Question 1

組織学的サンプルの調製において、組織固定はなぜ必要なのでしょうか？

Accepted Answer

組織固定は、細胞死後に自然に放出される酵素による分解を防ぐことで細胞と組織の構造を保存します。固定は酵素活性を抑制し、タンパク質の切断部位を認識不能にします。主な2つのメカニズムは、組織を硬化させる共有結合を形成する架橋と、アルコールやアセトンを使用してタンパク質を脱水させ構造を変形させる凝固です。

Question 2

組織固定の主なメカニズムは2つありますか？

Accepted Answer

クロスリンキングはタンパク質内およびタンパク質間における共有結合の形成を含み、組織を硬化させ分解に耐えるようにします。凝固はアルコールやアセトンを通じてタンパク質を脱水し、その三次構造を変形させ、疎水性領域がタンパク質表面に移動するようします。凝固固定はパラフィンワックスのような埋め込み媒体が組織により効果的に浸透するのを助けます。

Question 3

ホルマリンが組織標本の固定剤としてどのように機能するのか？

Accepted Answer

ホルマリン、つまり水に溶かしたホルムアルデヒドは、リジンやグルタミンのようなアミノ酸の側鎖の第一級アミンに付着し、メチレン橋と呼ばれる安定した架橋を形成します。この架橋プロセスは本質的に遅く、完了するのに1-2日かかります。ホルマリンは中性pHを維持し、組織のアーティファクトを防ぐために、リン酸塩でバッファーすると最も効果的です。

Question 4

組織固定を始める前にどのような要因を考慮すべきですか？

Accepted Answer

サンプルの拡散性を考慮してください：固定剤は拡散係数と時間に関連する速度で組織に浸透するため、完全な固定のためにサンプルは4mmの厚さに制限する必要があります。また、固定剤の量とpHも考慮してください。試薬の枯渇を防ぐために、固定剤とサンプルの比率は少なくとも40:1である必要があります。ホルマリン中性pHを維持し、組織のアーティファクトを避けるためにリン酸塩でバッファーする必要があります。

Question 5

組織学的標本にメディアを埋め込む目的は何ですか？

Accepted Answer

埋め込みメディアは組織自体に似た機械的剛性を持つ試料をサポートします。パラフィンワックスが最も一般的な埋め込みメディアです。適切な埋め込みメディアを選択することが重要です。なぜなら、硬すぎたり柔らかすぎるメディアは切片作成の欠陥を引き起こすからです。パラフィン埋め込みの前に、サンプルは水をエタノールに、そしてキシレンに置き換えることで脱水し、最後に温めたパラフィンワックスで温めなければなりません。

Question 6

クライオセクショニングはどのように従来のパラフィン包埋切片法と異なりますか？

Accepted Answer

クライオセクショニングは、OCT（最適切断温度）培地で組織を急速に凍結させ、-20°Cに保たれたクライオミクロトームで切片を作り、パラフィン切片が水浴処理を必要とするのとは異なり、凍結切片を切片作成直後に陽イオン化ガラススライドに直接移す方法で、架橋反応が発生しないため抗体ラベリングにより適したタンパク質構造を保持します。

Question 7

パラフィンワックスの代替埋め込み方法は何ですか？

Accepted Answer

アガー埋め込みでは、新鮮に調製した液体アガロースが試料を冷却時に固定します。振動ブレードを備えたバイブロトームは、アガロースに埋め込まれた試料から50-1000 µmの厚い断面を切断します。通常、染色前にアガロースから試料を取り出し、真空グリースでスライドに載せます。高解像度のイメージングには、厚いアガロース断面を光顕微鏡原理 機器 と 応用で観察するのが最適です。

光学顕微鏡で観察するための組織サンプルの作製 - 評価クイズ