縦用の眼の前房に移植、非侵襲イメージング

こんにちは、マイアミ大学ミラー医学部糖尿病研究所のドレッタです。このビデオでは、膵臓のアイレットをマウスの目の内部チャンバーに移植する方法を示します。この手順には 2 つの手順があります。

ステップ1は、分離された膵臓アイレットをカニューレにロードすることであり、ステップ2は実際の移植手順です。装置および試薬の詳細については、添付のテキストを参照してください。ここでは、シリンジが取り付けられた電動シリンジドライバーと、次のビデオで焦点を当てるリザーバーとカニューレのアタッチメント

まず、アイレットをカニューレにロードします。すべての手順はステレオスコープの下で行われます。まず、皿を円を描くように回転させて、アイレットを中央に配置します。

中央に配置されたら、カニューレをリザーバーから外し、電動シリンジドライバーを前方に駆動して気泡を洗い流します。そして、それは前方のフットペダルを踏むことによって行われます。準備ができたら、電動シリンジドライバーを後方に駆動して、アイレットをリザーバーに吸引し始めます。

そしてまた、それは後ろ向きのフットペダルを踏むことによって行われます。アイレットが貯水池の底に蓄積する傾向があることに注目してください。次に、カニューレをリザーバーに再接続し、アイレットをリザーバーから取り出します。

次に、チューブをカニューレに挿入して、アイレットをリザーバーから外し、アイレットがチューブに詰められたままになるように促します。電動シリンジドライバーを前方に駆動しながら、リザーバーをタップします。アイレットがカニューレの背面に入り始めるときに、アイレットがチューブにどれだけ詰まっているかに注目してください。

これで、アイレットを移植する準備ができているはずです。NSサイズのマウスをパッドに置き、人差し指と親指で頭の皮膚を引っ張って、移植する目を露出またはポップします。新しい針をメスとして使用します。

虹彩の接触や損傷を防ぐために、斜めの端を下に向けて目に近づきます。針の先端を角膜に貫通させ、横方向に切開します。次に、切開部からまぶたがプリロードされたカニューレを内部チャンバーに導入し、電動シリンジドライバーを前方に駆動してアイレットをチャンバーに再度注入し始めます。

カニューレ内に閉じ込められる可能性のある気泡は、後で消散するため、心配する必要はありません。そして、それらは、まぶたがチャンバーから逆流するのを最小限に抑えたり防いだりするための自然なバリアとして機能します。カニューレをゆっくりと慎重に内部チャンバーから引っ込めます。

次に、滅菌PBSで目を洗います。お好みの鎮痛剤を注射し、最後に眼科用抗生物質軟膏を塗布します。移植が終了しました。

今回、膵臓のまぶたを眼の内部に移植した代表的な結果を示します。7日目の個々のアイレットの縦断的イメージング研究用。移植後、アイレットは28日目までに虹彩の上にはっきりと生着されます。

アイレットは、移植後42日で以前に見たのと同じ場所にあります。アイレットは同じ場所にはっきりと見えます。また、切開部がどの程度治癒したかにも注目し、個々のアイレットのイメージングに干渉する可能性を排除します。