Question 1

ヘマトサイトメーターとは何ですか？なぜ細胞数を数えるために使用されるのですか？

Accepted Answer

ヘマサイトメーターは、血液細胞の数えるために元々設計された、レーザーでエッチングされたグリッドを備えた計数チャンバーです。グリッドが様々なサイズの象限に分割された2つの計数チャンバーが含まれています。このツールにより、研究者は光学顕微鏡下で細胞を数え、総細胞濃度を計算することができ、既知の細胞量を必要とする生物医学実験で細胞数を決定するために不可欠です。

Question 2

ヘマサイトメーターグリッドはどのように細胞計数のために構成されていますか？

Accepted Answer

ヘマサイトメーターグリッドは9つの大きな四分円から成ります。4つの角の四分円はそれぞれ16の小さな四分円に分かれています。中央の四分円は25の小さな四分円を含み、それぞれがさらに16のマイクロ四分円に分かれています。各大きな正方形の面積は1 mm²で、0.1 mm³、つまり1/10,000ミリリットルの体積を含んでおり、これは総細胞濃度を計算する上で重要です。

Question 3

ヘマサイトメータに細胞を読み込む前にどのような準備手順が必要ですか？

Accepted Answer

カバースリップとカウントチャンバーをエタノールとキムワイプで清掃し、綿くず、指紋、透かしを除去します。カバースリップマウンティングサポートに水を塗布して、表面張力を使用してカバースリップを所定の位置に保持します。セル懸濁液を上下にピペッティングしてゆっくりと攪拌し、セル塊を分離させます。その後、約10マイクロリットルを吸引し、毛細管作用によって溶液をグリッドにわたって引き込む導入ポートにロードします。

Question 4

セル密度に基づいてどの象限を数えるかはどのように選択しますか？

Accepted Answer

セル密度に応じて象限サイズを選択します：セル数が少ない場合は、一つの角の象限ですべてのセルを数えます；中程度の密度の場合は、16の小さな象限のいずれかを使用します；高密度の場合は、25の中心の象限のいずれかでセルを数えます。正確性を確保するため、必ず象限あたり少なくとも20-50セルを数えます。上部と左側の線に触れているセルは数えますが、下部または右側の線に触れているセルは無視します。

Question 5

サンプル内のセルの総数をどのように計算しますか？

Accepted Answer

セル数を10,000倍します（各大きな正方形が1/10,000ミリリットルに相当するため）。象限のサイズに基づいて乗算係数を適用します：大きな象限の場合は1倍、角の象限の場合は16倍、中央の象限の場合は25倍します。サンプルを希釈した場合は希釈倍数で掛けます。最後に、全サンプル容量に掛けて実験サンプルの総セル数を決定します。

Question 6

トリパンブルー除外法とはどのようなものか、また細胞の生存率をどのように決定するのか？

Accepted Answer

トリパンブルーは生きている細胞と死んだ細胞を区別する活性染色です。生きている細胞は膜が完全で染料を排除し、位相差顕微鏡下では明るく金色に見えます。死んだ細胞は膜の完全性を欠いており、トリパンブルーが入り込んで細胞質を青く染めます。生きている細胞のみを数え、最終的な数値にトリパンブルー希釈倍率を掛けることで、サンプル中の生存細胞濃度を決定します。

Question 7

生物医学実験で正確な細胞計数が重要なのはなぜですか？

Accepted Answer

正確な細胞数は、細胞ベースの検定で再現可能で統計的に関連性の高いデータを確保します。研究者は組織から細胞を分離する際、共培養実験で異なる細胞集団を混ぜる際、ELISPOTのような免疫アッセイを行う際、または細胞からmRNAを抽出する際に正確な細胞数を必要とします。正確な細胞数を知ることで、実験条件を適切に希釈し、複製間で標準化することができ、細胞の継代をサポートします cell lines サブ培養法と応用。

血球計算盤を利用した細胞数の数え方 - 評価クイズ