（一時的または恒久的に）中大脳動脈内の血流を遮断することによって広範な梗塞を誘発することを目指します。しかし、いくつかの要因は、ACを生成するために寄与することができる使用マウス系統を含む実験的な脳卒中の研究、の変動のertain度、すべての上に、研究に含まれており、動物の年齢や性別、技術は、虚血性損傷を誘発するために採用。後者の点に関しては、期間と侵襲手術（ つまり開頭術の必要性）だけでなく、確実に虚血性病変を誘発するために、オペレータに必要な外科的なスキルは、in vivo脳卒中研究で成功し、公平のための重要な決定要因である。 photothrombosisの概念は当初、1977年3ローゼンブラムとエルSabbanによって提案され、ワトソンらがラットの脳におけるそのアプリケーションによって有名になった1985年4技術が大幅に向上し、現在のモデル3の基礎を設定された- 6。 photothromboticアプローチは以前に血液系、WHに供給される光感受性色素の光活性化を介して皮質梗塞を誘発することを目的と光にさらされる地域では地元の血管血栓症におけるICH結果。循環色素が冷光源によって適切な波長で照射されるとき、それは順番に反応性の高い一重項酸素生成物を多量に生成した酸素分子にエネルギーを放出する。これらの酸素中間体は、血小板付着および凝集に、最終的に局所脳流れの中断7を決定血栓の形成をもたらす、内皮細胞膜の過酸化を誘導する。 Photothrombosisは、それが普通の人間のストロークで発生しますが、光にさらされる分野での血流の選択的な中断、その結果より多くの表面的な血管に病変を誘発するような唯一の動脈を閉塞または破壊しない非正規虚血モデルである。この理由のため、このアプローチは、皮質可塑性の細胞および分子生物学的研究のために適切であり得る。この技術の主な利点は、実行のそのシンプルさに存在します。スクラブ2分;頭皮を剃るための1分;;定位固定装置に動物を配置し、3〜5分また、photothrombosisは簡単に20分待ち（麻酔のために3分を含む動物あたり約40分で行うことができ消毒液で頭皮、切開をし、頭蓋骨をきれいに、冷光ファイバを配置し、2〜4分;腹腔内拡散のために5分待ち、、ローズベンガル液を注入する1分、照明の15分、そして5分〜傷をきれいに）動物を縫合。さらに、全く手術専門知識は病変がそのまま頭蓋骨のシンプルな照明を通じて誘導されるように、この手法を実行するために必要ありません。古典的な動脈閉塞とは異なり、この方法では、照射されたゾーン内に軟膜と実質内微小血管閉塞の選択を決定しない側副血管の目標領域内に酸素を供給するために残っていないような病変間のばらつきを低減する。 その特定の性質にもかかわらず、photothrombotic被害株は不可欠なメカニズムは、脳行程で発生する。同様に、ヒト行程における動脈閉塞し、血小板凝集及び血栓の形成が照射領域7の血流の中断を決定する。同様に、このモデルはまた、中大脳動脈閉塞8のように本質的な炎症反応を共有しています。しかし、よくdelimitated境界、部分的に保存され代謝の領域に対応する半影ゾーンでは、photothrombotic病変の後に非常に低下したり、存在しないです。これは明確な境界線は、虚血性または無傷皮質領域内の細胞応答の研究を容易にすることができる。 Photothrombosisマウスモデルは、トランスジェニック動物の様々な研究のストロークに特に適している。確かにバイアス9を引き起こす可能性が高い死亡率を報告した古典的なモデルはC57BL / 6マウス系統内の全株と長期研究に合わせることはできません。

<table><tbody><tr><td colspan="4">Solutions and chemicals</td></tr><tr><td>Rose Bengal </td><td>Sigma, Italy</td><td>330000</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane Vet </td><td>Merial</td><td>103120022</td><td></td></tr><tr><td>Betadine </td><td>Asta Medica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">手術材料および機器</強力な</td></tr><tr><td>>フィルター </td><td>Havard 装置</td><td>340415</td><td></td></tr><tr><td>150W 光ファイバー照明器</td><td>Photonic</td><td>PL3000</td><td></td></tr><tr><td>プレート用 TCAT-2DF </td><td>Havard 装置</td><td>727561</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxic Instrument </td><td>Stoelting</td><td>51950</td><td></td></tr><tr><td>手術顕微鏡 </td><td>高木</td><td>OM8</td><td></td></tr><tr><td>ヒーティングパッド</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>、酸素、窒素ガス</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>、手術ツール、</td><td>ワールド精密機器</td><td></td><td>、光ファイバータップ、マスクはカスタムメイドです </td></tr></tbody></table>

photothrombotic虚：マウス脳卒中研究のための低侵襲かつ再現性の光化学皮質病変モデル

Photothrombotic Ischemia: A Minimally Invasive and Reproducible Photochemical Cortical Lesion Model for Mouse Stroke Studies

photothromboticストロークモデルは、以前に注入された光感受性色素の光活性化によって与えられた皮質領域内虚血性損傷を誘発することを目指しています。照明続いて、色素が活性化され、その後の血小板凝集し、最終的に局所血流の中断を決定する血栓の形成、を、内皮細胞膜の損傷成分という一重項酸素を生成する。当初は1977年にローゼンブラムとエルSabbanによって提案されたこの手法は、後のラット脳内で1985年にワトソンによって改良と現行モデルの基礎を設定されていた。また、トランスジェニックマウス系統の可用性の向上、さらにphotothrombosisモデルの関心を高めるために貢献した。簡潔には、感光性染料（ローズベンガル）が腹腔内注射し、血流に入る。冷光源によって照射されたときに、色素が活性化になると、ローカルの結果、血小板の活性化および血栓症、内皮損傷を誘発する血流の中断。光源は、再現可能かつ非侵襲的な方法で、任意の目的の皮質領域のターゲティングを可能開頭の必要がなく無傷の頭蓋骨に適用することができる。マウスはその後縫合と目を覚ますために許可されています。虚血性損傷の評価が迅速トリフェニルテトラゾリウムクロリド又はクレシルバイオレット染色によって達成することができる。この技術は、正確なセルの特性又は機能的研究のために非常に有利で小型化と十分に区切られた境界の梗塞を生成する。また、トランスジェニックマウスにおける脳の可塑性の根底にある細胞および分子応答を研究するために特に適している。

このプロトコルは、すでに肉眼（ 図1A-1C）の皮質の解剖時に表示されている皮質病変を生成します。 photothrombotic病変組織がローズベンガルの光活性化を可能にするために十分に透明である浅と深い皮質層に発症。脳梗塞の程度の測定を4％パラホルムアルデヒド（PFA）で固定した後、新鮮な組織、あるいは、クレシルバイオレットによるトリフェニルテトラゾリウムクロリド（TTC）を用いて組織学的染色によって迅速に行うことができる。 TTCのインキュベーションの前に、新たに解剖脳は、脳スライサーに配置されており、厚さ1mmのスライス（ 図1C）に区分。梗塞領域が梗塞面積（ 図1D-1E）の正確な測定を可能にする、淡い現れるのに対し、TTCは赤で無傷の組織にラベルを付けます。ペナンブラとして定義された不完全な虚血のゾーンは、病変の大きさに応じて非常に減少もしくは存在しないです。同様に、クレシルバイオレット染色は紫染色周囲の組織に比べて染色梗塞領域の識別を可能にします。反応性増殖と細胞浸潤...

Photothrombosisは、再現性の高い方法で、興味のある分野での小よく区切り梗塞を誘発するための迅速、低侵襲技術です。これは、トランスジェニックマウスの脳の可塑性の根底にある細胞および分子応答を研究するために特に適している。

Photothrombotic虚：マウス脳卒中研究のための低侵襲かつ再現性の光化学皮質病変モデル

The photothrombotic stroke model aims to induce an ischemic damage within a given cortical area by means of photo-activation of a previously injected ...

本手順の全体的な目的は、あらかじめ注入した光感受性染料を光活性化させることにより、特定の皮質領域において血管血栓症および虚血性損傷を誘発することです。まず、頭蓋骨を露出させるために皮膚を切開します。その後、光感受性染料であるローズベンガルを腹腔内に注入します。5分後、標的となる皮質領域にコールドライト光源を15分間照射します。ローズベンガルを血管内に循環させます。照射されたローズベンガルが活性化し、一項酸素を生成します。内皮細胞膜の構成成分が損傷し、その結果、照射されたすべての表面に血栓が形成され、局所的なRA血流の遮断につながります。処置の最後に、皮膚を縫合して創傷を閉じます。虚血部位の同定は、TTCまたはクリスタルバイオレット染色によってより迅速に行うことができます。こんにちは、v Abesです。こんにちは、Mon Mazeです。光血栓症は、マウスにおいて再現性のある皮質虚血性病変を誘導するための、迅速かつ非侵襲的な手法です。本手法は、多くの脳卒中実験研究、特に細胞レベルおよび分子レベルにおける脳損傷に対する皮質可塑性の評価に適しています。化学的モデルでは通常、マウスよりも操作が容易なラットが用いられます。しかし、マウスはコストが低く、多くのコンジェニック系統が利用可能です。使用しているモデルは技術的に容易に実施できるため、ここではマウスにおいてRomble Deionを誘導する方法について説明します。ローズベンガルをOVチューブに入れ、最終濃度が15 mg/mLになるまで滅菌細胞溶液で溶解させます。これを室温の暗所で最大2か月間保存し、マウスの体重を記録します。使用するローズベンガルの投与量は、体重1gあたり10 µLです。光血栓症を誘導するには、脳定位固定装置と冷光光源が必要です。また、手術中は直腸温度計とヒートパッドを用いて、動物の体温をモニタリングすることを推奨します。手術の準備として、ピンセット、メス、皮膚リトラクター、剪刀、CIキット、消毒用のベタジンエタノールと綿棒、および術後回復用の保温ブランケットを用意します。手術部位を消毒してください。手術中に無菌状態が損なわれた場合は、感染のリスクを避けるため、直ちに処置を中断し、最初からやり直してください。50%の酸素と50%の一酸化窒素の混合ガス中で気化したイソフルランを用いてマウスを麻酔し、導入チャンバーに設置して、初期投与量3.5%でイソフルランを投与します。深い麻酔状態に移行したら、動物を導入チャンバーから取り出し、脳定位固定装置に設置します。手術の間、oph floranの投与量を2%に維持します。動物が十分に鎮静されているか確認するため、足趾へのピンチ刺激を行います。また、動物の眼球の乾燥を防ぐために眼軟膏を塗布してください。フィードバック制御加熱パッドに接続された直腸プローブを挿入し

photothrombotic-ischemia-minimally-invasive-reproducible

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

このビデオは、感光性色素の投与後に無傷の頭蓋骨をレーザー照射することにより、マウスモデルで光血栓性脳卒中を生成する手順を示しています。...

マウスモデルにおける光血栓性脳卒中のモデリング:光血栓症を誘発するための感光性色素投与後のマウス頭蓋骨を介したレーザー照明技術

中大脳動脈閉塞（MCAO）の種々のマウスモデルが広く実験的脳研究において使用される。ここでは、人間の虚血性脳卒中の過半数によって課さ被害に対応する大き​​さの一貫した皮質梗塞を生成し、経頭蓋永久遠位MCAOのモデルを示しています。...

マウスにおけるモデリングのストローク：遠位中大脳動脈の永久的な凝固

ここでは、マウスの体性感覚皮質にRose Bengal光血栓をin vivoで誘導するための半侵襲的光学顕微鏡法のアプローチについて説明します。...

共焦点光学イメージングによるローズベンガル光血栓<em&gt;インビボ</em&gt;：単一の容器ストロークのモデル

光血栓症は、脊髄に限局性虚血を誘発する低侵襲で再現性の高い手順であり、マウスの脊髄損傷のモデルとして機能します。...

マウスの脊髄損傷のモデルとしての光血栓誘発性局所虚血

私たちは、シリコーンコーティング縫合糸を使用して、中大脳動脈の閉塞によって誘発される脳卒中のマウスモデルを記述します。このプロトコルは、永久的な閉塞または一時的な虚血を誘発し、続いて再灌流を誘発するために適用することができます。...

梗塞エリアの中央動脈閉塞技術と可視化を使用したマウスにおける虚血性脳卒中および虚血 - 再灌流の誘導

従来の光血栓性脳卒中(PTS)モデルは、主に組織プラスミノーゲンアクチベーター(tPA)溶解性治療に対して高い耐性の高密度血小板凝集体を誘導します。ここでは、光活性化のためにトロンビンと感光性色素を同時注入することにより、修正されたマウスPTSモデルが導入されています。トロンビン増強PTSモデルは、血小板:フィブリン血栓を混合し、tPA血栓溶解に対して非常に敏感です。...

フィブリン富化およびtPA感受性光血栓性脳卒中モデル

ここで説明するフォトトロンボミックストロークモデルは、感光性染料の投与後にレーザー照明を用いて永久的な微小血管閉塞を誘導することによって無傷の頭蓋骨を通してストロークが生成される。...

マウスにおける脳卒中のモデリング:光血栓症による焦点性皮質病変

ここでは、C57BL/6Jマウスの経頭蓋電気凝固術による遠位中大脳動脈閉塞(dMCAO)モデルを確立し、その後の神経学的行動と組織病理学的特徴を評価するためのプロトコルを提示します。...

遠位中動脈閉塞法を用いたマウスにおける急性虚血性脳卒中の誘発

全光学的アプローチを使用して、虚血性脳卒中を誘発すると同時に、覚醒して行動しているマウスの新たな脳卒中コアで蛍光バイオセンサーを使用してニューロンのCa2+...

行動マウスの虚血性脳卒中を誘発および監視するための同時光血栓症とファイバー測光法

このプロトコルは、ウイルスの送達、視球体の着床、光血栓誘導、アストロサイトおよびニューロン活動の同時記録、アストロサイトのオプトジェネティック刺激を含む統合的な手法を提供します。この統合手法は、虚血性脳卒中の急性期から慢性期にわたり、アストロサイトとニューロンの関係を同時に調査することを目的としています。...

振る舞うマウスの神経細胞およびアストロサイト活動の光血栓性脳卒中モデリングおよび in vivo 光学記録のための統合手法

学ぶフォトスロンボーシス法によるマウス局所脳虚血モデルの作製。ローズベンガール光活性化で血管血栓を誘導し、低侵襲かつ再現性の高い皮質虚血病変を作成できます。脳卒中後の可塑性評価に適しています。

Photothrombotic虚：マウス脳卒中研究のための低侵襲かつ再現性の光化学皮質病変モデル

さらに動画を探す