Name: の精子競技能力の違いを評価するショウジョウバエ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: 学ぶ精子競争能力の違いをDrosophila melanogasterで評価する二重交配実験法。遺伝的マーカーと眼色解析により父性を特定し、遺伝的要因が生殖成功率に与える影響を明らかにします。

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著者らは、資金調達のためにNSF（MCB-1157876）に感謝。我々はまた、彼らのコメントについてアルベルトチヴェッタ、ジョンRoote、二匿名のレフェリーに感謝します。

小規模実験は全体の手順に慣れるために実行する必要があります。 1。処女雌とナイーブ男性の収集概説された実験の最も単純なバージョンは、大人は、次の組み合わせを含む初期の十字架、の4つのタイプで構成されます。）W 1118個人処女雌を収集するためにと、b）オレゴン-Rの個人ナイーブ参照男性を収集するために; C ）P {SW}ホモ接合男性と処女の女性ナイーブ実験男性（タイプI）を収集するために、SDICの野生型の組織を運ぶ制御ラインからのステップと、d）P {SW}ホモ接合男性とSDIC-SW-削除を運ぶSDIC-SW欠乏 （タイプII）を運ぶナイーブ実験男性を収集するために処女雌を。 <ol><li> 8-10女性と5人の男性をそれぞれ含む複数のバイアルを設定します。女性は産むことを許可卵、すべての3〜5日新しいバイアルに大人を転送します。ペットボトルではなく、必要に応じてバイアルを使用し、常に新鮮な食品を使用しています。必要なバイアルの数は、研究中の実験雄タイプの数との違い（ 表1）を検出することが必要であると推定個体数に依存する。バイアルあたり10以上の女性は、子孫の生殖能力の変動を引き起こす可能性が幼虫の成長、中にオーバー混雑になる可能性があります。 25で保存バイアル°温度制御チャンバー内のC。 </li><li>初期の十字架を設定した後の日に11 番目と12 番目の処女雌とナイーブな男性の収集を開始。待機期間は、温度に応じて異なり、低い温度の結果は長く発達時に個人のコレクションを遅らせる。孵化するタイミングに影響を及ぼす他の要因は、媒体の一種である。このようなコーンミール·酵母媒体29として栄養価の高い食品は、大人の適切な開発を保証交配を促進する生殖器系、。嵌合解除の収集は、すべての4-6時間を飛ぶ。収集する場合、バイアルにCO 2を導入することにより、ハエを麻酔、ハエを下にタップし、セックス実体顕微鏡下でそれら（ 図2）。セックスと適切に表現型とラベルバイアルによって異なるバイアルに希望のハエを置きます。 </li></ol> （注1）。コレクションルーチンが破棄によって、午前中に前の夜の間に現れた大人を開始します。日中は一度か二度処女雌とナイーブな男性を収集します。一般的には、D.ショウジョウバエの雄は25℃30℃で羽化後に性的に成熟した8時間になります。ハエは、午前12時12時間の明/暗サイクルの下で維持されている場合は、羽化の二つのピークが予想されています：最初の1〜2時間の間に光をオフにする前に、光が上、そして2時間の間になった後。羽化は蛹暗く後24時間以内に発生します。 （注2）。 10以上の女性SHウルド、過混雑を防止するために同一のバイアルに入れられる。これはまた、それらの少なくとも一つが処女でないので廃棄されなければならない場合には、女性の損失を制限する。 注3。短時間で処女雌と雄ナイーブの適切な数を収集するために、以下の対策を採用することができる。実験的な男性の2つのタイプ（ 表1）を含む実験のために1118ワットの15〜20バイアルを設定します。軽く媒体の表面を振りかけると産卵を促進するために、いくつかの乾燥アクティブ酵母ペレットを追加します。連続した日に親に少なくとも4回を転送します。両親が別のバイアル（ 図3）に転送された後に各バイアルで蛹化のために利用可能な表面を増加させるために、4 回目か5 日目の間にマルチ折り畳まれた紙を（7×5センチ）を挿入します。最初の交配から生まれた、大人の人数が十分でない場合、いくつかのより多くの日を待ち、個人を集める別の日に設定するバイアルからALS。ワークロードを均等にするためにいくつかの連続日間の実験を行うことを計画します。 2。ダブル交配実験 図4は 14で行わダブル交配実験に関わる主な手順を示しています。 <ol><li> 1日目の朝、最初の交配を設定します。オレゴン-Rの男性は犯罪アッセイで交尾する最初のです。 <ol><li>吸引器を使用し、10 4-5日齢の白色目W 1118処女雌と10赤い目オレゴン-Rナイーブ男性それぞれを含むバイアルを設定します。二から三のバイアルを5日間連続して毎日設定されています。セットアップするバイアルの数は、利用可能な個体数に応じて異なる場合があります。ハエが2時間交尾することができます。 </li><li>オレゴン-Rの男性を破棄し、吸引器（ 図5）を使用して、新しいバイアルにそれぞれの女性を配置します。雌雄の判別は、少数の目視検査によって達成することができる形態素差（ 図2）。適切に各バイアルにラベルを付け、2日間（以下 &quot;V1&quot;）用バイアルに女性を残す。 </li></ol></li><li> 3日目に、第二の交尾を設定します。セットアップ男性とクロスの選択は、実験的な男性型のいずれかに向けた潜在的なバイアスを最小化するために、ランダムに行われるべきである。 <ol><li>ライトがオフになっている二時間前に、アスピレーターで新しいバイアルに再びメスを移す。適切に新しいバイアルにラベルを付けます（以下、 &quot;V2&quot;）。 </li><li> V2に同じ遺伝子型の3 5〜6日齢の実験的な男性を紹介します。 </li><li>それぞれの女性のための2.2.1と2.2.2を繰り返します。 </li><li>二時間右4日目、光がオンされる前（ つまり、2.2.1の後には12以上の時間）で、吸引器を使って男性を捨てる。 </li></ol></li><li> 6日目に、別の新しいバイアルに再び各女性を転送します。適切に（以下、 &quot;V3&quot;）新しいバイアルにラベルを付けます。 </li><li> 10日目で、1118ワットを破棄</&gt;雌（商標）。 </li><li> v2とv3では子孫を調べます。女性はV2の女性最初に起動した産卵後17日目に例えば V2（またはv3）に導入された後の最初の検査は13-15日後に行われます。第2の検査は17日後に正確に実行されます。この時間枠は、同じバイアルには第二世代であることが保証され、安全な上限時間的な境界をもたらす。子孫カウントを促進しつつ二検査が過剰混雑を防ぐ。 <ol><li> 17日目で、V1を検査し、現在の赤い目の子孫が存在することを確認してください。それに応じてバイアルをマークされていない場合。白目子孫の存在はない子孫が参照または実験的な男性とその交配が発生しなかったことを示していないながら、女性が最初の交配時に処女ではなかったことを示しています。 </li><li> 17日目で、V2の最初の検査を行う。麻酔は、CO 2とV2に子孫が登場し、目の色や性別によって、それらを並べ替える。最初と秒で父親レコード子孫番号ONDの男性。 図6は、各交配スキームの子孫で予想される表現型を示しています。この特定の実験14では、基準又は実験によって産ま雄雌の子孫としてのみを明確に割り当てることができるので、唯一の娘からの情報は、P 2を計算するために使用することができる。他のマーカーとの男性の子孫の父親が明確に割り当てることができる場合は、雌雄の子孫の数は下流の計算に用いることができる。子孫を捨てますが、第2の検査のためにv2を保つ。 </li><li> 20日目に、V2で新たに浮上して子孫と2.5.2のように進み、その後、バイアルを捨てる。 </li><li> 20日目に、初めてv3では現れ子孫を検査し、ステップ2.5.2に従ってください。 </li><li> 23日目では、v3では新たに浮上して子孫と2.5.3のように進んでください。 </li></ol></li></ol>注1：複数の交配が持つかもしれないことをPのスコアに対する潜在膨張効果（2.2.2および2.2.3）のため、交配特定の時間枠に限定することができる。時間枠は使わ女性と男性の遺伝子型に関連付けられているremating周波数に依存します。複数交配の確率は特別に夜の時間11時に削減されます。 注2：大人のハエの数が低いときに、これは酵母の潜在的な異常増殖が原因で問題を引き起こす可能性があるため、生酵母ペレットを追加しないでください。 3。データ解析<ol><li>録画子孫カウントは、適切な統計パッケージ（SASインスティテュートから例えば JMP）または無料のWebベースのツール（ 例で簡単に目視で効率的な分析のために適切に組織されるべき<a href="http://www.vassarstats.net/" target="_blank">http://vassarstats.net/</a> ）。 </li><li>精子競争能力。 v2とv3のからカウントを追加します。ないか非常に限られた子孫（ 例えば &lt;10）に上昇を与えている女性のハエは、手順の間に死亡した、または唯一の成功しinseminaあっ2人の男性の一人テッドは、非有益とみなされており、任意の下流の統計分析（2.5.1及び表2）から除外されます。各有益な女性のためのP 2得点を計算します。 </li><li>比べ実験男性の間でP 2値の統計的に有意な差があるかどうかをテストします。これはパラメトリック（ 例えば TukeyのHSD）またはP 2値の分布の歪度と分散と平均の間の依存関係など、いくつかの要因に依存してノンパラメトリック（ 例えばスチールDwass）テストを使用して行うことができます。角度変換は、一般にパラメトリック検定31の使用に先立って、例えばP 2などの割合に適用される。 </li><li>合率の違い（オプション）。各実験オスタイプの場合、二重に交配した雌と、最初の男性（犯罪アッセイにおける参照オスとDの実験の雄と交配するものの数を計算efenseアッセイ）。両側フィッシャーの正確確率検定を（で入手使用<a href="http://www.langsrud.com/fisher.htm" target="_blank">http://www.langsrud.com/fisher.htm</a> ）、実験的な男性の2つのタイプの間に統計的に有意な差があるかどうかを判断する。 </li><li>性比（オプション）。各実験の男性の場合は、予想される1:1の比率から、各女性の外れから子孫の性比かどうかを判断するためにカイ二乗検定を使用しています。 </li></ol>

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</ol>

利害の衝突は宣言されていない。

我々は、遺伝的に異なるの相対的な寄与の違いを評価するために実験的な設計を記載しているD.対照二重交配実験7,8で子孫にショウジョウバエのオス。これは、精子競争能力に影響を与えると仮定遺伝因子のコンテキスト内で行われたと同様の手順では、防御アッセイ（ 図1）に適用されるが、それはオフェンスアッセイ内に例示されている。この実験計画は、このような雌遺伝子型32の影響として、父親の成功の他の側面をテストするために変更することができる。組み入れることができる変更の例としては、女性と男性との間に第二の交尾のダイレクトモニタリングである。さらに、実験的な男性のタイプの相対的なパフォーマンスは、男性と女性の使用テスターの遺伝子型に依存しているので、他のシナリオに外挿することはできないことに注意することも重要である異なるテスター雄と雌10,32,33を含む。 必要な個人（処女雌とナイーブ男性）と子孫の得点のコレクションは労働集約的であるため、評価すべき別個の実験の男...

ジェフ·パーカーが、昆虫やその進化の意味2の精子競争の有病率を指摘しているので、 ショウジョウバエや他の種における研究の急増は、多くの異なるレベルでこのような現象にいくつかの光を当てることを試みた。関心のある分野のいくつかの例は、自然個体9,10、その遺伝アーキテクチャと遺伝的要因11-14、そして男女15,16の間に共進化を駆動におけるその役割の基礎との関連性で、その変化の調査であった。 D.でショウジョウバエの雌、専門の精子貯蔵器官の限られた容量、貯精嚢と精レセプタクル6,17のペアは、別の男性からの精子の競争に貢献しています。約1,500精子が挙げ臓器18,19に収容することができます女性だけ〜500に交尾中に転送されます。研究室では、管理されたダブル交配実験基準男性および1つまたは複数の目的の雄を含むメンツが広く精子競争力7,8を評価するために使用されてきた。 精子競争能力は合計子孫上、 すなわちその実験と参照男性の両方からダブル交配実験で実験男性によって産ま子孫の割合と推定される。精子競争能力は、2つのコンポーネント、別個のアッセイで評価し、それらの各々を含む。オフェンスアッセイ、第雄から精子を置換するための実験的な男性の精子の能力では、基準マレ、 すなわち評価される。逆に、防御アッセイにおいて、変位に抵抗するか、または基準男性の精子の受精の成功を低減するために実験的な男性の精子の能力が評価される。アッセイ、防御または攻撃の種類に応じて、精子競争力がゴールP 1又はP 2のそれぞれを介して推定される。 P1、P 2は、0と1の間の値だけを取ることができる。中間値は、通常は直接精子競争を伴う生理的なシナリオを示唆している精子混合、の間接的な証拠として解釈されます。同じ根拠に続いて、極端な値が強力な差動精子競争能力の証拠として解釈することができます。初期の研究では、ことを示したDのP 2 ショウジョウバエは 7が長く2交配間の経過時間として増加0.8を超えています。この同じ実験計画は、他のショウジョウバエ種で使用されている、P 2は、精子競争力20を評価する試験において一般的に使用される統計量である。ほとんどの種について、試験した菌株のP 2の値が0.6以上である21。それにもかかわらず、別の男性の精子との間の直接的な競争とは無関係な他のいくつかのメカニズムが同じスコアを（説明を参照）を得ることができます。 D第一又は第二の男性が産まistinguishing子孫を容易に識別マーカーの使用を介して可能である。初期の研究では、男性のいずれかの致死線量で照射した、例えば、照射された精子によって受精したX線ように実質的にすべての卵子では7孵化に失敗しました。続いて、眼の色素沈着または翼の形状を変化させる変異は、最も一般的に使用されるマーカーされている。前者の例としては、突然変異であるBW（ブラウン）9、CN（辰砂 ）22とW（白 ）23、表現型の二種類に変異サイ （ カーリー ）24 ​​に対応しながら、これらの変異のいくつかはに統合されました同じ個人、 例えばCN体重 。公知の遺伝パターンと少ない程度、アロザイム25及びマイクロサテライト26,27にも使用されている。 の違いをテストするための実験デザインここで説明する精子競争力は本質的にクラークらのことを次の9。これらの実験から得られた結果は、精査の下で実験的な男性のタイプの差父親に関する情報のみを与える。受精後のフィットネス14,28の違いと精子可視化技術24は P 1の違い（またはP 2）スコアが精子能力の違いとして解釈されることを可能にするためにも金を作るアッセイ。 図1は攻防アッセイの両方の原理を概説します。プロセスの物流を説明するために、攻撃実験をD.で行うキイロ 14について詳細に説明する。この特定の犯罪アッセイは精子競争力上の多重遺伝子ファミリー精子特有のダイニン中間鎖（SDIC）の測定可能な効果をテストするために使用されていました。すべてのメンバーこの多重遺伝子ファミリーのsがX染色体上にタンデムに存在します。ノックアウト男性はSDICクラスタを削除することによって生成された。削除されたセグメントはまた必須遺伝子短い翼（SW）が含まれており、研究の目的は、SDICの関連性を評価することであったので、SDIC-SWの削除を運ぶ男性は（P {SW}として象徴SWのトランスジェニックコピーによって救出されたまた、染色体2上のミニ白レポーター遺伝子）を実施している。眼の色は父親を識別するための可視マーカーとして使用した。すべてのハエは参照男性として用いた菌株オレゴン-Rからのものを除いて、 白の変異背景にあった。

<table><tbody><tr><td>琥珀色のラテックスチューブ</td><td>VWR</td><td>62996-473</td><td>1/4インチID、1/6インチ壁</td></tr>1 <tr><td>ml目盛り付きXLフィルターチップ</td><td>USAサイエンティフィック</td><td>1126-7810</td>任意の<td>1mlピペットチップを使用できますが、フライレシーバーとしては半透明で長いチップの方が優れています。フィルターチップを使用する場合は、先端をトリミングした後、針でフィルターを突き出して廃棄</td></tr>します <tr><td>パラフィルム</td><td>シグマ</td><td>P-7793</td><td></td></tr><tr><td>メッシュ生地</td><td></td><td></td><td>薄くて滑らかな</td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>S6D</td><td></td></tr><tr><td>CO2タンク</td><td>エアガス</td><td>CD-50</td><td>CO2が利用できない場合は、代わりにFlyNap(Carolina Biological Supply Company)を使用してください</td></tr><tr><td>FlyStuffフットバルブ、コンプリートシステム</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-121C</td><td>FlyNapを使用する場合は不要</td></tr><tr><td>プラスチックバイアル Genesee</td><td>Scientific</td><td>32-109</td><td>バイアルを保持するために再利用できる段ボールトレイが付属しています</td></tr><tr><td>コットンボール</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>AS-212</td><td></td></tr><tr><td>活性ドライイースト</td><td>レッドスター</td><td></td><td>一般的な食料品店で発見</td></tr><tr><td>シャーピーマーカー</td><td></td><td></td><td>異なる遺伝子型をマーキングするために異なる色を使用することができる</td></tr></tbody></table>

の精子競技能力の違いを評価する<em&gt;ショウジョウバエ</em

Assessing Differences in Sperm Competitive Ability in Drosophila

卵子が受精するための同種オス間の競争は、生き残りと生存1の最大化に成功した交配イベントの数を最大化するのではなく、上で動作性選択、 つまり選択のメカニズムの1つです。精子競争が彼らの精子は、時間と空間の偶然であるのと同じ女性2で交尾後のオス間の競争を表しています。この現象は、植物や動物3の複数の種が報告されている。例えば、野生で捕獲されたD.ショウジョウバエのメスは通常2-3人の男性4から精子が含まれています。精子は、異なる男性2,5から精子の直接競争につながる可能性が限られたストレージ容量を持つ専門の臓器に格納されています。 関心の異なる男性（実験オスタイプ）の精子競争力を比較すると対照二重交配experimenを介して実行されています実験6,7のTS。簡単に説明すると、単一の女性を連続二つの異なる男性、1実験雄と1クロス交配リファレンス男性にさらされている。同じ交配スキームは、その後こうして共通の基準を通じて精子の競争力の間接的な比較を容易にし、他の実験的な男性のタイプを使用して続いている。実験および参照男性が父親の個人の割合は、一つは単純な数式の7,8を使用して精子競争能力を推定することができるマーカーを使用して識別されます。また、精子競争力を実験オス異なる能力属性の反射であると仮定されメイト（それぞれ攻撃と防御アッセイ）09への第2又は第であるかに応じて2つの異なるシナリオで推定することができる。 ここでは、推定さtの根底に異なる遺伝因子の役割を調べるために役立ちアプローチを説明彼D.の精子競争力の現象キイロ 。

表2は、Dに（アッセイ1及び2）2犯罪の実験のいくつかの顕著な特徴をまとめたもの機能SDICクラスタとと（タイプIおよびII、それぞれ）なしのショウジョウバエの実験男性は14を比較されます。いくつかの基準にレプリケートで発生する異なる発生率を取った後、雌の58から83パーセントは、有益であることが判明したため、その子孫の父親カウントがP 2を計算するために使用することができる。ノンパラメトリックテストの結果は、無傷のクラスタ（タイプI）14と男性に比べて、SDICクラスター（タイプII）なしで、男性が低い精子競争力と一致していた。このパターンは、実行犯罪アッセイを渡って再現できました。類似しているが、統計的に有意ではない傾向（図示せず）が並行して行わ防御アッセイで発見された。重要なのは、相手側の速度差（ステップ3.4）の不在は、可能性を否定したこと男性遺伝子型は女性remating行動14を及ぼす可能性があります。 </p...

間の差分精子競争力<em&gt;ショウジョウバエ</em異なる遺伝子型を持つ&gt;男性はダブル交配実験により確認することができる。これらの実験の各々は、金利および参照男性の男性のいずれかを含んでいる。子孫で容易に識別マーカーはそれぞれ男性で父親個人の画分の推論を可能にする。

Competition among conspecific males for fertilizing the ova is one of the mechanisms of sexual selection, i.e. selection that operates on maximizing the ...

本実験の全体的な目的は、異なる遺伝子型を持つショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）の雄の間で、精子競争能力に差があるか否かを検証することである。これは、2匹の異なる雄と交配させた雌から生まれた子孫の父性を特定する可視的な遺伝マーカーを追跡することで達成される。本アッセイの遺伝子型において、雌はまずリファレンス雄と交配し、その後、実験雄と交配させる。実験雄によって父親となった子孫の割合は、子孫の眼の色を調べることで推定される。これらの結果により、参照用オスの精子に対する相対的な性能から、実験群のオス精子の競争力を間接的に比較することができます。これらの手法は、遺伝的要因がSPRの競争力に及ぼす影響を評価するなど、生物学の遺伝学および進化論分野における重要な問いに答えるのに役立ちます。本手順の提示は、当研究室の大学院生および学部生を対象としています。以下のプロトコールでは、精子の運動性に関与するタンパク質をコードすると推定されるsicと呼ばれる遺伝的要因の解析について説明します。まず、15〜20本のバイアルを用意します。各バイアルの培地に、乾燥させた活性酵母ペレットを少量、軽く振りかけます。これにより、移動を容易にします。コーンミール酵母培地などの新鮮な栄養培地を常に使用してください。次に、各バイアルに雌を8〜10匹（それ以上にならないように）と、雄を5匹加えてください。雌雄の識別は、いくつかの形態的な違いを目視で確認することで可能です。バイアルを25°Cで保存し、少なくとも3～5日ごとに成虫を新しいバイアルに移してください。最良の結果を得るには、1日おきに成虫を移してください。子世代を回収するため、卵の入ったバイアルは保持しておいてください。必要なバイアルの数は、研究における実験用オスのタイプ数と、統計的検出力を確保するために必要と推定される個体数によって決まります。親個体をバイアルから移して4〜5日後に、多層に折り畳んだ紙を培地に挿入し、バイアル内の蛹化可能な表面積を増やします。蛹が黒ずんで視認できるようになった時点で、バイアルを確認してください。これらのハエは、交配を開始してから11〜12日後の24時間以内に羽化します。これらのバイアルから処女雌および未交配雄の採取を開始してください。毎朝一番に、夜間に羽化したハエを廃棄してください。その後、4〜6時間の間隔で1日1〜2回、バイアルからハエを回収し、バイアル内に二酸化炭素を導入してハエを麻酔させます。次に、ハエを軽く叩いて落とし、実体顕微鏡下で雌雄判定を行います。目的のハエを、性別および表現型ごとに異なるバイアルに分け、適切にラベルを貼ります。1つのバイアルに10匹以上の個体を入れないでください。処女雌に12時間明暗サイクルを適用し、彼らの閉塞時間をあなたに有利なように調節します。閉塞のピーク時間は、主観的夜明けから1〜2時間後、および消灯の2時間前に発生します。この実験には2つのバージョンがあります。それぞれ「攻撃アッセイ」と「防御アッセイ」と呼ばれます。本セクションでは、1日目の朝に攻撃アッセイを実施し、アスピレーターを用いて最初の交配をセットアップする方法について説明します。アスピレーターは、吸引したハエがチップ内に留まるよう遮断壁を備えたピペットチップに接続されたチューブで構成されています。チップの内径は広げられています。ハエについては、羽化後4〜5日の処女雌を10匹ずつ入れたバイアルを用意します。10匹のナイーブな参照雄を用いて、このようなバイアルを1日あたり2〜3本、5日間連続で準備します。各バイアルにおいて、ハエを2時間交配させた後、参照雄を取り除き、吸引器を用いて各雌を新しいバイアルに移します。各バイアルにV1とラベルを貼り、雌をバイアル内で2日間飼育します。3日目に、各雌をもう一方の遺伝子型のナイーブな雄と2回目の交配させます。主観的な日没の2時間前に、アスピレーターを使用して雌を、同じ遺伝子型の3日、5日、または6日目の実験用雄が入った新しいバイアルに移します。バイアルに雄の遺伝子型を記載し、新しいバイアルにV2とラベルを貼ります。翌朝を4日目とします。ハエの主観的な夜明けの2時間前に、アスピレーターを用いてオスを除去します。6日目に、各メスをV3と表記した別の新しいバイアルに移します。10日目にメスを廃棄し、17日目にも同様に廃棄します。子孫が入ったV oneバイアルを検査します。リファレンスオスと交配させた際に、メスが処女であったかどうか、およびリファレンスオスと交配したかどうかを判定します。同日に、二酸化炭素でハエを麻酔させて、V twoバイアルの子孫を検査します。目の色と性別によって分類します。次に、1匹目と2匹目のオスによって父親となった子の数を記録します。この実験では、雌の子だけを、参照オスまたは実験オスのどちらが父親であるか明確に割り当てることができます。他の実験では、異なる遺伝マーカーを利用して雄の子代の父系を判定することも可能です。検査済みの後代は廃棄しますが、V2バイアルはそのまま保持してください。20日目に再検査を行い、V2バイアルから得られた後代の父系を2度目に記録し、併せてV3バイアルから羽化した後代の初回検査を実施します。その後3日後の23日目に、V threeで羽化した子代を検査します。ここでも、各雌について、V twoおよびV threeからの子代数を適切に整理し、視覚的な確認や統計ソフトによる効率的な分析ができるように記録してください。参照オスと実験オスによって受精した子代の総数を算出するため、各雌について、実験オスと参照オスの合計子代数に対する実験オスによる子代の割合としてP twoスコアを算出します。一部の雌個体を解析から除外する必要があります。まず、後代が得られなかったか、または後代が極めて少ない個体、次に処置中に死亡した雌個体、そして2匹の雄のうち1匹のみから受精に成功した雌個体を除外します。P2値における統計的な差を確認してください。実験群の雄のタイプ間では、P2値分布の歪度および分散と平均比率の間の依存関係に基づき、パラメトリックまたは非パラメトリック検定を使用します。データは通常、正規分布しません。t検定またはANOVA（分散分析）を行う前に、元のP2値に逆正弦変換（別名：角度変換）を適用するか、あるいは単にWilcoxon符号付き順位和検定などの非パラメトリック検定を、*Drosophila melanogaster*の実験に使用します。実験に使用した雄個体は、機能的なESICクラスターを持つ群と持たない群の2群に分けた。全体で、雌個体の58%から83%が情報提供可能であった。機能的なESICクラスターを欠損している雄個体は、ESICクラスターが正常な雄個体と比較して、P twoスコアが有意に低いことを示した。これは、SICクラスターが精子の競争力を高めることを示しています。このビデオを視聴することで、二重交配実験の実施方法を十分に理解し、変異体オスと対照群のオスの間における精子競争力の差を検出できるようになります。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

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我々はショウジョウバエDrosophila melanogasterの交尾行動に影響を与える環境および遺伝的合図を分析するためのアッセイを実証する。...

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蛍光色素、ローダミンBを用いて、オス のアエデスアエジプティ 蚊の交配競争力を研究する

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の精子競技能力の違いを評価する

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