Name: 縦用の眼の前房に移植、非侵襲イメージング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 54 s
Description: 学ぶマウス眼の前房への膵島移植法と共焦点顕微鏡による非侵襲的イメージング技術。移植後42日間にわたる生体観察が可能で、糖尿病治療研究に貢献します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

私たちは、博士を認める。カミッロリコルディ、アントネッロピレッジ、R.ダマリスMolano、ステファンSpeierと実りある議論のためのダニエルNyqvist。我々はまた、ビデオ録画のヘルプはEleutヘルナンデスとディエゴ·エスピノーサ-Heidmann技術支援のために、マイク·バルデスとマーガレットFormosoに感謝します。バイロンマルドナドは、編集された記録され、最終的な映像を作り出した。研究支援は、糖尿病研究所財団（提供された<a href="http://www.DiabetesResearch.org" target="_blank">www.DiabetesResearch.org</a> ）、NIH / NIDDK / NIAID（MHAにF32DK083226、ACへのNIH RO3DK075487; PO.B.へU01DK089538）。 PO.Bに追加の研究支援はカロリンスカ研究所、スウェーデン研究評議会、スウェーデン糖尿病財団、ファミリーErling Perssonさん、財団、ファミリークヌートとアリスウォレンバーグ財団、スカンディア·インシュアランス·カンパニー·リミテッド、活気のある（から資金を介して提供されましたFP7-228933から2）、カロリンスカ研における糖尿病における研究戦略推進プログラムitutet、ノボノルディスク財団、バースフォンKantzow財団。

次の手順は2ステップで実体鏡下で行われ、最初のステップは、カニューレ内に島をロードする必要が第二段階では、ACEへの実際の移植である。動物で実行されるすべての手続きは、マイアミ大学の制度的動物のケアと使用委員会（IACUC）によって承認された。 1。移植するためのカニューレでロードランゲルハンス島<ol><li>サークルを絞り込むのに皿を回転させて中央培養皿の中の小島。 </li><li> &quot;リザーバ&quot;からカニューレを外し、清潔な表面にカニューレと接続チューブを配置します。リザーバは、フィルタ（ 図1a）を使用せずに300μlの使い捨てプラスチックピペットチップで作ることができる。 </li><li>リザーバ内に吸引時の小島の連続的な流れを確保するために貯水池の気泡を洗い流す。貯水池のフラッシングがフットペダルを使用してハンズフリー電動注射器ドライバを前方に駆動することによって行われます（ 図1b、c）である。また、これは（例えば生理食塩水、PBSまたは培養培地などの滅菌液であらかじめロード）リザーバーに膵島の吸引を可能にするために、シリンジ内の空間を作ります。 </li><li>優しくリザーバーに膵島の所望量を吸引除去する。彼らはリザーバーを入力して、底部に向かって一緒に残るような島は渦になる傾向がある。吸引は、フットペダルを使って後方電動注射器ドライバを駆動することによって行われます。 </li><li>接続チューブを介してリザーバにカニューレを再接続します。 </li><li>培養皿に戻ってカニューレ先端を配置し、カニューレ内に次にチューブに貯水池の小島を洗い流す。あなたは優しく（タッピング）チューブ（ 図1d） &quot;フリック&quot;でチューブ/カニューレを埋戻しとして膵島一緒残ることを確認します。先に島の全ての気泡がカニューレをフラッシュされる前または後に停止します。よくわからない場合は、小島が残って空気としてカニューレの奥に入ると停止前方に小島の泡は、ACEの小島からの逆流（逆流）を防止することができます。一夜消費します。 </li><li>この段階では、ACE（次の手順を参照してください）​​に膵島を注入する準備が整いました。 </li></ol> 2。前眼房に膵島移植<ol><li>ステレオスコープの下に暖かいパッドの上に麻酔マウスを置きます。 </li><li>酸素/イソフルレン麻酔器に接続されている麻酔 &quot;マスク&quot;にマウスの鼻を置きます。マスクは1ミリリットル使い捨てプラスチックピペットチップ（フィルターなし）から作られ、狭い方の端（ 図2a、b）を介して麻酔のチューブに接続されています。 </li><li>そっと眼の蓋が良い露出と簡単にアクセスできます（ 図2c）に目を光らせて空いている方の手の人差し指と親指を使用していて、 &quot;ポップ&quot;移植する引っ込める。これは上の過度の圧力によって、マウスの呼吸を妨げることなく完璧にいくつかの練習が必要になります首や頭への血流を遮断する。 </li><li>使い捨てインスリン注射器（29 - 31G）を使用して、メスのように、慎重に角膜の先端のみを貫通し、単一横切開を行います。 ACE（ 図2d）のうち、注入中の膵島の逆流を最小限にするために、角膜と角膜輪部の頂点との中点で切り込みを入れる。 </li><li>注意深く切開を通してカニューレを（小島がプリロード）を挿入します。 </li><li>ゆっくりとカニューレの膵島を取り出して虹彩の上にそれらを預ける。 ACEの過度の圧力上昇に起因する膵島逆流を防ぐために、切開に象限の反対の中でできるだけ少ないボリューム（s）として、短時間の推力で膵島を取り出します。これは、さらにカニューレを（ステップ1.6を​​参照してください）​​ロード中にチューブに膵島を圧縮することにより確保することができる。 </li><li>ゆっくりACEのカニューレを引っ込める。島の大ボリュームは圧力に起因する膵島還流として注入した場合、これは特に、重要なステップです必ずACEの内部に蓄積避けられないかもしれない。カニューレの周りに切開して過剰圧力を解放するために、ACEの中にある状態で膵島逆流を最小限に抑える/排除するために、穏やかにカニューレを回転させます。あなたはカニューレを撤回し、必要に応じて、ACEから完全に後退する前に圧力がおさまるまでカニューレを待つように試みると同時に逆流の兆候がないか確認してください。 </li><li>滅菌PBSまたは生理食塩水を移植された眼をすすぐ。 </li><li>最初の48時間、術後鎮痛（0.05 mg / kgの皮下）にブプレノルフィンを注入します。 </li><li>直ちに移植後の移植眼にエリスロマイシン点眼抗生物質軟膏を塗る。 </li><li>麻酔からの回復を可能にするために温めておいたケージに戻って動物を置きます。 </li></ol>

<ol><li>Weigert, R., Sramkova, M., Parente, L., Amornphimoltham, P., Masedunskas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy%3A+a+novel+tool+to+study+cell+biology+in+living+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy: a novel tool to study cell biology in living animals.</a> Histochem. Cell Biol. 133 (5), 481-491 (2010).</li>
<li>Leibiger, I. B., Caicedo, A., Berggren, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+in+vivo+imaging+of+pancreatic+%3F-cell+function+and+survival+-+a+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol.+%28Oxf%29%22%5BJournal%5D)">Non-invasive in vivo imaging of pancreatic ?-cell function and survival - a perspective.</a> Acta Physiol. (Oxf). , (2011).</li>
<li>Wang, Y., Maslov, K., Kim, C., Hu, S., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+photoacoustic+and+fluorescence+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Integrated photoacoustic and fluorescence confocal microscopy.</a> IEEE Trans Biomed. Eng. 57 (10), 2576-2578 (2010).</li>
<li>Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Going+deeper+than+microscopy%3A+the+optical+imaging+frontier+in+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Going deeper than microscopy: the optical imaging frontier in biology.</a> Nat. Methods. 7, 603-614 (2010).</li>
<li>Aswathy, R. G., Yoshida, Y., Maekawa, T., Kumar, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+quantum+dots+for+deep+tissue+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal+Chem%22%5BJournal%5D)">Near-infrared quantum dots for deep tissue imaging.</a> Anal. Bioanal Chem. 397 (4), 1417-1435 (2010).</li>
<li>Ghoroghchian, P. P., Therien, M. J., Hammer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+fluorescence+imaging%3A+a+personal+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev.+Nanomed+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">In vivo fluorescence imaging: a personal perspective.</a> Wiley Interdiscip Rev. Nanomed Nanobiotechnol. 1 (2), 156-167 (2009).</li>
<li>Prescher, A., Mory, C., Martin, M., Fiedler, M., Uhlmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+FTY720+treatment+on+postischemic+pancreatic+microhemodynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Effect of FTY720 treatment on postischemic pancreatic microhemodynamics.</a> Transplant Proc. 42 (10), 3984-3985 (2010).</li>
<li>Leblond, F., Davis, S., Valdés, P., Pogue, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-clinical+whole-body+fluorescence+imaging%3A+Review+of+instruments%2C+methods+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Photochem.+Photobiol.+B%22%5BJournal%5D)">Pre-clinical whole-body fluorescence imaging: Review of instruments, methods and applications.</a> J. Photochem. Photobiol. B. 98 (1), 77-94 (2010).</li>
<li>Toso, C., Vallee, J. P., Morel, P., Ris, F., Demuylder-Mischler, S., Lepetit-Coiffe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+magnetic+resonance+imaging+of+pancreatic+islet+grafts+after+iron+nanoparticle+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Clinical magnetic resonance imaging of pancreatic islet grafts after iron nanoparticle labeling.</a> Am. J. Transplant. 8 (3), 701-706 (2008).</li>
<li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248 (4951), 73-76 (1990).</li>
<li>Wang, B. G., Konig, K., Halbhuber, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+microscopy+of+deep+intravital+tissues+and+its+merits+in+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microsc%22%5BJournal%5D)">Two-photon microscopy of deep intravital tissues and its merits in clinical research.</a> J. Microsc. 238 (1), 1-20 (2010).</li>
<li>Denk, W., Delaney, K. R., Gelperin, A., Kleinfeld, D., Strowbridge, B. W., Tank, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomical+and+functional+imaging+of+neurons+using+2-photon+laser+scanning+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Anatomical and functional imaging of neurons using 2-photon laser scanning microscopy.</a> J. Neurosci. Methods. 54 (2), 151-162 (1994).</li>
<li>Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choreography+of+cell+motility+and+interaction+dynamics+imaged+by+two-photon+microscopy+in+lymphoid+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Choreography of cell motility and interaction dynamics imaged by two-photon microscopy in lymphoid organs.</a> Annu. Rev. Immunol. 26, 585-626 (2008).</li>
<li>Khorshidi, M. A., Vanherberghen, B., Kowalewski, J. M., Garrod, K. R., Lindstrom, S., Andersson-Svahn, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+transient+migration+behavior+of+natural+killer+cells+imaged+in+situ+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Biol.+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">Analysis of transient migration behavior of natural killer cells imaged in situ and in vitro.</a> Integr. Biol. (Camb). 3 (7), 770-778 (2011).</li>
<li>Matheu, M. P., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoimaging%3A+studying+immune+system+dynamics+using+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Immunoimaging: studying immune system dynamics using two-photon microscopy.</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2011, pdb.top99(2011).</li>
<li>Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCelli%2C+S+%22Nat.+Med%22">Nat. Med</a>. , (2011).</li>
<li>Fan, Z., Spencer, J., Lu, Y., Pitsillides, C., Singh, G., Kim, P., et al. In vivo tracking of 'color-coded' effector, natural and induced regulatory T cells in the allograft response. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFan%2C+Z+%22Nat.+Med%22">Nat. Med</a>. 16 (6), 718-722 (2010).</li>
<li>Sabek, O., Gaber, M. W., Wilson, C. M., Zawaski, J. A., Fraga, D. W., Gaber, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+human+islet+vascularization+using+a+dorsal+window+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Imaging of human islet vascularization using a dorsal window model.</a> Transplant Proc. 42 (6), 2112-2114 (2010).</li>
<li>Coppieters, K., Martinic, M. M., Kiosses, W. B., Amirian, N., von Herrath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+the+in+vivo+imaging+of+autoimmune+diabetes+development+in+the+pancreas+by+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A novel technique for the in vivo imaging of autoimmune diabetes development in the pancreas by two-photon microscopy.</a> PLoS One. 5 (12), e15732(2010).</li>
<li>Martinic, M. M., von Herrath, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+the+pancreas+during+development+of+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of the pancreas during development of diabetes.</a> Immunol Rev. 221, 200-213 (2008).</li>
<li>Mostany, R., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Method+for+2-Photon+Imaging+of+Blood+Flow+in+the+Neocortex+through+a+Cranial+Window%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window.</a> J. Vis. Exp. (12), e678(2008).</li>
<li>Palmer, G. M., Fontanella, A. N., Shan, S., Hanna, G., Zhang, G., Fraser, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+optical+molecular+imaging+and+analysis+in+mice+using+dorsal+window+chamber+models+applied+to+hypoxia%2C+vasculature+and+fluorescent%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">In vivo optical molecular imaging and analysis in mice using dorsal window chamber models applied to hypoxia, vasculature and fluorescent.</a> 6 (9), 1355-1366 (2011).</li>
<li>Jain, R. K., Munn, L. L., Fukumura, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+tumour+pathophysiology+using+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dissecting tumour pathophysiology using intravital microscopy.</a> Nat. Rev. Cancer. 2 (4), 266-276 (2002).</li>
<li>Taylor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+response+of+capillary+endothelium+to+changes+in+intravascular+pressure%2C+as+seen+in+the+rabbit%27s+ear+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Aust.+J.+Exp.+Biol.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">The response of capillary endothelium to changes in intravascular pressure, as seen in the rabbit's ear chamber.</a> Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. 31 (5), 533-543 (1953).</li>
<li>Shan, S., Sorg, B., Dewhirst, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rodent+mammary+window+of+orthotopic+breast+cancer+for+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">A novel rodent mammary window of orthotopic breast cancer for intravital microscopy.</a> Microvasc. Res. 65 (2), 109-117 (2003).</li>
<li>Speier, S., Nyqvist, D., Cabrera, O., Yu, J., Molano, R. D., Pileggi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+in+vivo+imaging+of+pancreatic+islet+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Noninvasive in vivo imaging of pancreatic islet cell biology.</a> Nat. Med. 14 (5), 574-578 (2008).</li>
<li>Speier, S., Nyqvist, D., Kohler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat. Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li>
<li>Falck, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site+of+production+of+oestrogen+in+the+ovary+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Site of production of oestrogen in the ovary of the rat.</a> Nature. 184, Suppl 14. 1082(1959).</li>
<li>Bickford-Wimer, P., Granholm, A. C., Bygdeman, M., Hoffer, B., Olson, L., Seiger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+fetal+cerebellar+and+cortical+tissue+transplanted+to+the+anterior+eye+chamber+of+athymic+rats%3A+electrophysiological+and+structural+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Human fetal cerebellar and cortical tissue transplanted to the anterior eye chamber of athymic rats: electrophysiological and structural studies.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84 (16), 5957-5961 (1987).</li>
<li>Adeghate, E., Donath, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+findings+in+long-term+pancreatic+tissue+transplants+in+the+anterior+eye+chamber+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Morphological findings in long-term pancreatic tissue transplants in the anterior eye chamber of rats.</a> Pancreas. 5 (3), 298-305 (1990).</li>
<li>Abdulreda, M. H., Faleo, G., Molano, R. D., Lopez-Cabezas, M., Molina, J., Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution%2C+noninvasive+longitudinal+live+imaging+of+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">High-resolution, noninvasive longitudinal live imaging of immune responses.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. , (2011).</li>
<li>Unutmaz, D., Xiang, W., Sunshine, M. J., Campbell, J., Butcher, E., Littman, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+primate+lentiviral+receptor+Bonzo%2FSTRL33+is+coordinately+regulated+with+CCR5+and+its+expression+pattern+is+conserved+between+human+and+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The primate lentiviral receptor Bonzo/STRL33 is coordinately regulated with CCR5 and its expression pattern is conserved between human and mouse.</a> J. Immunol. 165 (6), 3284-3292 (2000).</li>
<li>Pileggi, A., Molano, R. D., Berney, T., Cattan, P., Vizzardelli, C., Oliver, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+induction+in+islet+cells+results+in+protection+from+apoptosis+and+improved+in+vivo+function+after+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 induction in islet cells results in protection from apoptosis and improved in vivo function after transplantation.</a> Diabetes. 50 (9), 1983-1991 (2001).</li>
</ol>

PO.B.商用サービスのプラットフォームとして眼の前房を使おうとしているバイオテクノロジー会社Biocrine、の創設者の一人です。 ACはこの技術を保護する特許になります。

マウス膵島は、以前説明したように33、密度勾配上での精製に続くコラゲナーゼ消化を用いて単離した。孤立した膵島を移植する前に、一晩培養した。これは必要とされないかもしれないが、それは小島が単離手順から回復できるようにすることをお勧めします。これは、生き残った/堅牢な膵島の移植性を確保するように移植が糖尿病のレシピエントで実行される時に重要です。 移植は、酸素/イソフルラン混合（1.5-3％）効果と吸入で一般化された麻酔下で行われる。代替吸入または注射麻酔薬（ 例えば、ケタミン）を使用することができる。注射麻酔を使用する場合は、プロトコルでステップ2.2をスキップします。手順の実行中に低体温症を防ぐために、熱源ので麻酔動物を提供する。一般的に無血管共同で切開を行う際に一部のマウスでは、血管を破壊することが可能であるrnea。例えば、ヌードマウスの角膜は血管化する傾向がある、可能な場合に血管化地域を避ける。切開あたりの新しい注射器を使用しています。切開を行う際に針で虹彩に穴をあけることは避けてください。アイリスとの接触を防止し、更にアイリスに向かっ...

生体顕微鏡の進歩は、in vitro試験1で予測されていない生理現象を明らかにした。これは、生きている動物にインビトロ法によって得られた従来の知見を翻訳に挑戦を強調しています。過去10年間では、生きた動物の組織の可視化はかなりの撮像モダリティ2、3、4、5、6の技術の進歩によって改善された。これは、非侵襲的に標的組織の縦可視化を可能にするための実験動物モデルで実現可能なアプリケーションを用いた in vivoイメージングアプローチのための必要性に拍車をかけている。 このような磁気共鳴イメージングと陽電子放射断層撮影法、または生物発光イメージング技術としては、体7-8、9の奥深くの臓器/組織の非侵襲的イメージングを有効にしている。しかし、これらの技術は使用Oにもかかわらず、高いバックグラウンド信号と低空間分解能に起因する単一細胞の解像度を達成することはできませんF高コントラスト材料または組織特異的発光4。これは二光子蛍光共焦点顕微鏡10の出現で対処されました。二光子顕微鏡は、前例のない詳細11、12と携帯電話のイベントを可視化し、定量化するために生体内イメージングの研究を可能にしました。これは、健康と病気13、14、15、16の重要な生物学的プロセスの特性評価につながっている。先駆的な生体内イメージング研究は、主に切除された組織（ 例えば、リンパ節） を用いたin vivo条件で &quot;模倣&quot;しているが、他の研究では 、in situ 17、18、19、20、21 に画像さらさ標的組織への侵襲的なアプローチを使用しています。他の研究でも侵襲的なアプローチおよび in vivo 22、23、24、25 に制限された撮像解像度に関連付けられた制限を回避するには、 &quot;ウィンドウ室モデル&quot;を使用しています。ウィンドウ室モデルでは、透明な窓を有する室は、外科的にdiffeで皮膚に注入される動物の家賃の場所（背や耳、皮膚、乳房脂肪、肝臓など）（ 例えば 、マウス、ラット、ウサギ）。このアプローチは明らかにin vivoイメージングの高解像度を可能にしますが、それは、チャンバを移植する侵襲的手術を必要とし、数週間または数ヶ月22の上に縦イメージング研究を収容することができない場合があります。 それが最近になって前眼房（ACE）への移植、すなわち、低侵襲で高解像度の共焦点顕微鏡法を組み合わせることで、in vivoイメージングプラットフォーム26,27 における強力で汎用性の高いような&quot;自然な身体の窓&quot;を提供している。実証されたACEへの移植は組織28、29、30の様々な生物学的側面 ​​を研究するために、過去数十年で使用されてきた、そして高分解能イメージングとその最近の組み合わせにより、単一細胞の解像度で膵島の生理学を勉強して有効になって非侵襲的かつ長手方向に&lt;&gt; 26、27（商標）。このアプローチは、動物モデルにおける1型糖尿病（未発表データ）の開発の間に自己免疫応答を研究するために使用されました。また、それぞれのACE膵芽または個々の腎糸球体、（未発表データ）に移植することにより、腎機能の研究では、膵臓の発達を研究するだけでなく、ために使用された。このアプローチを使用した最近の報告書はさらに、膵島移植31日後の免疫応答を研究するための応用を実証しました。重要なのは、この研究では、眼の前房への移植は、実行する自然な身体のウィンドウを提供示した：in vivoで移植組織の（1）の長手方向の、非侵襲的イメージング、（2） 生体内でで 、細胞の表現型と生存率を評価するためにcytolabeling その場で 、標的組織で免疫細胞の浸潤（3）リアルタイム追跡、および局所適用または眼内注射によって（4）地元の介入。 ここでは、D膵島を用いて眼の前房に移植を行う方法emonstrate。

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 説明/コメント </td></tr><tr><td> IsoTHESIA（イソフルラン） </td><td> Buttlerアニマルヘルスサプライ</td><td> 11695-6775-2 </td><td> 99.9パーセントイソフルラン/ mlの</td></tr><tr><td> Ketaset（ケタミンHCL） </td><td>フォートダッジ·アニマルヘルス</td><td> 0856-2013-01 </td><td>代替注射麻酔</td></tr><tr><td> Beprenex（ブプレノルフィン塩酸塩） </td><td>レキットベンキーザー·ヘルスケア（英国）株式会社</td><td> 12496-075-7-1 </td><td> 0.3 mg / mlの</td></tr><tr><td>エリスロマイシン眼軟膏、USP、0.5％ </td><td>アクロン</td><td> 17478-070-35 </td><td>移植された眼に予防的に適用された</td></tr><tr><td> 0.9％塩化ナトリウム（生理食塩水） </td><td>ホスピーラ社</td><td> 0409-7983-03 </td><td>静脈注射用。無菌の</td></tr><tr><td> PBS </td><td>ギブコ</td><td> 10010-023 </td><td> 1X。無菌の</td></tr><tr><td> CMRL培地1066 </td><td> Cellgro </td><td> 98から304-CV </td><td>補足し、CITの修正。小島のための好ましいメディア</td></tr></tbody></table>

縦用の眼の前房に移植、非侵襲<emインビボ&gt;</emリアルタイムでのシングルセル分解能&gt;イメージング

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

生体内イメージングは​​、生物学の研究に不可欠なツールとして浮上している。その過程で、多くのイメージング技術は、非侵襲的に動物に異なる生物学的過程を研究するために開発されてきた。しかし、既存の生体内イメージングモダリティの主要な技術的な限界は、単一セルの解像能力を持つ非侵襲的、縦画像を組み合わせることができないことである。我々は前眼房への移植は、 生体内で細胞レベルの分解能で非侵襲的な、縦撮影が可能多目的実験プラットフォームを提供するなどの重要な制限を回避する方法をここに示す。我々は、マウスに移植手順を示し、すなわち、臨床的意義、膵島移植でモデルを使用して代表的な結果を提供します。前眼房に移植し、様々な組織で直接可視化を可能にするだけでは、このアプローチはがれするためのプラットフォームを提供長期的なフォローアップを実施し、標的組織で監視することにより、n個の薬。なぜなら目の給付だけでなく、移植治療の前房にその汎用性、組織/細胞移植のために、それは、このようなシグナル伝達とがんや自己免疫疾患の発症などの生理学的および病態生理学的プロセスを研究するために 、in vivoアプリケーションで他にも及ぶ。

&quot;良い​​&quot;移植を定義するいくつかのパラメータがあります。良い移植は出血せずに進み、映像に見られるように切開を行ったものです。出血は、ACE（ 図3a）にメス（針）の先端のみを貫通することによって防止/最小化されます。これはまた、虹彩の接触および穿刺を防ぐことができます。また、時間（ 図3c、d）の上に、角膜の濁りを発生させることなく、非常によく治る小切開を確実にするでしょう。移植の成功へのもう一つの重要な側面は、ACEの還流切れによる損失なし小島の合計所望の量を移植できるようにすることです。などのプロトコルステップ1.6で述べたように、これは、ACE（ 図3b）の最終カニューレの後退時に外切開を密封助けるのに空気泡を使用することにより、最小限のボリュームを吐出小島と、該当する場合は最小限に抑えることができます。また、iを提供<html>瞳孔と角膜輪部のエッジとの間の虹彩の上sletsは、in vivoイメージング（ 図3d） のために非常に適し...

眼内移植し、共焦点顕微鏡を組み合わせた新しいアプローチがグラフトされた組織内での単一セルの解像度で縦、非侵襲性のリアルタイムイメージングを可能にする<em生体内で&gt;</em&gt;。我々は、マウスの眼の前房に膵島を移植する方法を示します。

Intravital imaging has emerged as an indispensable tool in biological research.  In the process, many imaging techniques have been developed to study ...

こんにちは。マイアミ大学ミラー医科大学糖尿病研究所のドレッタです。このビデオでは、マウスの眼球内室への膵島移植方法を実演します。この手順は2つのステップで構成されています。ステップ1は、単離した膵島をカニューレに充填することであり、ステップ2が実際の移植手順です。器具および試薬の詳細については、付随するテキストを参照してください。ここでは、シリンジを装着した電動シリンジドライバーと、リザーバーおよびカニューレのアタッチメントについて説明し、以降のビデオで重点的に取り上げます。まず、カニュラにアイレットをロードします。すべての操作は実体顕微鏡下で行います。ディッシュを円を描くように回転させ、アイレットを中央に寄せます。中心に位置した状態で、カニューレをリザーバーから外し、電動シリンジドライバーを前進させて気泡をすべて洗い流します。これは前進用フットペダルを踏むことで行います。準備が整ったら、電動シリンジドライバーを後退方向に駆動させ、アイレットをリザーバーへ吸引し始めてください。そして、同様に後方フットペダルを踏むことで行います。アイレットがリザーバーの底に蓄積する傾向があることに注意してください。その後、カニューレをリザーバーに再接続し、アイレットをリザーバーから排出します。次に、アイレットをリザーバーから追い出し、チューブ内に詰まった状態で保持させるため、カニューレへチューブを挿入します。電動シリンジドライバーを前進させながら、リザーバーを軽く叩きます。アイレットがカニューレの後端に入り始める際に、チューブ内に密集している様子を確認してください。ここまでで、アイレットを移植する準備が整っているはずです。NSサイズのマウスをパッドの上に置き、人差し指と親指で頭部の皮膚を引っ張り、移植する眼球を露出させるか、または押し出します。新しい針をメスとして使用します。虹彩への接触や損傷を防ぐため、針の切り口（ベベル）を下に向けた状態で眼球にアプローチします。針先を角膜に刺入し、側方に切開を加えます。次に、アイレットをあらかじめ装填したカニューレを切開部から前房内に挿入し、電動シリンジドライバーを前進させ、アイレットを房内に注入します。カニューレ内部に気泡が閉じ込められても、後で消散するため心配ありません。また、これらの気泡は天然の障壁となり、チャンバー外への眼瞼の逆流を最小限に抑えるか、あるいは防止する役割を果たします。ゆっくりと慎重に、内部チャンバーからカニューレを後退させて抜去してください。次に、眼を滅菌PBSで洗浄します。任意の鎮痛剤を投与し、最後に眼科用抗生物質軟膏を塗布します。これで移植は完了です。ここでは、眼球の内腔に移植した膵島（pancreatic islets）の代表的な結果を示します。移植後7日目の個々の膵島の経時的なイメージング研究の結果です。移

transplantation-into-anterior-chamber-eye-for-longitudinal-non

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

明確な遺伝的背景における個々のWT網膜前駆細胞のライブトラッキングは、神経発生時の細胞非自律的なシグナル伝達の寄与を評価することができます。ここでは、胚移植を介して、およびin vivoタイムラプス共焦点イメージングにおける遺伝子ノックダウン、キメラ世代の組み合わせは、この目的のために利用しました。...

細胞非自律影響を研究するためのキメラゼブラフィッシュ胚における個々の網膜前駆細胞におけるトランスジェニック遺伝子発現のin vivoイメージング

網膜色素上皮細胞は乾燥加齢による黄斑変性症の高度なフォームのセル置換療法として役立つことができます。このプロトコルでは、地理的な萎縮の目の大きいモデルと病気のこのモデルにヒト胚性幹細胞由来網膜色素上皮細胞の網膜下移植の世代について説明します。...

地図状委縮の目の大きいモデルにヒト胚性幹細胞由来網膜色素上皮細胞の網膜下移植

プロトコルの目的は、レーザー マウス眼房内で胸腺のインプラントで顕微鏡による胸腺細胞の縦の生体リアルタイム追跡を示すことです。角膜の透明性と血管新生血管前駆細胞の動員と成熟した T...

生体内での実時間追跡レーザー顕微鏡による眼房内で胸腺細胞

ここでは、生きたマウス眼球表面イメージング用の多光子顕微鏡プラットフォームを紹介します。蛍光トランスジェニックマウスは、細胞核、細胞膜、神経線維および毛細血管を眼表面内で可視化します。コラーゲン構造に由来する非線形第二高調波生成信号は、間質アーキテクチャにラベルフリーイメージングを提供します。...

マウス角膜と結膜のライブイメージングのためのカスタム多光子顕微鏡プラットフォーム

in vivoイメージングは、健康と疾患における生物学の研究のための強力なツールです。このプロトコルは、標準的な2光子顕微鏡によるマウス網膜の経瞳孔イメージングについて説明しています。また、網膜の複数の細胞コホートを蛍光標識するためのさまざまなin...

経瞳孔二光子マウス網膜のin vivoイメージング

このプロトコルは、倒立共焦点顕微鏡を使用して生体内イメージングを簡素化する新しいツールを提供します。...

倒立共焦点顕微鏡での上皮組織動態を長期モニタリングするための合理化された生体内イメージングアプローチ

ここでは、マウスの眼の前房に生着した肝スフェロイドの非侵襲的な in vivo イメージングを可能にするプラットフォームについて説明します。ワークフローは、初代肝細胞からのスフェロイドの生成から、マウスの眼への移植、共焦点顕微鏡による細胞分解能での in vivo イメージングまで多岐にわたります。...

マウス眼の前房に移植された肝スフェロイドのin vivoイメージング

高周波ドップラー超音波は、局所的な心筋機能を評価するための新しい技術です。この作品は、心筋の歪み、DP / dtは、虚血 -...

高周波高分解能心エコー検査：虚血 - 再灌流マウス心臓における心筋ストレイン、収縮性、および僧帽弁閉鎖不全の非侵襲的な反復測定に関する最初の証拠

我々はここに非侵襲的に18F-フルオロデオキシと陽電子放射断層撮影法を用いた急性同種移植片拒絶反応を評価するために、ラット腎移植モデルを提示する。...

使用したラット腎移植後の急性拒絶反応の非侵襲的イメージング<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG PET

我々は、酸素代謝の指標を推定する脳血流指数の拡散相関分光法対策に脳内ヘモグロビンの酸素化の周波数領域から近赤外分光法対策を組み合わせる。我々は、新生児の脳の健康と発達を評価するためのベッドサイドスクリーニングツールとしてこの測定の有用性を検証した。...

乳幼児の脳代謝と血行動態の非侵襲的光計測

学ぶマウス眼の前房への膵島移植法と共焦点顕微鏡による非侵襲的イメージング技術。移植後42日間にわたる生体観察が可能で、糖尿病治療研究に貢献します。

縦用の眼の前房に移植、非侵襲

さらに動画を探す