Live Imaging Assay for Assessing the Roles of Ca<sup>2+</sup> and Sphingomyelinase in the Repair of Pore-forming Toxin Wounds

Christina Tam; Andrew R. Flannery; Norma Andrews

doi:10.3791/50531

カルシウムの役割を評価するためのイメージングアッセイを生きる 2 +とスフィンゴミエリナーゼ

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Live Imaging Assay for Assessing the Roles of Ca²⁺ and Sphingomyelinase in the Repair of Pore-forming Toxin Wounds

カルシウムの役割を評価するためのイメージングアッセイを生きる 2 +とスフィンゴミエリナーゼ

Full Text

12,084 Views

18:25 min

August 25, 2013

DOI: 10.3791/50531-v

Christina Tam¹, Andrew R. Flannery¹, Norma Andrews¹

¹Department of Cell Biology and Molecular Genetics,University of Maryland

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

親油性色素FM1-43に曝露された細胞のライブイメージングは、孔形成毒素は原形質膜から除去されることにより、反応速度の正確な決定を可能にする。これは、Ca ^{2 +、}スフィンゴミエリナーゼおよび原形質膜の修復に関する他の要因のための要件を評価するために使用できる高感度のアッセイである。

この手順の全体的な目標は、親油性色素FM 1 43をライブセルイメージングに利用して、原形質膜からの性能の低い毒素除去の正確な動態を測定することです。これは、最初に毒素を摂氏4度で事前に結合することによって達成されます。2番目のステップは、ディッシュを加熱された顕微鏡ステージに移し、細胞を視覚化できる焦点面を見つけることです。

次に、適切な予熱済みメディアを追加し、すぐにイメージングを開始します。最後のステップは、細胞内FM 1 43蛍光を分析および定量することです。最終的に、この高感度アッセイは、カルシウム、フィンガル、ミエリン、および原形質膜修復のためのその他の因子の要件を評価するために使用できます。

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos